Agar eosina-azul de metileno (EMB o LEVINE)

a) MATERIALES
Equipo y materiales de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y
medios de cultivo según requerimiento.

b) PROCEDIMIENTO
 Suspender 36 g del polvo en un litro de agua purificada. Reposar 5 minutos.
 Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su dilución total.
 Esterilizar en autoclave 121 c durante 15 minutos.
 Distribuir en placas de Petri estériles.
 Siembra: En superficie, por estriado directo a partir de la muestra. En profundidad,
para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

c) USO
Este medio también denominado E.A.M. es utilizado para el aislamiento selectivo d
bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y excasas exigencias nutricionales. Permite
el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
 Caldo de tioglicolato
a) MATERIALES
 Mechero
 Asas bacteriológicas
 Elementos de protección
 Incubadora
 Cepas ATCC
b) PROCEDIMIENTO

 Pesar 29,75 gr del medio deshidratado y disolver en 1 litro de agua destilada.

La mezcla se deja en reposo por 5 minutos aproximadamente. Llevar a una
fuente de calor y agitar frecuentemente hasta que se disuelva completamente.

 Verter el medio en tubos de ensayos y autoclavar a 121°C por 15 minutos.

Dejar enfriar antes de usar. Revisar el inserto de la casa comercial para su
conservación. Algunas recomiendan guardar a temperatura ambiente en lugar
oscuro, y otras en nevera protegidos de la luz.

 El pH del medio preparado es de 7,1 ± 0,2.

 El color del medio deshidratado es beige claro y preparado es ámbar claro con
cierta opalescencia.

c) USO

El caldo tioglicolato es útil para el enriquecimiento de muestras clínicas, especialmente

para aquellas provenientes de sitios estériles. También es útil para muestras no clínicas,
como cosméticos, medicamentos, etc. Para la inoculación de muestras líquidas (como
LCR, líquido sinovial, entre otros), primero se centrifugan las muestras y luego se toman
 2 gotas del sedimento y se colocan en el caldo tioglicolato. Incubar a 35°C por 24 horas.
Si en este tiempo no hay crecimiento (turbidez), se incuba hasta un máximo de 7 días

Agar sangre campy

a) MATERIALES

Equipo y materiales de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios

de cultivo según requerimiento.

b) PROCEDIMIENTO

 Disolver 50,0 g de medio en 1 L de agua bidestilada. Remover para homogeneizar,

calentando hasta ebullición sin parar de remover. NO AUTOCLAVAR. Enfriar
rápidamente en un baño a 45-50ºC, agitando suavemente.

 Añadir 210 mg del suplemento en 10 mL de agua bidestilada que no esté fría. Agitar
hasta su total disolución. Esterilizar por filtración con filtro de 0,45 µm (por ejemplo con
jeringa y filtro de carcasa VHU237).
 Añadir los 10 mL de esta solución estéril de suplemento al 1L de medio enfriado a 45-
50ºC. Remover para homogeneizar.
 Dispensar en placas Petri estériles y dejar solidificar. Las placas pueden almacenarse
hasta un mes en nevera ¡no congelar! si están bien cerradas en bolsas autosellables, para
evitar su deshidratación y contaminación.

c) USO

Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio está suplementado

con sangre y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la
mayoría de las bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente.
 Agar hektoen entérico (HE)

a) MATERIALES

Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios

de cultivo según requerimiento.

b) PROCEDIMIENTO

 Suspender 76 gramos del polvo en litro de agua purificada. Dejar reposar de 10 a 15

minutos.

 Calentar con agitación frecuente y hervir hasta lograr una dilución completa. Enfriar y
distribuir en placas de Petri.

 Siembra: Directa, estriando la superficie del medio de cultivo.

 Incubacion: En aerobiosis a 35-37 grados centígrados durante 18 a 24 horas.

c) USO

Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. Y

Shigella spp. A partir de heces y alimentos.
 Agar S-S (Salmonella y Shigella)

a) MATERIALES

 Materiales suministrados BD Salmonella Shigella Agar (placas Stacker de 90 mm).

Controladas microbiológicamente.

 Material no suministrado: Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio

que se requiera.

 Tipos de muestras Se trata de un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento de

Salmonella a partir de muestras fecales o torundas rectales de pacientes en los que hay
sospecha de una infección entérica bacteriana.

b) PROCEDIMIENTO

Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con
flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda,
hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área
inoculada. También debe inocularse un medio menos selectivo tal como BD MacConkey II
Agar a fin de incrementar la posibilidad de recuperación cuando la población de
microorganismos gram-negativos sea escasa y de proporcionar una indicación sobre otros
microorganismos presentes en la muestra. Incubar las placas, protegidas de la luz, a una
temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de 18 a 24 h o durante más tiempo si es
necesario
c) USO

El agar Salmonella-Shigella es una modificación del agar citrato desoxicolato descrito por
Leifson. Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de inhibición
de los microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y
Shigella, que inhibe por contenido de sales biliares, verde brillante y citratos. En BD
Salmonella Shigella Agar, la diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante
la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan lactosa producen
ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la formación de colonias de
color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este
último grupo incluye la mayoría de los patógenos intestinales, incluidas Salmonella y
Shigella. El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de producción de
ácido sulfhídrico, como lo demuestran las colonias con centros de color negro. Este medio
se utiliza para el aislamiento primario de Salmonella a partir de muestras fecales
humanas. Dado que existen medios más eficaces para el aislamiento de Shigella, no debe
utilizarse para el aislamiento de este organismo.
 Agar muller-Hinton

a) MATERIALES

Materiales no suministrados . Según CLSI: caldo de inóculo en tubo, tal como BD

TrypticaseTM Soy Broth (caldo de digerido de soja-caseína) o caldo Mueller Hinton II
(con ajuste de cationes), para la preparación de un inóculo estándar y caldo estéril o
solución salina para la dilución del inóculo.

b) PROCEDIMIENTO

 Según EUCAST: en el caso de los análisis de sensibilidad sistemáticos, el inóculo

se puede preparar realizando una suspensión directa en solución salina de varias
colonias morfológicamente similares. 2. Dicha suspensión debe ajustarse
inmediatamente a los patrones de turbidez del sulfato de bario (patrón 0,5 de
McFarland) sin incubación. La turbidez del patrón y del inóculo de prueba deben
compararse sosteniendo ambos tubos contra un fondo blanco con líneas negras
claramente marcadas, o se puede utilizar un dispositivo fotométrico. 3. Se han
considerado aceptables para fines de análisis sistemáticos métodos alternativos de
preparación del inóculo en los que se utilizan dispositivos que permiten la
normalización directa de los inóculos sin un ajuste de la turbidez, como BD
Prompt Inoculation System25 . 4. En la medida de lo posible, utilizar el inóculo en
los 15 min posteriores. La suspensión debe utilizarse siempre en los 60 min
siguientes a la preparación. Sumergir una torunda estéril en el inóculo diluido
correctamente y girarla varias veces contra la porción superior de la pared interna
del tubo para exprimir el exceso de líquido y evitar así una inoculación excesiva.
5. Inocular toda la superficie del agar de la placa tres veces, girando la placa 60
grados cada vez para obtener una inoculación uniforme.

 6. Según CLSI: La tapa puede dejarse entreabierta entre 3 y 5 min y mantenerse la

placa a temperatura ambiente durante no más de 15 min para permitir que se
 absorba la humedad de la superficie antes de aplicar los discos impregnados con
agentes antimicrobianos. Aplicar los discos mediante un dispensador de discos
antimicrobianos, empleando técnicas asépticas. Depositar los discos de modo que
los centros queden a no menos de 24 mm de distancia.

 Según EUCAST: aplicar los discos a la placa seca en los 15 min posteriores a la
inoculación, empleando técnicas asépticas. Depositar un máximo de seis discos en
la placa. PA-254032.08 Página 5 de 11 7. Una vez colocados los discos sobre el
agar, presionarlos con una aguja o pinza estéril hasta que el contacto con la
superficie del medio sea completa. Este paso no es necesario si los discos se
colocan con los dispensadores de autoapisonamiento BD Sensi-Disc. 8. En los 15
min posteriores a la aplicación de los discos, invertir la posición de las placas e
introducirlas en la incubadora. Las placas no deben incubarse en una
concentración aumentada de dióxido de carbono. Para conocer las condiciones
recomendadas para la incubación, consultar CLSI y EUCAST.

c) Uso

Mueller Hinton Agar es un medio estándar utilizado para la prueba de sensibilidad de

bacterias aerobias de rápido crecimiento o anaerobias facultativas, como estafilococos,
enterococos, miembros de la especie Enterobacteriaceae y bacilos gram negativos
aerobios.