ANTICUERPOS

Carrera: Biotecnología
Materia: Inmunología
Mariela Jiménez Vargas
 Anticuerpos policlonales y monoclonales

Anticuerpos
producidos
por una sola
clona de
linfocitos B

Anticuerpos
producidos
por diferentes
clonas de
linfocitos B
Definición de anticuerpos policlonales
• Los anticuerpos policlonales (pAb) son
derivados de múltiples clonas de células B que
se han diferenciado a células plasmáticas en
respuesta a un inmunógeno.

• Un antisuero es un producto biológico, que

posee un gran número de anticuerpos,
resultado de la inmunización con determinado
antígeno.
PRODUCCIÓN DE ANTISUEROS
 Animales del laboratorio
La selección de la especie para la producción de pAb es
multifactorial.
• Distancia filogenética • Facilidad de colección de la
muestra
No se puede obtener
más del 10% de sangre
cada 10 días. Más de
esto puede resultar en
choque hipovolémico o
anemia.

• Disponibilidad del modelo • Condiciones de alojamiento

animal

www.cartoonstock.com
 Animales del laboratorio
• Edad de los animales
– Ratones 6 semanas
– Ratas 6 semanas
– Conejos 3 meses
– Cobayos 3 meses
– Pollos 18-20 semanas
– Cabras 6 a 7 meses
– Ovejas 7 a 9 meses

• Características y necesidades de los anticuerpos

(revisar la siguiente tabla)
 Animales del laboratorio
Animal Suero Posible Endogámicos Observaciones
(ml) mAb
Conejo 500 NO NO El más elegido cuando el Ag es limitado, sus Ab
son fácilmente caracterizados y purificados.

Ratón 2 SI SI El más elegido para Ab monoclonales. Algunas

cepas como NZB tienden a hacer autoanticuerpos,
se pueden usar para antígenos conservados.
Rata 20 SI SI Elegido para Ab monoclonales. Se prefiere para
anticuerpos anti-IgE.

Hámster 20 NO NO > SI Elegido cuando el antígeno es limitado. Se

prefiere cuando se requieren Abs fijadores de
complemento.
Cobayo 30 NO NO Difícil de sangrar

Pollo 50 NO NO Para antígenos mamíferos altamente

conservados. Se produce IgY (homólogo de IgG)
que no actúa con receptores Fc de mamíferos.
NZB: New Zealand Black
 Características del antígeno
• Inmunogénicidad
• Pureza: >0.99%, esterilidad ya que
podría haber inmunocompetencia.
• Toxicidad: endotoxinas o pH
fisiológico
• Cantidad: depende de la
inmunogenicidad, pureza, especie
animal a ser usada, adyuvante
usado.
 Dosis del antígeno
Depende de: especie a inmunizar, antígeno, volumen, órganos linfoides
que se involucrarán y el tipo de anticuerpo que se desea producir.

• La dosis del antígeno se puede definir como, la dosis óptima para lograr
la respuesta más fuerte ó la mínima dosis probable para inducir la
producción de un antisuero policlonal útil.
– Conejo: 0.5-1 mg de antígeno puro o 50-250 μg acompañado de
adyuvantes.
– Ratón: 10-200 μg.
– Cabras u ovejas: 250-5000 μg

• ** aunque la dosis no debe exceder los 25 μg por sitio para ratón y los
200μg para ratas cobayos o conejos con adyuvantes inmunoestimulates.
• Los refuerzos se deben dar 2-4 semanas después y generalmente no
deben superar los dos refuerzos.
Vías de inmunización
• Las vías de inmunización se
refiere al sitio de entrada
(administración) del antígeno.
 Intradérmico (i.d.)

 Subcutáneo (s.c.)

 Intramuscular (i.m.)

 Intraperitoneal (i.p.)

 Intravenoso (i.v.)
https://homesecurity.press/quotes/intracardiac-injection-in-mice.html

• Se evitan las vías donde se administra directamente el antígeno en los

órganos linfoides.
** Las plantas de los pies, articulaciones e i.v. se evitan cuando se usan
adyuvantes.
 Intradérmica
• Esta ruta se ve favorecida por la alta concentración
del antígeno y su rápida distribución a los nodos
linfáticos. Sin embargo, el uso de adyuvantes dirige a
severas ulceraciones.
• Los daños adversos se pueden minimizar con
múltiples sitios de inyección, lo que además puede
reforzar la respuesta inmune y puede prevenir el uso
de refuerzos.
– La adminsitración de 2ml de antígeno en un total de 30 a 50
sitios, resulta en un pico de 2 a 4 meses.
• Esta ruta es muy utilizada en ratas y ovejas.
• La administración en las patas traseras incrementa la
retención del antígeno, pero nunca se debería llevar
a cabo en conejos y no se deberían utilizar
adyuvantes, principalmente los de emulsión.
 Subcutánea

• Esta es la ruta más accesible y fácilmente de inyectar.

• El antígeno puede ser dispersado a múltiples sitios, incluso cuando se da una única
inyección. Es mejor con el uso de adyuvantes de emulsión.
• Se recomienda fraccionar las dosis para minimizar reacciones adversas asociadas
con los adyuvantes y el potencial de inducción de tolerancia.
• Una vez administrado el antígeno es absorbido lentamente y pasa a la linfa.
• Puede ser afectado por la circulación sanguínea, la actividad del músculo adyacente,
las características del antígeno, especie a inmunizar y sitio de inyección.
• Esta ruta es frecuentemente usada para antígenos solubles, en la inmunización
secundaria y minimiza su potencial de anafiláctico.
• Se han diseñado variantes para esta vía, en donde se requiere de cirugía, la
administración de implantes (micro pelotas) o antígeno impregnado en bandas de
nitrocelulosa.
 Intramuscular
• El músculo esquelético absorbe rápidamente pequeñas
moléculas (<2kDa) por medio de los capilares
vasculares. Por lo tanto, es indicado para antígenos con
peso molecular bajo.
• Permite la compartimentalización del antígeno para su
procesamiento.
• Los antígenos grandes y particulados, no pueden
penetrar la vascularización induciendo daño e
inflamación severa; pero entran fácilmente a la linfa y
los dirigen a los nodos linfáticos. Sin embargo, la
circulación linfática es limitada aquí, por lo que la
distribución del antígeno es muy lenta.
• Se pueden administrar grandes cantidades de antígeno
por este medio. Su uso está limitado a roedores.
• Con el uso de adyuvantes, la respuesta inflamatoria
puede ejercer daño a los nervios adyacentes,
resultando en un daño temporal o permanente de los
nervios.
 Intraperitoneal
• Es un eficiente método para llevar al
antígeno a la linfa y distribuir
ampliamente al antígeno. Además se
pueden administrar grandes volúmenes y
es fácil de acceder a ella.
• Esta ruta puede acoger a un gran número
de adyuvantes, incluyendo liposomas o
emulsiones.
• Es más usada en ratones.
• Al igual que la vía i.v. puede inducir
anafilaxia por la rápida absorción del
antígeno.
• La principal desventaja es su potencial
para causar peritonitis aguda, severa y
dolorosa postinmunización.
 Intravenosa
 Dirige antígenos particulados pequeños (virus,
bacterias o células) rápidamente a los órganos
linfáticos secundarios.
 Los antígenos solubles sin adyuvantes, en la
primer inmunización puede evitar sostener la
respuesta e incrementar la tolerancia.
 En la administración secundaria:
 Puede ser inefectiva, ya que forma inmunocomplejos.
 Se favorece la anafilaxia, aunque se puede evitar con
antihistamínicos.
 El acceso a la vena en algunas especies es Nunca se usa
limitada, además de que el volumen a inyectar para los
debe ser en relación al peso del animal, adyuvantes,
particularmente en los roedores. puede inducir
embolismo.
 Otras vías
• Cuando los antígenos son poco
inmunogénicos o se tiene muy pocas
cantidades de ellos, se recomienda utilizar vías
más directas, como la intrarticular, intranodal,
o intraesplénica.
Adyuvantes en animales de experimentación
• Los adyuvantes son sustancias que mejoran la respuesta
inmune a un antígeno y son ampliamente usados en los
procesos de inmunización para aumentar la producción de
anticuerpos, ya sea por que:
 Reducen la cantidad de antígeno,
 Número de inmunizaciones.
 Como un sistema dispensador de antígeno para su captación.

• La selección del adyuvante influye directamente en la:

 Cantidad
 Afinidad
 Isotipo
 Especificidad del epítopo.
 Clasificación de los adyuvantes
• Con el propósito de la producción de pAb, los adyuvantes se clasifican en:

 Sistemas dispensadores de antígenos: proveen una liberación

sostenida de antígeno a las células presentadoras de antígeno por la
formación de depósitos. Ejemplos: emulsiones y liposomas.

 Inmunoestimulantes: promueven la proliferación y diferenciación

de células del sistema inmune. Ejemplos: derivados bacterianos
como el lipopolisacárido de bacterias gram-negativas, muramil
dipéptido (peptidoglicano derivado de la pared celular bacteriana),
citocinas o DNA bacteriano.

 Combinados.
 Sistemas dispensadores de antígeno
(SDA)
• Son adyuvantes basados en emulsiones (agua en aceite o
aceite en agua), estos primeramente forman el depósito del
antígeno permitiendo una lenta y sostenida liberación del
antígeno a las CPA que resulta en la prolongada estimulación
de linfocitos B y síntesis de Ab; además de promover la
memoria inmunológica.

 Hidróxido de aluminio en gel

 Adsorbentes de fase sólida
 Materiales encapsulados como liposomas
 Adyuvantes
Adyuvante Composición Desventajas Ventajas
Adyuvante Agua en aceite mineral, Solo se usa en modelos Se obtienen altos
completo de monooleato de manida como experimentales por su títulos de Abs.
Freud surfactante y Micobacterium toxicidad
tuberculosis muerto por calor
Adyuvante Carece del microorganismo Solo se usa en modelos Se obtienen altos
incompleto de experimentales por su títulos de Abs.
Freud toxicidad

Titer Max agua en aceite (escualeno), Retardan la respuesta de Favorece la producción

monooleato de sorbitan los anticuerpos y tiene de IgG1, IgG2a e IgG2b,
(emulsificante) y un bajos títulos baja toxicidad
coopolimero (surfactante-
CRL8941).
Sistema de Emulsión de aceite (con Bajos títulos de Abs. Baja toxicidad,
adyuvante Ribi antígeno) en agua (solución Requiere inmuno- incrementa respuesta
(RAS) salina) y surfactante. estimulantes ya sea m.o. inmune humoral.
o parte de ellos (muramil
dipéptido)
Sales de Sales de aluminio El título de Abs baja a las Usados en vacunas
aluminio 3 semanas. humanas y veterinarias.
 Adyuvantes inmunoestimulantes
Adyuvante Composición Desventajas Ventajas
Complejos antígeno, Es limitado para Pocos efectos adversos.
inmunoestimulantes colesterol, un poco número Es para antígenos
(ISCOMs): fosfolípidos y de antígenos. particulados y solubles.
saponinas que Hay alto título de Abs y
forman una amplia gamma de
mezcla de isotipos.
micelios.
Oligodeoxinucleótido contiene motivos Activan a la respuesta
sintético: de CpG no inmune innata mediante
metilados que activación de PRR como
actúan como las TLR-9, lo que activa a la
secuencias de respuesta inmune celular
DNA bactariano. y regulación de la
producción de citocinas
proinflamatorias, además
de la respuesta inmune
humoral.