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La calidad del agua y la susceptibilidad antifúngica de levaduras

patógenas oportunistas de los ríos

ME Monapathi, CC Bezuidenhout y Rhode OHJ

RESUMEN

ME Monapathi
Levaduras de las fuentes de agua se han asociado con enfermedades que van desde super fi infecciones de las mucosas ciales a enfermedades
CC Bezuidenhout ( Unidad de autor) correspondiente para la Ciencia y

que amenazan la vida. El objetivo de este estudio fue determinar la calidad del agua así como la diversidad y antifúngica susceptibilidad de Gestión Ambiental -
Microbiología de la Universidad del Noroeste, ciencias
levaduras a partir de dos ríos. los niveles de levadura y datos de parámetros fisicoquímicos fueron analizados por análisis de componentes ambientales, Campus Potchefstroom, Private Bag X6001,

Potchefstroom 2520, Sudáfrica Enviar un e-mail: carlos.bezuidenhout@nwu.ac.za

principales para determinar correlaciones entre los datos fisicoquímicos y los niveles de levadura. morfotipos levaduras se identificaron fi ed por

pruebas bioquímicas y secuenciación de genes 26S rRNA. Se llevaron a cabo pruebas de susceptibilidad de difusión de discos antifúngicos.

parámetros físico-químicos del agua estaban dentro de la gama de calidad de agua objetivo (TWQR) para la cría de ganado. Para el uso de

irrigación, sólidos disueltos totales y nitratos no estaban dentro del TWQR. los niveles de levadura oscilaron entre 27 ± 10 y 2573 ± 306 ufc / L. OHJ Rhode
Cultivos de Investigación Agrícola del Consejo-Grain
Sólo no pigmentada, se aislaron levaduras ascomycetous. Saccharomyces cerevisiae y Candida glabrata con mayor frecuencia fueron aislados. Instituto,
Potchefstroom,
También se aislaron varios otros agentes patógenos oportunistas. Un gran número de los aislados eran resistentes a azoles, especialmente Florida
Sudáfrica

uconazol, sino también a otras clases antifúngicos. Candida especies fueron resistentes a casi todos los antifúngicos clases. Estas fuentes de

agua se utilizan para la recreación y religiosa, así como para abrevar el ganado y el riego. De particular preocupación es el contacto directo de

los individuos con la levadura oportunista, en especial la inmuno-comprometidos. Resistencia de estas especies de levaduras a los agentes

antifúngicos es una preocupación aún más la salud.

palabras clave | patrones de resistencia, las secuencias del gen 26S rRNA, la contaminación del agua, la diversidad de levadura,

las infecciones por hongos

INTRODUCCIÓN

La escasez de agua en el Oeste Provincia del Norte (PNT), África del Sur, se ve agravado por
la contaminación de las aguas superficiales de las minas, la agricultura, la escorrentía urbana
( NWDACE •••• ) y en muchos casos mal tratados con el retorno de aguas residuales Florida OWS
( Greendrop
• • • • ) . Al evaluar la calidad del agua, físico-química y las características
bacteriológicas se determinan. El uso específico fi límites c, usos potenciales
de la agua se determinan ( DWAF
• • • • ) . Estos parámetros de calidad del agua se utilizan para de este modo fi ne
el sistema de agua, para comprender la relación entre los parámetros, así como
para evaluar la sostenibilidad del medio ambiente ( Dallas & Day •••• ). Las especies
bacterianas tales como Escherichia coli, coliformes totales, coliformes fecales, fecal
estreptococos, y enterococos son ampliamente utilizados y aceptados como organismos
indicadores en la prueba de la calidad del agua. Ellos son considerados como el mejor
indicador de la contaminación fecal de los suministros de agua, sobre todo en fuentes
abiertas tales como ríos ( Pereira •••• ; Adeleke y Bezuidenhout •••• ). Algunos estudios
han demostrado que la presencia de levaduras también se podría usar para
determinar la calidad del agua de superficie ( Hagler y MendoncaHagler •••• ; Arvanitidou
et al. •••• ; Van Wyk et al. •••• ).
Arvanitidou et al. ( ••••) signi demostrado fi correlaciones signifi entre los niveles de
bacterias indicadoras fecales y levaduras. La presencia de especies de levaduras
de los géneros Candida, Cryptococcus, Pichia y Rhodotorula podría ser
considerado como bioindicadores del nivel de contaminación en el agua ( Nagahama
• • • • ).
En un estudio realizado por Van Wyk et al. ( ••••) , varias especies de
levaduras se aislaron de agua de la superficie de la NWP. especies
patógenas conocidas ( Candida guilliermondi, Candida lusitaniae, Candida
tropicalis, Cryptococcus laurentii, glutini Rhodotorula y mucilaginosa
Rhodotorula;
Hazen •••• ; Nagahama •••• ; Karkowska-Kuleta et al.
•• • • ) fueron algunos de los aislamientos identificados fi ed ( Van Wyk et al.

• • • • ) . Estas especies pueden causar enfermedades que van desde

doi: 10.2166 / wst.2016.580

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súper fi infecciones de las mucosas ciales a los que amenazan la vida en las personas ajuste, prolongada y el tratamiento repetido con fármacos antifúngicos ha llevado a

con trastornos inmunológicos ( Yamaguchi et al. •••• ). especies patógenas en desarrollo de resistencia a estos fármacos, especialmente Florida

Tal fi hallazgos son una preocupación, ya que estas fuentes de agua se utilizan para los fluconazol ( Sanglard et al. •••• ;

propósitos de recreación y religiosos, así como directamente a la agricultura (riego de mulu et al. •••• ; Abrantes et al. •••• ). También ha habido informes de Florida resistencia
los animales y de riego; Van Wyk uconazol entre los aislamientos ambientales ( Pfaller et al. •••• ; Medeiros et al. ••••
et al. •••• ; Molale y Bezuidenhout •••• ). ).
A pesar de que las levaduras se han aislado de los medios acuáticos, El objetivo del presente estudio fue determinar la calidad del agua, los niveles y la

se han prestado poca atención y concentración a su presencia y diversidad de las levaduras, y la susceptibilidad antifúngica de levaduras aísla en dos ríos

significación fi cado ( Arvanitidou et al. •••• ). de la predicción numérica del tiempo, Sudáfrica.

Aproximadamente el 10,2% de la población de Sudáfrica total es VIH positivo ( estadística

SA •••• ), por lo que es importante que el signi fi cance de la levadura patógeno
oportunista en sistemas acuáticos recibe una mayor atención. De acuerdo a Shisana
et al. MATERIALES Y MÉTODOS
( ••••) , prevalencia del VIH en el PTN es aproximadamente 13%. agentes
antifúngicos tales como Florida uconazol se proporcionan como parte del área de muestreo
tratamiento profiláctico para el VIH para prevenir las infecciones debilitantes
por Candida y Cryptococcus spp. ( Morschhauser •••• ; Abrantes et al. •••• ). Esto El muestreo se llevó a cabo en 2013 en el río y Harts Mooi River en 2013 y
implica que grandes cantidades de este fármaco se utilizan en el entorno 2014, respectivamente ( Figura 1 ).
farmacéutico / médico. Los datos de un estudio realizado por Truter y Graz ( ••••) apoyar
esto, y muestran que entre los antifúngicos Florida fluconazol y nistatina son los
parámetros de muestreo y físico-químicas
más comúnmente prescritos en Sudáfrica.

Las muestras de agua se recogieron asépticamente usando la técnica de

muestreo de inmersión descrito en Van Wyk et al. ( ••••) .
Lo que también se conoce acerca de los fármacos antimicóticos es que una
La temperatura del agua, pH, sólidos disueltos totales (TDS) y oxígeno disuelto
gran proporción de la dosis se excreta en la orina y
(OD; solamente Harts River) se midieron en el sitio usando un multi 350 sonda
fi encuentra su camino en las aguas residuales y en las plantas de tratamiento de aguas
de múltiples parámetros (Merck, Alemania). Las muestras de agua fueron
residuales (EDAR). Se sabe que cuando trabajan EDAR ef fi-
transportados al laboratorio en hielo en cajas frías oscuras, y se llevó a cabo el
cientemente eliminan sólo parcialmente los productos farmacéuticos ( Kummerer •••• ). Sin
análisis dentro de las 6 horas. En el laboratorio, la demanda química de oxígeno
embargo, en la predicción numérica del tiempo, la mayoría de las EDAR son bien (i) no
(COD, sólo Harts River), nitrato (NO 3 ), y fosfato (PO 42 )
funciona de manera óptima, (ii) no se gestiona adecuadamente, (iii) trabajar más allá de

los sistemas ' parámetros de diseño o (iv) una combinación de éstos ( informe Greendrop
se midieron usando el 2800 del sistema y los reactivos Hach Lange DR ( Hach
•••• ). Esto sugiere que las aguas residuales tratadas mal que puede contener grandes
Company •••• ).
cantidades de agentes antimicrobianos tales como antifúngicos decantar en el ya se ha

subrayado sistema acuático.

El aislamiento y la enumeración de levaduras

Otro impacto es la capitalización del sector agrícola. Azoles se utilizan para

Las muestras de agua se analizaron por membrana fi filtración para determinar
proteger los cultivos de cereales, en particular contra diversas enfermedades
la presencia de levaduras en agua usando el método descrito por Van Wyk et
fúngicas de granos ( Boyacıoğlu et al.
al. ( ••••) . Enumeración se realizó a temperatura ambiente y a 37 culturas C.
• • • • ; Mateo et al. •••• ). El escurrimiento de estas tierras también entrará en
W

levadura que crecieron a 37 C fueron puri fi ed por sub-cultivo en agar YM ( Wickerham

el agua del medio ambiente y más impacto en el sistema de agua. El PNT
W

•••• ) y se utiliza para posterior análisis.

está situado en la zona principal de maíz que produce y también produce
signi fi cativos cantidades de otros cereales ( DWAF •••• ). Así pues, hay varios
(a veces intermitentes) eventos / procesos simultáneos que conducen a la
filtración de niveles subterapéuticos de agentes antifúngicos en el medio identi fi cación de levaduras
ambiente. Los impactos de estos eventos en la diversidad y la selección de
patógenos resistentes a antifúngicos / patógenos oportunistas son Diazonio azul B
indeterminada, y estudios para investigar esto son necesarios. En la clínica
diazonio se utilizó azul B (DBB) (Sigma-Aldrich, Alemania)
distinguir entre ascomycetous y
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Figura 1 | Mapa de la Provincia del Oeste (PNT). Los diferentes sitios de muestreo en el río Mooi y el río Hart se indican con puntos verdes. La versión a todo color de este fi gura está disponible
en la versión online de este documento, por lo http://dx.doi.org/10.2166/wst.2016.580 .
levaduras Basidiomycetes. Los detalles del método se dan en la
Van Wyk et al. ( ••••) .
identificación molecular fi catión
Diez mililitros de un cultivo durante la noche de los diversos aislados se
utilizaron para extraer el ADN genómico. El procedimiento se realizó de
acuerdo con la modi fi método ed de Hoffman y Winston ( ••••) . Culturas (2 ml)
se centrifugaron durante un minuto a 14000 × g y el sobrenadante se retiró
por aspiración. Las células se suspendieron en 500 μ L de tampón de lisis de
ADN (100 mM de Tris HCl a pH 8,0; 50 mM de EDTA; 1% SDS). perlas de
vidrio (200 μ L) se añadieron a la suspensión, con vórtex durante 4 min y se
enfrió inmediatamente en hielo. La suspensión se centrifugó a 14.000 × g y la
fase líquida se transfirió a un tubo de microcentrífuga estéril. Un total de 275 μ
Se añadió acetato de L de amonio (pH 7,0), con vórtex durante 5 minutos y
se incubó a 65 C durante 5 minutos, seguido de enfriamiento inmediato en
W NL1 cebadores (5 0- GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3 0) y NL4 (5 0- GGTCCGTGTTT
hielo. A esta suspensión 500 μ se añadió l de cloroformo y se mezcló. La
mezcla se
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se centrifugaron durante 2 minutos a 14.000 × g en 4 C. La capa superior se W
transfirió a un tubo de microcentrífuga estéril y 750 μ l de isopropanol añadido.
Esto se incubó durante 5 min a temperatura ambiente. ADN se purificó fi ed
usando el kit de tejido Nucleospin (Macherey-Nagel, Alemania). El protocolo
de este kit fue seguido de la etapa 5 en adelante. etapas de lavado, secado
de la membrana y la elución del ADN se siguieron tal como se indica en el
protocolo Nucleospin. muestras de ADN eluido se almacenaron a 4 C hasta el W
análisis adicional.
A NanoDrop TM 1000 espectrofotómetro (Thermo Scientific fi c, EE.UU.)
( NanoDrop •••• ) se utilizó para determinar las concentraciones de ADN, así
como 260/280 proporciones para evaluar la pureza del ADN ( NanoDrop •••• ).
Se usó electroforesis en gel de agarosa para determinar la integridad del
ADN, así como los tamaños de la ampli 26S rRNA PCR fi fragmentos de
genes ed. los ± 500 pb fragmento de gen 26S rRNA fue ampli fi ed usando el
0)
( O ' Donnell •• • • ).
Reactivos para la amplificación fi cación consistió fi nal 25 μ l de volumen
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con (i) 2 μ L plantilla de ADN genómico ( ± 50 ng), (ii) 12,5 μ L doble fuerza PCR
Master Mix (0,05 U / μ l Taq polimerasa, MgCl 4 mM 2 y dNTPs 0,4 mM;
Fermentas Life Sciences, EE.UU.), (iii) 1,5 μ L MgCl 2, ( 1,5 mM), (iv) 5,0 μ mezcla
L cebador y (v) 4 μ L nucleasa agua libre (Fermentas Life Sciences, EE.UU.).
Las condiciones del ciclo de PCR consistió en una desnaturalización inicial de
300 segundos a 95 C, seguido por 35 ciclos de 60 segundos a 95 C, 35
W W
segundos a 52 C y 60 segundos a 72 C. A fi etapa de extensión final de 300
W W
segundos a 72 C estaba incluido. Los controles positivos incluyen la reacción
W componentes principales (PCA) para determinar los patrones y las relaciones en
de PCR ( Candida rugosa CBS13; Clavispora lusitaniae CBS 6936).
La secuenciación 26S rRNA se realizó como se describe en el Jordaan
y Bezuidenhout ( ••••) . Los cromatogramas fueron vistos en el software
Geospiza Pinzón TV (versión 1.4), y las búsquedas BLAST ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST
) Fueron utilizados para determinar la identidad de la ampli fi secuencias ed.
identi fi secuencias ED se presentaron al GenBank y números de acceso son
los siguientes: Mooi River (KM102986 a KM103064) y Harts River
(KM885965 a KM885981 y KP070741 a KP070762).
Análisis filogenético
Clustal W versión 1.8 se utilizó para realizar alineación de secuencias
múltiples ( Thompson et al. •••• ). Alineado secuencias fueron editadas
utilizando DAMBE ( Xia y Xie •••• ).
método de vecino a participar en el programa MEGA versión 5.2 ( Tamura et
al. •••• ) se utilizó para construir un dendrograma filogenético. Un número de
secuencias de genes de levadura 26S rRNA representativos se descargaron
de GenBank para comparar su relación filogenética con el identi fi especies de
levadura ed.
pruebas de sensibilidad antifúngica
Para los ensayos de susceptibilidad antifúngicos, placas de propagación de cultivos
de levadura se prepararon en placas de agar YM, y se utilizó el método de difusión en
disco de Kirby-Bauer ( Bauer et al.
• • • • ) . Los discos impregnados con concentraciones conocidas de agentes
antifúngicos se obtuvieron (mástil Diagnostics, Reino Unido). Se usaron los
siguientes agentes antifúngicos: Florida uconazol (FCN; 25 μ g), econazol (ECN:
1 μ g), ketoconazol (KCA: 15 μ g), miconazol (MCL: 1 μ g), metronidazol (MZ: 5 μ sol),los ríos podrían ser el resultado de las aguas residuales de las plantas de
Florida ucytosine (FY: 1 μ g), nistatina (Nueva York: 100 μ sol). La incubación se
realizó a 37 C. diámetros (en mm) de las zonas de inhibición de crecimiento se
W
midieron después de 24 horas. Estos diámetros se compararon con los valores
en CLSI ( ••••) para
Candida albicans.
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Estadística
Los datos fueron analizados utilizando el software (Addinsoft, París, Francia)
Microsoft Excel (2011) y XL STAT. El coef de correlación de Pearson fi ciente se
utilizó para probar las relaciones entre las mediciones de los parámetros
físico-químicos y los niveles de levadura. Los datos en bruto eran fi primer
estandarizada utilizando Microsoft Excel. Esto se utilizó para el análisis de
los datos. La salida de datos se proporcionó como biplots de correlación. El signi
correlación fi signi nivel se fijó en p < 0.05. Los conjuntos de datos completos
estandarizados para los dos sistemas fluviales se sometieron a análisis de la
agregación de aglomeración usando distancias euclidianas y método Wards.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
parámetros físico-químicos
Las mediciones de los parámetros físico-químicos y los niveles del río Mooi
y río Harts se presentan en
Las tablas 1 y 2 , Respectivamente. parámetros físico-químicas en comparación con
Rango objetivo la calidad del agua (TWQR; DWAF
• • • • ) para usos agrícolas (riego ganado y riego). mediciones de pH
fueron generalmente dentro de los límites TWQR para ambos usos; sin
embargo, ambos niveles de TDS y nitrato en el río Mooi fueron más altos
que los niveles recomendados para la irrigación (40 mg / L y 0,5 mg / L,
respectivamente;
DWAF •••• ). En el río Hart, sólo el TDS era más alto que el límite de riego. El
alto TDS no es raro que la predicción numérica del tiempo, y ambas causas
naturales e impactos humanos son responsables de este fenómeno ( NWDACE
•••• ).
Altos de TDS en la provincia también se observó en el estudio de Van Wyk et
al. ( ••••) . En ese caso, los niveles medidos variaron entre 250 a 950 mg / L.
De acuerdo con los límites establecidos para ef aguas residuales Florida uents
que están permitidos para ser decantado en aguas ambientales, los nitratos no
deben exceder <1,5 mg / L y fosfatos no deben exceder de 1,0 mg / L ( Sudáfrica ••••
). Muchos de los sitios de muestreo en el río Mooi medir nitratos y fosfatos que
excedieron estos rangos estándares de calidad de las aguas residuales. En el río
Hart, era sólo los fosfatos que excedieron el límite. nitratos y fosfatos elevados en
tratamiento de aguas residuales, la lixiviación de desechos humanos y animales,
residuos de cultivos y la escorrentía de tierras cultivadas ( Dallas & Day •••• ;
Razak et al. •••• ). Estos dos ríos reciben ef Florida uents de escorrentía agrícola, así
como ef aguas residuales Florida uents, y esto
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Tabla 1 | parámetros físico-químicos y recuentos de levadura en el río Mooi

área de la muestra Temperatura do

W pH TDS mg / L NO 3 mg / L correos 42 mg / L los niveles de levadura (ufc / L) enumerados a 37 do
W

TWQR - agua para el ganado N/A N/A < 1000 < 100 N/A N/A

TWQR - irrigación N/A 6.5 - 8,4 <40 < 0.5 N/A N/A

Wonderfonteinspruit - antes de Carletonville 13.4 8.64 547 1.7 1.64 107 ± 61

Wonderfonteinspruit - después de Carletonville 10.3 8.14 595 5.4 2.91 333 ± 101

Muiskraal 9.8 8.49 310 0.9 1.88 107 ± 61

Boskop - antes Boskop presa 11.5 8.06 451 1.0 1.27 173 ± 101

Boskop - después Boskop presa 14.7 8.40 427 1.3 1.54 27 ± 23

Thabo Mbeki Puente 17.9 7.40 462 1.2 1.22 187 ± 83

Recorte del parque del puente 16.6 7.72 450 0.7 1.28 147 ± 61

Puente peatonal 17.8 7.77 467 2.0 1.39 40 ± 0

Puente Viljoenroad 18.1 7.75 463 1.6 3.08 2573 ± 306

Puente Taaiboschbult 17.2 7.52 579 2.2 5.29 160 ± 40

Puente Skandinawiedrif 17.1 7.46 529 2.6 6.01 27 ± 46

Temp, la temperatura; TDS, sólidos disueltos totales; NO 3- N, nitratos; correos 42 , fosfatos; CFU, unidad formadora de colonias; TWQR, rango de calidad del agua de destino ( DWAF 1996 ).

Tabla 2 | parámetros físico-químicos y recuentos de levadura en el río Harts

Temperatura TDS mg / L NO 3 mg / L correos 42 mg / L DO mg / L DQO mg / L los niveles de levadura (ufc / L) enumerados a 37 do

W

do
pH
W

área de la muestra

TWQR - agua para el ganado N / AN / A < 1000 <100 N/A N / AN / A N/A

TWQR - irrigación N/A 6.5 - 8.4 < 40 < 0.5 N/A N / AN / A N/A

Lichtenburg antes de la 19.0 7.44 678 0.8 0.04 12.9 35 924 ± 28

PTAR

Lichtenburg después de la PTAR 19.4 8.26 494 < 0.1 1.19 15.3 42 351 ± 8

Biessiesvlei 21.9 8.08 687 0.2 5.74 20.8 32 109 ± 28

Puente Vermaas 21.7 8.23 375 0.2 3.04 21.7 31 52 ± 4

Sannieshof 23.5 8.45 401 0.1 2.71 20.0 32 68 ± 14

Delareyville 21.2 8.01 203 0.1 0.00 20.0 43 27 ± 10

Temp, la temperatura; TDS, sólidos disueltos totales; NO 3- N, nitratos; correos 42 , fosfatos; DO, oxígeno disuelto; DQO, demanda química de oxígeno; CFU, unidad formadora de colonias; TWQR, rango de calidad del agua de destino ( DWAF 1996 ).

podría haber resultado en los nitratos y fosfatos elevadas observadas. los levaduras ( daek •••• ). Las fuentes de carbono tales como polioles, alcoholes, ácidos

niveles de COD, que sólo se midieron en el río ciervos, estaban dentro de orgánicos y aminoácidos son utilizados por especies de levadura para el crecimiento ( Rodrigues

los niveles aceptables para ef aguas residuales Florida uente (<75 mg / L; Sudáfrica
et al. •••• ). Las levaduras pueden utilizar una amplia gama de compuestos de nitrógeno

•••• ). Estos niveles oscilaron entre 31,0 y 43,0 mg / L. DO niveles en el río como fuentes de nitrógeno. Los compuestos de nitrógeno también se pueden utilizar

Harts variaron entre 12,9 y 21,7 mg / L. Estos dos parámetros, ligados a las como fuentes de carbono ( Messenguy et al. •••• ). La mayor parte de la levadura son

condiciones de temperatura mesófilos, nitrato y los niveles de fosfato, mesófilos, y crecen mejor a temperaturas entre 20 y 30 C. Crecimiento a 37 C está
W W

indicaron que el sistema del río proporcionan un hábitat ecológico que asociado con la patogenicidad. Levaduras prefiere un medio ligeramente ácido, y tienen

podría apoyar el crecimiento de organismos heterotróficos tales como un pH óptimo entre

levaduras.
4,5 y 5,5. Estos son organismos sobre todo aeróbicas y por lo tanto prefieren hábitats

Las condiciones que prevalecen en ambientes naturales determinan la naturales con concentraciones relativamente altas de oxígeno. DO en agua puede

actividad metabólica, el crecimiento y la supervivencia de ser por tanto un factor principal que
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en Florida uye metabolismo y el crecimiento ( daek •••• ). Los resultados de parámetros

físico-químicos medidos en el presente estudio tanto indicaron que las condiciones

son favorables para el mantenimiento de las poblaciones de levadura.

los niveles de levadura

los recuentos totales de levadura enumeran a 37 C osciló entre 27 ± 23 y 2573 ± 306

W

ufc / L para el río Mooi y 27 ± 10 y 924 ± 28 mg / L para el río Harts. No clara

asociación se podría establecer cuando se consideran los parámetros físicos y
químicos en relación con los niveles mínimos y máximos de levadura
enumerado. los niveles de levadura enumerados a temperatura ambiente
también se consideraron originalmente (datos no incluidos) y fueron siempre
mayores que los niveles de levadura enumerados a 37 C. Sobre la base de W

morfotipos y tinción DBB, todas las levaduras seleccionadas para el análisis

adicional eran levaduras ascomycetous. Los resultados presentados aquí son
diferentes a los de Van Wyk et al. ( ••••) . Estos autores observaron que las
levaduras ascomycetous fueron el grupo dominante aislado. En el presente
estudio, las levaduras solamente ascomycetous estaban entre los
seleccionados y identi fi ed.

Correlación entre los parámetros físico-químicos y los niveles de

levadura

El PCA es una técnica de compresión de datos de uso común. Se utiliza para

estudiar la correlación entre dos variables aleatorias covarying ( Coombe •••• ). En
el presente estudio, PCA se utilizó para establecer cualquier forma de
asociación entre los parámetros físico-químicos y los niveles de levadura de los
diferentes sitios de muestreo. Las relaciones de los datos Mooi River (en la
biplots La Figura 2 (a) ) Sugerido una asociación positiva de los niveles de
levadura y la temperatura y una asociación negativa con pH. Sin embargo, estas
asociaciones no podrían ser signi fi-

cativamente correlacionada. Dos períodos de muestreo se llevaron a cabo

en el río Hart. Durante un periodo de muestreo ( La Figura 2 (b) ), DO y
parámetros COD no se midieron. Biplots para el río (Hart La Figura 2 (b) y 2
(c) ) Indica que los niveles de levadura tenían signi fi peralte ( p < 0,05) fuertes
correlaciones con nitratos ( r ¼ 0,909) y pH ( r ¼? 0,816). La asociación entre
los parámetros físico-químicos y los niveles de levadura durante los dos
períodos de muestreo fueron similares. Lo que todos los tres biplots
también mostraron son las asociaciones de TDS con nitratos y fosfatos. En
el Río Mooi, una correlación positiva de TDS con nitratos y fosfatos se
había observado en un estudio de Jordaan y Bezuidenhout ( ••••) . Estos
autores también demostraron que estos parámetros se asociaron con
niveles de bacterias.
Figura 2 | PCA biplots de correlación de la interacción de los parámetros físico-químicos, la
los niveles de levadura y la asociación de los diversos puntos de muestreo (A ¼ Mooi River; segundo ¼ Ciervos río

excluyendo theDOand DQO; do ¼ Ciervos río includingDOand COD).

 1325 ME Monapathi et al. | susceptibilidad antifúngica de levaduras patógenas oportunistas
Los gráficos de dos dimensiones en el presente estudio han explicado 69.37 -
89,29% de los datos. En La Figura 2 (a) , También se observan tres conjuntos de
asociaciones basadas en el total de datos. El punto WF2 muestra forma un
clúster con los sitios aguas arriba (WF1, MR1, MR2, MR3) del segmento urbano
de Potchefstroom. Los sitios urbanos (MR4, MR5, MR6, MR7) forman un grupo
aparte y los dos sitios rurales aguas abajo (MR8, MR9) un grupo separado. Esto
sugiere diferencias espaciales en la calidad del agua en los diferentes sitios que
se permite para este patrón de agrupamiento.
identi fi especies de levadura ed
Se seleccionaron Representantes de morfotipos, puri fi ed, manchado por el
método y identi DBB fi ed por secuenciación del gen 26S rRNA. Buena
calidad del ADN suf fi cantidad ciente fue aislado de los diferentes
morfotipos. Los resultados se indican por sistema río y no por sitio. Para los
11 sitios del río Mooi había 78 representantes y para los seis sitios del río
Hart había 40 representantes.
Entre los aislados (118 individuos), especies del género Candida fue
identificado con mayor frecuencia fi ed. Constituyó 41% de los individuos.
Esto fue seguido por el género Saccharomyces. Sin embargo, la única
especie de este género fue S. cerevisiae, que supuso el 28% de todos los
aislados. El desglose de las especies de los géneros que no sean Saccharomyceshechas anteriormente acerca de la asociación de los niveles de levadura y las
era la siguiente: Candida glabrata
(21%), Candida albicans ( 18%), Lecythophora sp. ( 4%), Candida
pseudolambica ( 4%), Candida tropicalis ( 4%),
Mexicana Pichia ( 4%), Clavispora lusitaniae ( 4%), guilliermondi Pichia ( 3%),
Wickerhamomyces anomalus ( 2%),
Cyberlindnera fabianii ( 2%), salicaria Pichia ( 2%), Telluris Arxiozyma ( 2%), guilliermondii
Entre las especies aislados en el presente, el estudio de varios de ellos son
Meyerozyma ( 2%),
kudriavzevii Pichia ( 2%), bracarensis Candida ( 1%), Candida parapsilosis ( 1%). Muchasdiversos Candida especies que con frecuencia se aislaron de muchos sitios.
de estas especies fueron previamente identificados fi ed entre las levaduras
procedentes de la predicción numérica del tiempo de Sudáfrica ( Van Wyk et al. •••• ).
Medeiros
et al. ( ••••) especies de levaduras aisladas similares de ambientes de agua
dulce en el sur de Brasil. Estos ejemplos corroboran la fi hallazgos del
presente estudio.
La similitud de secuencia entre representantes de GenBank fue alta,>
97%. El análisis filogenético proporcionado un árbol Vecino-Participar ( figura
3 ) En el que con alta bootstrap fi se proporcionan confianza (basado en 1000
repeticiones) para los diversos grupos.
Varias especies de levaduras que se identificaron fi ed en este estudio tiene la
capacidad de utilizar nitratos y fosfatos directamente ( Gorfer et al. •••• ; Cabrera et al. ••••
). Excepto por Saccharomyces cerevisiae, la identi fi especies ed enumerados
anteriormente podrían
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asimilar nitrato y convertirlo en nitrito utilizando nitrato reductasa. El nitrito
se convierte a continuación de amonio para su inclusión en aminoácidos ( Schinko
et al. •••• ; Cabrera
et al. •••• ). Cabrera et al. ( ••••) demostrado que en S. cerevisiae, ef sulfito Florida UX
son responsables de nitrato y nitrito de EF Florida UX. Esto es para evitar
niveles tóxicos de especies de nitrógeno se acumulan dentro de la célula de
levadura. tal ef Florida UX se han demostrado para funcionar también en Candida
especies. Por otra parte, Falih y Wainwright ( ••••)
demostrado el papel de las levaduras de suelo y S. cerevisiae en la movilización
de fósforo. Secco et al. ( ••••) proporciona una visión general de metabolismo del
fosfato de levadura y demuestra que las vías están disponibles para la levadura
de sobrevivir en condiciones de estrés de fosfato. metabolismo del fosfato
depende del pH y requiere un pH ligeramente ácido ( Serrano
et al. •••• ). Las condiciones alcalinas leves en los ríos Harts y Mooi pueden causar
algo de estrés metabólico para las levaduras y pueden tener un en Florida influencia
en los niveles de levadura. Especulamos que acidifica fi cationes del agua, que
puede resultar de drenaje ácido de minas, podría resultar en los niveles de
levadura en aumento. Como fuere, estas capacidades de levadura para que
participen activamente en los procesos biogeoquímicos y de asimilación de
carbono, nitrógeno y fósforo así puede explicar la detección y el mantenimiento de
poblaciones de levaduras en los sistemas acuáticos naturales de la Mooi Ríos
Harts y. Esto también puede proporcionar algún soporte para las deducciones
propiedades físico-químicas.
patógenos oportunistas y susceptibilidad antifúngica
conocidos patógenos / agentes patógenos oportunistas. Estos incluyen
representantes incluyen C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei, C.
guilliermondii,
y Clavispora lusitaniae ( Hurley et al. •••• ). En 1995, Hazen examinó el estado de
las nuevas y emergentes patógenos ( Hazen •••• ). Varias de las especies aisladas
en este estudio estaban en esa lista. Sin embargo, también fue enumerado S.
cerevisiae.
Las cepas patógenas causado infecciones vaginales y la sangre ( Hazen •••• ).
Esta especie fue aislada de los dos ríos (10 aislamientos del río Mooi y 23
del río Hart).
entornos clínicos han sido mayormente reconocido como un riesgo para la salud
con respecto a las infecciones de levaduras en pacientes inmunodeprimidos. Candida spp.
son los hongos patógenos más comunes que causan la atención de salud graves - infecciones
asociadas ( Alangaden •••• ). La mayoría de las infecciones son el resultado de la
paciente ' s propia Florida ora. infecciones cruzadas han sido
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Figura 3 | Un árbol de agrupamiento de vecinos que muestra la relación filogenética entre las distintas cepas y los parientes cercanos y también entre las distintas especies. Una prueba de arranque
(1000 repeticiones) se llevó a cabo y al lado del cluster, se proporciona el porcentaje de árboles que soportan el clúster.

informado de la aparición de las superficies inanimadas, de las manos de los que afecta a la calidad del agua recreativa. Las levaduras presentes en las heces pueden ser

trabajadores sanitarios o entre pacientes ( Rangel-Frausto asociados con los tipos de alimentos consumidos ( Ahearn

et al. •••• ; Ryan •••• ). En ambientes acuáticos, las levaduras han sido implicados como • • • • ) . El agua potable también puede ser considerado como una posible vía de
indicadores de contaminación de aguas residuales transmisión para las levaduras patógenas y puede constituir
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un peligro potencial para la salud en individuos inmunodeprimidos ( Arvanitidou Varios agentes antifúngicos están disponibles para tratar estas infecciones. Sin

et al. •••• ). embargo, debido a un tratamiento prolongado y repetido, especies de levadura se han

levaduras patógenas patógenos oportunistas / poseen varios genes y vuelto resistentes a los fármacos antifúngicos usados ​de forma continua ( Sanglard et al.

proteínas asociadas con la virulencia ( Todar •••• ; Morschhauser

• • • • ) . Los factores de virulencia que se han detectado en la levadura incluyen la • • • • ; Abrantes et al. •••• ; mulu et al. •••• ). También ha habido informes de Florida
capacidad de growat 37 C, componentes de la pared celular y la cápsula, moléculas
W resistencia uconazol entre los aislamientos ambientales ( Pfaller et al. •••• ; Medeiros
de adhesión y la producción de enzimas extracelulares ( Kurokawa et al. •••• ). A los 37 et al. •••• ). Independientemente de sus estructuras químicas individuales y
años C, sólo un número limitado de especies de levadura puede crecer. Estos son en
W propiedades biológicas variables, todos los azoles interactúan con e inhiben la
su mayoría aquellos animales associatedwithwarm-sangre caliente tales como Candida lanosterol 14- α- desmetilasa. Esta es una enzima clave en la conversión de
albicans y un número de otras levaduras patógenas oportunistas ( daek •••• ). En el lanosterol a ergosterol. El ergosterol se incorpora en las membranas celulares
presente estudio, las levaduras se cultivaron y aislaron a 37 C. Producción de W de las levaduras y es responsable del crecimiento y la proliferación celular ( Blanco
pruebas de enzimas extracelulares se llevó a cabo, pero los resultados no fueron et al.
concluyentes y por lo tanto no se incluyen aquí. Delaware fi características fenotípicas

de virulencia noche no se pudo demostrar, lo que implica que los aislados pueden ser •• • • ).
todas las cepas ambientales completamente no patógenas. En estudios anteriores, Azol que contiene los productos utilizados en la medicina humana y los de la

varias levaduras asociada humanos han sido aislados de ambientes de agua dulce ( Hagler agricultura se formulan de manera diferente ( Muller et al.

y Ahearn • • • • ) . Sin embargo, el modo de acción y mecanismo de resistencia

• • • • ; Fromtling et al. •••• ; Nagahama •••• ; Van Wyk et al.
• • • • ) . Por lo tanto, no es raro fi especies nd de levadura tales como las aisladas en el
presente estudio, en los sistemas de agua dulce.
Lo que sigue siendo motivo de preocupación es que los Hart Ríos Mooi y se
utilizan para la recreación y actividades religiosas en las que el contacto directo es
la orden del día. Si se considera que una gran proporción (13%) de la población
NWP es VIH positivo, entonces los impactos de levaduras tales como estas
antifúngica es similar en medicina humana y veterinaria así como la
protección de las plantas. resistencia a los azoles es hereditaria y adquirida.
La resistencia a los azoles podría ser debido a la sobreexpresión de EF Florida genes
de la bomba UX, alteración de la ezyme objetivo (14 α- demythylase lanosterol)
y la inactivación de la desaturasa esterol C-5 en la vía de la biosíntesis de
ergosterol ( Blanco et al. •••• ; Cernicka y Subik
• • • • ) . Resistencia observada en este estudio podría ser potencialmente debido a
uno cualquiera o una combinación de los mecanismos mencionados.

especies aisladas en el presente estudio podrían ser devastadoras. Podrían causar

enfermedades que van desde la mucosa a potencialmente letal infecciones tablas 3 y 4 mostrar los números de aislados por sitio en el que no se
diseminadas en personas con trastornos inmunológicos ( Yamaguchi et al. •••• ). observaron zonas de inhibición (completamente resistentes a la concentración
probada), en comparación con el número total probado. Algunas similitudes
son evidentes entre el

Tabla 3 | Número de levaduras seleccionadas aisladas del río Mooi que eran resistentes a diversos antifúngicos

FCN 25 μ sol ECN 1 μ sol KCA 15 μ sol MCL 1 μ sol MZ 5 μ sol 1 año fiscal μ sol NY 100 μ sol

Wonderfonteinspruit - antes de Carletonville 4/5 4/5 4/5 4/5 5/5 5/5 0/5

Wonderfonteinspruit - después de Carletonville 15/15 10/15 10/15 10/15 15/15 15/15 0/15

Muiskraal 1/2 1/2 1/2 1/2 2/2 2/2 0/2

Boskop - antes Boskop presa 2/2 1/2 1/2 1/2 2/2 2/2 1/2

Thabo Mbeki Puente 6/7 3/7 4/7 3/7 7/7 7/7 0/7

Recorte del parque del puente 4/8 0/8 0/8 0/8 8/8 8/8 1/8

Puente peatonal 3/3 2/3 2/3 2/3 3/3 3/3 1/3

Puente Viljoenroad 17/17 14/17 14/17 14/17 17/17 17/17 0/17

Puente Taaiboschbult 11/13 9/13 9/13 9/13 13/13 13/13 2/13

Puente Skandinawiedrif 6/6 5/6 5/6 5/6 6/6 6/6 0/6

porcentaje n ¼ 78 88.5 62.8 64.1 62.8 100 100 6.4

FCN, Florida fluconazol; ECN, econazol; KCA, ketoconazol; MCL, miconazol; MZ, metronidazol; el año fiscal, Florida ucytosine; NY, nistatina.
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Tabla 4 | Número de levaduras seleccionadas aisladas de Harts río que eran resistentes a diversos antifúngicos

FCN 25 μ sol ECN1 μ sol KCA 15 μ sol MCL 1 μ sol MZ 5 μ sol 1 año fiscal μ sol NY 100 μ sol

Lichtenburg antes de la EDAR 14/14 0/14 0/14 0/14 14/14 14/14 0/14

Lichtenburg después de la EDAR 3/3 3/3 1/3 3/3 3/3 3/3 2/3

Biessiesvlei 6/6 1/6 2/6 1/6 6/6 6/6 0/6

Puente Vermaas 4/5 0/5 0/5 0/5 5/5 5/5 1/5

Sannieshof 3/4 0/4 1/4 0/4 4/4 4/4 0/4

Delareyville 7/8 1/8 1/8 1/8 8/8 8/8 0/8

Porcentaje norte ¼ 40 92.5 12.5 12.5 12.5 100 100 7.5

FCN, Florida fluconazol; ECN, econazol; KCA, ketoconazol; MCL, miconazol; MZ, metronidazol; el año fiscal, Florida ucytosine; NY, nistatina.

aislados de los dos ríos. Un alto porcentaje de los aislamientos eran
resistentes a Florida uconazol (88,5 y 92,5%, para Mooi y Harts Rivers,
respectivamente). Todas las cepas fueron resistentes a metronidazol y Florida
ucytosine y menos de 8% eran resistentes a la nistatina. En el caso del río
Mooi aísla,
62,8% de los aislamientos eran resistentes a ambos econazol y miconazol y
64,1% eran resistentes a ketoconazol. El escenario era diferente para el río
Hart, donde sólo
12,5% eran resistentes a estos tres agentes antifúngicos azólicos. Así, entre
los fi cinco agentes antifúngicos de azol, se observaron patrones de resistencia
diferenciales.
Los datos de un estudio realizado por Truter y Graz ( ••••) apoyado esto, y
mostró que entre los antifúngicos Florida fluconazol y nistatina son los antifúngicos
más comúnmente recetados en Sudáfrica en el sector privado. El fluconazol es
uno de los fármacos más prescritos en el sector de la salud pública en Sudáfrica.
Se utiliza como parte del cóctel de fármaco utilizado en el tratamiento del VIH ( Información
evitar que entren en el sistema acuático. La susceptibilidad a varios agentes
de ayudas •••• ). Un estudio realizado por
Abrantes et al. ( ••••) que se llevó a cabo entre los individuos seropositivos de
Sudáfrica y Camerún, demostraron que un alto número de clínicamente
aislado
Candida especies fueron resistentes a la Florida fluconazol.
Una de las preocupaciones de los resultados del presente estudio es que casi
todos Candida especies aisladas y caracterizadas eran resistentes a todos los
antifúngicos probados en este estudio. La única excepción fue la susceptibilidad a la
nistatina. Saccharomyces cerevisiae aislamientos eran en su mayoría susceptibles a
CONCLUSIÓN
El presente estudio demostró que la calidad del agua, como se mide por los
parámetros físicos y químicos generales, era adecuado para diversos usos,
incluyendo la regadera animal. Los dos ríos estudiados se encuentran en zonas
de producción agrícola, pero también cerca de áreas urbanas y villas. Tal agua
puede ser por tanto adecuado para la preparación de agua potable a través puri
tradicional fi procesos de cationes. Los resultados también demostraron que los
parámetros físico-químicos tuvieron impactos sobre los niveles de levaduras.
Tales estudios deben ampliarse a los sistemas acuáticos más en Sudáfrica
para determinar las estructuras de las poblaciones de levadura con respecto a
otros microorganismos y la calidad del agua. Entre las levaduras aisladas
fueron varios patógenos oportunistas. Aunque la patogenicidad potencial no se
ha demostrado, los resultados plantean preocupaciones. Es importante que la
fuente de estas levaduras ser determinada y que se hagan esfuerzos para
antifúngicos disponibles generalmente se ensayó y se encontró que muchos de
los aislados eran completamente resistentes a estos agentes antifúngicos. Este
es otro motivo de preocupación, ya que algunos de éstos se utilizan como
tratamiento profiláctico en la gestión de la enfermedad del VIH. Los resultados
de este estudio deben ir seguidas de estudios clínicos y epidemiológicos.
Además de esto, los estudios sobre los niveles de antifúngicos en el sistema
acuático deben determinarse. niveles subterapéuticos de estas sustancias
pueden crear condiciones que tienen impactos negativos sobre las poblaciones
naturales de levadura en el agua y los sedimentos.

econazol, ketoconazol, miconazol y nistatina. Esto demuestra que el tratamiento

eficaz de las infecciones por levaduras procedentes de los Hart o el agua del río

Mooi todavía puede ser posible, a pesar de que las opciones pueden ser limitadas.

Los resultados sobre la susceptibilidad antifúngica de aislados del medio ambiente

pueden ser usados ​para guiar las pruebas antifúngico en el ámbito clínico, y no

deben ser utilizados para la toma de decisiones clínicas. información crítica

necesaria en este estudio era si había alguna antifúngicos presentes en el agua y EXPRESIONES DE GRATITUD

las concentraciones de los mismos.

Los autores desean agradecer al Dr. C Mienie para la asistencia con la

secuenciación, y la Comisión de Investigación del Agua del Sur

 1329 ME Monapathi et al. | susceptibilidad antifúngica de levaduras patógenas oportunistas Ciencia y Tecnología del Agua | 75.6 | 2017

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En primer lugar Recibido el 5 de mayo de de 2016; aceptado en forma revisada 30 de de noviembre de 2016. Disponible en Internet el 20 de diciembre de el año 2016