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PRACTICA Nº 06
AYACUCHO – PERÚ
2018
DETERMINACION DE NITRITOS
I. INTRODUCCIÓN
La determinación cualitativa mediante espectrofotometría de los nitritos en los embutidos
como las salchichas, en estos alimentos, la apariencia y el color es la primera y más
importante característica que percibe el consumidor, el color de los productos cárnicos es el
resultado de pigmentos naturales presentes o colorantes agregados. El principal pigmento
natural presente en los productos cárnicos es la mioglobina, la cual dependiendo de su
estado de oxidación puede presentar distintas tonalidades, el rojo brillante que presentan
algunos productos cárnicos comerciales es responsable de la nitrosimioglobina (MbFe2NO
o MBno) la cual se deriva a partir de la reacción de la mioglobina con el óxido nítrico (NO)
derivado a partir de la adición e nitratos y/o nitritos, sales y otros ingredientes incluyendo la
sacarosa y especies a las carnes se les denomina con el término de “curado”. Entre las
funciones que desempeñan los nitritos en es curado de la carne son: (a) desarrollo de un
característico color rosa estable, (b) un sabor típico (c) una textura única que le hace
diferente al de la carne fresca, (d) previene y protege contra el desarrollo de algunas
bacterias aeróbicas y (e) acción antioxidante. Diversas marcas de salchicha utilizan este
aditivo de nítrico, para conservar sus características del producto, por ello utilizan diversas
dosis, la cual en un exceso de nitrito puede causar problemas tecnológicos como el cambio
de sabor, en las últimas décadas se ha cuestionado el uso de nitritos y/o nitratos debido a su
ingesta en altas concentraciones causa problemas de intoxicación y producción de
carcinógenos.
Objetivo:
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DETERMINACION DE NITRITOS
Entre los compuestos minoritarios que le confiere una coloración a la carne se encuentran
los compuestos orgánicos con sistemas enzimáticos cuyos enzimas y grupos prostéticos
tienen propiedades cromóforas como son las peroxidasas, y flavinas que tienen poca
contribución al color de la carne. Existen otros compuestos mayoritarios que desempeñan
un papel importante en el color de la carne como son los citocromos (metaloproteínas con
un grupo prostético hemo). Carotenoides (sistemas de pigmentos conjugados de naturaleza
isoprenoide) presentes principalmente en aves y hemoproteínas como hemoglobina y el
citocromo C que juegan un rol importante en el color dla carne de res, cordero y aves de
corral (Hunt, 2006). La mioglobina está formada por la globina que es característica de
cada especie animal y el grupo prostético hemo (Fe+2), si pues, la mioglobina es un
complejo de globina y hemo, el hierro localizado centralmente posee seis puntos de
coordinación cuatro de los cuales están ocupados por átomos de nitrógeno del anillo
tetrapirrólico, el quinto año de coordinación está unido a un residuo de histidina de la
globina y quedando el sexto sitio disponible para formar complejos con átomos
electronegativos donados por diversos ligando (figura 01). El hierro hemo del anillo de
porfirina de la mioglobina puede existir en dos formas como hierro ferroso reducido (Fe+2)
formando mioglobina (Mb) y férrico oxidado (Fe+8) que resulta en la formación dela
metamioglobina (MMb), además existe otro estado de la mioglobina que se conoce como
oxigenación en el cuál esta se une al oxígeno formado oximioglobina (MbO2). (Von Elve,
2000: De Man, 1999) así las distintas tonalidades que adopta esta hemoproteína dependen
tanto de su estado de oxidación como de su estado de oxigenación (Tabla 01) (Carballo y
col. 1991)
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DETERMINACION DE NITRITOS
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DETERMINACION DE NITRITOS
La formación del color de los productos cárnicos curados involucra reacciones entre
pigmentos de la carne y nitritos (NO2) o nitratos (NO3), agregados, resultando en la
formación de nitroso hemo pigmentos (NOHP) (Sakata y Nagta, 1992).
Figura 02: Reacción del ácido nitroso en sistemas cárnicos (adaptada de Honikel, 2008)
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DETERMINACION DE NITRITOS
a. Propiedades Químicas
El ión nitrato es la base conjugada del ácido nítrico (HNO3). El ácido nítrico es un ácido
fuerte (pka = -1.37) que se disocia en el agua produciendo iones nitrato e iones hidroxonio
(H3O+). Los nitratos son sales del ácido nítrico de fórmula general R-NO3, donde R es un
radical monovalente, los nitratos se disuelven fácilmente en agua, con la excepción de los
nitratos básicos de mercurio y bismuto En contraste con su comportamiento en disolución
ácida, los nitratos en medio básicos son agentes oxidantes débiles. Los nitratos pueden ser
descompuestos por el calor .El ión nitrito es la base conjugada del ácido nitroso (HNO2),
un ácido débil (pka = 3.37), que existe sólo en solución acuosa diluida fría dado que se
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DETERMINACION DE NITRITOS
b. Fuentes Alimentarias
La principal fuente dietética de nitritos son las carnes curadas donde representa hasta el
70% de la ingesta alimentaria total de esta sustancia, según el tipo y origen de carne curada
consumido por otro lado los productos de origen vegetal (incluso las papas) constituyen la
principal fuente alimentaria de nitrato y suelen proporcionar más del 85% de la ingesta
diaria en alimentación. Las concentraciones de nitrato en esos productos varían mucho (de
1 a 10000 mg por kg), según la clase, la fuente y las condiciones de cultivo y
almacenamiento. Las verduras foliáceas y algunos cultivos de raíz comestible (Por ejemplo,
remolacha y rábano) contienen a menudo concentraciones de nitrato superiores a 2500 mg
por kg. Cuando se tiene en cuenta la conversión del nitrato en nitrito en el cuerpo humano,
la mayor parte del nitrito al que están expuestas las poblaciones proviene de los productos
de origen vegetal y menos del 10 % de las carnes curadas. (Chasco y col., 1996)
CÁRNICOS
La sal mezclada con nitrato de potasio fue empleada para la conservación de las carnes
desde épocas remotas. En el presente siglo se reconoció que la acción antimicrobiana se
debía al ion nitrito, cuyo uso en proporciones de 0.4 a 0.6% de nitrito de sodio en la sal
común como conservador de las carnes curadas está mucho más extendido. El empleo
directo del nitrito en los productos cárnicos curados, tiene varias ventajas: rapidez de
acción, puesto que no se necesita esperar a que las bacterias nitro-reductoras transformen en
nitrito una parte de nitrato; mejor higiene, porque se inhibe más rápido la proliferación de la
flora bacteriana indeseable; posibilidad de regular con precisión la cantidad de nitrito
añadido. Mientras que el objetivo de emplear nitratos, actualmente en vías de desuso, es
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DETERMINACION DE NITRITOS
adicionar al producto una fuente de nitritos ya que la reducción por enzimas microbianas
puede proporcionar una reserva de nitritos. (Chasco y col., 1996 y col., 2004; Sebrank y
Fox, 1985)
Las características esenciales de las complejas series de reacciones se pueden resumir así:
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DETERMINACION DE NITRITOS
El sabor de una carne tratada con nitrato y/o con nitrito es totalmente diferente del sabor de
una carne solamente salada. La utilización de nitrato en salazón lenta, por inmersión en
salmuera o salado con sal seca, se acompaña de fenómenos enzimáticos de proteolisis y
lipólisis que conducen a la formación de compuestos sápidos que no están en relación
directa con la utilización del nitrato. Simplemente la obligación de dejar transformarse el
nitrato en nitrito conduce a estas reacciones paralelas que no se producen cuando la salazón
es rápida con nitrito. (Hunt, 2006).
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DETERMINACION DE NITRITOS
Uno de esos estudios determinó que el uso de aditivos alimentarios constituía un factor
esencial. Como resultado de ello, la FAO y la OMS convocaron en 1955 la primera
conferencia Mixta FAO/OMS sobre Aditivos Alimentarios. De esa conferencia surgió el
Comité Mixto FAO/OMS de Expertos en Aditivos Alimentarios (JEFCA) que, más de 40
años después de su creación, continúa reuniéndose periódicamente.
Las concentraciones permitidas de nitrito en los alimentos curados varían de país a país y
están comprendidas entre 10 y 200 ppm. En casi todos los países se admite el nitrito para
las salazones y la conservación de productos cárnicos, pero en algunos países se renuncia al
empleo de nitratos debido a su imperfecta y no controlable conversión en nitritos y se
prefiere la adición directa de nitritos.
En nuestro país, la Norma Técnica Nacional vigente dada por INDECOPI, establece en
relación al empleo de Nitrito sódico y de Nitrato sódico o potásico, como conservantes y
fijadores del color en las carnes y productos cárnicos lo siguiente: que se limita las
cantidades residuales a no más de 200 partes por millón de nitrito de sodio en el producto
cárnico terminado y a no más de 500 partes por millón de nitrato de sodio o potasio en el
producto cárnico terminado, por otro lado la Ley General de Salud cuenta con un
Reglamento sobre Vigilancia y Control Sanitario de los Alimentos y Bebidas (Decreto
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DETERMINACION DE NITRITOS
Actualmente la Comisión del Codex Alimentarius sólo autoriza el uso del Nitrito de sodio
y/o potasio para los productos cárnicos elaborados (carne tipo “Corned Beef”, carne
“Luncheon”, jamón curado cocido, espaldilla de cerdo curada cocida, carne picada curada
cocida). En relación a los nitratos, por el año 1981, éstos eran añadidos juntos con los
nitritos como aditivos en determinados productos cárnicos como el “Jamón curado cocido”
y la “Espaldilla de cerdo curada cocida” en concentraciones de 500 ppm; pero en el año
1988, se decidió suprimirlos debido a que en la mayoría de países ya no se utilizaba como
constituyente de la salmuera y el Codex asumió que la falta de nitratos no constituiría un
problema en tanto se controlase el nitrito añadido.
La preferencia del uso directo de nitrito en los productos cárnicos se debe también a que
éste actúa más rápidamente, es más seguro, y sus reacciones se pueden medir mejor. Las
normas del Codex para los productos cárnicos elaborados establecen que la dosis máxima
añadida de sales de nitrito de sodio y/o potasio es de 200 ppm, expresada en nitrito sódico y
la dosis máxima calculada sobre el contenido neto total del producto final es de 125 ppm de
nitrito expresados en nitrito sódico.
3.1 Equipos
01 espectrofotómetro
01 Balanza analítica
Licuadora
3.2 Reactivos
3.3 Materiales
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DETERMINACION DE NITRITOS
3.4 Muestra
3.5 Procedimiento
muestra
3. Pesar 5g de carne finamente homogenizada en un vidrio de reloj.
4. Pasar a un vaso precipitado de 250 mL con 150 mL de agua aproximadamente
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Homogenizado Baño Maria 45 min
DETERMINACION DE NITRITOS
0,1𝑔 100𝑚𝐿
𝑥𝑔 7𝑚𝐿
0,1𝑔 ∗ 7𝑚𝐿
𝑥=
100𝑚𝐿
𝒈
𝒙 = 𝟎, 𝟎𝟎𝟕
𝟓𝟎𝒎𝑳
2. Llevando a ppm:
𝑔 1000𝑚𝐿 1000𝑚𝑔
𝐶1 = 0,007 ∗ ∗
50𝑚𝐿 1𝐿 1𝑔
𝑪𝟏 = 𝟏𝟒𝟎 𝒑𝒑𝒎
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DETERMINACION DE NITRITOS
Concentración Ppm
C1 140
C2 180
C3 220
C4 290
C5 360
C6 440
4.2 Resultados
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DETERMINACION DE NITRITOS
ABSORBANCIA VS CONCENTRACION
0.06
0.05
ABSORBANCIA
0.04
0.01
0
0 200 400 600 800 1000
CONCENTRACION
ABSORBANCIA VS CONCENTRACION
0.06
0.05
ABSORBANCIA
0.04
0.01
0
0 200 400 600 800 1000
CONCENTRACION
y = 0.000053x - 0.001448
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DETERMINACION DE NITRITOS
Donde:
𝑌: 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝑋 = 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜𝑠
Despejando:
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 + 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟒𝟒𝟖
𝑷𝒑𝒎𝒏𝒊𝒕𝒓𝒊𝒕𝒐𝒔 =
𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟓𝟑
Luego:
𝟎. 𝟎𝟕𝟎 + 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟒𝟒𝟖
𝑷𝒑𝒎𝒏𝒊𝒕𝒓𝒊𝒕𝒐𝒔 =
𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟓𝟑
𝟎. 𝟎𝟑𝟓 + 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟒𝟒𝟖
𝑷𝒑𝒎𝒏𝒊𝒕𝒓𝒊𝒕𝒐𝒔 =
𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟓𝟑
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DETERMINACION DE NITRITOS
4.3 DISCUSIONES
Las normas del Codex para los productos cárnicos elaborados establecen que la dosis
máxima añadida de sales de nitrito de sodio y/o potasio es de 200 ppm, expresada en nitrito
sódico y la dosis máxima calculada sobre el contenido neto total del producto final es de
125 ppm de nitrito expresados en nitrito sódico, en base a esto se puede afirmar que las dos
muestras tanto salchicha de pollo como el chorizo pre cocido parrillero superaron el valor
fijado; mientras que INDECOPI limita la cantidad residual a no más de 200 ppm de nitrito
de sodio en el producto final y a no más de 500 partes por millón de nitrato de sodio o
potasio en el producto cárnico terminado, por lo tanto también se puede afirmar que las
muestras mostraron valores mayores. Los valores obtenidos fueron de 1348.07 ppm para la
salchicha de pollo y 687 ppm para el chorizo Precocido. Las elevadas concentraciones de
nitratos en las muestras, pueden deberse a diferentes factores como la utilización de agua
potable en el preparado de dichos embutidos, debido a que el agua potable es una de las
fuentes importantes de aporte de nitratos, así como también se sabe que durante el proceso
de elaboración de estos embutidos, parte de los nitritos pueden oxidarse a nitratos (de 1 al
10%) incrementándose su valor en el producto final.
Según, Chasco y col., 1996 y col., 2004; Sebrank y Fox, 1985; el empleo directo del nitrito
en los productos cárnicos curados, tiene varias ventajas: inhibe más rápido la proliferación
de la flora bacteriana indeseable (por ejemplo, el nitrito ha demostrado una excelente
capacidad de inhibir el crecimiento del C. botulinum especialmente a pH cercanos a 6,0,
donde ejerce una eficaz acción conservadora) ; modifica el sabor y por sobre todas las cosas
los nitritos juegan un rol importante en la coloración de las carnes curadas. La coloración
de las carnes curadas según Girard, 1991; pasa por un proceso de nitrosilación, el cual
puede ocurrir mediante dos vías: bia directa, cuando la Mb reacciona con el óxido nítrico
(NO) produciendo el pigmento curado NOMb, y via indirecta, la Mb es oxidada a MMb,
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V. CONCLUSIONES
VI. BIBLIOGRAFÍA
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