UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y METALURGICA

ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA

TEMA:

TECNOLOGIA DEL ADN

CURSO:

Biotecnología para Ingenieros Químicos

DOCENTE:

Ing. Ocrospoma Dueñas, Robert William

INTEGRANTES:

Allcca Memenza, Nayeli

Espinoza Carrillo, Seili

HUACHO - PERU

2019
 I. INTRODUCCION
Todo organismo, aún el más simple, contiene una enorme cantidad de información. Esa
información le permite tener características que lo diferencien de otros individuos. Como se
sabe, todas esas características están ubicadas en un conjunto de moléculas orgánicas de gran
tamaño llamadas ácidos nucleicos. En cada una de las células de un organismo encontramos
dos moléculas de este tipo: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (ARN).
Ambos tienen propiedades y funciones muy diferentes en la maquinaria de la vida. Pero es el
ADN el que lleva la batuta de la transmisión de información genética de los padres a los hijos,
llamada herencia. La genética es la rama de la biología encargada del estudio de la herencia.

Luego de los estudios hechos por el Padre de la genética, Gregor Mendel, en esta rama de
la biología se desarrollaron técnicas que darían lugar a lo que hoy día se conoce como ingeniería
genética y nueva biotecnología. Con estas técnicas se han podido desarrollar una diversidad de
investigaciones de notable importancia médica, farmacéutica, agrícola y ecológica. En el 1917
se utilizó, por primera vez, el termino Biotecnología. Ésta se define como un conjunto de
técnicas que utilizan organismos vivos o genes de éstos, para producir o modificar un producto.
Dentro de la biotecnología incluimos la ingeniería genética. Desde principios de siglo XX, la
ingeniería genética ha experimentado notables avances en la manipulación y el control de la
herencia. Uno de los principales descubrimientos en este campo ha sido la técnica del ADN
recombinante o ADNr, la cual ha permitido un notable avance en diferentes campos de
aplicación de la ciencia. Este trabajo se concentrará en la importancia y aplicaciones de este
método por medio de una exhaustiva investigación bibliográfica, con el objetivo de lograr un
aprendizaje verdaderamente significativo acerca de los agigantados pasos con que avanza la
ciencia en nuestros días.

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 INDICE

I. INTRODUCCION ........................................................................................................................ 2
I. DEFINICION ................................................................................................................................ 4
2. LAS HERRAMIENTAS DISPONIBLES ................................................................................... 4
2.1 LA EXTRACCIÓN DEL ADN ............................................................................................ 4
2.3 LA ELECTROFORESIS DEL ADN................................................................................... 6
2.4 HIBRIDIZACIÓN Y SONDAS GÉNICAS ........................................................................ 7
2.5 TECNICAS ............................................................................................................................ 8
2.5.1 La técnica del Southern ................................................................................................ 8
2.5.2 La técnica del Fingerprint ............................................................................................ 9
2.6 SINTESIS Y AMPLIFICACION DEL ADN ..................................................................... 9
2.7 LA SECUENCIACIÓN DEL ADN ................................................................................... 13
3. LA BIOLOGÍA SINTÉTICA ........................................................................................................ 14
III. CONCLUCIONES ...................................................................................................................... 15
IV. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA .......................................................................................... 17

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 I. DEFINICION
ADN recombinante es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de
ADN. Por lo tanto, la tecnología de ADN recombinante es el conjunto de técnicas que permiten
aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente. De
esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus
produzca una proteína que le sea totalmente extraña.

Estas técnicas se emplean normalmente para la producción de proteínas en gran escala, ya que
podemos hacer que una bacteria produzca una proteína humana y lograr una superproducción,
como en el caso de la insulina humana, que actualmente es producida por bacterias en grandes
recipientes de cultivo, denominados biorreactores. Como las bacterias se multiplican muy
rápidamente y pueden expresar grandes cantidades de proteínas, es posible lograr una
sobreproducción de la proteína deseada. A esto justamente se dedica la biotecnología, es decir
a la utilización de organismos vivos o de sus productos con fines prácticos.

El desarrollo de la tecnología del ADN recombinante fue posible gracias a varias líneas de
investigación: 1) el conocimiento de las enzimas de restricción, 2) la replicación y reparación
de ADN, 3) la replicación de virus y plásmidos y 4) la síntesis química de secuencias de
nucleótidos.

2. LAS HERRAMIENTAS DISPONIBLES

La tecnología del ADN engloba una serie de procedimientos para extraer, cortar, sintetizar,
marcar, identificar, amplificar y secuenciar el ADN. Estas técnicas, desarrolladas a lo largo de
una década (1985-1995), constituyen en la actualidad un conjunto de herramientas que es
utilizado en forma rutinaria en los laboratorios, generalmente en sistemas automatizados
especialmente.

2.1 LA EXTRACCIÓN DEL ADN

La extracción del ADN es un procedimiento relativamente simple. De un modo general, la

ruptura de paredes y membranas libera el contenido celular, del cual se eliminan el ARN y las
proteínas antes de separar el ADN, que precipita con alcohol. Una vez extraído y purificado, el
ADN se trata de diversas maneras. Numerosas empresas comercializan diferentes tipos de kits
para la extracción de ácidos nucleicos, reemplazando a los protocolos tradicionales por

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sistemas más fáciles de automatizar. Se estima que el mercado llegará a los US$ 158 mil
millones, en 2014.

2.2 LAS NUCLEASAS Y LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

Entre las numerosas enzimas utilizadas diariamente en los laboratorios, las nucleasas merecen
una atención especial. Estas enzimas rompen las uniones entre los nucleótidos de una cadena
de ADN; algunas comienzan por los extremos, eliminándolos de a uno, otras cortan a la
molécula por adentro. A este último grupo (endonucleasas) pertenecen las “enzimas de
restricción”, que son capaces de cortar el ADN en sitios específicos. Normalmente, las enzimas
de restricción son producidas por bacterias, como un arma de defensa contra el ataque de virus
(bacteriófagos), ya que al cortar el ADN viral impiden su multiplicación. El ADN bacteriano
no es atacado por sus propias enzimas, ya sea porque no posee las secuencias correspondientes
o porque las secuencias están camufladas por la adición de grupos metilo. Desde su
descubrimiento por Werner Arber en la década de 1960, ya se aislaron centenas de enzimas de
restricción. Todas actúan como tijeras químicas que cortan el ADN al reconocer determinadas
secuencias de 4 a 8 bases.

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 2.3 LA ELECTROFORESIS DEL ADN
Los fragmentos de ADN que fueron obtenidos con enzimas de restricción pueden ser separados
en un gel al cual se aplica un campo eléctrico. Al estar cargados negativamente, los fragmentos
de ADN se desplazan hacia el polo positivo a una velocidad que depende del tamaño.
Fragmentos menores encuentran menos resistencia y migran más rápido (Figura 1).

El poder de separación varía con el tipo de soporte (gel de agarosa o de poliacrilamida) y su

concentración, porque esta determina el tamaño del poro. También depende de las
características del campo eléctrico aplicado. Los fragmentos de restricción forman bandas que
se pueden observar a la luz ultravioleta, después de la tinción con una sustancia fluorescente.
Junto con la muestra se siembra en el gel una mezcla de fragmentos de tamaño conocido o
“regla molecular”, que sirve como patrón de comparación para estimar el tamaño de las bandas
de tamaño desconocido. Una de las primeras aplicaciones de la electroforesis de los fragmentos
de restricción fue el estudio de los polimorfismos. Un cambio (mutación)

FIGURA 1. Electroforesis del ADN

A. Sistemas de electroforesis Horizontal

B. Formación de las bandas por migración de los fragmentos de restricción en el gel.

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 C. Migración de diferentes muestras de ADN en el gel

En el sitio de restricción de una molécula de ADN (como, por ejemplo, de GAATTC a

GAACTC) origina fragmentos de tamaño diferente, denominados RFLP (del inglés, restriction
fragment length polymorphisms). Utilizados como marcadores, los RFLP pueden ser
estudiados como cualquier gen asociado a un carácter visible o una modificación bioquímica
(Figura 2).

2.4 HIBRIDIZACIÓN Y SONDAS GÉNICAS

En determinadas condiciones de temperatura, pH o concentración salina, las hebras de la doble

hélice de ADN se separan. La separación es causada por la ruptura de los puentes de hidrógeno
entre las bases complementarias.
FIGURA 2. Polimorfismos de restricción (RFLP)
Una mutación puede generar dos alelos diferentes: A1, sin sitio de restricción, y A2, con un
sitio de restricción. En la electroforesis, el ADN correspondiente a A1A1 se verá como 1 banda,
el de A1A2 como 3 bandas y el de A2A2 como dos bandas.

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 A. Polimorfismo de restricción en un fragmento de ADN.

B. Perfil de bandas en el gel de electroforesis.

Al volver a las condiciones iniciales, esos enlaces se reestablecen y las hebras se asocian
nuevamente. La reacción de hibridación también ocurre entre hebras de ADN o de ARN de
diferente origen y tamaño, siempre que tengan algunas secuencias complementarias. En
función de esta propiedad se construyen fragmentos de unifilamentares de ADN o ARN de
secuencia conocida, marcados con sustancias fluorescentes o radiactivas. Estos fragmentos se
usan como sondas para reconocer la presencia de una secuencia complementaria en un
cromosoma o en una hebra de ADN (Figura 3).

2.5 TECNICAS
2.5.1 La técnica del Southern

En 1975, E. M. Southern describió un método para analizar fragmentos de restricción usando

sondas de ADN. Una vez separados por electroforesis, los fragmentos son transferidos a una
membrana de nylon o de nitrocelulosa. La hibridación de una sonda radioactiva con su
secuencia complementar se registra en una placa o film apropiado (Figura 4). El método,
denominado Southern blotting, ha sido utilizado para el diagnóstico de enfermedades genéticas,
algunas de las cuales son causadas por mutaciones que al eliminar o crear un sitio de restricción,
modifican el patrón de bandas. Fueron diseñados métodos análogos para estudios de ARN

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(Northern blotting) y de proteínas (Western blotting). En el primer caso la sonda es un
fragmento de ácido nucleico, en el segundo un anticuerpo específico.

FIGURA 3. Hibridación de una sonda con la secuencia complementaria.

2.5.2 La técnica del Fingerprint

Descrita por A. Jeffreys en 1985, la técnica es una variante del método de Southern que está
focalizada en las regiones del genoma que no se expresan, donde se acumulan mutaciones que
confieren a cada individuo una secuencia única (exceptuando a los gemelos). Muchas de ellas
son secuencias repetidas y están dispersas a lo largo del genoma. Esas secuencias se denominan
VNTR (del inglés, variable number of tándem repeats) y están repetidas un número variable
de veces en cromosomas homólogos. En consecuencia, los fragmentos de restricción
correspondientes tendrán un tamaño diferente que será detectado mediante una electroforesis
(Figura 5). Al aumentar el número de sondas para el reconocimiento de otros tipos de VNTR,
se obtiene un perfil de bandas individual que se parece al código de barras que se usa en el
comercio. Así como las impresiones digitales identifican a las personas, las sondas revelan la
identidad genética de cada uno de nosotros. El procedimiento, no por casualidad llamado
Fingerprint (huella dactilar, en inglés), fue adoptado rápidamente para la investigación de
paternidad (o maternidad) y la identificación de las personas, en asuntos policiales o forenses.

2.6 SINTESIS Y AMPLIFICACION DEL ADN

La síntesis de oligonucleótidos de ADN y ARN se realiza actualmente en máquinas

automatizadas (sintetizadores) capaces de construir, en pocos minutos, moléculas de hasta 60
pares de bases (Figura 6). Estos oligonucleótidos pueden ser usados como sondas o como
cebadores (primers) para amplificar una molécula de ADN (véase un poco más adelante la
reacción en cadena de la polimerasa o PCR).

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FIGURA 4. Técnica de Southern

La sonda identifica la homocigosis de I (sin sitio de restricción) y de III (con un sitio de

restricción) y la heterocigosis de II (un cromosoma sin sitio de restricción, el otro con un sitio
de restricción).

1. Preparación de los fragmentos de restricción

2. Electroforesis

3. Transferencia

4. Sonda radioactiva

5. Autorradiografía

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FIGURA 5. Polimorfismos de VNTR
A. Número de VNTR presentes en el mismo fragmento de restricción, en tres individuos
diferentes.

B. Separación de los fragmentos de restricción en el gel de electroforesis

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FIGURA 6. La síntesis de oligonucleótidos

FIGURA 7. Síntesis de ADNc, mediante la transcriptasa reversa

FIGURA 8. Reacción en cadena de la polimerasa

Un aparato de PCR puede realizar 25 ciclos en menos de una hora, amplificando 105 veces el
fragmento de ADN.

A. Los elementos necesarios

Los cebadores son fragmentos complementarios a los extremos del segmento que se quiere
amplificar y son indispensables para que la polimerasa inicie la síntesis de ADN

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B. La reacción en cadena de la polimerasa
Primer ciclo

Segundo ciclo

Tercer ciclo

2.7 LA SECUENCIACIÓN DEL ADN

Desarrollado por F. Sanger en 1977, la secuenciación de un fragmento de ADN es también un

procedimiento de tipo iterativo que se lleva a cabo en aparatos automatizados, capaces de
realizar rápidamente el trabajo (Figura 9). Existen hoy secuenciadores capilares automatizados
donde un brazo robot coloca el gel en los capilares, agrega el ADN y hace la limpieza, después
de realizada la corrida electroforética. En el año 2000 estos secuenciadores permitían el
tratamiento de una centena de muestras en cuatro horas, sin exigir más de 15 minutos diarios
de atención humana. Las secuencias son almacenadas en gigantescos bancos de datos.
Ensamblar la información exige un tratamiento matemático para ordenar las secuencias,
completar las lagunas y verificar los datos. Esta etapa se una empresa relacionada con Celera
(Biosystems Applied) mantenía a sus computadoras funcionando día y noche, llegando a gastar
en electricidad un millón de dólares mensuales. El dato impresiona, pero una década después,
en 2006, la tecnología ya era 500 veces más veloz. A pesar de haber posibilitado el estudio de

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numerosos genomas, en esa fecha el método automatizado de Sanger comenzó a ser
considerado poco eficiente y comenzó el desarrollo de una nueva generación de tecnologías de
secuenciación, más rápidas y baratas. Actualmente, muchas empresas cuentan con tecnologías
en diferentes etapas de desarrollo y comercialización (IBM, Oxford Nanopore Technologies,
Intelligent Bio-systems, Laser Gen Inc. y NABsys) y son varias las plataformas comerciales
que coexisten en el mercado (Roche/454, Illumina-Solexa, Life/APG, Helicos Biosciences).
Los costos de secuenciación han disminuido enormemente. El precio por secuenciar una mega
base (1.000.000 de pares de bases), cayó de 1.598,91 dólares (2004) a 0,12 dólares (2011). En
consecuencia, tenemos una avalancha de datos que permite realizar estudios evolutivos
innovadores y abre el camino para desvendar las diferencias genéticas que afectan la salud y la
enfermedad.

3. LA BIOLOGÍA SINTÉTICA
Con el desarrollo de las nuevas plataformas tecnológicas surge, en la interface entre la biología
y la ingeniería, una nueva disciplina, denominada biología sintética. Eminentemente práctica,
su objetivo es diseñar y construir sistemas biológicos simplificados que cumplan funciones
determinadas. El punto de partida son moléculas de ADN sintetizadas automáticamente,

asociadas entre sí como los ladrillos de un juego Lego, de modo de crear genomas mínimos.
En la primera década del siglo XXI fueron sintetizados varios genomas virales (hepatitis C,
2000; poliomielitis, 2002; PhiX174, 2003). En 2010, varios investigadores del J. Craig Venter
Institute crearon una bacteria sintética al introducir unidades básicas de ADN de Mycoplasma
micoides en una bacteria de la especie Mycoplasma capricolum, y eliminar el genoma de esta
última. Denominada Synthia, la bacteria sintética lleva secuencias específicas que confirman
su origen artificial y se reproduce normalmente. Varias universidades (Harvard, MIT, etc.) y

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organizaciones (Biobricks Foundation, DIYBIO, SYNBIO, etc.) están comprometidas con el
desarrollo de la biología sintética en beneficio de la humanidad y del planeta. Promueven la
creación de una comunidad que comparta valores y normas de trabajo, mediante la difusión
libre de protocolos y secuencias biológicas estándar que puedan ser usadas con seguridad como
ladrillos básicos. Se espera que la biología sintética traiga mejoras sustanciales en áreas tan
diferentes como la medicina, la industria, la energía y el medioambiente.

III. CONCLUCIONES

El ADN y la tecnología van de la mano para ir descubriendo muchas cosas de interés mundial,
es así que se han desarrollado métodos para purificar el ADN de los organismos, como la
extracción con fenol-cloroformo y manipular en el laboratorio, tales como resúmenes de la
restricción y la reacción en cadena de polimerasa. La biología moderna y bioquímica hacen un
uso intensivo de estas técnicas en la tecnología del ADN recombinante. ADN recombinante es
una secuencia de ADN artificial que ha sido montada a partir de secuencias de ADN de otros.
Ellos pueden transformarse en organismos en forma de plásmidos o en el formato adecuado,
utilizando un vector viral. Los organismos modificados genéticamente pueden ser utilizados
para elaborar productos tales como proteínas recombinantes, que se utiliza en la investigación
médica, o de ser cultivadas en la agricultura. En lo forense tenemos grandes avances, los
científicos forenses pueden usar el ADN en la sangre, el semen, la piel, la saliva o el pelo
encontrado en la escena del crimen para identificar a un cotejo de ADN de un individuo, como
un agresor. Este proceso se denomina huella genética, o más exactamente, el análisis de ADN.
En el análisis de ADN, las longitudes de secciones variables de ADN repetitivo, tales como
repeticiones en tándem cortas y mini satélites, se comparan entre las personas. Este método
suele ser una técnica muy fiable para la identificación de un cotejo de ADN. Sin embargo, la

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identificación puede complicarse si la escena está contaminada con ADN de varias personas.
el análisis de ADN fue desarrollado en 1984 por el genetista británico Sir Alec Jeffreys, y
utilizó por primera vez en la ciencia forense para condenar a Colin Pitchfork en el caso de 1988
Enderby asesinatos. Y en lo que nos compete a la informática encontramos Bioinformática
implica la manipulación, búsqueda y extracción de datos de datos de secuencias de ADN. El
desarrollo de técnicas para almacenar y buscar secuencias de ADN ha llevado a avances muy
aplicado en ciencias de la computación, especialmente los algoritmos de búsqueda de cadenas,
aprendizaje automático y la teoría de base de datos. Cadena de búsqueda o de algoritmos, que
encuentran una ocurrencia de una secuencia de letras dentro de una secuencia más grande de
las letras, se han desarrollado para buscar secuencias específicas de nucleótidos. En otras
aplicaciones como editores de texto, incluso algoritmos simples para este problema por lo
general suficiente, pero las secuencias de ADN causan estos algoritmos para mostrar un
comportamiento casi peor de los casos debido a su reducido número de personajes distintos. El
problema relacionado del alineamiento de secuencias tiene como objetivo identificar
secuencias homólogas y localizar las mutaciones específicas que las hacen distintas. Estas
técnicas, en especial la alineación de secuencias múltiples, se utilizan en el estudio de las
relaciones filogenéticas y la función de las proteínas. Los conjuntos de datos que representa un
valor genomas enteros "de secuencias de ADN, como los producidos por el Proyecto Genoma
Humano, son difíciles de usar sin anotaciones, lo que marca la ubicación de los genes y
elementos reguladores en cada cromosoma. Regiones de la secuencia de ADN que tienen los
patrones característicos asociados con proteínas o ARN de codificación de los genes pueden
ser identificadas por los algoritmos de búsqueda de genes, que permiten a los investigadores
predecir la presencia de productos de los genes en un organismo particular, incluso antes de
que se ha aislado experimentalmente.

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 IV. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

o Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, and Walter P (2002). Molecular

Biology of the Cell, 4th edition. .
o Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, Lewontin RC, and Gelbart WM (2000). An
Introduction to Genetic Analysis. New York: W.H. Freeman and Company. ISBN 0-
7167-3520-2.
o Hartl D, Jones E (2005). Genetics: Analysis of Genes and Genomes, 6th edition.
Jones & Bartlett. ISBN 0-7637-1511-5.
o Lodish H, Berk A, Zipursky LS, Matsudaira P, Baltimore D, and Darnell J (2000).
Molecular Cell Biology, 4th edition. ISBN 0-7167-3136-3
o Tecnología y genética, tomado
de: http://www.unam.gt/virtual/estruc_sist_nervioso.htm
o How Does Sickle Cell Cause Disease?. Brigham and Women's Hospital: Information
Center for Sickle Cell and Thalassemic Disorders (2002-04-11). Revisado el 2007-07-
23.

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