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PRÁCTICA N° 9

EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES. DETERMINACIÓN DEL ESPECTRO DE


ABSORCIÓN.

I. INTRODUCCIÓN

Los cuerpos luminosos como el sol o la lámpara eléctrica, emiten un amplio


espectro que comprenden muchas longitudes de onda. Aquellas
longitudes de onda que están asociadas con la luz visible son capaces de
afectar la retina del ojo humano y con ello dan origen a las impresiones
subjetivas de la visión. Este espectro de absorción comprende un intervalo
de longitudes de onda entre los 400 - 750nm que involucran los colores del
violeta al rojo, pero gran parte de la radiación proveniente de estos
cuerpos luminosos no pueden ser percibidas por nuestros sentidos,
hablamos de la radiación UV, gamma, X y gran parte de la radiación que
emiten los cuerpos calientes, todos estos caen fuera de la región visible de
un ser humano.

Dentro de la región visible del espectro, las personas que tienen una visión
visible del color, son capaces de correlacionar la longitud de onda
transmitida de los objetos, que llega al ojo con subjetiva sensación de color
y el color en si algunas veces se utiliza por conveniencia para designar
ciertas porciones del espectro.

Una molécula específica puede absorber solamente fotones de luz de una


longitud de onda característica, esto se pone de manifiesto generalmente
en sus espectros de absorción. La energía absorbida forma parte ahora de
la molécula y se denomina a estos como compuestos activados.

Diversos organismos como las plantas verdes, algas y algunas bacterias


poseen pigmentos que capturan la energía luminosa para la fotosíntesis. La
clorofila es en general el pigmento más abundante y tiene el papel más
significativo en la captación de luz para la fotosíntesis. Se encuentran
cuatro tipos diferentes de clorofila entre los organismos fotosintéticos:
clorofila a y b, se localizan en las plantas superiores, en cambio las
bacterias fotosintéticas poseen bacterioclorofilas a y b.

Además de la clorofila en las membranas fotosintéticas pueden existir otros


pigmentos accesorios como son: carotenoides y las ficobilinas entre ellas la
ficoeritrina y la ficocianina.

Para los seres vivos las sustancias que transmiten color se encuentran
distribuidas ampliamente por lo que podemos observar en la naturaleza
infinidad de colores y matices, que son resultados de la interacción de las
diferentes moléculas cromóforas (que portan color).

Para esta práctica hemos usado diferentes pigmentos vegetales obtenidos


de los pétalos de las flores y hojas de plantas fanerógamas y algas.

El objetivo de la práctica es determinar el espectro de absorción de cada


pigmento.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1. Material

2.1.1. Material biológico:

Hoja y flores de distintos colores.


Algas marinas.

2.1.2. Material de laboratorio:

Pipetas
Embudos
Tubos de ensayo
Gradillas
Morteros

2.1.3. Reactivos:

Agua destilada
CHCL3 - CH3OH (1:1)
CHCL3: CLOROFORMO
CH3OH: METANOL
CH3COCH3: ACETONA

2.1.4. Equipos:

Balanza analítica
Espectrofotómetro
2.2. Procedimiento

2.2.1. PROCEDIMIENTO: "A" (HOJAS Y FLORES)

Pesar 2g de muestra biológica en la balanza analítica.


Triturar en el mortero la muestra con 10mL de cloroformo: Metanol.
Filtrar en el embudo con papel de filtro, procurar que el filtrado sea
translúcido.
Determinar la absorbancia de los pigmentos en el
espectrofotómetro.

2.2.2. PROCEDIMIENTO: "B" (ALGAS)

Pesar 2g de hojas frescas pero sin las nervaduras principales.


Enseguida, lavarlas con agua de caño y luego picarlas en tamaños
bien pequeñitos. Agregar Carbonato de calcio.
En un mortero de porcelana y con la ayuda de arena fina, moler las
hojas hasta apreciar una consistencia a modo de papilla.
Cuando se haya llegado a esta consistencia, verter 4mL de
acetona al 80%.
Filtrar y lavar mientras filtra, con 4mL más acetona al 80%. Este es el
extracto acetónico.
Verter 10mL de éter de petróleo a un tubo de ensayo y luego 10mL
del extracto acetónico. Agitar fuertemente por unos segundos. Dejar
reposar. Observar.
Descartar la capa inferior, con la ayuda de una pipeta Pasteur.
Enseguida se añaden 2mL de acetona al 92%, pero con mucho
cuidado.
Observar la formación de dos capas.

La capa inferior se transfiere a otro tubo de ensayo. Ahora tenemos dos


muestras.

III. RESULTADOS:

Λ A/ROS A/H A/ALGAS A/R A/N


400
420
440
460
480
500
520
540
560
580
600
620
640
660
680
700
720

λ = LONGITUD DE ONDA

A/ROS = ABSORBANCIA DEL PIGMENRO ROSADO

A/H = ABSORBANCIA DE HOJAS DE PLANTA

A/ALGAS = ABSORBANCIA DE HOJAS DE ALGAS

A/R = ABSORBANCIA DE PIGMENTO ROJO

A/N = ABSORBANCIA DE PIGMENTO ANARANJADO.

IV. DISCUSIÓN
V. CONCLUSIONES

VI. REFRENCIAS BIBLIOGRÁFICAS