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1.
Levi Patterson 1-745-849 2. Tifanny Navarro 4-781-2352
3.
Gabriela Rodríguez 4-799-2349
Bioquímica (Qm.235), Escuela De Tecnología Médica,
Facultad De Ciencias Naturales Y Exactas,
Universidad Autónoma De Chiriquí.
David, Chiriquí, Republica De Panamá.
Email: 1. levipatterson28@gmail.com 2 .tifannydalet@gmail.com
3.
gabyroqui1998@gmail.com
Resumen:
El objetivo de este laboratorio determinar detectar la actividad enzimática de la deshidrogenasa
succínica utilizando el extracto del hígado. Para la catálisis del sustrato, se realizaron 6 pruebas
por indicadores los cuales van a cumplir una función de aceptar electrones artificiales como el azul
de metileno. la cantidad de sustrato y agua vario para comprobar la efectividad de la enzima en una
cantidad considerable, cuando no había sustrato, cuando esta fue desnaturalizada y cuando se le
aplicaron los inhibidores artificiales que fueron el malonato de sodio, azida y el cianuro de sodio. al
final se compararon los resultados determinándose a veces la reacción de los inhibidores no
resultan del todo efectivas según la cantidad de sustrato y de la enzima presente para inhibir.
También se determinó que la reacción fue más eficiente la que tenía las cantidades similares de
sustrato, enzima y agua; mientras que los menos eficientes fueron con inhibidores fuertes los cuales
interfirieron con la función de la enzima donde el inhibidor más efectivo fue el malonato de sodio,
con esto logramos entender la importancia de tener un ambiente en las condiciones adecuadas
para que las enzimas realicen de forma efectiva su actividad catalítica en el organismo.
Palabras claves: Redox, Sustrato, Actividad Enzimática, Indicador, Homogenizado, Inhibidor.
Objetivos: que al aceptar átomos de hidrógenos del
sustrato, originan la forma leuco, la cual es
Detectar la actividad enzimática de la
incolora. Con este cambio de color del
deshidrogenasa succinica en extractos de
indicador redox se comprueba que la enzima
hígado utilizando indicadores redox como
está transformando el sustrato. Según
aceptores artificiales de electrones (Vázquez M. 2002).
Establecer que sustancias pueden actuar
como inhibidores de la deshidrogenasa Materiales y Reactivos:
succínica.
Descripcion capacidad cantidad
Marco teórico: Vasos 100 y 250 ml 3
químicos
La deshidrogenasa succínica es una enzima Licuadora 1
especial de la mitocondria, porque participa en Tubos de - 6
dos procesos metabólicos a la vez, el ciclo de ensayo
Krebs y la cadena de transporte electrónico.
El 2,6 diclorofenolindofenol (DICIPIP) y el azul
de metileno resultan ser indicadores redox
apropiados para funcionar como aceptores
artificiales de electrones y establecer la
actividad de la deshidrogenasa succínica en
los homogenizados de los tejidos. Se trata de
sustancias de color azul en su forma oxidada,
Nom Form Prop. físicas Toxicidad Metodología
bre ula y quimicas
cortar trozos pequeños del
higado y proceder a licuarlos
Fosfa (NaH2 Sólido, polvo Irritaciones en con 100 ml de agua hasta
to PO4) cristalino son la nariz en la obtener el extracto
mono olor. p.e: piel
básic 200°C. pF
o de 100°C
sodio
Hidro NaOH Masa Puede causar luego se toman 40 ml del
xido molar: 39.997 daños graves, homogenizado y se diluyen
de g/mol permanentes hasta 200 ml con agua
destilada
sodio Densidad: 2.1 al sistema
3 g/cm³ gastrointestinal.
S0líquido, 1 Irritación con
bar: 75.91 pequeñas
J·mol-1·K-1 exposiciones se agita la mezcla
vigorosamente y la preparacion
Azul C16H18 Densidad: 1.75 resultante se emplea en las
de ClN3S 7 g/cm³ diferentes pruebas
metil Punto de
eno fusión: 100 °C
Punto de al homogenizado del tubo 3 se
ebullición: Se calentara previamente a una
descompone temperatura de 52 °C, por espacio
de 15 minutos
Malo C7H12 Masa Irritante en altas
nato O4 molar: 160.17 concr¿entracio
de g/mol nes
sodio Densidad: 1.0 se agitan todos los tubos y se
colocan en baño maria a una
5 g/cm³
teperatura de 37 °C por un tiempo
Punto de de 30 minutos.
ebullición: 19
9 °C
Solubilidad
en
observar en que tiempo
agua: despre desaparece el color de los tubos ,
ciable centrifugar y decantar el liquido y
observar los cambios en cada tubo
Resultados Cuadro # 2 Orden de agregado de reactivos a
cada uno de los tubos
Cuadro #1 Preparación de soluciones
Solución Fosfato monobásico de sodio Solución Tubos
Amortiguadora 0.1M Se disuelve 1.38g Orden de 1 2 3 4 5 6
100ml de H2O y se ajustó el Rect
𝑝𝐻 A 7.4 mediante la adición A ml de 0.5 0.5 0. 0. 0. 0.5
de hidróxido de sodio 0.1N. amortig 5 5 5
uador
Solución De Previamente preparado
Azul De B ml de 0.0 0.5 0. 0. 0. 0.5
Metileno Al sustrato 5 5 5
0.02%
Tubo #1 y #6 sin
formación de
precipitado Antes de Luego de Luego de
Tubo #2 agregar la añadir la centrifugar
2 3 4 5 precipitado enzima enzima
6
Tubo #3 calentada sometida a
precipitado color temperatura
oscuro elevada
Tubo #4 gran
precipitado
Tubo #5 gran
cantidad de
precipitado
Cuadro #8 tubo #5 Agregado Azida
Cuadro #7 tubo #4 Agregado malonato