PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

RESUMEN
Se conocieron las técnicas de esterilización y los principios generales de preparación de
medios de cultivo. Los medios de cultivos solidos sintéticos (agar nutritivo y agar PDA)
permiten que la especie microbiológica crezca gracias a su composición y cumpliendo al
menos los requerimientos básicos de nutrientes; con los medios de cultivos se hizo una
siembra por agotamiento de estrías donde al final de la esta se observan con mayor claridad
las unidades formadoras de colonias.
Palabras clave: medios de cultivo, agar nutritivo, agar PDA.

ABSTRACT
The sterilization techniques and the general principles of preparation of culture media were
known. Synthetic solid culture media (nutritive agar and PDA agar) allow the
microbiological species to grow thanks to its composition and at least meet the basic nutrient
requirements; With the culture media, a seeding was made by striae depletion, where colony
forming units are observed more clearly at the end of the season.
Key words: culture media, nutritive agar, PDA agar.

1. INTRODUCCIÓN. MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos

que permiten el crecimiento de un tipo de
Un medio de cultivo es un conjunto de microorganismos determinado, inhibiendo
nutrientes, factores de crecimiento y otros el desarrollo de los demás.
componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los MEDIOS DIFERENCIALES. Son
microorganismos. La diversidad metabólica aquellos en los que se pone de manifiesto
de estos es tan grande que la variedad de propiedades que un determinado tipo de
medios de cultivo es enorme, no existiendo microorganismos posee.
un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las CONSTITUYENES HABITUALES DE
bacterias con exclusividad. LOS MEDIOS DE CULTIVO

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO A continuación, se da una idea general sobre

Son aquellos que permiten el crecimiento de
una gran variedad de microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son
aquellos que favorecen el crecimiento de u
determinado tipo de microorganismo sin
llegar a inhibir totalmente el crecimiento de
los demás.
algunos de los constituyentes habituales de
los medios de cultivo.
AGAR. Se utiliza como agente gelificante
para dar solidez a los medios de cultivo. En
el agar bacteriológico el componente
dominante es un polisacárido que se obtiene
de ciertas algas marinas y que presenta la
indudable ventaja de que, a excepción de
algunos microorganismos marinos, no es
utilizado como nutriente.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en
que ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales (p.a. carne, hígado, cerebro,
semillas, etc.) son extraídos con agua y calor
y posteriormente concentrados hasta la
forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son a menudo
empleados en la elaboración de los medios
de cultivo. Los más utilizados son el extracto
de carne, de levadura y el de malta.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de
compuestos orgánicos, nitrogenados y sales
minerales, que se obtienen por digestión
enzimática o química de proteínas animales
o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las
peptonas son muy ricas en pépticos y
aminoácidos, pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales minerales.
SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para
mantener el pH dentro del rango optimo del
crecimiento bacteriano a veces, es necesario
añadir algunos componentes al medio de
cultivo. Debido a que la mayoría de las
bacterias son neutrófilos, se suelen emplear
sales del tipo de los fosfatos visaditos ò
bipotásicos u otras sustancias como las
peptonas para prevenir la desviación del pH.
INDICADORES DE PH. Con el objeto de
poder detectar variaciones en el pH debido a
fermentaciones u otros procesos, se hace
necesario a veces añadir indicadores acido-
base que nos lo indiquen.
AGENTES REDUCTORES. Con el
objetivo de crear en los medios de cultivo
condiciones que permitan el desarrollo de
los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se
añaden estos agentes reductores siendo, los
más empleados la cisteína y el tioglicolato
entre otros.
AGENTES SELECTIVOS. La adición de
determinadas sustancias a un medio de
cultivo puede convertirlo en selectivo. Así,
por ejemplo, la adición de cristal violeta,
sales biliares, acida sódica, telurito potasico,
antibióticos, etc., a la concentración
adecuada hará que actúen como agentes
selectivos frene a determinados
microorganismos.
2. MATERIALES/ METODOS
En la práctica: preparación de medios de
cultivo se tomó un medio de cultivo sintético
(Agar nutritivo o Agar PDA) en el este caso
tomamos agar nutritivo y se pesó 0.2g con
ayuda de una espátula y una Balanza
calibrada, se trasladó a un beaker con agua
destilada y se disolvió, luego de esto se llevó
a una plancha de calentamiento hasta que
hirviera para homogenizar y finalmente se
incubo en autoclave a 37°C por 24 horas.
Con ayuda de un asa de siembra
(previamente esterilizada con un mechero
Bunsen como dio indicaciones el docente)
por siembra en estría o siembra por
agotamiento con coliformes.
3. RESULTADOS

Figura No. 1. Resultados del Cultivo de
bacterias por método de agotamiento
4. ANALISIS DE RESULTADOS
Lo medios de cultivo utilizados intervienen
en el éxito o fracaso de un proceso industrial.
La selección del medio de cultivo depende,
principalmente, del tipo de microrganismo
empleado, y el proceso que se quiere
obtener. (Krikorian, 2010). Por lo tanto, en
estas prácticas se sembraron medios de
cultivos de agar nutritivo, ya que es un
medio de cultivo usado normalmente para
todo tipo de bacterias.
Estos son muy útiles porque permanecen
solidos incluso a altas temperaturas,
además, el crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo que se
distinguen mejor las colonias pequeñas, en
un caldo de nutrientes, la bacteria crece en
el líquido, y aparece como una sustancia
espesa, con colonias difícilmente
observables. El agar nutritivo contiene
normalmente (p/v):0,5% de peptona;0,3%
de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5% de agar;0,5% de cloruro de sodio;
agua destilada; pH casi neutro (6,8) a 25
°C. Krikorian, A. D. (2010)., este cultivo se
dejó por 24 horas en incubación.
En la Figura No. 1. Resultados del Cultivo
de bacterias por método de agotamiento, se
observaron unidades formadoras de colonia
gracias a la aislación al final de la siembra,
estas se aprecian con mayor facilidad y se
notan las diferencias como el color y la
forma; Se recomienda mejorar la siembra de
cepas, para un futuro llevar una extracción
de más calidad. Krikorian, A. D. (2010).
5. CONCLUSIONES
• Para realizar prácticas en el laboratorio de
microbiología es necesario disponer medios
de cultivos estériles y resulta necesario
conocer la metodología de preparación
esterilización de estos.
• En la práctica se emplearon medios de
cultivo sólidos (agar nutritivo y agar PDA),
cabe resaltar que, para hacer siembras en el
laboratorio, es necesario que los cultivos al
menos satisfagan los básicos necesarios por
el microorganismo que se va a sembrar.
• Por medio de la técnica por agotamiento de
estrías se observaron unidades formadoras
de colonias, al inicio su cantidad era mayor,
al final de éste las colonias se aislaron mejor.
6. BIBLIOGRAFIA
• Recuperado de:
https://www.probiotek.com/productos/reactivo
 s/medios-de-cultivo-reactivos/agar-
dedextrosa-y-papa/
• Recuperado de:
https://www.probiotek.com/productos/react
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• Krikorian, A. D. (2010). Medios de cultivo:
generalidades, composición y preparación.
Cultivo de tejidos en la agricultura:
fundamentos y aplicaciones. Cali.
• Srinivasan, D., Nathan, S., Suresh, T., &
Perumalsamy, P. L. (2001). Antimicrobial
activity of certain Indian medicinal plants
used in folkloric medicine. Journal of
Ethnopharmacology, 74(3), 217-220.
7. CUESTIONARIO
 ¿Qué es el agar y cuál es su
origen?
El agar, también conocido como agar, es una
sustancia gelatinosa formada por
polisacáridos procedentes de la pared celular
de algas marinas. Se considera una de las
herramientas más necesarias en la rama de
biología.
Desde muchos siglos atrás ha sido utilizada
en la cocina de los países de extremo oriente,
aunque no fue hasta la mitad del siglo XIX
cuando su uso se extendió por Europa, con
usos como el espesado y el aclarado de
alimentos tan variados como los helados y la
cerveza, respectivamente.
Sin embargo, lo que no se suele conocer es
que tuvo origen en la cocina de un humilde
matrimonio alemán.
Desde entonces, su uso está más que
extendido en laboratorios; desde los de
microbiología, en los que se utiliza como
medio selectivo para el cultivo de ciertos
tipos de microorganismos, hasta los de
biología molecular, en los que se utiliza su
porosidad para la separación por tamaño de
algunas partículas.
En 1881, un joven médico, llamado Walter
Hesse, decidió llevar su trabajo más allá del
simple tratamiento de pacientes de un pueblo
rural, en el que estaba destinado, centrando
su atención también en la bacteriología y
cómo la contaminación ambiental y la falta
de higiene podían dar lugar a la propagación
de enfermedades.
Para ello, recogió varias muestras de aire y
agua, con el fin de cultivar las bacterias
presentes en ellas, pero se topó con un gran
problema al comprobar que la gelatina que
había utilizado para ello se fundía con las
temperaturas cálidas del verano, haciéndose
totalmente líquida y estropeando todo el
experimento.
Apesadumbrado por el problema y sin saber
cómo solucionarlo, un día decidió compartir
su pesar con su mujer, Angelina Fanny
Eilshemius, que rápidamente extrapoló la
situación a los postres que ella elaboraba en
su cocina, ya que podía cocinar pasteles y
gelatinas sin que el resultado se derritiera
con el calor.
Para ello, la joven utilizaba agar, un
material basado en algas que había sido
utilizado por su familia desde muchos años
atrás. Utilizarlo no parecía nada
descabellado, por lo que Walter decidió
tomar una muestra del preciado
ingrediente, para probar a sembrar sobre él
las muestras que había recogido para sus
investigaciones.
Y cuál fue su sorpresa al comprobar que,
efectivamente, el agar era un medio de
siembra magnífico, pues aportaba los
nutrientes necesarios, a la vez que se
mantenía estable, sin deteriorarse a causa
de las altas temperaturas o las enzimas
secretadas por las propias bacterias.
Además, como resultado, podía
esterilizarse sin problemas, a la vez que
ofrecía múltiples posibilidades para los
cultivos de todo tipo de bacterias, incluidas
las de crecimiento lento.
Hoy en día existen un sinfín de opciones
dentro del agar, pues se les añaden otros
recursos, como ciertos antibióticos o
colorantes selectivos, que permiten
discernir si en el medio está creciendo un
tipo concreto de bacterias.
 ¿Cuál es la composición de los
medios de cultivo Agar PDA y
Agar nutritivo?
Agar PDA: Tiene la infusión de papa
como fuente de almidones y la dextrosa son
la base para el crecimiento de hongos y
levaduras. El bajo pH (3.5) evita el
crecimiento de las bacterias. Cuando se va
a usar para el recuento de hongos y
levaduras, agregar al medio de cultivo una
vez esterilizado y enfriado
aproximadamente a 45ºC, 14 ml de una
solución estéril de ácido tartárico al 10%
para obtener un pH aproximado de 3.5.
Sembrar el medio de cultivo por estría en
la superficie o adicionar la muestra para la
técnica de vaciado en placa. Incubar hasta
7 días a temperatura ambiente.
PREPARACION AGAR DE DEXTROSA
Y métodos de conteo en placa para alimentos,
PAPA: Rehidratar 39 g del medio en un
litro de agua destilada. Reposar 10 a 15
minutos. Calentar agitando frecuentemente
hasta el punto de ebullición durante 1
minuto para disolverlo por completo.
Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb de
presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45ºC. Vaciar de
acuerdo a la técnica a seguir en cajas de
Petri estériles. Cuando se requiera el medio
inclinado en tubo, distribuirlo antes de
esterilizar. Si se acidifica el medio, no
sobrecalentar y fundir solo una vez, para
evitar la hidrólisis del agar.
Agar nutritivo: El medio contiene extracto
de carne, peptona y agar, siendo una
formulación suficiente para el desarrollo de
los microorganismos. El extracto de carne
proporciona al medio fuente de
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El
empleo de este medio es de acuerdo al tipo
de estudio por realizar. PREPARACION:
Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua
destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar
agitando frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para disolverlo
por completo.
 Identifique la función
de cada componente
Agar PDA: utilizado para el cultivo de
hongos. Este producto está conforme a los
Requerimientos Armonizados de las
Farmacopeas USP/EP/JP. Es un medio de
propósito general para levaduras y mohos
que puede ser suplementado con ácidos o
antibióticos para inhibir el crecimiento
bacteriano. Es recomendado para uso con
productos lácteos y pruebas realizadas en
cosméticos. El Agar Papa Dextrosa (PDA)
puede ser usado para el cultivo de levaduras
y mohos clínicamente significativos. La
base (infusión de papa) nutricionalmente
rica, estimula la esporulación de los mohos y
la producción de pigmentos en algunos
dermatofitos.

Agar nutritivo: se utiliza para el cultivo de

una variedad de microorganismos en un
entorno de laboratorio. El agar nutritivo no
está destinado a ser utilizado en el
diagnóstico de enfermedades u otras
condiciones en humanos. El agar nutritivo
sigue siendo un medio de uso general
ampliamente utilizado para el cultivo de
microorganismos no fastidiosos. Si es
necesario, se pueden agregar
enriquecimientos a este medio. El agar
nutritivo, modificado mediante la
incorporación de 4metilumbeliferil-β-D-
glucurónido (MUG), se utiliza para la
detección fluorogénica de Escherichia coli.
Cumple con los métodos estándar de la
APHA y la Asociación de Químicos
Analíticos Oficiales (AOAC). El agar
nutritivo se especifica en muchos métodos
estándar para pruebas de alimentos, agua y
otros materiales.