MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS (CLORACIÓN DE GRAM Y ZIEHL NEELSEN)

PASOS PROCEDIMENTALES
MATERIALES:

 Mechero

 Balón de gas

 Cristal violeta

 Lugol

 Safarina

 Microscopio

 Lamina portaobjeto

 Hisopos

 Agua

Baja lenguas
Fucsia fenicada
Alcohol ácido
Azul de metileno
Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO.
COLORACIÓN GRAM
1. Preprarar un frotis de la muestra en un portaobjetos.
2. fijar la muestra a la llama del mechero.

3. cubrir la muestra con cristal violeta y dejar actuar por un minuto.

4. Se lavó con agua de grifo. 5. Cubrir el preparado con Lugol y dejar

actuar por 1 min

6. lavar con agua de grifo y decolorar con alcohol cetona, asta desprender todo
el colorante.
7. lavar con agua corriente de grifo y luego cubrir la preparación con safrina y
dejar actuar por 30 segundos. Luego lavar con agua de grifo

8. Secar la preparación a la llama del mechero. Observer al microscopio con el

objetivo de inmersión, utilizando una gota de aceite de cedro.
 RESULTADO DE LA MUESTRA EN LA PRÁCTICA.

BACTERIAS
GRAM
POSITIVAS
DEL
EPITELIO OBSERVACIÓN
BUCAL A 100X

EJEMPLO DE FLUIDO VAGINAL PRESERVADO

BACTERIAS
GRAM
NEGATIVAS
PROCEDIMIENTO.
COLORACIÓN ZIEHL NEELSEN.
1. Extender una porción del esputo en una lámina porta
objetos. Fijar el extendido a la llama del mechero.

2. Cubrir la muestra con fucsina fenicada y calendar a lámina durante 5 minutos

hasta el desprendimiento de vapores.

3. Eliminar el exceso de colorante y lavar con agua de grifo.

4. Decolorar con alcohol ácido y lavar con agua de grifo.

 5. Cubrir con algunas gotas del colorante azul de metilo y dejar actuar por 1
minuto. Luego lavar con agua de grifo.

6. Secar el preparado y observer al microscopio con el objetivo de inmersión.

RESULTADOS.

COMGLOMERADO OBSERVACIÓN
DE COCOS A 100X
MÉTODO DE MICROBIOLÓGICOS (COLORACIÓN GRAM Y ZIELH NEELSEN)

COLORACIÓN GRAM
PRINCIPIO:
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared
celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada

microorganismo.

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de

laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias.
Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de
Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos
de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y
pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino
también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar
el antibiótico más adecuado para tratarla. (1)
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas.
Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se
realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en
la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado,
y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color
rosado, y serían Gram negativas. (1)(2)

El diagnóstico rápido de microorganismos presentes en fluidos corporales estériles,

como el líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, peritoneal o articular, es de gran
importancia para el diagnóstico de infecciones que, en estas localizaciones, son
generalmente graves y secuelares. La tinción de Gram constituye una herramienta de
gran utilidad en el diagnóstico etiológico; sin embargo, la sensibilidad de esta técnica es
variable según el tipo de muestra y la carga bacteriana presente en ella. La
concentración de la muestra, como un paso previo a su tinción mejora el rendimiento,
por lo que es recomendable su uso de rutina. (2)
Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más
peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata
la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y
provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared
celular. Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración
de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina
básica. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas,
mientras que las Gram positivas permanecen azules. (3)

UTILIDAD

Con la tinción de Gram lo que estamos detectando es básicamente el tipo de pared

celular de la bacteria que estamos analizando en ese momento. Aunque esta técnica
tiene ciertas limitaciones pues existen bacterias que no presentan pared celular, como
es el caso del género Mycoplasma. Además, a veces, otros factores como la edad de la
muestra o el protocolo de la tinción pueden interferir en los resultados de la tinción, por
lo que siempre se recomienda usar controles y realizar pruebas más exhaustivas en el
caso de que se quiera identificar la bacteria.
COLORACIÓN ZIELH NEELSEN
PRINCIPIO:
La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario
de tuberculosis.(4)(5) El agente etiológico de la tuberculosis fue descrito por Heinrich
Hermann Robert Koch, quien, basándose en las características de las micobacterias,
desarrolló una de las primeras tinciones utilizando azul de metileno seguido de la tinción
de Bismarck. Sin embargo, fueron los trabajos de Paul Ehrlich los que defi nieron la
resistencia a la decoloración por alcohol-ácido, y las últimas modifi caciones a la tinción
fueron realizadas por los científi cos alemanes Franz Ziehl y Karl Adolf Neelsen(6)
El fundamento de esta técnica de tinción se basa en las propiedades de la pared celular
de estos microorganismos. La pared está formada por un tipo de ácidos grasos llamados
ácidos micólicos; estos se caracterizan por presentar cadenas muy largas. Cuando los
ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden retener los colorantes
con mayor facilidad. Algunos géneros de bacterias son muy difíciles de teñir mediante
tinción de Gram, debido al alto contenido de ácidos micólicos de la pared
celular.(7) Debido a que la pared celular de algunas bacterias, como Mycobacterium
tuberculosis están provistas de un alto contenido de lípidos y ácidos micolicos, les
confiere características únicas en la fijación de un colorante del carbol fucsina tan
fuertemente, que resisten la decoloración con alcohol acido. Estas propiedades acido-
resistentes de las micobacterias empleando la técnica empleando la técnica de Ziehl

Neelsen permiten un diagnóstico rápido y presuntivo para detectar el bacilo de la

tuberculosis pulmonar.(4)
Mycobacterium tuberculosis es el microorganismo productor de tuberculosis (TB), se
caracteriza por su resistencia a la decoloración por el alcohol y los ácidos, lo que está
dado por la integridad de su cubierta de cera, de ahí, deriva el nombre de bacilo ácido-
alcohol resistente (BAAR).Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes (o
acidorresistentes). Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M.
marinum se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. (9)
 La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere de calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento
aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su
entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo,
sobre un color azul (que lo provee el colorante de contraste Azul de metileno).(7)
UTILIDAD.
Usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR) , como M.
tuberculosis o el Phylum Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.

¿QUÉ TÉCNICA DE COLORACIÓN SE UTILIZÓ PARA LA DIFERENCIACIÓN DE

BACTERIA GRAN POSITIVAS Y GRAN NEGATIVAS Y EN QUÉ TIPO DE
MUESTRAS? SUSTENTE LOS PRINCIPIOS DE DICHA TÉCNICA, MEDIANTE
REFERENCIA(S) BIBLIOGRÁFICAS(S)
La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico
microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de
las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser
extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinarlas en el microscopio.
Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico),
lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).(1) El
fundamento de la técnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias.
Gram positivas y Gram Negativas(1)(2)
Esta tinción permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos:

 Gram positivas: se tiñen de color morado o violeta

 Gram negativos: se tiñen de color rojo o rosado

Se recomienda realizar una tinción de Gram en todas las situaciones en las que se
quiera hacer una primera aproximación en la clasificación de las bacterias aisladas.
Además de realizarla en estudios de investigación científica, también se realiza en
hospitales y clínicas de todo el mundo ante estas enfermedades. (1)(3)
 Neumonías: se puede recoger una muestra de esputo sobre la que se realiza
una tinción de Gram para identificar microorganismos responsables.
 Infección de orina: se puede utilizar la coloración de Gram en la orina con
sospecha de infección. La muestra debe ser recogida con cuidado para no
contaminarla con bacterias de la vagina o del prepucio.
 Uretritis: es la infección de transmisión sexual más frecuente y suele producir
secreción a través de la uretra, que se recoge para realizar la tinción de Gram.
 Meningitis: la tinción de Gram teñirá las bacterias que estén infectando el líquido
cefalorraquídeo.
 Exudado vaginal: aunque en la vagina hay multitud de bacterias, la tinción de
Gram puede teñir todas ellas y ver la proporción de Gram positivas y Gram
negativas. Así se diagnostican las vaginosis, tan frecuentes en las mujeres
con menopausia.
 Abscesos: cuando se acumula pus en cualquier lugar se debe drenar y después
planificar la antibioterapia si es necesaria, y para ello es muy útil saber qué tipo
de bacteria es la causante del cuadro.
 Sepsis: en este caso la muestra recogida es la sangre; un tubo pequeño de cada
brazo

EN UN CUADRO INDIQUE 10 NOMBRES DE BACTERIAS QUE PERTENECEN A CADA GRUPO

BACTERIANO.
GRAM NEGATIVOS GRAM POSITIVOS
(10)
(10)
(10)
¿QUÉ TÉCNICA DE COLORACIÓN SE UTILIZÓ PARA LA DIFERENCIACIÓN DEL
BACILO DE KOCH Y QUÉ CARACTERÍSTICA DEBE TENER LA MUESTRA?
SUSTENTE LOS PRINCIPIOS DE DICHA TÉCNICA, MEDIANTE REFERENCIA(S)
BIBLIOGRÁFICAS(S)

FUNDAMENTO - Coloración de Ziehl Neelsen:

La detección de BAAR en frotis teñidos aplicando tinción de ZiehlNeelsen, es el
procedimiento más sencillo y rápido para el diagnóstico y control del tratamiento de TB
pulmonar. Mycobacterium tuberculosis es el microorganismo productor de tuberculosis
(TB), se caracteriza por su resistencia a la decoloración por el alcohol y los ácidos, lo
que está dado por la integridad de su cubierta de cera, de ahí, deriva el nombre de bacilo
ácido-alcohol resistente (BAAR)(9)
Es un proceso que se realiza en cuatro etapas:
Absorción:
De las micelas del colorante a la superficie bacilar debido a la presencia de
macromoléculas de ácidos micólicos. Es un proceso que requiere calentamiento para
que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras (ácidos micólicos
esterificados con alcoholes). Es un fenómeno isotérmico ya que es importante mantener
una cierta temperatura final que se manifiesta con la producción de vapores.(8)
Hay factores que alteran esta etapa pudiendo ser una ventaja, como por ejemplo la
modificación de la tensión interfacial mediante agentes tensioactivos (aniónicos o no
iónicos a pH ligeramente ácido) en concentración débil, que facilita la Coloración de Z-
N permitiendo realizarla sin calentamiento y con mejores resultados.
Ejemplo: Fucsina tensioactiva.
Ventaja: No vaporiza el fenol que es contaminante ambiental.

Combinación:
Se produce una reacción iónica de salificación entre el catión colorante y los ácidos
micólicos de la pared bacilar. La pared bacilar de las Mycobacterias tiene una compleja
composición química propia y exclusiva. En el proceso de salificación intervendrían dos
tipos de constituyentes: (8)
Lipopolisacáridos (sólo presente en micobacterias) formado por ácidos micólicos unidos
por unión éster a un arabinogalactosano.
Mucopéptidos (común en las paredes bacterianas).
Se demuestra el papel de los ácidos micólicos pues la formación de sales es prevenida
bloqueando sus grupos carboxilos, modificando su estructura química, o extrayendolos
por saponificación. Esto último, primero debilita y luego hace desaparecer la ácido-
alcohol resistencia Los bacilos tuberculosos no se tiñen con soluciones acuosas de
colorantes básicos, sino solamente en presencia de etanol y fenol. Una vez teñidos son
resistentes a la decoloración con ácido alcohol. La localización de los ácidos micólicos
en la pared bacilar explica el motivo por el cual, para mantener la ácido-alcohol
resistencia de los gérmenes, es necesario el mantenimiento de su integridad física.
Solución:
La combinación liposoluble de los ácidos micólicos con el catión colorante de la fucsina
básica se solubiliza en inclusiones celulares que contienen lípidos neutros.(8)
Decoloración:
Completando el proceso de coloración tenemos al colorante distribuido en dos formas y
cada una de ellas presenta un comportamiento diferente respecto a la acción de las
soluciones decolorantes (8)
Como combinación con ácido micólico y localizado en zonas ácido-alcohol resistentes.
Esta combinación tiene el mismo carácter lipofílico de la pared bacilar y de las
inclusiones ácidoalcohol resistente.
Es removido del cuerpo, por acción de los decolorantes, como forma no combinada de
naturaleza reversible (elusión y decoloración) manteniendo sus características de
electrolito. En el caso de un decolorante ácido y dependiendo del grado de acidez, forma
con el catión fucsina básica no combinada, sales mono o biácido más soluble y
fácilmente eliminables por lavado.

Se ha comprobado por comparación de varios solventes decolorantes, que la efectividad

de decoloración se debe a la mayor constante dieléctrica de los solventes y a la mayor
afinidad de los mismos hacia el colorante.(8)

Manejo y preparación de las muestras:

Muestras de esputo, fluidos y orinas: En los últimos años se ha difundido el empleo de
las primeras muestras de la mañana y de los esputos inducidos proporcionan resultados
positivos más precoces y se hayan menos contaminados.
Las muestras se recogen en un recipiente estéril, bien cerrado y se lleva al laboratorio
inmediatamente.
¿QUÉ DIFERENCIA EXISTE ENTRE LAS DOS TÉCNICAS DE COLORACIÓN
UTILIZADAS? SUSTENTE LOS PRINCIPIOS, MEDIANTE REFERENCIA(S)
BIBLIOGRÁFICAS(S)
Las bacterias ácido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados según la tinción de
Gram, la técnica más común en la microbiología actual. Sin embargo pueden ser teñidas
con algunas tinciones combinadas con calor, como la de Ziehl-Neelsen. Una vez teñidas
tienen la capacidad de resistir la decoloración de una combinación de alcohol/ácido, el
decolorante más común en los protocolos de tinción de bacterias.(11)

TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN TINCIÒN DE GRAM

Esta tinción demuestra la capacidad de ciertas
bacterias de resistir a la decoloración por ácidos
y alcoholes, lo cual se correlaciona con su alto
contenido en lípidos en la pared celular y
presencia de ácidos micólicos que aumentan el
carácter hidrófobo. Una de las bacterias que
presentan esta característica es Mycobacterium
tuberculosis Principal causante de la
tuberculosis.
Las células bacterianas son ricas en ácidos
nucleicos tienen cargas (+) en los grupos
fosfatos que se combina con las cargas (+) de
los colorantes básicos. Los colorantes ácidos
no tiñen a las células bacterianas, se utilizan
para teñir el material de fondo para
proporcionar un contraste de color
Tinción utilizada para separar las bacterias en
Gram (+) y Gram (-).

Figura N° 12: Tinción de ácido-alcohol Figura N° 14: Tinción de Gram de Bacillus

resistencia (Ziehl-Neelsen) de Mycobacterium cereus (bacilos gram positivos). Microscopía
phlei. Las flechas señalan estos bacilos ácido- de campo claro (100x).
alcohol resistentes teñidos de rojo. Microscopía
de campo claro (100x).

Figura N° 15: Tinción de Gram de Escherichia

coli (bacilos gram negativos). Microscopía de
Figura N° 13: Tinción de ácido-alcohol
campo claro (100x).
resistencia (Ziehl-Neelsen) de Mycobacterium .
Las flechas señalan estos bacilos ácido-alcohol
resistentes teñidos de rojo. Microscopía de
campo claro (100x)
¿CÓMO SE REALIZA EL REPORTE DE LA PRESENCIA DE BAAR POR EL
MÉTODO DE LA BACILOSCOPÍA?
La siguiente es la escala adoptada internacionalmente para el informe de los resultados
de extendidos examinados por la técnica de Ziehl Neelsen. (11)

Características morfológicas del bacilo de la

tuberculosis Los bacilos acidorresistentes
tienen entre 1 y l0 µm de largo. Con la
coloración de Ziehl Neelsen se observan como
bastoncitos delgados, ligeramente curvos, rojo
fucsia, destacándose claramente contra el
fondo azul. En los extendidos teñidos con
auramina los bastoncitos se observan con
fluorescencia amarilla. A veces se observan con gránulos o cuentas intensamente
coloreados en el interior. En la muestras de esputo pueden presentarse aislados,
apareados o agrupados. Es muy difícil distinguir el bacilo de la tuberculosis de otras
micobacterias por examen microscópico. Algunas micobacterias que no son M.
tuberculosis pueden aparecer como bastones muy largos o como bacilococos.(11
¿QUÉ PUEDE MANIFESTAR USTED, RESPECTO A LA LEY N° 30287 SOBRE LA
LEY DE PREVENCIÓN Y CONTROL DE LA TBC EN EL PERÚ? Y QUE OTRAS
TÉCNICAS SE PUEDE REALIZAR PARA LA IDENTIFICACIÓN DEL BACILO DE
KOHC
Esta ley establece parámetros de interoperabilidad
entre entidades públicas para asegurar la
transparencia sobre actividades relacionadas al
control de la tuberculosis, y también que las
personas afectadas con TBC tienen derecho a
solicitar copia de su historia clínica, ejerciendo así
su derecho a la información y el acceso a datos
personales relativos a la salud.
Los pacientes también tienen derecho a elegir no
participar en programas de investigación. En ese
sentido, los programas de investigación no podrán
usar los datos del paciente sin su previo
consentimiento y menos condicionarlo si se
compromete su cuidado (siendo una condición de consentimiento libre para el
tratamiento de datos personales). Además, el paciente tiene derecho a la privacidad y
respeto a su dignidad, creencia religiosa y cultural.

Por otro lado se establece la obligación del paciente a otorgar datos relativos a su salud,
así como información de contacto de otras personas que puedan ser o haber sido
contagiados de tuberculosis. A pesar de esta excepción establecida para el trato de
datos personales sin consentimiento del titular, no se ha establecido correctamente los
fines de tratamiento y gestión de estos datos por parte de quienes los recogen.
Técnicas de tinción o baciloscopias
Tienen por objeto, poder visualizar en el microscopio la presencia o no de BAAR en las
muestras. Actualmente siguen constituyendo la forma más rápida y económica para
diagnosticar la TB. No obstante, dado que su sensibilidad (40-70% en muestras
respiratorias) y su especificidad no son absolutas, es necesario realizar siempre cultivos
para un diagnóstico de certeza. Existen multitud de variantes descritas de técnicas para
las baciloscopias; incluso las hay para observadores daltónicos14. No obstante las dos
más utilizadas son:(11)
La tinción de Ziehl-Neelsen.
Las tinciones con fluorocromos.
Cuantificación de las baciloscopias
Morfología de los BAAR
Identificación pruebas bioquímicas.
La identificación de Mycobacterium tuberculosis mediante pruebas bioquímicas es hasta
ahora la prueba diagnostica más confiable y utilizada, sin embargo, la desventaja de las
pruebas bioquímicas es el tiempo que tarda en obtener los resultados finales. Esta
situación ha dado lugar al perfeccionamiento de técnicas moleculares o
cromatográficas.
  Acumulación de niacina
 Reducción de nitratos a nitritos
 Hidrólisis del tween 80.
 Prueba de la catalasa a 68 grados centígrados
 Prueba de la enzima arilsulfatasa.
 Prueba de la ureasa
 Pirazinamidasa
 incorporación de hierro.
 Inhibición del crecimiento por la hidrazida del ácido tiofeno-2-carbocílico (t2h).
 Crecimiento en cloruro de sodio al 5%.
 Crecimiento en agar macconkey
Técnicas de cultivo
Los cultivos siguen siendo los métodos
más sensibles para la detección de
MTC en pacientes que no están
recibiendo tuberculostáticos. Pueden
detectar entre 10 y 100 bacilos/ml de
esputo. A pesar del gran desarrollo y
revolución que han supuesto, desde
1990, las técnicas moleculares, sobre
todo las basadas en amplificación de
ácidos nucleicos (AAN), ninguna de
ellas, a fecha actual, ha conseguido en
estudios clínicos ser tan sensible como
los cultivos. Sin embargo, precisaremos de medios de cultivo específicos ya que con la
inoculación directa de la muestra en los medios de cultivo habituales no crecen las
micobacterias. El microbiólogo por tanto debe ser informado de si a una muestra
respiratoria se le desea buscar una micobacteria o no.(11)
Detección de Mycobacterium tuberculosis mediante la amplificación de su DNA
(PCR).
La amplificación del material genético de M. tuberculosis mediante una reacción
enzimática da lugar a millones de copias del DNA blanco. Teóricámente este hecho
convierte a la PCR en la técnica de diagnóstico más rápida y especifica de todas las
técnicas de diagnóstico actualmente utilizadas. En teoría esta puede ser utilizada sin la
necesidad de aislar previamente a la micobacteria en un medio de cultivo(12)
Uso de sondas de ácidos nucleicos para la confirmación de cultivos positivos de
Mycobacterium tuberculosis.
El rRNA liberado de la bacteria que se va a probar (M. tuberculosis por
ejemplo) a través de la acción de un agente lítico, calor y sonicación,
se hibridiza con la sonda de DNA de cadena simple marcada con I 125
para formar un complejo DNA-RNA estable.(12)
Después de la separación del complejo marcado del DNA, se cuentan
los complejos DNA-RNA radiactivos. Los resultados de la prueba se
calculan como porcentaje de hibridación de la sonda inicial.(12)
Cromatografía gas-líquido y cromatografía de alta resolución.
Anticuerpos anti mycobacterium tuberculosis.
PRUEBA DE LA TUBERCULINA
La prueba de la tuberculina mide la hipersensibilidad
retardada como respuesta hacia a la tubérculo
proteína (PPD).(12)

MANIFIESTE USTED PORQUE ES IMPORTANTE CONOCER EL FUNDAMENTO DE

LA COLORACIÓN GRAM.

La tinción de Gram es de gran

utilidad para realizar el examen
directo de muestras clínicas,
porque permite determinar la
calidad de ellas, la respuesta
inflamatoria, la naturaleza y
cantidad de microorganismos
presentes y el germen
predominante en una infección
mixta o con muestras
contaminadas con biota normal.
Adicionalmente, se puede
correlacionar el resultado del
examen directo con el resultado de los cultivos y de esta manera, disponer de un
adecuado control de calidad. Este examen tiene valor diagnóstico y es de informe
inmediato en muestras de líquido cefalorraquídeo y líquidos corporales, esputo, sangre,
orina, abscesos, y secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnostico en
muestras faríngeas y nasofaríngeas ya que la biota observada hace parte de la flora
normal de estos sitios anatómicos. Es de uso limitado en muestras de materia fecal (el
diagnostico presuntivo de infecciones por Campylobacter sp.) (13)

Utilidad en el diagnostico presuntivo Las características fenotípicas que presentan

algunas bacterias contribuyen a su diagnóstico presuntivo: (14)
La observación de cocos Grampositivos dispuestos en racimos sugieren la
presencia de estafilococos.
La disposición de cocos Grampositivos en cadena indica estreptococos.
Diplococos Grampositivos en forma de lanceta o con extremos alargados son
característicos de S. pneumoniae cuando se observan en esputos.
Diplococos Gram negativos arriñonados o reniformes son característicos de las
especies de Neisseria.
 Bacilos Grampositivos ordenados en letras chinas o empalizadas son típicos del
Corynebacterim
Los dos grupos bacterianos que distingue esta técnica difieren en el color con el que
finalmente adquieren. Las bacterias Gram + se teñirán de azul por el cristal violeta y no
perderán esta coloración durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram‐ perderán la
coloración inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teñirán de rosa debido a
la safranina.(14)
Además de proveer al microbiólogo y al clínico las características fenotípicas de la
bacteria en cuanto a tamaño, forma, agrupación y características tintoriales, esta tinción
es importantísima ya que en algunos casos permite la instauración del tratamiento
rápido y oportuno.(14)
Esta tinción, constituye por lo tanto un apoyo indiscutible contra las enfermedades
infecciosas y aumenta su valor en lo relativo a instaurar una terapia rápida permitiendo
la selección de los antibióticos apropiados (15)
BIBLIOGRAFIA:
1. Agudelo Clara Inés, Castañeda Elizabeth. Coloración de Gram. Instituto Nacional
de Salud. Grupo de Microbiología. 1998. pp. 5-8.
2. Díaz P. et al. Utilidad de la citocentrifugación en el diagnóstico bacteriológico
microscópico de fluidos corporales. Rev. chil. infectol. 2002, vol.19, n.3 pp. 167-173.
3. López A. Méndez R. Tinción Gam. Universidad Autónoma de Zacatecas Francisco
García Salinas. Área de Ciencias de la Salud.Unid. Acad. de Ciencias Químicas.
2010
4. Ben-Selma W et al. Detección rápida de Mycobacterium tuberculosis en esputo
mediante el kit Patho-TB en comparación con microscopía directa y cultivo. Diagn
Microbiol Infect Dis. 2009; 65: 232-235.
5. Chen P et al. Una mancha altamente eficiente de Ziehl-Neelsen: identificando
Mycobacterium tuberculosis intracelular de novo y mejorar la detección de M.
extracelular tuberculosis en el fluido cerebroespinal. J Clin Microbiol. 2012; 50:
1166-1170.
6. Selvakumar N et al. Comparación de variantes de carbolfuchsin solución en Ziehl-
Neelsen para la detección de ácido resistente bacilos. Int J Tuberc Lung Dis. 2005;
9: 226-229.
7. Bauman, R. Microbiología con enfermedades por el sistema del cuerpo (4ª ed.).
Pearson Education, Inc. 2014.
8. Díaz R Gamazo C y López Goñi I. 1999. Manual práctico de microbiología. Edición
Masson
9. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg Edward A. Manual de Microbiología Médica. La
Habana: Editorial de Ciencias Médicas; 2008.
10. Llop Hernández A, Valdés Dapena Vivanco MM, Suazo Silva JL. Microbiología y
parasitología médicas. La Habana: Editorial de Ciencias Médicas; 2001.
11. Dorronsoro I. Torroba L. Microbiología de la tuberculosis. Anales Sis. San Navarra.
Vol. 30 sulp. 2 Pamplona 2007
12. http://www.fcq.uach.mx/phocadownload/DOCENCIA/MATERIAL-DE-
ESTUDIO/micobacterias/diagnostico/diagnostico.html
13. Revista Portales Médicos (15 de marzo, 2013) Artículo de revisión. La coloración
de gram y su importancia en el diagnóstico microbiológico. Obtenido de
http://www.revista-portalesmedicos.com/revista-medica/coloracion-
gramdiagnostico-microbiologico/
14. Luis Esaú López-Jácome, Melissa Hernández-Durán, Claudia Adriana Colín-
Castro, Silvestre Ortega-Peña, Guillermo Cerón-González, Rafael Franco-
Cendejas. (marzo, 2014) Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología.
Obtenido de http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
15. Cisternas Osvaldo. La tinción de Gram como herramienta de uso diario en el
diagnostico precoz de algunos patógenos. Revista del hospital del niño. Panamá
Vol. Nro 2. Diciembre 2007.