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Objetivos:
Conhecer técnicas de extração de DNA
Compreender o processo necessário à extração do DNA
Aprender procedimentos experimentais para extrair DNA de células vegetais, semelhantes aos
usados em laboratórios de investigação.
http://ce3.igc.gulbenkian.pt/wp-content/uploads/2017/02/Extracao-ADN-secundario-ce3.pdf
Material:
Uvas
2 Gobelés
Tubo de ensaio
Almofariz com Pilão
Bisturi
Sal
Detergente de louça
Água destilada
Funil
Filtro de café ou gaze
Varinha Mágica
Etanol frio
Fucsina básica
Laminas e lamelas
Microscópio ótico
Procedimento:
1. Descascar as uvas
2. Triturar as uvas com o pilão no almofariz até se obter uma solução liquida
3. Fazer a preparação de extração, juntando num copo ½ colher de café de
sal fino, 2 colheres de chá de detergente e 100 ml de água destilada
4. Adicionar a solução liquida obtida no 2º passo à preparação de extração
5. Colocar o filtro de café ou gaze, preferencialmente em leque, de modo a
ter maior superfície de absorção possível num funil
6. Verter através do funil a solução para o tubo de ensaio
7. Adicionar álcool frio (5ºC) à solução filtrada
8. Deixar repousar até se observar a ascensão de uma camada gelatinosa
9. Observar ao microscópio, utilizando fucsina básica.
Resultados:
Nos resultados tb Podes colocar uma imagem legendada ( com a fase celular no
fundo, por ser mais densa e a fase alcoólica em sobrenadante com o DNA) ….
Deixo-te alguns exemplos… podes desenhar… ou colocar fotografia…mas com
legenda
Discussão:
O suporte físico da informação necessária para o desenvolvimento de um
ser vivo permaneceu desconhecido até meados do século XX. Contudo, as
investigações que se foram realizando vieram mostrar um grupo de moléculas -
os ácidos nucleicos – que é responsável pelo armazenamento da informação
genética.
Este grupo de moléculas, mais concretamente o DNA (ácido
desoxirribonucleico) organiza se em cromossomas e é uma longa cadeia
polinuclestidica formada por nucleótidos de Timina, Amina, Guanina e Citosina,
Cerca de 99% do DNA encontra-se no núcleo da célula e o restante DNA
encontra se em locais específicos, como por exemplo nas mitocôndrias e nos
cloroplastos.
Nesta atividade laboratorial utilizaram-se células de plantas, neste caso
das uvas, pois são excelentes fontes de DNA. Deste modo, obtém-se amostras
de DNA significativamente grandes, com o objetivo de as observar.
A trituração realizou-se para romper os tecidos, as paredes celulares e as
membranas citoplasmáticas, libertando o conteúdo celular de modo a que o
detergente e o sal atuem melhor. Contudo, o pilão usado com o almofariz não
consegue remover os núcleos e libertar o DNA, porque estes são demasiados
pequenos.
Uma vez que na trituração não se consegue romper os núcleos, recorreu
se à emulsificação, através da aplicação de detergente. O detergente penetra na
estrutura das membranas e separa as grandes moléculas de fosfolípidos,
provocando a destruição das membranas. Consequentemente o conteúdo
nuclear (DNA e proteínas) dispersa se na solução.
O DNA é muito solúvel em água devido aos seus iões fosfato (molécula hidrofílica). Para
impedir que o DNA libertado do núcleo da célula se dissolva totalmente na solução e se torne
invisível, usa-se sal. Assim, a adição do sal (NaCl) no início da experiencia
proporcionou ao DNA um ambiente favorável à não dissolução. O sal ao
dissociar-se contribui com iões positivos (Na+) que neutralizam a carga negativa
do DNA (devido à ionização do grupo fosfato), estabilizando-o. Assim, as
moléculas neutras de DNA vão tornar-se mais agregadas, deforma a tornar os
filamentos de DNA mais espessos e visíveis a olho nu.
A filtração permite separar as paredes celulares e as membranas
citoplasmáticas do restante conteúdo celular, nomeadamente dos núcleos. Assim,
a solução filtrada está tão pura quanto possível, contendo o DNA e outras moléculas, como
proteínas, que não interferem com o sucesso da extração.
Conclusão:
Depois de seguir o procedimento experimental, conseguiu-se extrair o
DNA das uvas num tubo de ensaio sobre a forma de um novelo observável a
olho nu, enquanto estava suspenso em álcool. Com isto pode-se concluir que a
molécula de DNA é pouco solúvel, pouco densa e que as suas ligações de
pontes de hidrogénio são fracas energeticamente.
No fim da atividade os objetivos principais foram cumpridos, isto é, extrair e
visualizar moléculas de DNA a olho nu e depois com o microscópio, e ficar a
conhecer os processos para o fazer. Também foi possível compreender e
descrever as transformações físicas e químicas que ocorrem em cada passo da extração de DNA.
Bibliografia:
http://ce3.igc.gulbenkian.pt/wp-content/uploads/2017/02/Extracao-ADN-secundario-ce3.pdf
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