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Miyauchi Contreras, Camila Suan; Morillo Alfaro, Diego Marcelo; Narciso Boza,
Linda Milagros; Ortiz Fermín, Xiomara Janelle.
Docente
Velez Azañero, Armando Jesús Edilberto.
2019
INTRODUCCIÓN Commented [1]: Chicos, quiero aprovechar que tengo
el correo del profesor e intentar enviar el informe para
ver si lo corrige, ¿les parece bien?
El desarrollo de la vida es dependiente de la habilidad de las células para almacenar,
Commented [2]: perfectooo, pero que no se moleste
reparar y traducir la información de los genes (1), ya que estos contienen las xd
características fisiológicas y bioquímicas de todo ser vivo (2). La sustancia que Commented [3]: el miercoles nos dijo que no iba a
compone estos genes se denomina ADN (ácido desoxirribonucleico), esta es una corregir por correo porque sería como darnos
favoritismo y facil le hacian problemas :(
estructura química cuyos elementos fundamentales, los nucleótidos, se organizan
Commented [4]: chicoos quien tiene la caratula
linealmente, originando grandes secuencias de información (2). Asimismo, dichas
subunidades están constituidas por tres componentes: una base nitrogenada, un
grupo fosfato y un azúcar desoxirribosa. Las bases nitrogenadas pueden ser purinas
(adenina y guanina) o pirimidinas (citosina y timina) (3). El establecimiento de esta
estructura se remonta al año 1953 (4), cuando Francis Crick y James Watson
estudiaron la difracción del ADN en rayos X de Rosalind Franklin, cuyo aporte fue
inmenso para el entendimiento de la estructura de doble hélice (3).
Hoy en día, la extracción de ADN sirve como punto de inicio en análisis genéticos,
incluso con pequeñas partes de ADN (12),el estudio de la variación genética entre
individuos, poblaciones y especies sirve para explicar patrones y procesos ecológico-
evolutivos abordados por marcadores moleculares (técnicas de PCR y
secuenciación)(13).Los avances generados a la medicina se dieron en
nosotros(Práctica integral-prevenir/tratar determinadas enfermedades -diabetes.
“horóscopos genéticos”), en la medicina forense, saber más de los neandertales (ADN
extraído de fósiles), probar identidad de personaje (Tutankamón), retrato robot
genético (genes determinan características faciales - tecnología actual), prueba de
paternidad (14). En los últimos avances en la medicina se encuentra un caso particular
de un paciente que sufre de síndrome de Hunter, recibiendo medicamento vía
intravenosa, este contiene miles de millones de copias de un gen corrector unido a
herramienta (Zinc Finger Nucleases-tijera molecular) capaz de modificar su ADN (15).
Las nuevas tecnologías utilizadas en laboratorios fueron de gran aporte ya que acortó
el tiempo que se requerían las anteriores como la técnica de PCR que también pudo
ser optimizada por termocicladores y un equipo de electroforesis dando una mayor
precisión y exactitud a los resultados y poder analizar más muestras al mismo tiempo
(16). La electroforesis es útil para realizar una comparación entre las muestras de un
paciente enfermo y uno sano, para así poder identificar los ácidos nucleicos que
causan la infección u obtener un fragmento de ADN y este al ser localizado por el gel
sirve para futuros análisis(17). La técnica de PCR se aplica para buscar mutaciones
en enfermedades hereditarias e identificar mutaciones en determinados genes, como
en el Alzheimer (18) (19).
MATERIALES Y MÉTODOS
Para esta práctica se tuvo la mezcla de PCR ya realizada, esta fue de 25µl, y estuvo
compuesta por 12µl de agua ,7,5 µl de tampón, 1µl de MgCl 2, 1µl de Primers R, 1µl
de Primers F, 1µl de dNTPS, 0,5µl de Taq y 1µl de ADN. Se procedió a una
centrifugación para una óptima homogeneización de componentes; luego los tubos
de microcentrífuga, con la solución del mix de PCR, fueron colocados en un
termociclador, el cual estaba ya programado con las condiciones de amplificación.
Pasando etapas de Desnaturalización, donde estuvo a 94°C por 1 min; Hibridación,
donde estuvo a 52°C por 1 min; Elongación, donde estuvo a 72°C por 30 seg. Estas
etapas fueron repetidas por 29 ciclos más.
RESULTADOS
Mediante el proceso de cuantificación, se evaluaron las muestras de sangre de 12 Commented [5]: se escribe "doce" o así esta bien?
individuos de sexo variado con edades correspondientes a un rango de 17 años a 19 Commented [6]: mejor pon doce jej
años, donde se les extrajo las muestras a cinco hombres y siete mujeres.(Tabla1),
arrojando así los siguientes resultados:
El menor valor presentado fue de 13 µg/ml, y el mayor valor de la concentración de
ADN fue de 51 µg/ml resultando así una variación en las diferentes concentraciones Commented [7]: Por qué el menor fue de 13 y el
mayor fue de 51?
de las muestras de ADN de los diferentes estudiantes.
Commented [8]: este es otro parrafo?
El proceso de extracción de ADN fue hallado gracias al Kit Purelink Genomic debido
a la mayoría de beneficios para las muestras, sin embargo, se pudieron haber
originado unos porcentajes de error debido a que en un punto de la experiencia se
dió una mala manipulación de parte de los estudiantes al momento de realizar el
depósito ,de la muestra final del PCR, en los pocillos correspondientes para la
electroforesis ya que al ser colocadas varias muestras se rebalsaron lo que nos daría
como resultado un incremento en el porcentaje de error habitual.
DISCUSIÓN:
Según Cárdenaz (2016) La cantidad de glóbulos blancos son un factor que ocasionan
la variación de las distintas concentraciones de ADN encontradas en las muestras
realizadas, ya que en las células nucleares se encuentra el ADN, en este caso tiene
una relación como con la de los linfocitos encontrados en la muestra de sangre de
cada estudiante.
Cabe resaltar el rol que cumple la extracción del ADN. Kennedy et al. (2014), destaca
que cuando una técnica relativa de cuantificación es usada, los resultados se verán
influenciados por los efectos de la extracción. Por otro lado, Guo et al., postula que la
cantidad de ADN nuclear varía dependiendo del método de extracción utilizado.
Según un estudio acerca de la comparación entre 6 kits comerciales de Becker, et al.
(2016), se suelen preferir los kits de ADN comerciales ya que ofrecen superior
reproductibilidad, control de calidad y potencial para automatización. En el caso de
Purelink Genomic, la extracción se dio mayormente sin errores de reproductibilidad,
lo cual podría indicar que se trata de una marca comercial eficiente. El mínimo
porcentaje de error puede ser atribuido a errores en la manipulación y/o medición de
las muestras.
Pero también esta variación puede ser ocasionada por el manejo de las muestras al
ser traspasadas de un recipiente a otro o a la susceptibilidad de los diversos factores
de contaminación en la que se encuentran, por lo tanto la diferencia de sexo no influye
en las concentraciones de las muestras
En cuanto a la incidencia del gen Sox 1, Guth et al. (2008), explica que esta familia
de proteínas es caracterizada por actuar como importantes reguladores
transcripcionales de varios procesos de desarrollo. Poseen un rol indispensable en la
embriogénesis, neurogénesis y en la formación de órganos y tejidos. Asimismo, Pevni
et al. (1998), destaca que el gen Sox 1 aparece en la etapa embrionaria de inducción
neural, de la cual depende la formación de la placa neural. Según datos de NCBI,
estos genes pertenecen exclusivamente a los Homo Sapiens y son altamente
conservados a través de su evolución, lo cual conduciría a la deducción de que se
trata de un gen que la mayoría de humanos poseen; es por ello que los resultados
arrojaron una coincidencia en todas las muestras.
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