Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia

Prácticas de Laboratorio.

Asignatura: Laboratorio de Bioquímica II.

Docente: Q.F. Aida Castro Posligua Mg

Número de la Tema de la práctica de laboratorio.
práctica EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HÍGADO Y
#6 DETERMINACIÓN DE GLUCOSA.
Nombre: Tanya Geovanna Navarro Figueroa
Semestre: 5 Paralelo/grupo: 4-(4A) Viernes.
Objetivo:
 Obtener glucógeno mediante un proceso de extracción con una solución alcalina y posterior
identificación de glucosa mediante reacción de Molish.
Fundamento teórico.
GLUCOSA.
La Glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno
de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la
sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes
pancreáticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma
de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja, en condiciones
normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles
de glucosa en sangre.
El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas
aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia.
GLUCÓGENO.
Los seres vivos almacenan carbohidratos en forma de polisacáridos, siendo el glucógeno el carbohidrato de
reserva de la célula animal.
El glucógeno está formado por unidades monoméricas de glucosa unidas por enlaces glucosídicos α-(1,4),
cuando se unen aproximadamente entre 8-12 residuos, ocurren puntos de ramificación donde se establecen
enlaces α-(1,6). (FCV, s.f.)

EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO TISULAR.

El glucógeno es extraído del tejido (hepático o muscular) mediante tratamiento con KOH (30%) hirviente. Con
este tratamiento, las proteínas y lípidos complejos son hidrolizados, pero no el glucógeno. Posteriormente,
cuando se adiciona etanol, el glucógeno se hace insoluble y los otros compuestos permanecen en solución.
El glucógeno insoluble es luego separado por centrifugación y determinado como glucosa, sin previa
hidrólisis. (FCV, s.f.)
Se ha demostrado que en tejidos con alto contenido de glucógeno, como hígado y músculo (2-10 g% y 1-2
g% respectivamente), este polisacárido puede ser determinado en presencia de proteínas y sin hidrólisis.
Esto representa una ventaja sobre otros métodos en los cuales hay que precipitar el glucógeno y someterlo
a un proceso de hidrólisis larga.
Reacción Molish.
Forma parte de la composición del reactivo de Molish el α-naftol el mismo que se lo utiliza al 5 % en etanol
de 96° por ello a temperatura ambiente en un tubo de ensayo se debe colocar la muestra o solución problema
más el reactivo de Molish posteriormente se adiciona
ácido sulfúrico (H2SO4) e inmediatamente aparece la
formación de un anillo color violeta en la interface.
Es una reacción cualitativa, por lo que no permite saber
la cantidad de glúcidos en la solución original. La
reacción entre el ácido sulfúrico y la α-naftol forma un
anillo de color verde claramente visible, cuando no hay
Glúcidos. Cuando la concentración de glúcidos es alta,
se forma un precipitado rojo que al disolverse, colorea
la solución. La reacción de Molisch-Udransky es
considerada como una prueba general para
identificación de Glúcidos y un resultado negativo
excluye la presencia de estos. La presencia de Glúcidos
se pone de manifiesto por la formación de un anillo de
color púrpura-violeta en la interfase.
Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos
reductores presentes en la muestra.
Todos los azúcares por acción del ácido sulfúrico
concentrado se deshidratan formando compuestos
furfúricos por ejemplo las hexosas san hidroximetil
furfural. Los compuestos furfúricos reaccionan
positivamente con el reactivo de Molish que contiene
alfa naftol. (Parreño, 2014)

Reactivos de laboratorio

 1 Solución de Hidróxido de sodio 30%.

 Solución saturada de Sulfato de sodio.
 Alcohol absoluto
 Alfa naftol
 Ácido sulfúrico

Materiales de laboratorio
1. Tubos de ensayo
2. Pipetas
3. Gradillas
Equipos de laboratorio
1. Centrifuga
2. Balanza
Actividades por desarrollar/ técnica operatoria o procedimiento

1. Pesar 3 g de Muestra (hígado) en un vidrio reloj.

2. Agregar 5ml kOH al 30%.
3. Triturar y pasar a un tubo de ensayo 180 x 16 mm
4. Llevarlo a baño de agua hirviendo por 15 minutos. Retirar y enfriar
5. Centrifugar por 5 minutos a 3000rpm, descartar el precipitado
6. Adicionar al sobrenadante 0,5 ml de sulfato de sodio al 15%, mezclar
7. Añadir 8 ml de etanol al 95%, mezclar
8. Llevar a baño de hielo durante 15 minutos
9. Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm. Descartar el sobrenadante
10. Al sedimento (glucógeno) agregar 2ml de agua destilada y homogenizar
11. Agregar a 1 ml de residuo 3 gotas de alfa naftol + 2-3 ml de ácido sulfúrico conc. (Reacción de
Molish). Observar la presencia de carbohidrato.
Resultados obtenidos.

Formación de un anillo de
color violeta en l interfase.
Reacción de Molish

Conclusión.

Finalmente, se cumplió con el objetivo de la practica consiguiendo la identificación del glucógeno por medio
del tejido hepático del pollo, la cual dio positivo formando un anillo de color violeta en la interfase, se tomó el
hígado del pollo ya que este es el órgano de mayor reserva de glucógeno.

Recomendaciones.

1. Recomiendo que al momento de agregar el ácido sulfúrico este debe ser puesto por las paredes del
tubo.

REFERENCIAS.
FCV. (s.f.). Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular. Recuperado
el 14 de 12 de 2018 , de
http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica_ii/glucogeno_tisular.pdf
Parreño, J. (25 de mayo de 2014). Trabajos Bioquímicos. Recuperado el 16 de noviembre de 2018 , de
Reacciones de reconocimiento Azúcares Reductores:
https://sites.google.com/site/trabajosbioquimicos/home/reacciones-de-reconocimiento-azucares-
reductores