UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE QUÍMICA

LABORATORIO DE EQUILIBRIO Y CINETICA

PRÁCTICA 7. CONOCIMIENTO DE
TÉCNICAS ANALÍTICAS
PARTE I: FUNDAMENTOS DE
ESPECTROFOTOMETRÍA.

Equipo: 4
● SÁNCHEZ ORTEGA DIEGO
● GONZÁLEZ CASTAÑEDA DANIEL

● ROSETE AMBRIZ SERGIO ANTONY

● LEON FLORES PEDRO DAVID

PROF. RAMIRO EUGENIO DOMÍNGUEZ DANACHE

GRUPO: 23 SEMESTRE 2020-1
OBJETIVO GENERAL.

Conocer y aplicar los fundamentos de la espectroscopía para la determinación de

concentraciones en soluciones.

OBJETIVOS PARTICULARES.

A. Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables involucradas

en la Ley de Lambert-Beer.
B. Seleccionar la longitud de onda apropiada para las mediciones de absorbancia.
C. Construir una curva patrón de soluciones de yodo (serie tipo).

INTRODUCCIÓN.

La espectroscopía UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-

Visible de moléculas orgánicas e inorgánicas. La región visible , a la que es sensible
el ojo humano, se localiza
entre los 380 y 780 nm.

La absorción de la radiación
ultravioleta o visible por
moléculas, ya sean orgánicas
o inorgánicas, generalmente
se se produce por la
excitación de los electrones
de enlace, por lo tanto, la longitud de onda de los máximos de absorción se puede
relacionar con los enlaces de las especies absorbentes. Los métodos
espectroscópicos se basan en la capacidad de las sustancias de absorber(o emitir)
radiación electromagnética. Éstos se pueden emplear para determinar la
concentración de un reactivo o producto durante una reacción.

El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la solución

en la celda y la compara con la que se transmite o absorbe a través de una solución
de referencia denominada “blanco”.

La transmitancia de la muestra se define como la relación de la radiación transmitida

1
y la incidente (𝑇 = 𝑙𝑛). La disminución de la intensidad de la radiación depende de la
concentración del absorbente y de la longitud del camino recorrido por el haz. Estas
relaciones se recogen en la Ley de Lambert-Beer, la cual es el fundamento de la
espectrofotometría.

𝐴 = −𝑙𝑜𝑔10 𝑇 = 𝜀 𝑏 𝑐
ε es la constante de proporcionalidad llamada coeficiente de absorción molar,
absortividad molar o coeficiente de extinción(𝑀−1 𝑐𝑚−1 ). Es la característica de una
sustancia que nos dice cuanta luz absorbe a una longitud de onda determinada.

b es el paso óptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm).

c es la concentración molar de la especie (M) de la cual estamos midiendo la

absorbancia.

La Ley de Lambert-Beer se cumple para una radiación monocromática que atraviesa

una disolución diluida (≤0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un
equilibrio que depende de su concentración.

Instrumentación: Todo espectrofotómetro cuenta con los siguientes elementos:

Fuente de luz: Un filamento de tungsteno que funciona mediante una fuente de

alimentación estabilizada proporcionando una radiación de intensidad constante el
tiempo suficiente para asegurar una buena reproducibilidad de las lecturas de
absorbancia.

Selector de longitud de onda: Se trata de una sencilla red de difracción, que permite
separar la longitud de onda. Tras seleccionar la longitud de onda la radiación pasa a
través de un controlador de luz, que consiste en una abertura de forma de V que se
introduce o saca del haz para controlar la intensidad de la luz que incide en la
fotocelda.

Celda: Que contiene a la solución, generalmente es de un material transparente que

no absorbe la luz. Su longitud y capacidad varía según el equipo y diseño, pero el
paso óptico es en la mayoría de los casos de 1cm. Las hay de paredes cilíndricas o
planas.

Detector: A ésta llega la radiación tras pasar por un filtro y por la muestra. Se trata
de un fototubo de medida o transductor que recibe la señal de radiación
electromagnética y la convierte en una señal eléctrica de magnitud proporcional a la
intensidad de la radiación recibida.Este va acoplado a un sistema amplificador que
produzca o genere una señal eléctrica mucho mayor a la señal recibida. Se basa en
el efecto fotoeléctrico de los metales que al irradiar los generan electrones.
Escala de medida: La señal eléctrica del detector una vez amplificada se registra
bien en una escala analogica o en una pantalla digital que proporcionan los valores
de Transmitancia y/o Absorbancia.

PROBLEMA.

A partir del espectro de absorción, de una solución acuosa de yoduro(I3), seleccionar

la longitud de onda apropiada para determinar su coeficiente de absortividad molar a
partir de una curva patrón.

CUESTIONARIO PREVIO.

1. ¿Cómo se determina el espectro de absorción una solución colorida?

La espectroscopia de absorción es la medida de la cantidad de luz absorbida

por un compuesto en función de la longitud de onda de la luz. En general, se
irradia una muestra con una fuente de luz y se mide la cantidad de luz
transmitida a varias longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el
fenómeno en un gráfico.

2. ¿Cómo se selecciona la longitud de onda apropiada en un espectro para la

aplicación en la determinación de concentraciones por espectrofotometría?

Se debe de seleccionar la longitud de onda donde la muestra presenta la

máxima absorción

3. ¿Qué establece la ley de Lambert-Beer?

La Absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente

proporcional a su actividad óptica, longitud del paso óptico y su concentración.
Es una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades
del material atravesado.

4. ¿Qué es, para qué sirve y cómo se construye una curva patrón?

Es un marco de referencia que se construye de cantidades conocidas de una

sustancia que se utiliza para determinar la cantidad de especies presentes en
una muestra incógnita.

Se realiza mediante:

● Elegir el estándar.
● Seleccionar el rango de la curva de patrón.
● Realizar diluciones seriadas.
● Medir la absorbancia de cada una.
 5. ¿Explica porque se requiere adicionar KI a la mezcla 𝐼2 /agua?

𝐾𝐼 + 𝐼2 → 𝐾𝐼3 𝑝𝑒𝑟𝑜 𝑎𝑙 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑟 𝑒𝑛 𝑎𝑔𝑢𝑎, 𝐾𝐼 + 𝐼2 → 𝐾 + + 𝐼3−

Al tener presente solo el KI en el agua no se presentará una solubilidad alta

por lo que para que existe un aumento en la solubilidad se necesita agregar
yodo molecular para que este logre ser más soluble y presentar los iones
correspondientes.

PROPUESTA DEL DISEÑO DEL EXPERIMENTO.

Llevar a cabo una discusión grupal para identificar las variables involucradas y
plantear la hipótesis que ayude a proponer el diseño del experimento que pueda
conducir a la resolución del problema planteado (considerar que en el laboratorio se
dispone del material indicado en el punto VI).

Calibración del espectrofotómetro y barrido del espectro de absorción

● Identifica cada uno de los componentes del espectrofotómetro que vas a usar
(se recomienda revisar el manual de procedimientos para el espectrofotómetro
en uso).

Recomendaciones generales.

1. Encender el espectrofotómetro y esperar 15 minutos.

2. Seleccionar la longitud de onda más baja (se sugiere 330 nm). Ajustar con los
botones de nm▲ y ▼nm hasta llegar a la longitud de onda deseada.

3. Introducir la celda con el blanco (disolvente con un volumen hasta la marca

indicada; nunca llena) en la porta-celda, oprime la tecla de calibración en Absorbancia
(0A/100%T) y esperar a que se ponga en ceros la absorbancia, a continuación, sacar
la celda.

4. Introducir la celda con la solución de yodo (a una concentración de 2 x 10-4 M, para

lo cual se tiene que hacer una dilución de la solución original 1:10), registrar el valor
de absorbancia a una longitud de onda seleccionada (nm).

5. Incrementar en 10 nm la longitud de onda y repetir el procedimiento a partir del

punto 3 y realizar lecturas hasta llegar a 510 nm. Registrar los datos de absorbancia
en la tabla 1.

Curva patrón 1. Preparar soluciones de distinta concentración (Serie tipo), a partir de

la solución de referencia I2 –KI (0.002M - 0.2M). (ver Tabla 2)
2. Con el valor de la longitud de onda seleccionada a partir del espectro de absorción,
realizar la calibración con el blanco, posteriormente determinar la absorbancia para
cada solución de la serie tipo. Registrar las lecturas de absorbancia en la tabla 2.

REACTIVOS Y MATERIALES.

Reactivos Material y Equipo

I2–KI (0.002M-0.2M) (solución de 1 Espectrofotómetro

origen)
2 celdas espectrofotométricas
H2O destilada
4 vasos de precipitados de 50 ml
Nota: Hacer dilución 1:10 para el
barrido de longitud de onda. 6 tubos de ensayo (15 mL)

1 pipeta graduada de 1 mL

1 propipeta

METODOLOGÍA EMPLEADA.

TABLAS DE DATOS EXPERIMENTALES, CÁLCULOS Y RESULTADOS.

Tabla 1. Absorbancia de la solución de yodo a diferentes longitudes de onda

Evento λ (nm) Absorbancia Evento λ (nm) Absorbancia

1 325 1.52 11 420 0.285

 2 330 1.73 12 430 0.218

3 340 2.193 13 440 0.166

4 350 2.441 14 450 0.121

5 360 2.298 15 460 0.083

6 370 1.733 16 470 0.058

7 380 1.26 17 480 0.037

8 390 0.862 18 490 0.022

9 400 0.572 19 500 0.013

10 410 0.387 20 510 0.004

Tabla 2. Absorbancia a diferentes concentraciones molares de yodo a λ= 460 nm

Vol. de solución (I3-) Vol. de H2O

Mezcla (I3-) mol/L Absorbancia
(0.002 M) (ml) (ml)

1 2.5 2.5 0.001 0.571

2 2 3 0.0008 0.453

3 1.5 3.5 0.0006 0.375

4 1 4 0.0004 0.226

5 0.5 4.5 0.0002 0.083

ALGORITMO DE CÁLCULO.

Cálculo para obtener las concentraciones deseadas para un volumen de 5 mL de

solución.
 𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2

𝐶2 𝑉2 (0.001 𝑚𝑜𝑙/𝐿)(5𝑚𝐿)
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 0.001; 𝑉1 = =
𝐶1 0.002 𝑚𝑜𝑙/𝑙
= 2.5 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝐼3− 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙

𝑉𝐻2 𝑂 = 𝑉𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎 − 𝑉𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 5 𝑚𝐿 − 2.5 𝑚𝐿 = 2.5 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂

ELABORACIÓN DE GRÁFICAS.
ANÁLISIS DE RESULTADOS.

1.- ¿A qué longitud de onda se localiza el máximo de Absorbancia de la solución de

yodo 2𝑥10−4 M?

R= A 350 nm para la disolución de yodo 0.0002 M, alcanzando una absorción de

2.441.

2.- Justifica la aplicación de la longitud de onda para la determinación de la

absorbancia de las soluciones de la serie tipo.

R= Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente

una longitud de onda donde la absorbancia sea máxima pero donde este presente
que la representación gráfica de la absorbancia frente a la concentración le
corresponda una línea recta. En este caso se observó que a partir de 460 nm se
presenta una tendencia lineal por lo que este es el valor máximo de longitud de onda
donde se aplica la ley de Lambert-Beer.

3. ¿Qué relación presenta la Absorbancia con la concentración en la curva patrón?

R= Una relación lineal, ya que al ir aumentando la concentración aumenta la

absorción, es decir, son directamente proporcionales.

4.- ¿Qué representa la pendiente de la gráfica de la curva patrón?

𝛥𝑌 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
R=𝑚 = 𝛥𝑋 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

Este cociente se relaciona con la ley de Lambert-Beer-Bourger que es la siguiente

ABSORBANCIA = (ε × b) × c; donde C es concentración por lo tanto al despejar (ε ×

b) tenemos:

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
= (𝜀 × 𝑏) → 𝑚 = (𝜀 × 𝑏)
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

La pendiente corresponde al coeficiente de absorción molar multiplicada por el paso

óptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm)

CONCLUSIONES.

La absorbancia está relacionada con la concentración de la sustancia, c, por la ley de

Lambert-Beer de forma directamente proporcionales (𝐴 = 𝜀 𝑏 𝑐). Pero para que esto
se cumpla se realiza el espectro de absorción de la sustancia, donde se encuentra el
valor de longitud de onda para el cual la absorbancia es máxima en una tendencia
lineal para que se pueda cumplir la ley de Lambert-Beer, en este caso fue de 460 nm.

MANEJO DE RESIDUOS.
En esta práctica se utilizaron diferentes disoluciones con diferentes concentraciones
las cuales se desecharon en el envase correspondiente.

BIBLIOGRAFÍA.

● Castellan, G. W. (1987). Fisicoquímica (2ª ed.). México: Pearson Educación.

● Levine, I. N. (2004). Fisicoquímica (5ª ed.). D.F, México: Mc Graw Hill.
● Tippens P. (2010). FISICA, CONCEPTOS Y
APLICACIONES.México:MCGRAW-HILL.
● Chang. (2008). Fisicoquímica, 3a ed, México, Mc.GrawHill.