Clases 2 y 3 de Absociometria

ABSORCIÓN DE RADIACIÓN
Sólido
transparente,
REM incidente líquido REM transmitida
o gas
Radiaciones Electromagnéticas (REM) que no emergen son ABSORBIDAS
REM ABSORBIDA ES TRANSFERIDA a átomos, moléculas o iones capaces

de absorber la radiación, pasando de un estado fundamental a uno excitado.
Átomos, moléculas y iones presentan un número limitado de niveles

energéticos discretos y cuantizados, entre los cuales pueden ocurrir
transiciones, absorbiendo o emitiendo radiación características.
Clase 2 Absorciometría Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepción
NIVELES DE ENERGÍA DE UNA MOLÉCULA ORGÁNICA FLUORESCENTE
E Electrónica:
Energía electrónica
de la molécula o
átomo
E vibracional:
Energía resultante de
vibraciones de varios
átomos en una
molécula
E rotacional:
Energía resultante de
la rotación de la
molécula en torno a
su centro de
gravedad
Niveles de
Energía rotacional
Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepción
TRANSICIONES DE ENETRGIA EN ESPECTROSCOPIA
E ELECTRÓNICA > E VIBRACIONAL > E ROTACIONAL
PARA QUE OCURRA ABSORCIÓN

DE REM, D E DEBE CORRESPONDER
EXACTMENTE A TRANSICION E FOTON
INVOLUCRADA
D E = E Foton
TRANSICIONES EN
REGIÓN UV-VIS Transiciones electrónicas de la molécula:
(l =200-780 nm)
TRANSICIONES EN Transiciones Vibracionales de la molécula:

REGINES IR cercana y me- E del fotón permite que las molécula vibren alrededor
dio (l =0.78 – 50 um) de sus enlaces
ABSORCIÓN DE REM DE Transiciones rotacionales de la molécula:

REGIÓN IR lejana y E del fotón permite que las molécula roten en torno a
microondas su eje.
(l = 50 -100 um)
ESPECTROSCOPÍA: Es el estudio de las transiciones típicas de una
especie (átomo, ión, molécula), con lo que es posible su caracterización
Esp. de absorción atómica

De absorción
Esp. de absorción molecular
ESPECTROSCOPÍA
De emisión Esp. de emisión atómica
E Esp. de emisión molecular
ABSOR- EMISION
CION
Lo que se obtienes es un
ESPECTROGRAMA
%T
A
lo۷
l min
l max lo۷ Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepción
3s 3p
ÁTOMOS
3s 3p
ÁTOMOS
ESPECTROS ATÓMICOS
SON MÁS SENCILLOS
QUE ESPECTROS
MOLECULARES
MOLÉCULAS
ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR
La absorción de REM por un medio depende de:
1. l de la radiación (en otras palabras, de su energía)
2. Naturaleza de la especie molecular que absorbe
3. Concentración de la especie molecular que absorbe
4. Camino óptico que debe recorrer la REM a través del medio que absorbe
=2
A = - log T = log 100 - log %T = 2- log %T

Ley de Lambert
- BEER (LBB) A=kbc a y e dependen de:
e : absortividad molar k = e si c (moles/L) • Naturaleza de la

sustancia
a : absortividad k = a si c (g/L) • Longitud de onda
Potencia luminosa
transmitida
por la muestra
Pi P
MUESTRA
P
TRANSMISIÓN: T =
Po
Potencia luminosa
transmitida
Pi Po por el blanco
BLANCO P
% TRANSMISIÓN = * 100
Po
Límites de T y %T:
Si P = P0 T=1 %T = 100
Si P = 0 T=0 %T = 0
Unidades de e y a
A = a (e) x b x C
a = A / b c = 1 / cm x (g/L) 1 L= 1000 mL= 1000 cm3
2
a = 1 / cm x (g/1000cm3)
a = cm2 / mg
mg
M= moles/L
e=A/bc = 1 / cm x (mol/L)
1 L= 1000 mL= 1000 cm3
2
e = 1 / cm x (moles/1000cm3)
e = cm2 / mmol
mmol
a y e dependen de:
Por lo tanto: a x PM = e • Naturaleza de la sustancia
• Longitud de onda
La absorción de REM por un medio
depende de:
1. l de la radiación
2. Naturaleza de la especie molecular

que absorbe (a o e)
3. Concentración de la especie
A (l) = a (e) (l) x b x c
molecular que absorbe
4. Camino óptico que debe recorrer la

REM a través del medio que absorbe
a = cm2 / mg
Unidades:
e = cm2 / mmol
CURVAS DE CALIBRACIÓN Ecuación de una recta
y = b ± mx
P= P0 x 10 -kc A= a (e) x b x c A = 0 + (ab) x C
A = 0 + (eb) x C
%T - log T A
Dy/Dx = m = a*b (e*b) Dy/Dx = m = a*b (e*b)

C
C C
Previamente hay que determinar la l a la que se hace una Curva de calibración:

l se elige a través del espectrograma
Pendientes de l1 y l2 son distintas:
A
Espectrograma A Curva de calibración  l1 tiene mayor pendiente, lo que
corresponde a un máximo de
l1 absorción.
Curva de Calibración adecuada es
l2 la de mayor absorción (tiene mayor
sensibilidad).
Para obtener concentración de M.P
l1 l2 l C se interpola en la curva adecuada.
MP
VALIDEZ DE LA LLB
Como toda ley, tiene restricciones
• Es válida para luz monocromática (una sola l), porque A = f(l)
• Es válida para soluciones diluidas (10-2-10-3 M como max.)
• Es válida para soluciones verdaderas (no suspensiones, etc)
• Es válida para T° cte. y n cte.
Desviaciones LLB:
• Origen Químico (+ o -)
• Origen Instrumental (-)
Desviaciones de origen químico (+ o -) :

• Indica presencia de un equilibrio químico (el analito se disocia, asocia o
reacciona con el solvente, dando un producto con un espectro de absorción
distinto al del analito original).
• La desviación puede ser positiva o negativa (se visualiza en la c. de c.)
Ejemplo Cr2O7= + H2O 2 CrO4= + 2H+
pH
Curva de calibración
(sin ajuste de pH)
l = 450
A
Espectrograma
CrO4=/OH- Desv. Neg.

A
Cr2O7=/H+ C
Curva de calibración
(sin ajuste de pH)
l = 375 Desv. positiva
375 450 l
A
C
Desviaciones de la LLB por efecto de radicación policromática
Espectrograma Curva de calibración
Desviaciones de la Ley de LLB por efecto de radicación policromática
(suponiendo que a l 1 tenemos e1 y a l2 tenemos e2)
Desviaciones de origen instrumental:
•Pueden producirse por falta de monocromaticidad
•Pueden producirse por presencia de luz “parásita” o “espúrea” (luz que
proviene de otras fuente y no del haz de luz incidente).
Presencia de luz parásita o espúrea:

•Corresponde a luz que llega al detector, pero que no forma parte del haz de
medida.
•Es producto de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas del
instrumento.
EFECTO DEL % DE LUZ ESPÚREA SOBRE LA LINEALIDAD DE LLB
ABSROBANCIA
(Ps/P0) x100
Luz espúrea ≥ 0.1% es

fuente potencial de error
Concentración M x 103
EFECTO DE LA LUZ ESPÚREA EN MEDIDAS DE ABSORBANCIA
A % A
Verdadera Luz espúrea Observada
a = cm2/mg
e= cm2/mmol
RESUMEN: LLB: A = a x b x c dependen de l y de la
naturaleza de la sustancia
Valores de A : entre 0 y infinito
A= - log T ó 2 - log %T Valores de T : entre 0 y 1
Valores de % T: entre 0 y 100
Limitaciones de LLB:
Desviaciones de origen Químico: Desviaciones de origen Instrumental:
Equilibrios químicos • Falta de monocromaticidad del haz de medida
Desviaciones + ó – Desviaciones –
• Presencia de luz espúrea
Desviaciones -
Para dilucidar si existe desviación de LLB: A

Hacer curva de calibración de A vs C
y verificar linealidad
Desv. negativa
Si el resultado es:
Una recta: no hay desviación
Desv. +: Desv. Orig. Químico C
Desv. -: Desv. Orig. Químico o
Instrumental
Para dilucidar si la desviación es de origen químico o instrumental:
Graficar A=f (C) pero con el producto b * C constante (aumentar C y
disminuir b)
A
Si obtenemos una recta:
Desv. Química
Si la recta se curva: Desv. Instrumental
Desv. Química
C
Si el resultado es una recta, significa que e=cte (b*c cte), y por lo tanto no es el
sistema químico que falla.
Si hay desviación significa que e ≠ cte entonces si hay un equilibrio químico de por
medio que hace que e varíe.
2C = C
b 2b
APLICACIONES CUANTITATIVAS
1.- Método absoluto: cMP = A MP/ a (e) x b
•Aplicación directa de la LLB Donde a (e) se ha determinado
•Método exige que se cumpla LLB previamente con un patrón de
concentración conocida
2.- Método del factor:
• Se prepara una solución patrón de la A MP = a x b x cMP
sustancia (concentración conocida) y
se hace regla directa con la muestra
A ST = a x b x cST
problema (MP)
• Método exige que se cumpla LLB C MP = A MP x c ST /A ST
3.- Método de la curva de calibración: factor
• Se preparan varias soluciones de A
concentraciones conocidas del patrón
y se grafica vs A de cada solución.
m=axb
• La muestra problema se interpola A MP
m=exb
dentro del rango lineal obtenido
a o e se obtienen como un valor C MP C
promedio por lo tanto es la
mejor manera de determinarlo

Clases 2 y 3 de Absociometria

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ABSORCIÓN DE RADIACIÓN

Radiaciones Electromagnéticas (REM) que no emergen son ABSORBIDAS

REM ABSORBIDA ES TRANSFERIDA a átomos, moléculas o iones capaces

Átomos, moléculas y iones presentan un número limitado de niveles

PARA QUE OCURRA ABSORCIÓN

TRANSICIONES EN Transiciones Vibracionales de la molécula:

ABSORCIÓN DE REM DE Transiciones rotacionales de la molécula:

Esp. de absorción atómica

A = - log T = log 100 - log %T = 2- log %T

e : absortividad molar k = e si c (moles/L) • Naturaleza de la

a = A / b c = 1 / cm x (g/L) 1 L= 1000 mL= 1000 cm3

2. Naturaleza de la especie molecular

4. Camino óptico que debe recorrer la

Dy/Dx = m = ab (eb) Dy/Dx = m = ab (eb)

Previamente hay que determinar la l a la que se hace una Curva de calibración:

Desviaciones de origen químico (+ o -) :

CrO4=/OH- Desv. Neg.

Espectrograma Curva de calibración

Presencia de luz parásita o espúrea:

Luz espúrea ≥ 0.1% es

Para dilucidar si existe desviación de LLB: A

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