INFORME DE LABORATORIO

Práctica No. 10

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Integrantes: González M. / Pinargote T. / Villaprado T.

Fecha: 11 de enero del 2019

RESUMEN

En esta experiencia, reconocimos los agentes modificadores de la velocidad enzimática

donde se encuentran el pH y la temperatura que son los puntos más críticos de la que
depende su velocidad, todo esto debido a que cada enzima tiene una temperatura
optima donde su actividad enzimática se encuentra en su máximo punto y lo mismo
sucede con un pH óptimo. Esto se debe a que en estos puntos máximos es donde la
enzima tiene más interacción con el sustrato. Debido a que estos factores son puntos
críticos se debe conocer su temperatura y pH óptimos pues la variación, por ejemplo: si
la temperatura aumenta la velocidad de enzimática empezara a decaer debido a que
son proteínas estas tienden a desnaturalizarse hasta tener una actividad enzimática
nula, en esta práctica se confirmó que la actividad enzimática de los homogenizados de
papa, espinaca e hígado que son alimentos ricos en catalasa, su temperatura optima
estaba a 25% (ambiente). Sin embargo, el pH cumple la misma función que la
temperatura.

Palabras Clave

Catalasa óptimo actividad decae

 Baño de agua helada (4°C)

INTRODUCCION  Papel indicador universal
 2 gradillas para tubos de ensayo
OBJETIVOS:  2 morteros con pistilo
 1 pinza para tubos de ensayo
 Evaluar la actividad de la enzima  5 goteros plásticos
catalasa obtenida a partir de tejido  1 pipeta graduada de 5 mL
animal y vegetal  1 pipetómetro / pera succionadora
 15 tubos de ensayo
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:  4 vasos de precipitación de 100 mL
 1 bisturí
 Reconocer el mecanismo general de
la actividad enzimática Reactivos
 Obtener extractos que contengan
catalasa  Ácido clorhídrico 3 M
 Identificar la forma en la que el pH y  Agua destilada
la temperatura afectan a la actividad  Hidróxido de sodio 3M
enzimática  Peróxido de hidrógeno concentrado
 Espinaca
MATERIALES Y REACTIVOS  Hígado de res
 Papa
 Sangre fresca no hemolizada.
Materiales
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 Baño de agua 25°C
 Baño de agua 80°C
Preparación de homogenizados los tubos y, de ser el caso, el tiempo
En los morteros, triture por separado que ésta se demora en iniciar
los trozos de papa, hígado y
espinaca junto con una porción de
agua destilada. Emplee PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
aproximadamente 20 g de material y
40 mL de agua No se realizaron cálculos analíticos
En un vaso de precipitado coloque
50 mL de agua destilada y adiciónele RESULTADOS:
10 gotas de sangre. Agite
suavemente hasta obtener una Determinación de la actividad de la
mezcla homogénea catalasa
Transfiera cada uno de los extractos Tubos Reacción
a tubos de ensayo rotulados Agua destilada Negativo
apropiadamente Hígado Rápido positivo
Espinaca Lento positivo
Papa Rápido positivo
Determinación de la actividad de la Sangre Negativo
catalasa Tabla 1. En presencia del peróxido,
Prepare y rotule 5 tubos de ensayo hace que la actividad catalítica de
según se indica resultados positivos en el hígado,
Observe lo que ocurre en cada tubo y espinaca y papa por su composición de
anote en la casilla correspondiente de catalasa. (Pratt, 2012)
la Tabla X. El desprendimiento de
burbujas indica reacción positiva. Efecto de la temperatura sobre la
Identifique la solución en la que la actividad de la catalasa
catalasa presenta mayor actividad, Tubos Reacción a la
con esta solución se realizarán los temperatura
siguientes experimentos. 80 oC Negativo
25 oC Rápido positivo
o
4 C Positivo en 3s
Efecto de la temperatura sobre la Tabla 2. La muestra al ser expuesta a
actividad de la catalasa altas temperaturas (al ser hervidas), las
Rotule y prepare 3 tubos de ensayo enzimas presentes se desnaturalizaron.
según se indica (Zarza Meza, 2015)
Con ayuda de un cronómetro registre
el tiempo que tarda cada tubo en Efecto del pH sobre la actividad de la
producir las burbujas características catalasa
de la reacción enzimática, a partir del Tubos Reacción
momento en el que es adicionado el HCl Negativo
sustrato (peróxido de hidrógeno) NaOH Negativo
Agua destilada En 3s positivo
Tabla 3. Se muestran el tiempo de las
Efecto del pH sobre la actividad de velocidades de reacción enzimática
la catalasa correspondientes a cada nivel de
Rotule y prepare 3 tubos de ensayo actividad. (USCAMAYTA, 2017)
según se indica
Antes de adicionar el peróxido de DISCUSIÓN
hidrógeno verifique el pH de la
solución de cada tubo utilizando papel Las enzimas son catalizadores
indicador universal. Anote el valor biológicos de naturaleza proteica que
obtenido aceleran las reacciones que tendrían
Luego de agregar el sustrato observe lugar de manera espontánea sin
si la reacción sucede en cada uno de perderse ni modificarse en su acción,
permitiendo las reacciones bioquímicas
celulares indispensables para los seres
vivos. (Dámazo, 2014)
La actividad enzimática se encuentra
determinada por las condiciones tales
como la cantidad de enzima, sustrato, la
temperatura, el pH, el tiempo de
reacción.
En el laboratorio se realizaron 3
experiencias, las cuales fueron
desarrolladas de forma cualitativa,
teniendo en cuenta la concentración del
sustrato que es uno de los factores que
se aplican sobre la enzima para
determinar su actividad.
En este caso como sustrato se cuenta
con peróxido de hidrogeno que a
distintos cambios físicos - químicos nos
ayudara a identificar la enzima catalasa
que se encuentra en la organela
llamada peroxisoma.
(Campbell, 2016)
CONCLUSIÓN:
 Se obtuvo extractos que contenían
catalasa.
 Se evaluó la actividad de la enzima
catalasa obtenida a partir de la
sangre, papa, espinaca y papa,
donde se reconocio el mecanismo
general de la actividad enzimática.
 Se identificó la forma en la que la
temperatura afectan a la actividad
enzimática.
PREGUNTAS:
En un plano Velocidad enzimática vs
Factor (Y vs X) grafique las curvas que
expliquen el comportamiento de la
actividad enzimática de la catalasa con
los factores ensayados (pH,
temperatura).
¿Teniendo en cuenta que la enzima
catalasa es una proteína, qué prueba
podría plantear para verificar que los
homogenizados obtenidos en el
apartado 1 contienen este tipo de
macromolécula? Justifique su respuesta
Ejecutar el laboratorio virtual de la
página
http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=64
&sim=1342&cnt=1 “Effect of
temperature on enzyme kinetics”.
Resolver el assigment del laboratorio
virtual.
A. La velocidad de una reacción
química se duplicará (la reacción irá
dos veces más rápido) por cada
aumento de 10 ° C en la
temperatura. Esta observación es
válida para reacciones catalizadas
por enzimas hasta un cierto rango
de temperatura (diferente para cada
enzima), en la cual la velocidad deja
de aumentar y luego disminuye
bruscamente a medida que aumenta
la temperatura. ¿Explique?
La actividad catalítica cuando se
encuentra en su punto máxima es
conocida como Temperatura óptima, sin
embargo, Por encima de esta
temperatura, el aumento de velocidad
de la reacción debido a la temperatura
es contrarrestado por la pérdida de
actividad catalítica debida a la
desnaturalización térmica, y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta
anularse. ("Enzimas. Regulación de la
actividad enzimática.", 2015)
B. A partir de este experimento,
calculamos la temperatura óptima
necesaria para la actividad de la
amilasa (catalasa determinado en el
laboratorio). De la misma manera,
realice el experimento con diferentes
 enzimas y calcule la temperatura La inhibición enzimática consiste en la
óptima necesaria para su actividad y disminución o anulación de la velocidad
compare los resultados. de la reacción catalizada por una
enzima.
La temperatura optima de acción de la La actividad enzimática se puede inhibir,
amilasa esta entre 25 a 37°C frente al es decir, reducir o eliminar la actividad
almidón. (Montes, 2018) enzimática o catalítica de enzimas
específicas. (Gjertsen., 2017)
Homogenizado Seleccionado Tº
Papa 25 Los factores que la causan son:
Hígado 25
Espinaca 25  Concentración de enzimas

Esta propiedad se utiliza para

con el experimento realizado en el
determinar las actividades de las
laboratorio se determinó la actividad de
enzimas séricas (del suero sanguíneo)
la catalasa ante la temperatura de 25
para el diagnóstico de enfermedades.
grados que es la optima y la de 4 grados
que se demoró 3s más.
 Concentración de sustrato
ACTIVIDADES:
Al aumentar la concentración de
sustrato se incrementa la velocidad de
1. Enumere los grupos en los que se
la reacción. Esto se debe a que más
han clasificado las enzimas según moléculas de sustrato colisionarán con
su especificidad y ejemplifique los las moléculas de enzima, por lo que se
mecanismos de reacción formará el producto más rápidamente.

Clasificación enzimática  pH
Enzima Función
Oxido- Catalizan oxidaciones y Los cambios en la concentración de
reductoras reducciones iones hidrógeno (pH) influyen
Transferasas Catalizan la transferencia considerablemente en la actividad de
de porciones las enzimas, esta interferencia produce
Hidrolasas Catalizan la división cambios en la forma de las enzimas,
hidrolítica de enlaces afectando así su actividad.
covalentes
Liasas Catalizan cambios  Salinidad
geométricos o
estructurales dentro de La concentración de sales también
una molécula. afecta el potencial iónico y en
Isomerasas Catalizan cambios consecuencia pueden interferir en
geométricos o ciertos enlaces de las enzimas, los
estructurales dentro de cuales pueden formar parte del sitio
una molécula activo de la misma. En estos casos, al
Ligasas Catalizan la unión de dos igual que con el pH, la actividad
moléculas en reacciones enzimática se verá afectada.
acopladas a la hidrolisis
de ATP  Temperatura
(Harvey, 2010)
A medida que aumenta la temperatura
2. Defina inhibición enzimática y cite aumenta la actividad enzimática y, en
los factores que la causan consecuencia, la velocidad de la
reacción. Sin embargo, las
temperaturas muy altas desnaturalizan
las enzimas, esto significa que el exceso
de energía rompe los enlaces que
mantienen su estructura haciendo que
no funcionen de manera óptima.
 Concentración del producto
La acumulación de los productos de
reacción generalmente disminuye la
velocidad de la enzima. En algunas
enzimas, los productos se combinan
con su sitio activo formando un complejo
suelto y, por lo tanto, inhibiendo la
actividad de la enzima.
 Activadores enzimáticos
Algunas de las enzimas requieren la
presencia de otros elementos para
funcionar mejor, estos pueden ser
cationes metálicos inorgánicos como
Mg2+, Mn2+, Zn2+, Ca2+, Co2+, Cu2+,
Na+, K+, etc.
 Inhibidores enzimáticos
Los inhibidores enzimáticos son
sustancias que afectan negativamente
la función de las enzimas y, en
consecuencia, ralentizan o en algunos
casos, detienen la catálisis.
Hay tres tipos comunes de inhibición
enzimática: competitiva, no competitiva
e inhibición del sustrato
(Guerra, 2009) (Harper, (2013)
BIBLIOGRAFÍA Y NETGRAFÍA
 Enzimas. Regulación de la actividad
enzimática. (2015). Retrieved from
http://www.ehu.eus/biomoleculas/en
zimas/enz22.htm#t
 Guerra, R. (octubre de 2009).
oocities. Obtenido de
http://www.oocities.org/pelabzen/inh
enz.html
 Gjertsen., K. R. (2017). catedu .
Obtenido de http://e-
ducativa.catedu.es/44700165/aula/
archivos/repositorio/3250/3374/html
/24_inhibicin_enzimtica.html
 Harvey, R. A. (2010). Bioquímica :
Lippincott's illustrated reviews.
Barcelona: Wolters Kluwer.
 Harper, H. A. ((2013). Bioquímica
Ilustrada (29a) (29 ed.). México.
 Montes, O. (9 de mayo de 2018).
PRACTICA # 6 AMILASA SALIVAL
VELOCIDAD DE LA REACCIÓN
DE LA ENZIMA CON RELACIÓN
AL pH Y LA TEMPERATURA.
Obtenido de
http://www.academia.edu/36702193
/PRACTICA_6_AMILASA_SALIVAL
_VELOCIDAD_DE_LA_REACCI%C
3%93N_DE_LA_ENZIMA_CON_RE
LACI%C3%93N_AL_pH_Y_LA_TE
MPERATURA
 Campbell, M. K. (2016). Bioquímica
(8a). México: Cengage Learning.
 Dámazo, L. (25 de mayo de 2014).
slideshare. Obtenido de
https://es.slideshare.net/lizbethdam
azogalvez/factores-que-influyen-en-
la-actividad-enzimtica
 Pratt, C. &. (2012). Bioquímica.
Obtenido de ebookcentral:
https://ebookcentral.proquest.com/li
b/pucesp/detail.action?docID=3215
766
 USCAMAYTA, G. (31 de octubre de
2017). Química de los Alimentos.
Obtenido de
http://blog.pucp.edu.pe/blog/quimica
alimentos/2017/10/31/reacciones-
de-actividad-enzimática/
 Zarza Meza, E. (2015). Principios
de Bioquímica. México: Trillas.