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CÓDIGO: P-QB-GU-10.002.

030
GESTIÓN DE LABORATORIOS
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TEJIDO ANIMAL

OBJETIVO

Extraer las proteínas asociadas al ADN de tejido animal.

ALCANCE

Al iniciar el laboratorio el estudiante se familiarizará con la terminología y al final


podrá comprender mejor los procesos de precipitación y solubilización asociados a
la purificación del ADN y de las proteínas asociadas.

GENERALIDADES

INTRODUCCIÓN

El material genético de los organismos vivos, el Ácido Desoxirribonucleico (DNA),


comprometido en la transmisión de las características hereditarias de cada
organismo, se encuentra asociado con proteínas nucleares a las que,
colectivamente, se denomina Desoxirribonucleoproteinas (DNP). Al igual que las
proteínas, por aumento de la temperatura o variación extrema del pH del medio, el
DNA puede desnaturalizarse, con lo cual se modifican sus características
estructurales.

En el laboratorio, las DNP pueden extraerse mediante el uso de soluciones


salinas y precipitarse con la adición de Etanol. Además de la manipulación
cuidadosa, durante la extracción, deben emplearse agentes quelantes para
capturar el Magnesio y también el Calcio, ambos cofactores de DNA-asas
(enzimas que rompen el DNA).

PROTOCOLO

1. Eliminación de Ácido Ribonucleico (RNA) y otros componentes


celulares

Corte, rápidamente, en pequeños trozos, el tejido animal que se le suministra y


macérelo en un mortero helado, con ayuda de una pequeña cantidad de arena
lavada. Agregue, poco a poco, 25 ml de NaCl 0.15 M. Vierta en tres tubos de
centrífuga y centrifugue a 3000 r.p.m. durante 5 minutos. Deseche el líquido
sobrenadante, que contiene principalmente RNA y otros componentes celulares
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solubles en NaCl 0.15 M. Guarde el precipitado para continuar con la extracción


de las DNP.

2. Solubilidad y Extracción de las DNP

Con la ayuda de un agitador de vidrio, redisuelva el precipitado en 25 ml de NaCl


1M, lo que permite solubilizar las DNP. Para separarlas y aislarlas en el
sobrenadante, centrifugue nuevamente a 3400 r.p.m., durante 5 minutos.

3. Precipitación con Etanol

Vierta el sobrenadante del paso anterior, en un vaso de precipitados que contenga


150 ml de Etanol. Las DNP se agruparán en filamentos que pueden recogerse
alrededor de un agitador de vidrio.

4. Desnaturalización por Calor

Coloque, en un tubo de ensayo, una porción de las DNP que acaba de extraer y
precipitar y caliente a baño María hasta percibir cambios. Discuta lo concerniente
al proceso de desnaturalización, de tanto proteínas como de DNA.

5. Identificación de Componentes

Prueba de Biuret: Tome una pequeña porción de las DNP que acaba de extraer y
adicione 1 ml de NaOH al 1%, agite y adicione 3 gotas de Sulfato de Cobre al
0.5%. Note el cambio de color, un color violeta indica presencia de proteínas.

Prueba de la Anilina: La Desoxirribosa (azúcar constituyente del ADN) es una


aldopentosa, un monosacárido con 5 átomos de Carbono y que incluye un grupo
aldehído en su estructura lineal. Tome una pequeña porción de las DNP que
acaba de extraer y adicione 1 ml de Ácido Acético y 2 gotas de Anilina. Caliente
hasta que aparezca un color rojo cereza que es la prueba positiva para pentosas.
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BIBLIOGRAFÍA

 OSPINA, Blanca Lucía. Introducción a la Bioquímica. Universidad Nacional


de Colombia Sede Palmira.

 HERRERA, Emilio. Elemento de Bioquímica. México: Interamericana-


McGraw-Hill, 1993.

 LEHNINGER, Albert. Biochemistry. 2nd ed. New York: Worth Publishers,


1975.

 STRYER, Lubert. Bioquímica. 4 ed Trad. J. Macarulla. Barcelona, 1995.

Blanca Lucía Adriana Valencia C. Carmen Elena


ELABORÓ: REVISÓ: APROBÓ:
Ospina Giraldo Johannes Delgado O. Mier Barona

Auxiliares de Coordinadora de
CARGO: Profesora Asociada CARGO: CARGO:
Laboratorio Laboratorio

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