EXPLICACION TP4:

DETERMINACIÓN DE SULFATO DE QUININA EN UN COMPRIMIDO FARMACEUTICO POR FLUORESCENCIA

MOLECULAR

FUNDAMENTOS:

 Matriz: medicamento
 Técnica: fluorescencia molecular
 Determinamos: sulfato de quinina

FLUORESCENCIA

 Técnica de emisión, no hay relación de potencias, medimos la energía de una radiación emitida por nuestro
sistema
 Espectroscopia: interacción de la radiación con la materia
 Mecánica cuántica: podemos utilizarla de materia descriptiva, como herramienta
- porque los procesos radiació-sustancia suceden a escala subatómica
- si queremos darle un tamaño a la radiación, podemos tratarla como partículas, fotones, que interaccionan
con electrones
- cualquier movimiento esta cuantificado, hay frecuencias, energías prohibidas
 En las técnicas de fuorescencia queremos ver que esta pasando con los electrones y con los fotones
(radiación con la que trabajo)
 Hay un estado fundamental y un estado excitado, hay un electrón sobre el cual incide la radiación y procede
a excitarlo. Los electrones quieren estar en el menor estado de excitación posible. La radiación lo perturba,
pero vuelve a su estado fundamental, estable. Para eso hubo implicada una energía, que cuando vuele al
estado fundamental el electrón, la devuelve en forma de radiación. Se encuentran los electrones en un
estado, y el sistema responde, dándonos información acerca de la materia que estamos estudiando.

 La energia incidente no cambia, solo la potencia, en sistemas elasticos, cuando hay perdida el sistema es
inelástico, lo cual es otra espectroscopia.
 En fluorescencia, medimos la energia radiante emitida, nos brinda información cuantitativa (cuanto hay) y
cualitativa (longitud de onda, absorbancia).
 La fluorescencia no utiliza la ley de L y B, es una igual a una constante por la concentración
 La longitud de onda no es la misma cuando un electron sube o baja
 Hay dos espectros, uno de excitacion y uno de emisión, es información cualitativa
Estos espectros tienen una longitud de onda, y es
distinta, por lo que la energía es distina
A mas energia, menor longitud de onda. Casi siempre
hay perdida de energía.
El método por fluorescencia tiene mayor linealidad, lo
que nos permite estuidar mas rangos de [C]
 Desventaja: no cualquier elemento fluoresce
APLICACIONES

 Para que haya fluorescencia se necesita un tipo de transición electrónica, que algunas especies orgánicas
suelen no tener:
- n → π*
- π → π*
 Cuando hay dobles enlaces, se puede pensar en aplicar técnicas fluorescentes, porque es mas lineal y mas
sencilla.
 Hay quelatos que son ligandos que cuando se les une un metal, se reacomodan dando una estructura
fluorescente. También sucede todo lo contrario, hay especies que disminuyen la fluorescencia, quenching. La
pendiente de la curva se se hace negativa.
 LA ENERGIA EMITIDA NUNCA VA A SER MAYOR QUE LA INCIDENTE, LA ENERGIA EMITIDA VA A SER MENOR O
IGUAL QUE LA INCIDENTE, POR LO QUE LA LONGITUD DE ONDA VA A SER MAYOR.

DIFERENCIA FLUORESCENCIA FOSFORECENCIA

- En la fosforecencia se tarda mas porque se debe reacomodar el spin

- En la fluorescencia el electron se excita y pasa a tener el mismo spin
- En a fosforecencia, el electron se excita y cambia de spin

RENDIMIENTO CUANTICO

𝑓𝑙𝑢𝑜𝑟𝑒𝑠𝑐𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎
 𝜃=
𝑓𝑙𝑢𝑜𝑟𝑒𝑠𝑐𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎+𝑓𝑒𝑛𝑜𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑛𝑜 𝑓𝑙𝑢𝑜𝑟𝑒𝑠𝑐𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠

 Los fenómenos no fluorescentes deben ser bajos, sino baja el rendimiento, porque compiten con la
florescencia. Se pueden ajustar las condiciones experimentales para disminuirlo.

 En el laboratorio buscamos estrategias para disminuir esto.

 Estado singlete*: el electron excitado tiene diferente

spin que el que queda en estado fundamental
 Estado triplete: El electron excitado cambia su spin.
  Diagrama de Jablonsky
- 1° los electrones con la energía radiante suben a un estado de mayor energía, pasan del estado
fundamental a estados vibracionales. Van bajando sin emitir energía radiante: reajacion vibracional
(flecha curva en el diagrama), es el primer fenómeno no radiante, que compite con la fluorescencia.
Esto ocurre a nivel molecular, a nivel atomico no hay relajación vibracional
 La fluorescencia siempre ocurre desde el estado excitado mas bajo hasta cualquiera de los 4 estados
fundamentales. Bajan por relajación ibracional, aumenta t°.

 La conversión interna es aquello que ocurre cuando dentro de una misma molecula, el electron es excitado,
y en lugar de emitir, pasa de un estado excitado S2 a uno S2 excitado de otro grupo funcional que tenga
cerca o a un estado fundamental que tenga cerca.
 La conversión interna es perjudicial para la fluorescencia.
 La conversión externa es aquello que ocurre cuando otra molecula le pasa energía, siempre menor
 Cruce entre sistemas, estado radiante en estado triplete, el electron decide cambiar el spin y darse vuelta,
luego se da vuelta y cuando baja emite fosforecencia: va de menor energía del excitado hasta cualquiera de
los estados vibracionales del estado fundamenta y por relajación vibracional llega al estado fundamental
mas bajo.
 En fluorescencia baja desde el estado singlete y en fosforecencia desde el estado triplete

VARIABLES QUE AFECTAN LA FLUORESCENCIA

 Rigidez de la molecula
 pH: a veces la resonancia y los enlaces se ven afectados por la protonacion o la desprotonacion, y esto afecta
la longitud de onda. Puede desfavorecer o favorecer.
 Temperatura: relación vibracional y conversión externa, mayores colisiones generan choques
 Viscosidad: mas viscosidad mas colisiones
 Presencia de O2 disuelto favorece el cruce de sistemas y puede oxidarla, cambiando el analito

LABORATORIO

 Instrumento: fluoridimetro.
- Lámpara, dos filtros, uno hace un barrido para ver cual es el máximo de longitud de onda de excitación y
el otro para encontrar la mejor longitud de onda de emisión (1°emision > 2° excitación )
- Posición lámpara detector a 90°
- También sirve para nefelometria
 Medio ácido: H2SO4, no so HCl porque hace quenching y molesta. Efecto del átono pesado.
 Curva de calibrado: Expresion mg QSO4/comprimido