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ENZIMAS

Fabio Bernal (fabc723@gmail.com), Quiñones Jhosman

PROGRAMA DE INGENIERÍA PESQUERA


FACULTAD DE INGENIERÍA
UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA
SANTA MARTA
2019

RESUMEN
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones bioquímicas, lo realizado en esta
práctica fue comprobar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales (hígado)
vegetales (hojas de espinaca, champiñón y papa). Se observó la actividad enzimática de
la catalasa alterando condiciones de temperatura y pH, donde se comprobó que las
enzimas necesitan una temperatura y un pH óptimo para llevar a cabo sus funciones.

Palabras clave: enzima, temperatura, pH, papa, hígado, catalasa, peróxido

ABSTRACT
Enzymes are proteins that catalyze biochemical reactions, what was done in this practice
was to check the presence of the catalase enzyme in animal (liver) vegetable tissues
(spinach, mushroom and potato leaves). The enzymatic activity of catalase was observed,
altering temperature and pH conditions, where it was found that enzymes need a
temperature and an optimum pH to carry out their functions.

Key Word: enzymes, temperature, pH, potato, liver, cattails, peroxide

INTRODUCCIÓN
El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción
catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores.
Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es medir el efecto en la
velocidad de la reacción cuando se modifican las concentraciones del sustrato y se
mantienen constantes la concentración de enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la
temperatura, entre otros.
Se evalúa la influencia de estos factores en la reacción catalizada por enzimas con la
finalidad de determinar los intermediarios en una reacción y el papel que juegan en la
reacción enzimática, es decir, para predecir mecanismos de reacción. Es esencial entender
estos mecanismos para desarrollar nuevas herramientas moleculares, por ejemplo, para
combatir enfermedades en las que se conoce a la enzima que la produce. También es usual
medir la actividad enzimática con diferentes sustratos para entender su especificidad o
bien, medir la actividad de la enzima de diferentes tejidos u organismos para entender
cómo las diferencias en actividad están relacionadas con la función y/o la fisiología del
organismo del que proceden.

OBJETIVOS
Comprobar la reacción sobre el peróxido de hidrógeno por acción de la enzima
catalasa, presente en tejidos animales y vegetales determinando los productos de
reacción.

Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática, como la temperatura,


el pH, la concentración del sustrato y de la enzima.

MATERIALES
- Baño de maría - Peróxido de hidrogeno
- Gradilla de tubos de ensayo - Hojas de espinaca
- Pipetas - Papa
- Probetas - Hígado
- Tubos de ensayo - Champiñón
- Gotero - Gasa
- Mortero
- Beaker
- Termómetro

METODOLOGÍA
PRIMERA PARTE: FUNCIONAMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA EN
VARIOS ORGANISMOS.

Agregar 3ml de macerado de las diferentes muestras en diferentes tubos de ensayo, en el


tubo 1 agua destilada en el tubo 2 macerado de espinaca, en el tubo 3 macerado de papa,
tubo 4 macerado de hígado y tubo 5 macerado de champiñones. Seguido de esto agregar
4 gotas de peróxido de hidrogeno a cada uno.

SEGUNDA PARTE: EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL


FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS.
agregar en 4 tubos de ensayo 5ml de macerado de papa, el tubo 1 se dejara a temperatura
ambiente, el tubo 2 se someterá a temperatura de 37°C por 15 minutos, en tubo 3 se
someterá a temperatura de 80°C por 15 minutos, y el tubo 4 se someterá a un baño de
hielo por 30 minutos. Después de transcurrido los tiempos agregar a cada tubo 2ml de
peróxido de hidrogeno a cada tubo.
Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se comienzan a
producir burbujas.

TERCERA PARTE: EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO


DE LAS ENZIMAS.
Tomar tres tubos de ensayo y agregarles 3ml de macerado de hígado a cada uno, al tubo
1 agregar 3ml de HCL, al tubo 2 adicionar 3ml de NaOH seguidamente 3ml de peróxido
de hidrogeno.
Mida el tiempo que toma la reacción en completarse.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
PRIMERA PARTE: FUNCIONAMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA EN
VARIOS ORGANISMOS

Foto 1 Funcionamiento de la enzima catalasa.


Homogenado Reacción al añadir gotas de peróxido de hidrogeno
Papa tardó en reaccionar pero también en esta muestra había
presencia de la enzima catalasa. Mayor presencia de
burbujas
Espinaca Reacción más rápida con respecto a las demás muestra al
contacto del peróxido, presencia de la enzima catalasa.
Hígado Presencia considerable de Burbujas, también se encontraba
la enzima catalasa en la muestra
Agua destilada No ocurrió ningún cambio
Tabla 1 Resultados funcionamiento de la Enzima Catalasa.
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y
cataliza la reacción de descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.
El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos
organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima
catalasa.
La presencia de la enzima catalasa en los organismos se puede demostrar agregándole
peróxido de hidrogeno debido a que este reaccionara con un efecto burbujeante ya que
esta enzima descompone el peróxido de hidrogeno en oxigeno y agua , el resultado
positivo se identifica con el desprendimiento de burbujas.
Como pudimos observar en cada una de las muestras se encontraba esta enzima, la cual
en la diferencia de burbujeo en las muestras esto es dependiendo de la cantidad de catalasa
presente en el tejido se puede decir que la que contiene más catalasa de las muestras es
fue en el macerado de papa por la cantidad de burbuja aunque tardo un poco más de
tiempo de reacción con respecto a las demás muestra esto podría ser por el tipo fue
realizado el macerado que fue aproximadamente 5 horas antes de la práctica, seguida de
esta fue la espinaca que también presento bastante cantidades de burbuja.
¿Qué ocurre con el peróxido de hidrógeno?
La enzima catalasa, descompone el peróxido de hidrogeno en oxígeno y agua:

¿Por qué hay desprendimiento de burbujas?


El resultado positivo se identifica por el desprendimiento de burbujas. Indica actividad
enzimática que está descomponiendo el peróxido de hidrogeno.
SEGUNDA PARTE: EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL
FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS.

Foto 2 Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas.


Tubos Temperatura Tiempo que tardo en Observaciones
iniciar la reacción
1 37°C Rápidamente Presencia de pocas burbujas
espumosas y un precipitado
blanco, no era lo que se esperaba.
2 80°C Entre 30seg a 1min Presencia de burbujas y
precipitado blanco, no era lo
esperado.
3 Ambiente 20 segundos Desnaturalización de la muestra.
4 Hielo de 1 a 2 minutos Presencia de pocas espumas, no
era lo esperado.
Tabla 2 Resultados de efectos de temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas.

Al igual que ocurre con la mayoría de las reacciones químicas, la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variación de la
actividad enzimática con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en función
de la barrera de energía de activación de la reacción catalizada. Sin embargo, a diferencia
de lo que ocurre en otras reacciones químicas, en las reacciones catalizadas por enzimas
se produce un brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crítica.
Este efecto no es más que un reflejo de la desnaturalización térmica del enzima cuando
se alcanza dicha temperatura.
La Temperatura influye en la actividad enzimática. En general por cada 10ºC que aumente
la temperatura la velocidad de la reacción aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla se cumple
hasta que la temperatura alcanza un valor máximo (T° óptima) donde la actividad es
máxima. Esto se debe a que al aumentar la T° aumenta el movimiento de las moléculas
y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el S y el E.
Si la temperatura aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa
la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima posee una
T° óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37ºC. Los animales
poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la Tª corporal, se ven
obligados a hibernar en la estación fría pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas
temperaturas es muy baja.
Como pudimos observar en la práctica si se cumple lo anteriormente mencionado tal
como la desnaturalización cuando la enzima es sometido a temperatura de 80ºC ya que
sobre pasa los valores máximos de temperatura, como también se observó que a mayor
temperatura 37ºC la velocidad de reacción es más rápida, también que temperatura más
frías el tiempo de reacción es un poco mas lento. Todo esto es debido por lo comentado
anteriormente de los efectos de temperatura en la actividad enzimática.

¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?


La actividad enzimática (velocidad de reacción catalizada por la enzima) aumenta a
medida que aumenta la temperatura hasta que la enzima es desnaturalizada e inactivada
por el calor. A partir de ese momento la velocidad de la reacción disminuye en forma
marcada (Tortora G., et al).

¿Qué les sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas?


La actividad enzimática aumenta muy rápido pero también la enzima es desnaturalizada
e inactivada mucho más rápido por lo cual la velocidad de reacción disminuye.

TERCERA PARTE: EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO


DE LAS ENZIMAS.

Foto 3 Efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas.


Tubos Tiempo que toma la reacción en Descripción comparativa de las
completarse reacciones
1 De inmediato Desnaturalización de la muestra
2 De inmediato La muestra se desnaturaliza
3 Muestra control Muestra control
Tabla 3 Resultados del pH sobre el funcionamiento de las enzimas.

El pH es otro factor que influye en la actividad enzimática, debido a que el pH influye en


la ionización de los grupos funcionales de los aminoácidos que forman la proteína
enzimática. Cada enzima realiza su acción dentro de un determinado intervalo de pH,
dentro de este intervalo habrá un pH óptimo donde la actividad enzimática será máxima.
Por debajo del pH mínimo o por encima del pH máximo el enzima se inactiva ya que se
desnaturaliza. En la mayoría de las enzimas el pH óptimo está próximo a la neutralidad,
aunque hay excepciones.
La mayoría de los enzimas presentan un pH óptimo para el cual su actividad es máxima;
por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.
Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras
proteínas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH varía más allá de unos límites
estrechos. De ahí la conocida importancia biológica de los sistemas tampón.
Por lo anterior se pudo comprobar con los resultados de la practica en que se
desnaturalizaron las muestras del hígado por el cambio brusco de su pH al agregarles
HCL y NaOH.

¿Cómo afecta el pH la actividad enzimática?


Para la mayoría de las enzimas existe un pH óptimo que se asocia con una actividad
enzimática máxima. Por arriba o por debajo de este pH, la actividad enzimática disminuye
y por lo tanto también disminuye la velocidad de la reacción. Los cambios extremos del
pH pueden desnaturalizar la enzima (Tortora G., et al).

¿De qué otras maneras se podría explorar el funcionamiento de las enzimas


estudiadas en el laboratorio?
Existe otro método que se podría aplicar para explorar el funcionamiento de las enzimas
estudiadas que utiliza la reacción de Lugol para identificar el almidón.

Investiga 5 enzimas con los sustratos respectivos sobre los cuales actúa
Lactasa: actúa sobre la lactosa.
Somatostatina: actúa sobre el ácido clorhídrico inhibiéndolo.
Tannasa: actúa sobre la glucosa convirtiéndola en fructosa.
Aspartasa: cataliza la reacción reversible de adicción de amoniaco al doble enlace del
ácido fumarico para formar L-aspartato.
Amilasa: actúa sobre los enlaces de las unidades de glucosa que componen el almidón.

¿Fue igual la producción de catalasa en todas las muestras?

No fue igual debido a las distintas temperaturas a que se sometieron las pruebas y estas
no tuvieron una reacción igual de burbujas por eso no fue igual la producción de catalasa
en todas las muestras.
CONCLUSIÓN
Como producto del análisis de los resultados del experimento realizado en el laboratorio,
se pueden extraer las siguientes conclusiones:
La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimáticas porque acelera o
retarda la acción de las enzimas, lo que se evidencia con la producción de burbujas.
Para que la catalasa funcione correctamente debe tener un pH neutro y temperatura
ambiente. Como también que el cambio de su pH bruscamente desnaturaliza la enzima.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Tortora G., et al, 2007, introducción a la microbiología, Editorial medica panamericana, 9na
edición, España, Pag 120, 121

https://www.academia.edu/9180412/Informe_de_actividad_enzimatica

BABRET, A. CHAVEZ, C. Biología. Editorial Prentice Hall. New Jersey.1992

VILLEE, Claude A. Biología. McGraw-Hill. 1988.

https://www.academia.edu/17433504/actividad_enzimatica_2_docx1