DETERMINACION DE PRUEBAS DE FUNCION RENAL

1. OBJETIVO GENERAL
 Determinar la concentración de urea mediante el método enzimático colorimétrico de Berthelot y el
método cinético enzimático dependiente de NADH y la concentración de creatinina en suero
mediante el método cinético químico.

OBJETIVO ESPECIFICOS
 Leer la absorbancia de la urea cinético enzimático a una longitud de onda de 340 nm
 Leer las absorbancias de la creatinina a una longitud de onda de 500 nm.
 Adquirir habilidades y destrezas en el manejo de la técnica y procedimiento para la determinación
de creatinina y urea.
 Determinar NUS
 Interpretar los valores encontrados y relacionarlos con las diversas patologías vinculadas con las
mismas.
2. FUNDAMENTO TEORICO:
2.1. INTRODUCCION
Las enfermedades renales pueden ponerse de manifiesto tanto a través de datos bioquímicos
como clínicos. Entre los primeros cabe destacar el aumento en las concentraciones séricas de
urea y creatinina, las alteraciones en la composición fisicoquímica de la orina y la presencia de
elementos formes sanguíneos, bacterias, hongos, parásitos y elementos celulares procedentes de
descamación.
Los datos clínicos más frecuentes incluyen la presencia de edemas, hipertensión arterial, palidez
cutánea mucosa, prurito y alteraciones cuantitativas o cualitativas en la micción.
El conjunto de signos, síntomas y alteraciones bioquímicas se concretan en síndromes bien
definidos, no mutuamente excluyentes, de gran utilidad diagnóstica.
2.2. RIÑONES
Los riñones filtran la sangre y producen la orina, que varía en cantidad y composición, para
mantener el medio interno constante en composición y volumen, es decir para mantener la
homeostasis sanguínea.
Concretamente, los riñones regulan el volumen de agua, la concentración iónica y la acidez
(equilibrio ácido base y pH) de la sangre y fluidos corporales, además regulan la presión arterial,
eliminan residuos hidrosolubles del cuerpo, producen hormonas y participan en el mantenimiento
de la glucemia, en los estados de ayuno.
 2.3 SINDROME NEFROTICO
El síndrome nefrótico se caracteriza por cuatro elementos clínicos: proteinuria importante (superior
a 3 g /24 horas), hipoproteinemia, hipoalbuminemia, edemas y finalmente, hiperlipemia.
2.4. INSUFICIENCIA RENAL AGUDA
El término Insuficiencia renal aguda (IRA) expresa la disminución brusca, total o parcial, de la
función renal por cualquier causa. La IRA se clasifica en tres grandes grupos:
 IRA pre- renal.
 IRA parenquimatosa.
 IRA obstructiva

2.5. INSUFICIENCIA RENAL CRONICA

La insuficiencia renal crónica (IRC) se presenta como consecuencia de una serie de

enfermedades renales progresivas crónicas que afecten al parénquima renal o que obstruyan el
sistema excretor, se origina una situación en la cual los riñones sufren una pérdida progresiva e
irreversible de nefronas funcionales (glomérulos y túbulos).
Los síntomas no suelen ser apreciables hasta que se ha perdido un 80-90% de la función renal
por lo que el paciente, a menudo, no advierte la enfermedad hasta que se ha producido una
insuficiencia renal grave.
Son características fundamentales un aumento del BUN y de la creatinina sérica, así como, en la
mayor parte de los casos, una disminución del tamaño de los riñones que adoptan un aspecto
contraído.
El cuadro patológico y la velocidad de progresión (meses a años), varían en función de la causa
de la insuficiencia renal y de la presencia de factores complicantes.
Las consecuencias de la reducción del número de nefronas funcionales son amplias e
importantes:

 Trastornos hidroelectrolíticos: al reducirse el número de nefronas existe una mayor carga

de solutos para las todavía funcionantes, esto determina una diuresis osmótica a la que se
suma la incapacidad para concentrar o diluir la orina.
 Hipertensión: constituye un trastorno frecuente en la uremia, a menudo consecuencia de la
expansión del volumen extracelular.
 Retención de nitrógeno: como consecuencia de la reducción de la depuración se
presentan valores elevados de BUN, de creatinina sérica y de urato.
 Anemia: la anemia que se observa en los enfermos con IRC es habitualmente normocítica
y normocrómica y de origen multifactorial

2.6. UREA

La urea es el principal metabolito del catabolismo de las proteínas. Es sintetizado en el hígado

a partir de CO2, y de amoniaco generado de la desaminación de los aminoácidos, a través del
ciclo de la ornitina o Krebs-Henseleit.Mas del 90% de la urea es excretada a través del riñón,
donde es filtrada desde el plasma por el glomérulo. En el riñón normal, entre 40% y el 80% de
la urea es reabsorbida por difusión pasiva fuera del túbulo renal hacia el intersticio, y vuelve al
plasma. La reabsorción de urea depende principalmente del estado de hidratación y, por ello,
de la tasa de flujo urinario. Normalmente, la urea supone alrededor de la mitad (25g) del total de
solidos urinarios y de entre 80 % a un 90% del nitrógeno urinario total. La fracción restante
(<del 10%) de urea es eliminado a través del tracto gastrointestinal y la piel.
La urea es uno de los análisis de laboratorio más habituales para evaluar la función renal. La
utilidad del test, sin embargo, es limitada por el hecho de que se debe producir una
considerable destrucción glomerular, en torno al 70% u 80%, antes que se produzca un
incremento en el nivel de urea plasmática. Además, la concentración de urea plasmática
depende de la función renal, la ingesta de proteínas y el nivel de metabolismo proteínico. La
utilidad de la determinación de urea sérica es especialmente importante cuando sus
resultados son evaluados junto con los de la determinación de creatinina sérica.
técnica analítica:
la urea es determinada en suero, plasma y orina. Debido a que es muy susceptible a la
descomposición bacteriana, los especímenes (especialmente orina) deben ser refrigerados si
no van hacer analizados en las horas siguientes, para evitar una rápida perdida de la urea.
Existen dos métodos analíticos para la determinación de urea en líquidos fisiológicos: métodos
directos e indirectos. Los métodos directos están basados en la reacción de fearon, en la que
la urea es determinada por condensación directa con diacetil monoxima, en presencia de un
ácido fuerte para formar un derivado amarillo de diacona que absorbe fuertemente a 540nm.
Este procedimiento es sencillo, mide la urea directamente y no muestra interferencias por el
amonio. Además, ha sido satisfactoriamente automatizado en algunos autoanalizadores. Sin
embrago, algunas limitaciones, como la escala linealidad y el uso de un químico caustico, han
convertido a este método en poco atractivo
En el procedimiento indirectos, la urea es primero hidrolizada por la enzima ureasa a NH4-+y
HCO3- con la consiguiente cuantificación del ion amonio, tanto por espectrofotometría o
procedimientos electroquímicos. El abordaje espectrofotométrico emplea reacción de Berthelot
y ensayos enzimáticos apropiados. En el primero, el amonio es convertido en indofenol con la
adición de nitroprusiato. Este método es bastante satisfactorio y barato; sin embargo, tiene la
desventaja de que es muy sensible a la contaminación de amonio en la mezcla de la reacción,
y al amoniaco endógeno presentes en la muestra de orina. En las reacciones enzimáticas
acopladas, el NH4+ producido por hidrolisis con ureasa es medido por una serie de reacciones
acopladas que producen H2O2.El H2O2 es posteriormente cuantificado por la formación de un
colorante quinonaimina en presencia de fenol y 4-aminofenazona. Este método demuestra
buena especificidad.
Los abordajes electroquímicos para la cuantificación de NH4+ incluyen:

 La determinación de la tasa de incrementos de conductividad, según la urea es

hidrolizad por la ureasa para formar especies iónicas NH4+ y HCO3- .
 La determinación potenciometría utilizando un electrodo selectivo para el ion amonio.

Se considera que un método de espectrometría de masas puede ser el sistema definitivo para
la determinación de urea.
2.7. CREATININA
La creatinina es un componente de almacenamiento de fosfato de alta energía necesario para
el metabolismo del musculo.es sintetizado principalmente en el hígado a partir a partir de
arginina, glicina y metionina. esta reacción es catalizada por una transaminasa, que esta
transmitida a una inhibición por retroalimentación por aumento de la creatinina. una vez
sintetizada, entre la circulación sanguínea para ser ampliamente distribuida, especialmente a
las células musculares, que contienen alrededor del98% de toda la creatina del organismo. en
el musculo la creatinina es convertida a fosfocreatina, que sirve como fuente de energía. en
condiciones fisiológicas, la cretina pierde agua espontáneamente, para formar su amina cíclica,
creatinina. una vez formada la creatinina no es utilizada por el metabolismo y se convierte en
un producto de desecho.
La creatinina es filtrada por los glomérulos, pero es reabsorbida en gran parte o
completamente por los túbulos proximales. la creatinina es excretada a la circulación a una
velocidad relativamente constante, que es proporcional a la masa muscular del individuo. es
también filtrada libremente por los glomérulos, pero no es absorbida en circunstancias
normales. sin embargo, la reabsorción tubular de creatinina puede ocurrir en determinadas
condiciones clínicas, incluyéndola insuficiencia cardiaca congestiva severa y la diabetes
mellitus incontrolada. una fracción importante de la excreción de creatinina por el riñón es el
resultado de la secreción tubular máxima. así en individuos normales, el aclaramiento de la
creatinina puede ser normalmente superior entre un 10% y un 40% al aclaramiento de inulina.
en pacientes con insuficiencia renal severa, hasta un 60% de la creatinina urinaria puede
derivar de la secreción tubular. la secreción tubular de creatinina puede ser inhibida por
fármacos como la cimetidina, el provenid y el trimetoprim.
En contenido de creatina en el organismo de un hombre normal es proporcional a su masa
muscular. la tasa de cambio de la creatinina es también relativamente constante, siendo
trasformada, aproximadamente del 1.6% al 1.7% de la creatinina total cada 24 horas. debido a
la constancia en la producción de la creatinina, la determinación de su excreción urinaria es
habitualmente utilizada como una referencia a la cantidad total eliminada en orina de 24 horas.
durante años se aceptado que la creatinina plasmática es relativamente independiente de la
dieta. Sin embargo, estudios recientes muestran que la cantidad de proteínas de la dieta
puede afectar los niveles de producción de creatinina por efecto sobre la masa muscular del
individuo. otros factores que también pueden influir sobre la concentración de creatinina sérica
son su metabolismo y tratamiento por el riñón, así como los propios métodos de medida.
además, el efecto de envejecimiento, el embarazo, la diabetes mellitus, la administración de
fármacos y tanto el fallo renal agudo como crónico, deben ser correctamente interpretados
cuando se utiliza la creatinina sérica como un índice de función renal.
técnicas analíticas
La creatinina puede ser medida en suero, plasma u orina. no existen diferencias sistemáticas
entre la creatinina el suero y el plasma. hasta el momento el método más utilizado para su
cuantificación está basado en la reacción de jaffe, descrita en 1886. en esta reacción, la
creatinina es tratada con una solución alcalina de picrato, para formar un complejo brillante
rojo naranja, que absorbe la luz a 485 nm. desafortunadamente, este sencillo procedimiento
está sometido una interferencia por una variedad de cromógenos presentes en el suero, que
reaccionan dando un color idéntico, ocasionando así un incremento erróneo en la
concentración determinada de creatinina. entre estas sustancias están la glucosa, fructosa
ácido ascórbico, piruvato y ácido úrico. un incremento en la temperatura de la reacción, así
como cambios en el pH, también afecta a la determinación de creatinina, facilitando el efecto
de las sustancias interfirientes. por otro lado, la bilirrubina y la hemoglobina, así como
especímenes lipemicos, muestran una interferencia negativa en la reacción de jaffe. se han
realizado esfuerzos para eliminar o minimizar el efecto de estas interferencias, absorbiendo
los componentes interfirientes sobre materiales como la tierra de fuller o el reactivo de Lloyd.
este proceso sin embargo no es utilizado habitualmente en los laboratorios clínicos modernos,
porque requiere una tarea intensa y su eficacia es cuestionable. la validez del procedimiento
picrado para las determinaciones de creatinina ha sido, sin embargo, significativamente
mejorado por la introducción de determinaciones cinéticas, en contraposición a los métodos de
punto final. estos análisis utilizan la tasa diferencial de desarrollo de color de los cromógenos
que no son la creatinina comparados con las de la propia creatinina, permitiendo así una
separación tasa-dependiente de la creatinina y sus sustancias interfirientes. a pesar de que
este abordaje elimina alguno de sus reactantes inespecíficos, está todavía sometido a
numerosos resultados erróneos ah pacientes con elevados niveles de & - cetoacidos y
aquellos sometidos a terapia con cefalosporina. una nueva metodología en la que se usa la
corrección de un blanco, ha permitido eliminar la interferencia de la bilirrubina. en resumen, la
reacción de jaffe con diferentes modificaciones, es el método más utilizado actualmente en los
auto analizadores.
Otro abordaje para la eliminación de reacción inespecífica de jaffe ah solo la introducción de
varios métodos enzimáticos acoplados, incluyendo dos enzimas que se cortan la creatinina,
creatinina amidohidrolasa y creatinina desaminasa, y peroxidasa. el h2 o2 resultante reacciona
con un derivado de fenol y un colorante que absorbe la luz a una longitud de onda especifica.
estos métodos han sido adaptados para ser usados con analizadores automáticos.
varios métodos de cromatografía liquidan de alta resolución muestra una especificad
excelente. sin embargo, la necesidad de desproteinizacion de la muestra, así como la
laboriosidad del procedimiento, han hecho que estos análisis tengan una aceptación limitada
en la práctica común.
El análisis de muestras lipemicas y con niveles altos de bilirrubina darán también resultados
erróneos además las muestras deberían ser almacenadas a pH 7 para minimizar conversiones
internas
2.8. FUNDAMENTO DEL METODO

 METODO DE UREA CINÉTICO ENZIMÁTICO

La urea presente en la muestra consume según las reacciones acopladas descritas a
continuación NADH que se cuantifica por espectrofotometricamente.
Metodo: cinético enzimático dependiente de NADH
Urea + H2O ureasa 2NH4 +CO2
2NH4+ NADH+ H +2-oxoglutarato GDH glutamato + NAD

 MÉTODO COLORIMÉTRICO DE BERTHELOT

La urea en la muestra origina, mediante las reacciones acopladas descritas a continuación, un
color Complejo que puede medirse por espectrofotometría.
Ureasa
Urea + H2 O 2 NH4 + CO2
nitroprusiato
NH4 + salicilato + NaClO azul de indofenol
 METODOS PARA LA DETERMINACION DE CREATININA
 La creatinina forma un complejo coloreado Amarillo– anaranjado en una solución de picrato
alcalina. La diferencia en la absorbancia a tiempos fijos durante la conversión es proporcional
a la concentración de creatinina en la muestra.

Na OH
Creatinina + ácido pícrico -----------------> Complejo Picrato-Creatinina
3. FASE PRE-ANALITICA: Obtener una muestra sangre(suero) estable y representativa
3.1. Orden médica o solicitud de laboratorios
SOLICITUD DE LABORATORIOS
Nombre Ester quelca atahuachi
Edad 21 años Sexo F
Diagnostico Insuficiencia renal crónica a DC
Medico Dra. Paola Jaimes Chávez
Solicitante
Fecha 5 de octubre 2019
EXÁMENES SOLICITADOS
- Urea
- Creatinina en suero
- NUS
Firma del medico

- Revisar los datos del paciente: Nombre, edad, fecha, sello y firma del médico solicitante.
3.2. Instrucciones al paciente
Indicar de forma clara y de acuerdo al idioma que habla de la siguiente manera: Señora usted
debe realizar un ayuno de 8 horas. Es decir, usted debe comer por última vez a las 8 de la noche
y presentarse en el laboratorio a las 8 de la mañana del día siguiente.
3.3. Registro del paciente
En una base de datos registrar:
REGISTRO DE PACIENTE
Nombres y Apellidos Esther quelca atahuachi
Edad 21 años Sexo Femenino
Teléfono ----------- Cel. 60625222
Dirección Zona 16 de Julio Calle Tte. Montaño No 515
Tratamiento Ninguno
Diagnostico Insuficiencia renal crónica a DC
 Medico Solicitante Dra. Paola Jaimes Chávez
Fecha de recepción 05/10/19
Exámenes solicitados Urea, creatinina en suero, y NUS
- Se solicita la dirección y el teléfono en caso que se deba repetir el análisis en caso de que la
muestra presente hemolisis o lipemia.
3.4. Preparación del material de toma de muestra
Antes de la toma de muestra se debe tener listo el siguiente material:
- Guantes
- Mascarilla
- Gradillas
- Torundas alcoholadas
- Torundas de algodón secas
- Micropore
- jeringas de 5ml
- Ligadura
- Tubos sin anticoagulante
- Contenedor para agujas punzantes
3.5. Toma de la muestra: Trazabilidad
Antes de tomar la muestra debemos verificar si el paciente ha cumplido con todas las indicaciones
que se le dio.
- Explicar al paciente en qué consistirá la toma de muestra sanguínea.
- Seleccionar el sitio de la vena donde se realizará la punción
- Ligar el brazo aprox. 4 dedos por encima de la flexión del codo o a 10 cm. de él.
- Para tomar la muestra se debe realizar la asepsia y antisepsia correspondiente
- Introducir la aguja, formando ángulo aprox. 15° brazo-aguja y con bisel hacia arriba.
- Tomar 2 ml de sangre completa y trasvasarlo a un tubo sin anticoagulante
- Identificar la muestra con los datos del paciente

3.6. Transporte de la muestra

- los tubos se deben transportar tapados, en posición vertical, en un recipiente o gradilla, dentro de
un contenedor solido a prueba de derrames y a temperatura ambiente evitar agitación para
prevenir la hemolisis.
Tiempo de transporte.- 4 horas desde la toma de muestra.
 Limitaciones: lipemia, hemolisis, cefalosporinas, diuréticos, alopurinol.
3.7. Pre – tratamiento
- Debemos llevar la muestra de sangre a incubación de 37º C 5 minutos, pasado ese tiempo se
lleva a centrifugación 3000 rpm. El suero obtenido no debe ser lipémico, ictérico ni debe estar
hemolizado.
- Posteriormente trasvasar el suero a un tubo y colocar un código y no así el nombre del paciente
4. FASE ANALITICA: Obtener un resultado preliminar el cual está sujeto a cambios; cuando no
haya concordancia se repite.
4.1. Conservación de la muestra
- La muestra de suero debe estar debidamente identificada con un código a una temperatura de 2 a
8º C
4.2. Aplicación del método analítico
- Método enzimático colorimétrico de Berthelot para urea color
- Método cinético inverso para urea
- Método cinético químico basado en la reacción de Jafeé para creatinina en suero
- El control calidad se realiza mediante el control de precisión utilizando los pools de sueros y el
control de exactitud con el suero control.

TECO Creatinina Cinético químico

Fundamento del método:

creatinina + acido pícrico NaOH Complejo creatinina picrato

1ml Rvo trabajo(0.5ml de acido 37°C 100 ul de estandar

picrico +0.5ml de NaOH)
M
vortex 500nm
B B ST
ST 30 s
1min
M 60 s
100 ul de muestra
37°C
M
Vortex 500 nm
M M
30 s
1min
60 s 0.7-1.37 mg/dl

25mg/dl 30-60seg.

20 mg/dl 24 h
MUESTRA: SUERO PLASMA REACTIVOS: Conservar (18-25ºC)
Estándar (37ºc)
Los reactivos para diagnóstico “In Vitro” pueden ser peligrosos.
Manipúlese de acuerdo a un correcto procedimiento del
laboratorio en el que se evite la ingestión y el contacto con la piel
y con los ojos.

TECO Urea Cinético enzimático

Fundamento del método:

urea + H2O ureasa 2NH4 + CO2

NH4 + NADH +2- Oxoglutamato GDH Glutamato + NAD

(reducido) (oxidado)

1ml Rvo reconstituido 37°C 10 ul de estandar

Previamennte
M
vortex 340 nm
B B ST
30 s
ST 1min
60 s
M
10 ul de muestra
37°C
M
Vortex 340nm
M M
30s
1min 7-18 mg/dl
60 s
80mg/dl 30-60seg.

20 mg/dl 24 h

MUESTRA: SUERO PLASMA REACTIVOS:

DILUCION muestras con
valores por encima de 80mg/dl
deben ser diluidas a 1/1 con
solución salina al 0.9%
Conservar el reactivo (2-8ºC) sin recontituir
Una vez reconstituido el reactivo es estable 2 dias a 18-25°C
Los reactivos para diagnóstico “In Vitro” pueden ser
peligrosos. Manipúlese de acuerdo a un correcto
procedimiento del laboratorio en el que se evite la ingestión y
el contacto con la piel y con los ojos.
Biosystems Urea / BUN Enzimático Colorimetrico

Fundamento del método:

urea + H2O ureasa 2NH4 + CO2

NH4 + NaCl + salicilato Nitroprusiato Indofenol

reactivo (producto coloreado)

1ml Rvo A 10ul M 10 ul ST 37°C 1ml Rvo B 37°C

M M
vortex 600 nm
B M ST B
ST ST 1min
5min
M M

15-39 mg/dl

300mg/dl 2 horas

20 mg/dl 24 h
MUESTRA: SUERO O PLASMA REACTIVOS:
Dilución: la muestra cuando se obtengan Conservar el reactivo y estándar (2-8ºC)
valores superiores diluir 1/5 con agua Es conveniente lavar el vial del reactivo A2
destilada con una pequeña cantidad de la mezcla
preparada con el fin de arrastrar los restos
que mojan las paredes del frasco.

4.3. Lectura de absorbancias de los tubos de la serie analítica: Trazabilidad

- La trazabilidad se realiza verificando la longitud de onda antes de leer las absorbancias
- Urea en suero método cinético enzimático: Leer en el espectrofotómetro el blanco que es agua, el
standard y la muestra a una longitud de 340 nm. Anotar la absorbancia a los 30 y 60 seg.
- Creatinina en suero: Leer en el espectrofotómetro el blanco que es agua, y el estándar y la
muestra a una longitud de 500 nm. Anotar la absorbancia a los 30 y 60 seg.
5. Cálculos: Trazabilidad
- Se verifica la trazabilidad verificando los cálculos
 - Realizar los cálculos utilizando las siguientes formulas:

 Determinación de la creatinina en suero

𝑀(𝐴2 − 𝐴1)
𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 = 𝑥2𝑚𝑔/𝑑𝑙
𝑆𝑡(𝐴2 − 𝐴1)
𝑀(0,082 − 0,081)
𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 = 𝑥2𝑚𝑔/𝑑𝑙
𝑆𝑡(0,039 − 0,022)
Creatinina= 0,117 mg/dl
 Determinación de la urea método cinético enzimático
𝑀(𝐴1 − 𝐴2)
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑈𝑅𝐸𝐴 = 𝑥20𝑚𝑔/𝑑𝑙
𝑆𝑡(𝐴1 − 𝐴2)
𝑀(0,070 − 0,068)
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑈𝑅𝐸𝐴 = 𝑥20𝑚𝑔/𝑑𝑙
𝑆𝑡(0,080 − 0,074)
Concentración de UREA= 6,7 mg/dL
NUS= 6,7 mg/dL
UREA=7 x 2,14
=15 mg/Dl
6. FASE POST- ANALÍTICA
Con respecto al método cinético enzimático dependiente del NADH /NAD los resultados si salieron
dentro de los valores de referencia 7-18 mg/dL.Dato obtenido.
Con respecto a la determinación de creatinina según al método cinético químico de jeffe
compensando se encuentra normal dado el valor de referencia 0,7 a 1,37 mg/dL.
Interpretación de resultado preliminar es comparar resultados obtenidos con los valores normales de
referencia.

Valores obtenidos Valores de referencia

Creatinina =0,117mg/dL Normal es de 0.7 a 1.3 mg/dL (de 61.9 a 114.9
µmol/L) para los hombres y de 0.6 a 1.1 mg/dL
(de 53 a 97.2 µmol/L) para las mujeres
Urea =15 mg/dL Los valores normales en los adultos son entre 7
y 20 mg por decilitro. En los niños pequeños se
aceptan valores de 5 a 18 mg/dl
NUS =6,7mg/dL 7 - 20 mg/dL (2,5 - 7,1 mmol/L)

Control de calidad: se recomienda el uso de los sueros control bioquímicos niveles 1 y 2 para verificar la
funcionalidad del procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de control de calidad interno, así como
procedimientos de corrección en el caso de los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
Características metrológicas de creatinina:
Parámetros analíticos:
Longitud de onda: 500nm
Límite de detección: 0,03mg/dl=2,65umol/L
Repetibilidad: intraserie
Reproducibilidad: intraserie
Veracidad: los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencia sistemática
significativa al ser comparadas con reactivos de referencia
Interferencias: la hemoglobina 10g/L y la bilirrubina 10mg/dL concentración elevada de sustancias
reductoras y la lipemia interfieren.
Características diagnosticas:
La creatinina es el producto final del catabolismo de la creatinina o fosfocreatinina la cantidad
producida esta relacionado directamente con la masa muscular, la creatinina filtra libremente por el
glomérulo pequeñas cantidades son reabsorbidas y también secretados por los túbulos renales.
La medición de creatinina tiene utilidad para la evaluación de la función renal y monitorizar de diálisis
renal.
El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino
que debe ser integral.
Características metrológicas de urea:
Parámetros analíticos:
Longitud de onda: 340nm
Límite de detección: 2,5mg/dl=0,42umol/L
Repetibilidad: intraserie
Reproducibilidad: intraserie
Veracidad: los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencia sistemática
significativa al ser comparadas con reactivos de referencia
Interferencias: la lipemia menor a 10g /Ly la bilirrubina menor a 20 mg /dL no interfieren, la hemolisis
hemoglobina mayor a 5g/L y los niveles elevados de amonio interfieren.
Características diagnosticas:
La urea se sintetiza en el hígado como un producto de la desanimación de los aminoácidos. Su
eliminación en la orina representa la principal vía de excreción del nitrógeno.
Se encuentra concentraciones elevadas de urea en plasma como consecuencia de una dieta
hiperproteica, aumento del catabolismo proteico, ligera deshidratación, shock, hemorragia
gastrointestinal, tratamiento con glucocorticoides.
 La uremia post-renal está causada por condiciones que obstruyen el flujo urinario
Con respecto al método cinético enzimático dependiente del NADH /NAD los resultados si salieron
dentro de los valores de referencia 7-18 mg/dL.Dato obtenido.
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Para realizar las pruebas del perfil renal es necesario que el paciente se encuentre con un ayuno de 8
horas. Aunque no es indispensable.
Una vez obtenida la muestra de sangre venosa, la centrifugamos y obtenemos el suero y procedemos
a realizar las pruebas de urea y creatinina en suero sus respectivos métodos.
Realizamos la lectura de las absorbancias de cada metabolito de acuerdo al método utilizado, para lo
cual hicimos la lectura de urea cinético enzimático a 340 nm, y creatinina en suero a 500nm.
Se llego a determinar la concentración de la creatinina en suero mediante al método cinético químico
basado en la reacción de Jeffe, tomando en cuenta el tiempo de reacción a los 30 y 60 segundos. Se
llego a observar un aumento de la absorbancia a medida que pasaban los segundos en el
espectrofotómetro. Por lo cual se trabajó junto al espectrofotómetro y un cronometro para obtener
mediante la cuantificación, las absorbancias de la muestra y el estándar de acuerdo al tiempo de
reacción a los 30 y 60 segundos para tener así medidas exactas.
Para la obtención del resultado se restó la absorbancia de los 60 menos los 30 segundos, una vez
obtenido el resultado se dividió la muestra para el estándar y este resultado se multiplico por la
concentración conocida del reactivo estándar;2mg /dl.
Al calcular la concentración de creatinina en suero nos dio un valor de 0,117 mg/dl lo cual se
encuentra fuera de los rangos normales que seria 0,7 a 1,37 mg dL. El valor obtenido de 0,117
mg/dl se encuentra en los rangos normales esto es debido a que nuestra paciente, ya presenta una
masa muscular regular. Estos intervalos o valores de referencia varían de un laboratorio o línea
comercial a utilizar.
En este punto mencionaremos que la cinética de la creatinina en suero es directamente proporcional
ya que las absorbancias aumentan en función al tiempo, es decir mayor tiempo mayor es la
absorbancia.
Al calcular la UREA se obtuvo un resultado 15 mg/dl a partir del NUS de 7mg/dl en lo cuales los
valores obtenidos se encuentran dentro los valores normales.
En cuanto al método enzimático colorimétrico no se procedió a realizar debido a la falda del reactivo B,
por lo cual no se logró realizar la técnica esto es debido a que la reacción estaría incompleta sin el
reactivo B .
Finalmente cabe mencionar que está practica fue una de las más largas, pero quedamos satisfechos
ya que adquirimos mayor destreza y habilidad en realizar la determinación de urea y creatinina
mediante diferentes métodos y realizamos los cálculos con las fórmulas respectivas a cada método.
8. CONCLUSIONES:
En esta practica de laboratorio no logramos realizar la práctica de urea enzimático colorimétrico por
las causas de falta de reactivo B, por lo cual no se logró realizar la técnica ya que debido a la falta de
este reactivo la reacción estaría incompleta.
Realizamos la lectura de las absorbancias de la urea cinético enzimático a una longitud de onda de
340nm, y las absorbancias de la creatinina en suero a una longitud de onda de 500nm
Adquirimos habilidades y destrezas en el manejo de la técnica y procedimiento para la determinación
de urea y creatinina y determinamos NUS.
En esta práctica se logró hacer la determinación de UREA, (la cual es el resultado final del
metabolismo de las proteínas) y creatinina, por dos diferentes métodos, para la determinación de
UREA se utilizó el método cinético enzimático y para la creatinina el método cinético químico, estos
utilizados para la determinación en suero sanguíneo.
El valor encontrado después de realizar los cálculos fue dentro de los valores de referencia., para la
determinación del NUS obtuvimos un valor de 7 mg/dl y un valor de UREA de 15 mg/dl, en cambio
para la creatinina cinética obtuvimos un valor de 0,117mg/dl que está por debajo del valor de
referencia, tomando en cuenta que si obtenemos un valor mayor o menor del valor de referencia se
conocería como una patología presente.
Adquirimos la concentración de UREA Y CREATININA por distintos métodos, este dato se logró
tener deacuerdo a la fórmula de concentración de la muestra. Para la determinación de UREA es
igual a la absorbancia 1 menos la absorbancia 2 de la muestra sobre la absorbancia 1 menos la
absorbancia 2 del estándar multiplicado por la concentración del estándar que es igual a 20 mg/dl
este valor cambia dependiendo la línea comercial con el que se trabaja y para la determinación de
creatinina se obtiene de forma similar, pero se invierte la absorbancia 1 con la 2 de la muestra y del
estándar y se multiplica por 2 mg/dl
Es así que hallamos la determinación de CREATININA y UREA, los valores obtenidos que sobre
pasen o estén por debajo de los valores de referencia se relacionan con patologías como ser:
Un nivel alto de creatinina en sangre nos muestra un padecimiento de problemas o enfermedades
renales, el exceso de deporte sobre todo en los que se esfuerzan los músculos pueden generar
aumento de creatinina.
Un nivel bajo de creatinina se debe a una disminución de la masa corporal, lo cual puede ser debido
a diferentes enfermedades o deficiencias.
Finalmente podemos concluir que las muestras de suero pertenecen a una paciente aparentemente
sana y con funciones renales adecuadas.
9. BIBLIOGRAFIA

 Cárdenas P. (2012). PRUEBAS DE FUNCION RENAL. Ecuador: unidad académica de ingeniería

química, biofarmacia, industrias y producción. Pág. 14-19

 Henrry, B. J. (2007). laboratorio de el diagnostico clinico. new york: Marban. pag.172-176

9.1. Cybergrafía
Información recuperada en fecha 18 de octubre 2019 de las siguientes páginas en internet:
 Practica urea http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/urea.pdf
 El riñon https://www.sefh.es/bibliotecavirtual/fhtomo2/CAP12.pdf