T. Aceites Esenciales

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA
Y PARASITOLOGÍA
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas

FO
aeruginosa frente a diferentes concentraciones del aceite

IN
esencial de Eucaliptus globulus.

DE
AS
EM
TESIS
ST
SI
PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL

DE
DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO
N
O
CI
R EC
AUTOR: Br. SAGUMA MONTALVÁN GRACE FYORELLA

DI
ASESOR: Ms. C. VASQUEZ VALLES MARIA NELLY
COASESOR: Ms. CASANOVA LUJÁN JUAN

TRUJILLO – PERU
2014 i
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECTIVOS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
Dr. Orlando Velásquez Benites
N
IÓ
RECTOR
AC
IC
UN
Dra. Vilma Méndez Gil
M
CO
VICERRECTORA ACADÉMICA
Y
A
IC
ÁT
Dr. José Mostacero León
RM
FO
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

IN
BIOLÓGICAS
DE
AS
EM
Dr. William Zelada Estraver

ST
SI
PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE

DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS
N
O
CI
R EC
Dra. Bertha Soriano Bernilla

DI
DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO

PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y
PARASITOLOGÍA
ii
MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR
Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en
concordancia con las normas de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y
Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
_________________________
CO
Y
Ms.C. Pedro Alvarado Salinas
A
IC
PRESIDENTE ÁT
RM
FO
IN
DE
________________________
AS
Ms. C. Anibal Quintana Diaz

EM
ST
SECRETARIO
SI
DE
N
O
CI
EC
____________________________
R
DI
Ms.C. María Nelly Vásquez Valles
VOCAL
iii
APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, declaran

que la presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y
N
IÓ
fundamentales, siendo aprobada por UNANIMIDAD.
AC
IC
UN
M
CO
_________________________
Y
A
IC
Ms.C. Pedro Alvarado Salinas ÁT
PRESIDENTE
RM
FO
IN
DE
AS
________________________
EM
Ms. C. Anibal Quintana Diaz

ST
SI
SECRETARIO
DE
N
O
CI
R EC
____________________________
DI
Ms.C. María Nelly Vásquez Valles
VOCAL
iv
CERTIFICACIÓN DEL ASESOR
La que suscribe, Ms. C. Nelly Vásquez Valles, asesora de la tesis titulada:
N
IÓ
“Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes
AC
concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus”.
IC
UN
M
CO
CERTIFICA:
Y
A
IC
Que la presente investigación ha sido desarrollada de acuerdo al reglamento
ÁT
RM
establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de

FO
Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto y que el informe ha

IN
sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

DE
AS
EM
Por lo tanto autorizo a la Bachiller GRACE FYORELLA SAGUMA MONTALVÁN,

ST
continuar con el trámite del reglamento correspondiente.

SI
DE
N
O
CI
EC
Ms. C. Nelly Vásquez Valles

R
DI
ASESORA
v
DEDICATORIA
A DIOS, por iluminar y cuidar
N
siempre mí camino.
IÓ
AC
A mi amada madre Liliana
IC
UN
Montalván, por su valentía y fortaleza,
M
por enseñarme con el ejemplo que todo
CO
lo bueno en la vida, se consigue con
Y
A
esfuerzo y optimismo; por su
IC
ÁT
comprensión y confianza en mí y por
RM
ser mi modelo a seguir.

FO
IN
DE
A mis abuelitos Víctor Montalván y

AS
Priscila Miranda, por sus cuidados, amor,

EM
alegría e incondicionalidad para conmigo,

ST
porque me enseñaron con delicadeza los

SI
DE
valores de vida y lo maravilloso que es

N
tener una familia unida.

O
CI
R EC
DI
A mis hermanas Natalia y
Geraldine por su compañía, amor y
apoyo.
vi
AGRADECIMIENTOS
N
IÓ
AC
 Agradezco de manera especial a mi asesora Ms. C. Nelly Vásquez Valles, por
IC
brindarme su apoyo, dedicación, guía y orientación durante el desarrollo de la
UN
M
presente investigación.
CO
Y
A
IC
 Al Ms.C. Juan Casanova por su apoyo en la ejecución de esta investigación.
ÁT
RM
FO
 Al Ing. Wilson Reyes por su apoyo en la extracción del aceite de Eucalyptus

IN
DE
globulus.
AS
EM
ST
A cada uno de ustedes, muchas gracias

SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
vii
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:
N
IÓ
AC
En cumplimiento con las disposiciones vigentes establecidas en el Reglamento de
IC
Grados y Títulos de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y Parasitología
UN
de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a
M
CO
vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis titulada:
Y
“Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes
A
IC
concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus”, con el propósito de obtener
ÁT
el Título Profesional de Biólogo – Microbiólogo.
RM
FO
IN
Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo según su
DE
criterio establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.

AS
EM
ST
SI
DE
Trujillo, Abril del 2014

N
O
CI
R EC
DI
Br. Grace Fyorella Saguma Montalván
viii
CONTENIDO
Directivos de la Universidad Nacional de Trujillo ........................................................... ii
N
IÓ
Miembros del Jurado Dictaminador ................................................................................ iii
AC
Aprobación .......................................................................................................................iv
IC
UN
Certificación del Asesor .................................................................................................... v
M
CO
Dedicatoria .......................................................................................................................vi
Y
A
Agradecimiento .............................................................................................................. vii
IC
ÁT
Presentación ................................................................................................................... viii
RM
FO
Contenido .........................................................................................................................ix
IN
DE
RESUMEN .......................................................................................................................xi
AS
ABSTRACT ................................................................................................................... xii

EM
ST
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 1
SI
MATERIAL Y MÉTODOS ............................................................................................ 11

DE
N
Material Biológico ........................................................................................................... 11

O
CI
EC
Método ............................................................................................................................. 11
R
DI
A. Obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus ........................................ 11
1. Obtención de hojas de Eucalyptus globulus .................................................. 11
2. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus ................................. 11
2.1. Selección................................................................................................ 11
ix
2.2. Lavado ................................................................................................... 12
2.3. Cortado .................................................................................................. 12
2.4. Extracción del aceite por Arrastre con vapor de agua .......................... 12
2.5. Envasado................................................................................................ 13
N
IÓ
2.6. Almacenamiento .................................................................................... 13
AC
B. Estudio Físico del aceite esencial ........................................................................ 13
IC
1. Densidad ........................................................................................................ 13
UN
M
2. Índice de Refracción ...................................................................................... 13
CO
C. Preparación de las diferentes concentraciones del aceite esencial ...................... 14
Y
D. Preparación de los inóculos bacterianos .............................................................. 14
A
IC
3. Reactivación de los Cultivos bacterianos ...................................................... 14
ÁT
RM
4. Estandarización de los inóculos bacterianos ................................................. 14

FO
E. Prueba de sensibilidad ......................................................................................... 15

IN
F. Lectura ................................................................................................................. 15
DE
G. Análisis de Datos ................................................................................................. 16

AS
RESULTADOS ............................................................................................................... 17
EM
ST
DISCUSIÓN .................................................................................................................... 21
SI
DE
CONCLUSIONES ........................................................................................................... 27
N
O
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 28

CI
EC
ANEXOS ......................................................................................................................... 43
R
DI
x
RESUMEN
N
Se determinó la sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas
IÓ
aeruginosa frente a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de
AC
IC
Eucaliptus globulus, el cual se obtuvo a partir de las hojas de este, por el método
UN
de destilación por arrastre con vapor de agua. La sensibilidad de estos
M
CO
microorganismos se determinó por el método de difusión en agar, utilizando
Y
Vancomicina y Ciprofloxacina como controles para Staphylococcus aureus y
A
IC
Pseudomonas aeruginosa respectivamente, realizando ensayos por triplicado y
ÁT
con cuatro repeticiones. Aunque todas las concentraciones tuvieron efecto
RM
inhibitorio en ambas bacterias; se determinó que Staphylococcus aureus presentó

FO
mayor sensibilidad, estadísticamente significativa (p < 0.05), a las

IN
DE
concentraciones de 75 y 100% del aceite esencial en relación a la Vancomicina,

AS
mientras que Pseudomonas aeruginosa frente a la concentración de 100% en

EM
relación a la Ciprofloxacina.
ST
SI
Palabras clave: Sensibilidad bacteriana, aceite, Eucaliptus globulus, difusión en

DE
agar. Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.

N
O
CI
R EC
DI
xi
ABSTRACT
N
IÓ
It was determined the sensitivity of Staphylococcus aureus and Pseudomonas
AC
aeruginosa to concentrations of 25, 50, 75 and 100% of the essential oil of
IC
UN
Eucalyptus globulus, which was obtained from the leaves of this, by the
M
method of distillation with water vapor. The sensitivity of these
CO
microorganisms was determined by the agar diffusion method, using
Y
A
Vancomycin and Ciprofloxacin as controls for Staphylococcus aureus and
IC
ÁT
Pseudomonas aeruginosa, respectively, performing triplicate assays with four
RM
replications. Although all concentrations had an inhibitory effect on both

FO
bacteria; Staphylococcus aureus was determined which had a higher

IN
sensitivity, statistically significant (p <0.05) at concentrations of 75 and 100%

DE
of the essential oil in relation to Vancomycin, whereas Pseudomonas

AS
aeruginosa against concentration of 100% in relation to Ciprofloxacin.

EM
ST
SI
Keywords: Bacterial sensitivity, oil, Eucalyptus globulus, agar diffusion,

DE
Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa.

N
O
CI
R EC
DI
xii
INTRODUCCIÓN
Actualmente la propagación de los microbios patógenos no sensibles a drogas
es una de las amenazas más graves para el éxito del tratamiento de las
N
IÓ
enfermedades infecciosas debido al uso inadecuado o generalizado de
AC
antibióticos1, esta falta de sensibilidad consiste en que los microorganismos
IC
UN
crean mecanismos de defensa frente a los antibióticos, con la consiguiente
M
pérdida de acción de estos medicamentos. De allí que con el discurrir del tiempo
CO
se incrementó el interés en el uso de compuestos orgánicos biológicamente
Y
A
activos, extraídos de especies de plantas que presentan la capacidad de eliminar
IC
ÁT
a microorganismos patógenos por sí mismos2.
RM
Las plantas presentan dentro de su proceso de síntesis dos rutas metabólicas, una
FO
donde sintetizan los metabolitos primarios que son necesarios para el desarrollo
IN
DE
de la propia planta y otra ruta metabólica donde se sintetizan en específico un

AS
metabolito secundario en función de la genética de cada especie, en mayor o

EM
menor proporción2. Entre los metabolitos secundarios importantes relacionados

ST
con los mecanismos de defensa, destacan los flavonoides, fenoles, terpenos,

SI
alcaloides, lecitinas, polipéptidos y aceites esenciales3.

DE
N
Los aceites esenciales provienen del metabolismo secundario de las plantas

O
CI
superiores4 Se caracterizan por ser una mezcla compleja de varios compuestos

EC
de volátiles: hidrocarburos (terpénicos), alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres,

R
DI
éteres y fenoles. Son líquidos de consistencia aceitosa, aromáticos, que son
obtenidos de flores, brotes, semillas, hojas, corteza, hierbas, madera, frutas y
raíces3.
1
En la actualidad se conocen más de 3000 aceites esenciales en todo el mundo de
los cuales aproximadamente 300 son comercialmente importantes y son
destinados principalmente al mercado de fragancias, saborizantes y
farmacéutica5. Algunos aceites esenciales poseen propiedades bien definidas
N
IÓ
como agentes antimicrobianos y antioxidantes6. Obteniéndose de la canela
AC
(cimaldehido)2, clavo (eugenol)7, orégano (carvacrol)8, tomillo (timol)9 y
IC
UN
eucalipto (1,8-cineol o eucaliptol)10 entre otros.
M
CO
Los componentes mayoritarios de los aceites pueden constituir hasta un 85% del
Y
total mientras que la concentración del componente con actividad antimicrobiana
A
IC
puede ser muy variable11. Los aceites esenciales pueden extraerse mediante
ÁT
RM
varios métodos: destilación con vapor de agua, extracción con solventes

FO
volátiles, enflorado y con fluidos supercríticos12.

IN
El eucalipto, miembro de la familia Myrtaceae13 es un árbol alto de hoja

DE
perenne, nativo de Australia y Tasmania, introducido con éxito en todo el

AS
mundo, ahora plantado extensivamente en muchos otros países14. En el Perú fue

EM
ST
introducido en los valles interandinos de la sierra peruana entre los años 1860 –
SI
1870, desde allí el ritmo de las plantaciones de eucalipto ha crecido en los

DE
últimos años, siendo una especie forestal con un enorme potencial en la

N
O
actualidad15. El eucalipto tiene glándulas que segregan aceites esenciales en sus

CI
EC
hojas, los cuales producen su característico olor y poseen componentes que

R
pueden ser diferenciados en productos químicos de valor industrial12.

DI
Más de 300 especies de este género contienen aceites volátiles en sus hojas pero
menos de 20 especies son conocidas por su alto contenido de 1,8-cineol, las
cuales son usadas comercialmente para la producción de aceites esenciales en las
2
industrias farmacéutica y cosmética16.En la farmacopea internacional el aceite
esencial de Eucalipto es obtenido principalmente de la especie Eucalyptus
globulus17.
N
Los aceites esenciales tienen gran demanda en el mercado17 ya que se
IÓ
AC
encuentran en aplicaciones como anestésico, antiséptico, astringente,
IC
desodorante, diaforético, desinfectante, expectorante, febrífugo, fumigante,
UN
repelente de insectos, rubefaciente, sedante pero estimulante, vermífugo, un
M
CO
remedio popular para los abscesos, artritis, asma, forúnculos, bronquitis,
Y
quemaduras, diarrea, la disentería, la encefalitis, la enteritis, la erisipela, fiebre,
A
IC
gripe, inflamación, laringalgia, laringitis, mastitis, miasma, faringitis, tisis,
ÁT
rinitis, dolores, dolor de garganta, espasmos y heridas18 también su demanda es
RM
FO
alta en la fabricación de jabón17.

IN
En la medicina popular de Túnez, la inhalación del aceite esencial de Eucalyptus

DE
se ha utilizado tradicionalmente para el tratamiento de trastornos del tracto

AS
sinusitis19.
EM
respiratorio tales como faringitis, bronquitis, La acción

ST
antimicrobiana del aceite esencial es generalmente más activa en bacterias Gram

SI
positivas que en Gram negativas.

DE
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa son dos patógenos

N
O
CI
oportunistas que causan infecciones graves y potencialmente mortales en

EC
pacientes inmunocomprometidos20. S. aureus es un microorganismo Gram

R
DI
positivo, principal responsable de la infección postoperatoria de heridas,
síndrome de choque tóxico y la intoxicación alimentaria21 S. aureus
enterotoxigénico produce toxina estafilocócica, ésta enterotoxina es causa de
intoxicaciones alimentarias por la ingesta de productos contaminados,
3
generalmente de origen cárnico y lácteo22. P. aeruginosa es una bacteria Gram
negativa, aeróbica, comúnmente invasiva y toxigénica, patógeno oportunista en
humanos, representa un problema importante de salud en centros hospitalarios,
especialmente cuando se trata de pacientes con cáncer23 o quemados24. Una vez
N
IÓ
que se establece la infección, P. aeruginosa produce una serie de compuestos
AC
IC
tóxicos que causan no sólo daño tisular extenso, sino adicionalmente interfieren
UN
con el funcionamiento del sistema inmune25, 26
. Entre las proteínas que
M
CO
intervienen en la infección de P. aeruginosa se encuentran toxinas, como las
Y
exotoxinas A y S, así como enzimas hidrolíticas que degradan las membranas y
A
el tejido conjuntivo de diversos órganos25, 26. Esta situación se ve agravada por la
IC
ÁT
dificultad para tratar las infecciones por P. aeruginosa, ya que esta bacteria
RM
presenta una muy alta resistencia natural a distintos antibióticos y a

FO
desinfectantes27, 28
y es responsable de infecciones nosocomiales en los
IN
DE
huéspedes inmunocomprometidos29. Asimismo, P. aeruginosa presenta

AS
problemas en la industria alimentaria ya que puede descomponer los alimentos

EM
que se mantienen en refrigeración al mantener un metabolismo basal en estas

ST
condiciones y producir enzimas hidrolíticas30.

SI
DE
Muchos pacientes tienen susceptibilidad a infecciones por P. aeruginosa,

N
incluyendo aquellos con enfermedades pulmonares crónicas como la fibrosis

O
CI
quística (FQ)31, bronquiectasias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica32;

EC
pacientes inmunocomprometidos con SIDA, pacientes de quimioterapia del

R
DI
cáncer, médula ósea o trasplante de pulmón; incluso aquellos pacientes que usan
catéteres33-35. Varios estudios han documentado el aumento de las tasas de
insensibilidad de S. aureus y P. aeruginosa a los antibióticos14, 36-38.
4
El interés científico en este campo se ha expandido con la finalidad de demostrar
la acción antimicrobiana de algunos aceites, por mencionar, la eficacia del aceite
esencial de Eucalyptus globulus como antifúngico contra Trichophyton rubrum,
Trichophyton soudanense, Microsporum canis, Scopulariopsis brevicaulis,
N
IÓ
Candida albicans18, 39-41
y contra otros hongos fitopatógenos42, 43
.Antiparásito
AC
frente a Plasmodium falciparum44; antihelmíntico
IC
contra Pheretima
UN
posthumag45. Insecticida y repelente46; como larvicida y pupicida contra Musca
M
CO
domestica47, 48, Anopheles49, Aedes aegipti50, acaricida51, contra piojos52.
Y
En investigaciones realizadas con la finalidad de comprobar la actividad
A
IC
antibacteriana de algunos aceites contra Helicobacter pylori utilizaron el aceite
ÁT
de E. globulus en sinergismo con Thymus vulgaris53, 54
RM
, los resultados de
FO
aquellas investigaciones revelaron el efecto antibacteriano de E. globulus y T.

IN
vulgaris sobre H. pylori, esta bacteria también presentó sensibilidad frente a los
DE
aceites esenciales de Smyrnium olusatrum “apio”55, Chenopodium ambrosioides

AS
“paico”, Lippia alba “pronto alivio” y Azadirachta indica “lila india” 56.
EM
ST
La actividad antibacteriana del aceite esencial de E. globulus quedó comprobada

SI
frente a Staphylococcus aureus54 aislado de pacientes con infecciones de piel y

DE
tejidos blandos; frente a Enterococcus faecium resistente a Vancomicina57 frente

N
O
a B. subtilis, E.coli y S. aureus51,57-59. Cermelli, en su estudio determinó el efecto

CI
EC
antibacteriano para 20 aislamientos de Streptococcus pneumoniae, 40

R
aislamientos de Haemophilus influenzae, 30 aislamientos de H. parainfluenzae,

DI
10 aislados de Klebsiella pneumoniae y 10 aislamientos de Stenotrophomonas
maltophilla, resultando que H. inflzuenzae, H. parainfluenzae y S. maltophilia
fueron los más susceptibles, seguido por S. pneumoniae39, 58.
5
En otras investigaciones se comprobó la actividad antimicrobiana del aceite de
E. globulus obtenido del Nor este de Tunez contra K. pneumoniae, P.
aeruginosa, S. aureus , Streptococcus agalactiae , Streptococcus pneumoniae y
Streptococcus pyogenes18, 59, contra Pseudomona flurescens60 en este estudio se
N
IÓ
demostró que el uso de aceites esenciales en la fase de vapor es más ventajosa
AC
IC
que la fase líquida; además, el efecto antibacteriano de los vapores de aceites
UN
esenciales puede ser mejorada significativamente por la adición de iones
M
CO
negativos del aire; y en una de las últimas investigaciones realizada en Asia se
Y
demostró la actividad antibacteriana del aceite esencial de E. globulus al 25, 50,
A
75 y 100% frente a E. coli y S. aureus61.
IC
ÁT
RM
El aceite esencial de E. globulus también presenta actividad antioxidante, tal

FO
como lo indican investigaciones realizadas por un grupo de científicos entre las

IN
que destacan la investigación realizada por Ahlem, pues demostró que la

DE
administración oral del aceite reduce el estrés oxidativo62; Amakura encontró un

AS
nuevo galotanino en el extracto de la hoja de E. globulus y concluye que puede

EM
ser usado como antioxidante natural y aditivo alimentario63; Pastene detectó un

ST
componente antioxidante en el aceite de eucalipto64; Tyagi investigó la actividad

SI
DE
antibacteriana de aceite esencial (en líquido, así como en fase de vapor) y los
N
iones negativos del aire demostró que el uso de aceites esenciales en la fase de
O
CI
vapor es más ventajosa que la fase líquida y que el efecto antibacteriano de los
EC
vapores de los aceites puede ser mejorada significativamente por la adición de

R
DI
iones negativos del aire60 ofreciendo un enfoque novedoso y eficiente para el
control de la contaminación bacteriana que podría ser aplicado para las prácticas
de estabilización de alimentos; Aaza demostró su actividad antioxidante y
6
antiacetilcolinesterasa65 y Manccioni demostró la actividad conservante en
cosméticos, entre otros66.
La problemática de la pérdida de sensibilidad de algunas bacterias frente a
N
antibióticos sintéticos debido a la síntesis, producción y uso irracional de estos,
IÓ
AC
en los últimos 50 años se ha incrementado, esto está confirmado por el boletín
IC
informativo emitido por la Organización Mundial de la Salud67 donde alertó y
UN
formuló: “La naturaleza global de la pérdida de sensibilidad antimicrobiana
M
CO
necesita una respuesta global”. Y en un informe de vigilancia por el Centro
Y
Europeo de Prevención y Control de Enfermedades, sobre las tendencias de
A
IC
insensibilidad de los siete principales patógenos bacterianos de importancia para
ÁT
RM
la salud humana, S. aureus y P. aeruginosa se detallan con particular interés

FO
debido a su ubicuidad y la tolerancia intrínseca a muchos antibióticos68.

IN
Además las enfermedades transmitidas por Alimentos ETAs son causadas por
DE
microorganismos, estas enfermedades pueden tener gran impacto social por

AS
EM
tener consecuencias directas sobre la salud de los individuos, sobre el sistema de

ST
salud y sistema económico69. Hay dos categorías de ETAs: las intoxicaciones

SI
alimentarias, causadas por toxinas producidas por microorganismos y las

DE
infecciones alimentarias causadas por el crecimiento de los microorganismos en

N
O
el cuerpo humano, después de haber ingerido alimentos contaminados69.

CI
EC
Debido a su ubicuidad S. aureus está presente en piel de animales y personas,

R
DI
además de en sus fosas nasales y gargantas21, 69; P. aeruginosa puede aislarse de
muestras de suelo, aguas pristinas y contaminadas, así como de plantas y
animales69.Ambos son de amplia distribución y llegan con facilidad a los
alimentos y extiende una eventual contaminación, sus efectos son agudos y
7
aparatosos pero remiten de forma rápida. Los manipuladores de alimentos
pueden favorecer su rápida extensión tal como lo indica un estudio realizado por
el Instituto Nacional de Colombia70.
N
De allí que uno de los principales problemas de los procesadores de alimentos a
IÓ
AC
través de los años, ha sido la conservación de los mismos. Actualmente los
IC
consumidores demandan productos naturales porque relacionan los compuestos
UN
químicos con alergias y enfermedades diversas. Con base en esto, ha aumentado
M
CO
el interés en la búsqueda de nuevas formas para la conservación de los alimentos
Y
en base a productos naturales en lugar de conservadores sintéticos7, 63, ya que
A
IC
actuales estudios revelan los problemas de salud asociados con la acumulación
ÁT
RM
de radicales libres en el organismo, así como la utilización de antioxidantes

FO
sintéticos en productos alimentarios71-73.

IN
En tal sentido, lograr que la población disponga de alimentos rigurosamente

DE
libres de patógenos o contaminantes, es un propósito de muchos investigadores,

AS
EM
además hace un bien a la Salud Pública y teniendo en cuenta que los informes
ST
señalan una problemática mundial que implica una respuesta inmediata por la
SI
comunidad científica, se exige el uso alternativo de antimicrobianos de origen

DE
natural y vegetal como los aceites esenciales que en los sistemas productivos es
N
O
una alternativa viable, alto rendimiento, pureza del aceite obtenido, de fácil
CI
EC
extracción porque no requiere tecnología sofisticada12 permite la explotación de

R
recursos naturales, abundantes y renovables, no contamina el ambiente, buen

DI
antioxidante62, no genera disminución de la sensibilidad bacteriana, y no
requiere elevadas concentraciones.
Además E. globulus desde que fue introducido en el país, ha logrado aclimatarse
8
perfectamente a las condiciones edáficas y medioambientales de la sierra, costa e
incluso la selva alta, y aquí en la región La Libertad pese a que en su
Silvicultura no se ha utilizado las técnicas más apropiadas de propagación, el
ritmo de las plantaciones de eucalipto ha crecido en los últimos años, incluso se
N
IÓ
han establecido plantaciones sin definir el uso final o específico, por lo que
AC
IC
constituye una especie forestal con un enorme potencial en la actualidad,
UN
recurso renovable, importante para la actividad económica del país pero sobre
M
CO
todo que debe ser aprovechado en beneficio de los habitantes de este distrito de
Y
Tayabamba, para su desarrollo y crecimiento económico.
A
IC
Y según las investigaciones ya mencionadas de E. globulus como
ÁT
RM
antimicrobiano, indujo suponer que el aceite esencial de E. globulus inhibe el

FO
crecimiento de bacterias de allí que la investigación estuvo orientada a la

IN
determinación de la Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas

DE
aeruginosa frente a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial

AS
de Eucaliptus globulus.
EM
ST
SI
La presente investigación tuvo como objetivos:

DE
N
Objetivo General:
O
CI
 Determinar la sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas

EC
aeruginosa frente a las diferentes concentraciones del aceite esencial de

R
DI
Eucalyptus globulus.
9
Objetivos específicos:
 Determinar que concentración del aceite esencial de Eucalyptus
globulus es significativamente más eficaz en relación a la Vancomicina,
N
contra Staphylococcus aureus.
IÓ
AC
IC
 Determinar que concentración del aceite esencial de Eucalyptus
UN
globulus es significativamente más eficaz en relación a la
M
CO
Ciprofloxacina, contra Pseudomonas aeruginosa.
Y
A
 Determinar cuál de las bacterias empleadas (Staphylococcus aureus y
IC
ÁT
Pseudomonas aeruginosa) es significativamente más sensible frente al
RM
aceite esencial de Eucalyptus globulus.

FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
10
MATERIAL Y MÉTODOS
MATERIAL BIÓLOGICO
N
IÓ
AC
 Cultivo de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa
IC
proporcionado por el Laboratorio Referencial de Trujillo,
UN
Departamento de La Libertad, en el mes de Julio del 2013.
M
CO
Y
 Aceite esencial de Eucaliptus globulus.
A
IC
ÁT
RM
PROCEDIMIENTO
FO
IN
A. Obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus.

DE
AS
1. Obtención de hojas de Eucalyptus globulus.

EM
Se recolectó 8 Kg de hojas de eucalipto del distrito de

ST
SI
Tayabamba, provincia de Pataz y se colocó en cajas de cartón para

DE
su transporte al laboratorio de Química Física de la Facultad de

N
Ingeniería Química de la Universidad Nacional de Trujillo.

O
CI
EC
2. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus.

R
DI
2.1. Selección
Se seleccionaron hojas de eucalipto sin presencia de
11
magulladuras, cortes o demás lesiones.
2.2. Lavado
Se realizó con agua corriente, con el propósito de eliminar
N
IÓ
restos de partículas extrañas, suciedad y restos de tierra que
AC
IC
pudieran haber estado adheridos a las hojas y
UN
posteriormente se enjuagó con agua destilada.
M
CO
Y
2.3. Cortado
A
IC
El corte se realizó de forma manual y en cuadrados de 1cm
ÁT
de lado aproximadamente12 para aumentar el área de
RM
contacto con el vapor de agua.

FO
IN
DE
2.4. Extracción del aceite por Arrastre con vapor de agua.

AS
El aceite esencial se obtuvo mediante el proceso de

EM
destilación utilizando un equipo de extracción por arrastre

ST
con vapor12 (Anexo 2).

SI
Se colocó 200g de hojas cortadas de E. globulus en un

DE
balón de destilación de 3 bocas esmerilado de 1000 mL de

N
O
CI
capacidad el cual se conectó a otro balón de 1000 mL de

EC
capacidad en el que se generó el vapor de agua que luego

R
DI
circuló a través de la muestra. El vapor que entró en
contacto con las hojas arrastró el aceite esencial que luego
fue depositado en el embudo de separación el cual permitió
la separación del aceite obtenido.
12
El tiempo de extracción fue de 115 min aproximadamente,
contándose desde el instante en el que cayó la primera gota
en el embudo de separación12.
N
IÓ
2.5. Envasado
AC
IC
El aceite colectado se guardó en frascos de color ambar.
UN
Debido a que son inestables fotoquímicamente. Luego se
M
CO
deshidrató con Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3).
Y
A
IC
2.6. Almacenamiento ÁT
Se conservó en refrigeración a 4°C hasta el momento de su
RM
uso.
FO
IN
DE
B. Estudio Físico del aceite esencial

AS
EM
Constantes Físicas:
ST
 Densidad:
SI
Se utilizó un densímetro digital Densymeter DMA 35 –

DE
Aton Paar de fácil uso, gran precisión y confiabilidad. Este

N
O
CI
densímetro midió la densidad y temperatura de la muestra;

EC
(0.9 g/ml a 20°C)

R
DI
 Índice de Refracción:
Mediante refractómetro de círculo Carl Zeis se obtuvo el
valor del índice de refracción: 1.469
13
C. Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial
El aceite puro obtenido fue considerado como tratamiento al 100%, a
partir del cual se realizó diluciones para obtener las concentraciones
N
IÓ
de 25, 50, 75 y 100% de aceite de E. globulus; utilizando como
AC
solvente etanol absoluto, pues no afecta el crecimiento bacteriano61.
IC
UN
Se tuvo en cuenta que las nuevas concentraciones de aceite no se
M
CO
expusieran a la luz51.
Y
A
IC
D. Preparación de los inóculos bacterianos ÁT
RM
1. Reactivación de los Cultivo bacterianos

FO
Cada cultivo bacteriano fue reactivado en Caldo Infusión Cerebro-

IN
DE
Corazón (BHI) por 18 horas a 37 °C. Luego sembrados en agar

AS
nutritivo e incubados durante 18 – 24 horas a 37°C, con la

EM
finalidad de obtener colonias aisladas74, 75.

ST
SI
2. Estandarización de los inóculos bacterianos

DE
Las colonias de S. aureus y P. aeruginosa fueron suspendidas en

N
O
CI
Solución Salina Fisiológica (SSF) estéril hasta lograr una turbidez

EC
equivalente al patrón 0,5 de la escala de Mc Farland obteniéndose

R
DI
así una suspensión de 1.5x108 UFC/ml. Se realizó el recuento en
placa mediante la siembra en superficie de las suspensiones, para
comprobar las concentraciones bacterianas76.
14
E. Prueba de sensibilidad
La actividad antibacteriana del aceite de eucalipto se determinó
siguiendo el método de difusión en agar. Se sirvió 25mL de agar
N
IÓ
Müller-Hinton en placas Petri con la finalidad de lograr un grosor de
AC
IC
4mm de agar, luego para evitar exceso de humedad sobre la
UN
superficie, se las colocó entreabiertas en la estufa.
M
CO
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del
Y
inóculo, se agregó sobre el agar 0.1ml de suspensión bacteriana y con
A
IC
la ayuda del asa de Drigalski se sembró de forma uniforme y se dejó
ÁT
reposar por unos 15 min77. Luego se formó hoyos de 4mm de
RM
diámetro por 4mm de profundidad en el agar.

FO
Se agregó 50ul de aceite esencial a concentraciones de 25, 50, 75 y

IN
DE
100% en los hoyos respectivos.

AS
Se evaluaron placas control, utilizando antibióticos Vancomicina y

EM
Ciprofloxacina, como controles positivos para S. aureus y P.

ST
aeruginosa respectivamente75 y como control negativo se utilizó el

SI
etanol, para verificar que al usar etanol como solvente en la

DE
preparación de las concentraciones de aceite, no afectan el crecimiento

N
O
CI
de las bacterias en estudio. Luego se incubó a 37°C por 18 a 24

EC
horas78.
R
DI
F. Lectura
Cumplido el tiempo de incubación se observó la presencia de halos de
inhibición de crecimiento bacteriano los cuales se midieron para
15
posteriormente ser comparados77. El experimento se realizó por
triplicado y 4 repeticiones.
G. Análisis de Datos
N
IÓ
Los datos obtenidos fueron sometidos a al test de Kolmogorov-
AC
IC
Smirnov para determinar la distribución normal de los valores
UN
(Normal: p>0.05 y No Normal: p<0.05). Como los valores siguieron
M
CO
una distribución normal fueron analizados con la prueba de Anova,
Y
para determinar diferencia significativa entre tratamientos, luego se
A
IC
aplicó prueba de comparaciones múltiples paramétrica de Tukey con
ÁT
un intervalo de confianza del 95% para determinar diferencia
RM
significativa entre concentraciones de aceite y entre cultivos de

FO
bacterias la prueba Anova; para lo cual se utilizó el programa

IN
DE
estadístico SPSS Statistics 20.0, Microsoft Office Excel 2013.

AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
16
RESULTADOS
En la figura 1 se presentan los halos de sensibilidad (mm) de Staphylococcus
N
IÓ
aureus por la acción de diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite
AC
de Eucalyptus globulus y del grupo control “Vancomicina”, se observa la
IC
UN
existencia de diferencia significativa entre estos grupos, siendo la
M
concentraciones de 75 y 100% del aceite, las de mayor efecto en relación a la
CO
Vancomicina (p < 0.05).
Y
A
IC
En la figura 2 se presentan los halos de sensibilidad (mm) de Pseudomonas
ÁT
aeruginosa por la acción de diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del
RM
aceite de Eucalyptus globulus y del grupo control “Ciprofloxacina”, se observa la

FO
existencia de diferencia significativa entre estos grupos, siendo la concentración

IN
DE
100% del aceite, la de mayor efecto en relación a la Ciprofloxacina (p < 0.05).

AS
En la figura 3 se presenta la comparación de halos de sensibilidad (mm) entre

EM
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa a concentraciones (25, 50, 75

ST
SI
y 100%) del aceite de Eucalyptus globulus, observándose que existe diferencia

DE
significativa entre ambas especies, con un p < 0.05 a todas las concentraciones.
N
O
CI
R EC
DI
17
N
30
Ó
CI
A
IC
Sensibilidad(mm) de Staphylococcus aureus
25
UN
M
CO
20
25%
Y
50%
A
15
IC
75%
d
ÁT
100%
c
RM
10 Vancomicina
e
FO
b Etanol
a
IN
5
DE
AS
f
0 EM
25% 50% 75% 100% Vancomicina Etanol
ST
Concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus

SI
Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p < 0.05)

DE
N
IO
Fig. 1. Sensibilidad (mm) de Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite de
CC
Eucalyptus globulus y de los grupos control “Vancomicina y etanol”.

RE
DI
18
30
N
Ó
CI
Sensibilidad (mm) de Pseudomonas aeruginosa
25
A
IC
UN
20
M
CO
25%
Y
15 50%
A
75%
IC
d
ÁT
c 100%
10 c
RM
b Ciprofloxacina
Etanol
FO
5 a
IN
DE
e
0
AS
25% 50% EM 75% 100% Ciprofloxacina Etanol
ST
Concentración del aceite esencial de Eucalyptus globulus

SI

DE
N
IO
Fig. 2. Sensibilidad (mm) de Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite
CC
de Eucalyptus globulus y de los grupos control “Ciprofloxacina y etanol”.

RE
DI
19
30
N
Ó
CI
25
Halo de inhibición de crecimineto (mm)
A
IC
UN
20
M
CO
15
Y
a b
a
A
b
IC
10
ÁT
a b
a
RM
5 b
FO
IN
0
DE
25% 50% 75% 100%
AS
Aceite de Eucalyptus globulus
EM
Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa
ST
SI

DE
N
IO
Fig. 3. Comparación de la sensibilidad (mm) entre Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a
CC
concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite de Eucalyptus globulus.

RE
DI
20
DISCUSIÓN
Con la finalidad de buscar alternativas naturales para el control de bacterias
patógenas las investigaciones actuales se han orientado a evaluar la actividad
N
IÓ
antimicrobiana de los aceites esenciales de diferentes plantas, los resultados de
AC
aquellas investigaciones han sido favorables, tal es el caso del aceite esencial de
IC
UN
Eucalyptus globulus cuya actividad antibacteriana18, 53-56, 61
, fungicida39-43,
M
antihemíntico45, insecticida y repelente46, larvicida, pupicida47, 48
acaricida51, a
CO
sido comprobada frente a diferentes especies patógenas.
Y
A
IC
En esta investigación se evaluó la sensibilidad de dos especies bacterianas
ÁT
patógenos oportunistas, que por su amplia distribución y ubicuidad son agentes
RM
causantes de enfermedades, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa,

FO
IN
frente a diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus.

DE
Los resultados en esta investigación, revelan que S. aureus y P. aeruginosa

AS
presentan sensibilidad estadísticamente significativa (p < 0.05) frente al aceite

EM
esencial de E. globulus, es decir el aceite presenta actividad antibacteriana por lo

ST
SI
tanto inhibe el crecimiento de ambas bacterias, el grado de sensibilidad depende

DE
de la concentración usada del aceite esencial.

N
O
En la Fig. 1, se observa que S. aureus es sensible frente a las concentraciones de

CI
EC
25 y 50% del aceite de E. globulus, pues se observa la formación de halos de

R
sensibilidad de 14.0 y 16.5mm respectivamente; pero el diámetro de estos halos,

DI
es menor en comparación con el halo de sensibilidad formado por el antibiótico
Vancomicina (control) que fue de 17.4 mm, aunque producen sensibilidad en la
bacteria, no son concentraciones eficaces.
21
El halo de sensibilidad formado por la concentración de 75% del aceite, fue de 23
mm, respecto al halo de sensibilidad formado por Vancomicina que fue de 17
mm; presenta P < 0.05, esto se interpreta que el halo de sensibilidad formado el
aceite al 75% es significativamente mayor al formado por el control. Siendo esta
N
IÓ
concentración eficazmente sensible para S. aureus. El mismo resultado presentó la
AC
IC
concentración de 100%, pues el diámetro del halo formado fue de 26 mm, siendo
UN
mucho mayor con respecto a su control, por lo que resultó con p < 0.05, lo cual
M
CO
indica la existencia de diferencia significativa entre el halo de sensibilidad
Y
formado por el aceite al 100% y el formado por Vancomicina. Siendo esta
A
IC
concentración eficazmente sensible para S. aureus. ÁT
RM
La mayor zona de inhibición de S. aureus se obtuvo con la concentración de 100%

FO
de aceite esencial de E. globulus y el más bajo con la concentración de 25% del

IN
aceite.
DE
Una inhibición más significativa se observó con una concentración de aceite

AS
EM
esencial más alta. A concentraciones bajas, se observó un efecto inhibidor muy

ST
limitado en el crecimiento de microorganismos, en comparación con los controles.

SI
Este resultado permite asegurar que S. aureus es significativamente más sensible a

DE
las concentraciones de 75 y 100% del aceite esencial de E. globulus que al

N
O
antibiótico Vancomicina.
CI
EC
En la Fig. 2, P. aeruginosa presenta menor sensibilidad frente al aceite de E.

R
DI
globulus, para las concentraciones de 25 y 50%, pues los halos formados 11.0 y
17.0 mm respectivamente; presentan menor diámetro, en comparación con el halo
de sensibilidad formado por el antibiótico Ciprofloxacina (control) que fue de
22
20.6mm, aunque producen sensibilidad en la bacteria, no son concentraciones
eficaces en relación al antibiótico.
El halo de sensibilidad formado por la concentración de 75% del aceite respecto
N
al halo de sensibilidad formado por Ciprofloxacina que presenta P > 0.05, esto se
IÓ
AC
interpreta que el halo de sensibilidad formado el aceite al 75% no es
IC
significativamente mayor al formado por el control. Por lo cual, esta
UN
concentración no es eficazmente sensible para P. aeruginosa. Sin embargo la
M
CO
concentración de 100%, formó diámetro de 25.4mm, mucho mayor con respecto a
Y
su control (20.6mm), por lo que resultó con p < 0.05, lo cual indica la existencia
A
IC
de diferencia significativa entre el halo de sensibilidad formado el aceite al 100%
ÁT
RM
y el formado por la Ciprofloxacina. Siendo esta concentración eficazmente

FO
sensible para P. aeruginosa.

IN
La mayor zona de inhibición de P. aeruginosa se obtuvo con la concentración de

DE
100% de aceite esencial de E. globulus y el más bajo con la concentración de 25%

AS
EM
del aceite. Este resultado permite asegurar que P. aeruginosa es

ST
significativamente más sensible a la concentración de 100% del aceite esencial

SI
de E. globulus que al antibiótico Ciprofloxacina.

DE
N
En la Fig. 3, se compara los promedios de los halos de sensibilidad de S. aureus y

O
CI
P.aeruginosa frente a cada concentración (25, 50, 75 y 100%) del aceite esencial
EC
de E. globulus, existiendo diferencia significativa entre ambas bacterias, es decir

R
DI
una de las bacterias presenta mayor sensibilidad frente al aceite esencial,
resultando que S. aureus es más sensible al aceite de E. globulus. a las
concentraciones de 25, 75 y 100% pero P. aeruginosa, presenta mayor
sensibilidad frente a la concentración de 50% .
23
Los resultados obtenidos de esta investigación son similares a los mostrados por
otros trabajos con respecto a la actividad antimicrobiana de aceite esencial de E.
globulus. Bachir R en su investigación encontró que el aceite esencial de E.
globulus tiene efecto antibacteriano frente S. aureus pero solo frente a la
N
IÓ
concentración del 100%61 mientras que en esta investigación S. aureus presentó
AC
IC
sensibilidad significativa frente a la concentración de 75 y 100%, esto puede
UN
deberse a la cepa bacteriana utilizada y al lugar de procedencia de donde fue
M
CO
obtenido el aceite, por lo que el aceite esencial de E. globulus procedente del
Y
distrito de Tayabamba puede tener mayor capacidad antibacteriana.
A
IC
En otros trabajos se obtuvo un efecto antibacteriano sobre Pseudomonas79-87,
ÁT
eficacia frente H. influenzae y Stenotrophomonas maltophilla39, frente a S.
RM
FO
pneumoniae, S. pyogenes82, usando el aceite esencial de E. globulus.

IN
Investigadores señalan que existe una relación entre las estructuras químicas de
DE
los más abundantes en el aceite esencial y la actividad antimicrobiana.

AS
EM
Considerando la gran variedad de compuestos químicos presentes en lo aceites

ST
esenciales, es muy probable que su actividad antibacteriana, no sea atribuible a un

SI
mecanismo específico, sino a la acción combinada de varios de ellos, en el caso de

DE
E. globulus la actividad antibacteriana se debe a componentes tales como 1,8-

N
O
cineol, citronelal, citroneol, acetato de citronililo, p-cimeno, eucamalol, limoneno,

CI
EC
linalol, B-pineno, terpineno, a-terpinol, alloocimene y aromadendrene88 siendo

R
componente principal el monoterpene 1,3,3-trimethyl-2-oxabicyclo[2.2.2]octane89

DI
comúnmente llamado 1,8- cineol90.
Aunque no se conoce con exactitud el mecanismo de acción de los componentes
del aceite, se sabe que los sitios de acción en la célula bacteriana incluya la
24
membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de proteínas y el
sistema genético, todos ellos estratégicos para la supervivencia de los
microorganismos y cualquier acción sobre ellos puede inactivar a la célula
bacteriana91.
N
IÓ
AC
El resultado de la comparación de los halos de sensibilidad entre S. aureus y P.
IC
aeruginosa es similar al obtenido en otras investigaciones, donde informaron que
UN
los aceites esenciales son en general ligeramente más activos frente a bacterias
M
CO
Grampositivas que frente a las Gramnegativas92-102. Estos microorganismos
Y
difieren en varios aspectos de otros con respecto a la estructura de sus paredes
A
IC
celulares, principalmente con respecto a la presencia de lipoproteínas y
ÁT
RM
lipopolisacáridos en bacterias gram-negativas que forman una barrera para los

FO
compuestos hidrófobos103, 104. Los aceites esenciales se introducen a través de los

IN
lípidos de la membrana celular y mitocondrial, alterando su estructura y

DE
haciéndolas más permeables105, 106. Como consecuencia tiene lugar una fuga de
AS
iones y de otros contenidos celulares, de forma más o menos intensa, que puede
EM
llevar a la muerte celular107. En su mayoría las gram-negativas sean más

ST
resistentes a los aceites esenciales que las bacterias Gram-positivas108.

SI
DE
De acuerdo a los resultados obtenidos y basándose en otros trabajos científicos

N
O
relacionados a esta investigación, se puede afirmar que S. aureus presentó mayor

CI
EC
sensibilidad frente al aceite esencial de E. globulus que P. aeruginosa y que este

R
efecto sería debido a los componentes propios del aceite así como a la estructura y
DI
constitución de las membranas celulares de las bacterias en estudio.
También se evidencia que S. aureus y P. aeruginosa no son sensibles al control
negativo, etanol absoluto, ya que no se observó la formación de halos, lo que
25
indica que el uso de etanol absoluto como solvente en la preparación de las
concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de E. globulus, no
produjo ningún efecto ni alteró el crecimiento de las bacterias en estudio.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
26
CONCLUSIONES
 Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa son sensibles frente
N
IÓ
a las diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus
AC
globulus.
IC
UN
M
 La concentración del 75% del aceite esencial de Eucalyptus globulus es
CO
significativamente más eficaz en relación a la Vancomicina contra
Y
A
Staphylococcus aureus.
IC
ÁT
RM
 La concentración del 100% del aceite esencial de Eucalyptus globulus es

FO
significativamente eficaz en relación a la Ciprofloxacina, contra

IN
Pseudomonas aeruginosa.
DE
AS
 Staphylococcus aureus es más sensible frente a las diferentes

EM
concentraciones del aceite esencial de Eucalytus globulus que

ST
Pseudomonas aeruginosa.
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
27
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Owlia P, Saderi H, Rasooli I, Sefidkon F. Antimicrobial characteristics of
N
some herbal oils on Pseudomonas aeruginosa with special reference to their
IÓ
AC
chemical compositions. Indian J Pharmacol Res. 2009; 8(2): 107–114.
IC
2. Concepción L, Aurora R, Ortega J, Fernando B. Componentes químicos y
UN
su relación con las actividades biológicas de algunos extractos vegetales.
M
CO
Rev. Química viva 2010; 9(2): 86-96.
Y
3. Borboa-Flores J, Rueda-Puente E, Acedo-Félix E, Ponce J, Cruz-Villegas
A
IC
M, García-Hernández J et al. Evaluación de la actividad antibacteriana in
ÁT
RM
vitro de aceites esenciales contra Clavibacter michiganensis subespecie

FO
michiganensis. Tropical and Subtropical Agroecosystems 2010; 12: 539-

IN
547.
DE
4. Alzamora L, Morales L, Armas L, Fernández G. Medicina Tradicional en el

AS
Perú: Actividad Antimicrobiana in vitro de los Aceites Esenciales extraídos

EM
de algunas plantas aromáticas. Anales de la Facultad de Medicina 2001;

ST
62(2): 156-161.
SI
DE
5. Cowan M. plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology

N
Reviews 1999; 12(4): 564-582.

O
CI
6. Ponce A, Roula S, Del Valle C, Moreira M. Antimicrobial and antioxidant

EC
activies of edible coating enriched with natural plant extracts: in vitro and
R
DI
vivo studies. Postharvest Biology and Technology 2008; 49: 294-300.
7. Burt S. Essential oils: their antibacterial properties and potential
applications in foods. Int J Food Microbiol. 2004 Aug 1; 94(3): 223-53
28
8. Albado E, Saez G, Grabiel S. Composición química y actividad
antibacteriana del aceite esencial del Origanum vulgare. Rev Med Hered.
2001; 12 (1): 16 – 19.
9. De Bouchberg MS, Allegrini J, Bessiere C, Attisto M, Passet J, Granger R.
N
IÓ
Properties microbiologiques de bciles essentielles de chimotypes de Thymus
AC
IC
vulgaris Linnaeus. . Rivista Italiana Essenza Profumi Piante Officinai
UN
Aromi Sapingi Cosmetici 1976; 58: 527-36.
M
CO
10. Cimanga K, Kambu K, Tona L, Apers S, De Bruyne T, Hermans N, Totté J,
Y
Pieters L, Vlietinck AJ. Correlation between chemical composition and
A
IC
antibacterial a ctivity of essential oils of some aromatic medicinal plants
ÁT
growing in the Democratic Republic of Congo. J Ethnopharmacol. 2002
RM
Feb; 79 (2): 213-20.

FO
11. Elaissi A, Medini H, Khouja M, Simmonds M, Lynen F, Farhat F et al.

IN
DE
Variation in volatile leaf oils of five Eucalyptus species harvested from Jbel
AS
Abderrahman arboreta (Tunisia). Chem Biodivers. 2011; 8(2): 352-61.

EM
12. Moreno J, Lópes G, Siche R. Modelación y optimización del proceso de

ST
extracción de aceite esencial de “eucalipto” Eucalyptus globulus. Scientia

SI
Agropecuaria 2010; 1: 147-154.

DE
13. Akin M, Aktumsek A, Nostro A. Antibacterial activity and composition of

N
O
CI
the essential oils of Eucalyptus camaldulensis Dehn and Myrtus communis

EC
L. growing in Northern Cyprus. Afr J Biotechnol. 2010; 9: 531–535

R
DI
14. Mubita C, Syakalima M, Chisenga C, Munyeme M, Bwalya M, Chifumpa
G. et al. Antibiograms of faecal Escherichia coli and Enterococci species
isolated from pastoralist cattle in the interface areas of the Kafue basin in
Zambia. Veterinarski Arhiv. 2008; 78 (2):179–185.
29
15. Pino J, Marbot R, Quert R, Garcia H. Study of essential oils of Eucalyptus
resinifera Smith, E. tereticornis Smith and Corymbia maculata (Hook.) KD
Hill & LAS Johnson, grown in Cuba. Flavour Fragr J. 2002; 17:1–14
16. Bajaj Y. Medicinal and aromatic plants. Biotechnology in agriculture and
N
IÓ
forestry. 1995; 8: 194–196.
AC
IC
17. Elliot W, Jones D. The Encyclopaedia of Australian plants. Vol. 4.
UN
Melbourne: Lothian Publishing Company Pty Ltd; 1986.
M
CO
18. Elaissi A, Zyed R, Ben A, Mabrouk S, Ben Y, Haj K et al. Chemical
Y
composition of 8 eucalyptus species' essential oils and the evaluation of
A
IC
their antibacterial, antifungal and antiviral activities. BMC Complement
ÁT
Altern Med. 2012; 12: 81.
RM
19. Lestari E. Antimicrobial resistance among Staphylococcus aureus and

FO
Escherichia coli isolates in the Indonesian population inside and outside

IN
DE
hospitals. 14th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious

AS
Diseases. Prague / Czech Republic, May 1-4. 2011.

EM
20. Jose B, Reddy J. Evaluation of antibacterial activity of the leaf and flower
ST
essential oils of Gliricidia sepium from south India. Intl J App Pharm. 2010;
SI
2: 20–22.
DE
21. Insituto Nacional de Salud. Evaluación de riesgos de Staphylococcus

N
O
CI
aureus enterotoxigénico en alimentos preparados no industriales en

EC
Colombia. 2011.
R
DI
22. Bergen G. and Shelhamer J. Pulmonary infiltrates in the cancer patient.
New approaches to an old problem. Infect. Dis. Clin. North Am. 1996. 10:
297-325.
30
23. Madigan M. Martinko M, Brock J. Biology of Microorganisms, Eighth
edition. Prentice Hall. New Jersey. 1997. pp.698-701.
24. Döring G, Maier M, Müller E, Zoubair B, Tümmler B. and Kharazmi A.
Virulence factors of Pseudomonas aeruginosa. Antibiot Chemother. 1987.
N
IÓ
39: 136-148.
AC
IC
25. Mohr C, Rust L, Albus A, Iglewski B and V. Deretic. Expression patterns of
UN
genes encoding elastase and controlling mucoidy: co-ordinate regulation of
M
CO
two virulence factors in Pseudomonas aeruginosa isolates from cystic
Y
fibrosis. Mol. Microbiol. 1990. 4: 2103-2110.
A
IC
26. Hancock R and Woodruff W. Roles of porin and b-lactamase in intrinsic
ÁT
antibiotic resistance of Pseudomonas aeruginosa. Rev. Infect. Dis. 1988.
RM
10: 770-775.
FO
27. Sttover C, Pham A, Erwin S, Miizoguchi C, Warrener M and Hickey F.

IN
DE
Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an

AS
opportunistic pathogen. Nature. 2000. 406: 959-964.

EM
28. Soberó N. and Palmeros B. Pseudomonas lipases: Molecular genetics and

ST
potential industrial applications. Critical Rev. Microbiol. 1994. 20: 95-105.

SI
29. Chatzinikolaou I, Abi-Said D, Bodey GP, Rolston KV, Tarrand JJ, Samonis
DE
G. La experiencia reciente con Pseudomonas aeruginosa bacteriemia en

N
O
CI
pacientes con cáncer: Análisis retrospectivo de 245 episodios de

EC
Arco.Intern. Med 2000; 160: 501-509.

R
DI
30. Soberón G. Pseudomonas aeruginosa. Centro de investigación sobre
fijadores de nitrógeno. 2010; 23 (3): 125-132
31
31. Matthew N. Hurley, Miguel Cámara, and Alan R. Smyth. Novel approaches
to the treatment of Pseudomonas aeruginosa infections in cystic fibrosis.
Eur Respir J. 2012 October; 40(4): 1014–1023.
32. Garcia-Vidal C, Almagro P, Romaní V, et al. Pseudomonas aeruginosa en
N
IÓ
pacientes hospitalizados por exacerbación de la EPOC: un estudio
AC
IC
prospectivo. Eur Respir J 2009; 34(5): 1072-1078.
UN
33. Hu HB, Huang HJ, QY Peng, Lu J, Lei XY. Estudio prospectivo de la
M
CO
colonización y la infección por Pseudomonas aeruginosa en pacientes con
Y
ventilación mecánica en una unidad de cuidados intensivos neonatales en
A
IC
China. Am. J. Infect. De control. 2010; 38: 746-750. ÁT
34. Williams B, Dehnbostel J, Blackwell T. Pseudomonas aeruginosa. Defensa
RM
del huésped en las enfermedades pulmonares. Respirology 2010; 15 . :1037-

FO
1056 Chambers H and De Leo F. Waves of resistance: Staphylococcus

IN
DE
aureus in the antibiotic era. Nat Rev Microbiol. 2009; 7 (9): 629–641.
AS
35. Sadikot R, Blackwell T, Christman J. Interacciones patógeno-hospedador en

EM
Pseudomonas aeruginosa neumonía . Am J Respir Crit Care Med 2005;

ST
171(11): 1209-1223.
SI
36. Chambers H and De Leo F. Waves of resistance: Staphylococcus aureus in

DE
the antibiotic era. Nat Rev Microbiol. 2009; 7 (9): 629–641.

N
O
CI
37. Arredondo-García J, Amábile-Cuevas C. La alta prevalencia de resistencia a

EC
la ampicilina, co-trimoxazol y ciprofloxacino, entre uropatogénico

R
DI
Escherichia Coli aisladas en la Ciudad de México. J Infect Países en
Desarrollo. 2008; 2 (5): 350-353.
32
38. Bouza E, García-Garrote F, y Diaz M. Pseudomonas aeruginosa: una
encuesta de la Resistencia en 136 hospitales en España. Antimicrob Agents
Chemother. 1999; 43(4): 981–982.
39. Cermelli C, Fabio A, Fabio G, Quaglio P. Effect of eucalyptus essential oil
N
IÓ
on respiratory bacteria and viruses. Curr Microbiol. 2008; 56(1): 89-92.
AC
IC
40. Sartorelli P, Marquioreto A, Amaral-Baroli A, Lima M, Moreno P.
UN
Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oils from
M
CO
two species of Eucalyptus. Phytother Res. 2007; 21: 231–233.
Y
41. Tyagi A, Malik A. Antimicrobial potential and chemical composition of
A
IC
Eucalyptus globulus oil in liquid and vapour phase against food spoilage
ÁT
microorganisms. Food Chem. 2011; 126: 228–235.
RM
42. Ramezani H, Singh HP, Batish DR, Kohli RK. Antifungal activity of the
FO
volatile oil of Eucalyptus citriodora. Fitoterapia. 2002; 73: 261–262.

IN
DE
43. Su YC, Ho CL, Wang EI, Chang ST. Antifungal activities and chemical
AS
compositions of essential oils from leaves of four Eucalyptus. Taiwan J For

EM
Sci. 2006; 21: 49–61.

ST
44. Zofou D, Tene M, Ngemenya M, Tane P, Titanji V. In vitro antiplasmodial

SI
activity and cytotoxicity of extracts of selected medicinal plants used by

DE
traditional healers of Western cameroon. Malar Res Treat. 2011; 2011:

N
O
CI
561342.
EC
45. Taur D, Kulkarni V, Patil R. Chromatographic evaluation and anthelmintic

R
DI
activity of Eucalyptus globulus oil. Pharmacognosy Res. 2010; 2(3): 125-7.
46. Mossi A, Astolfi V, Kubiak G, Lerin L, Zanella C, Toniazzo G et al.
Insecticidal and repellency activity of essential oil of Eucalyptus sp. against
33
Sitophilus zeamais Motschulsky (Coleoptera, Curculionidae). J Sci Food
Agric. 2011; 91(2): 273-7.
47. Kumar P, Mishra S, Malik A, Satya S. Compositional analysis and
insecticidal activity of Eucalyptus globulus (family: Myrtaceae) essential oil
N
IÓ
against housefly (Musca domestica). Acta Trop. 2012; 122(2): 212-8.
AC
IC
48. Kumar P, Mishra S, Malik A, Satya S. Repellent, larvicidal and pupicidal
UN
properties of essential oils and their formulations against the housefly,
M
CO
Musca domestica. Med Vet Entomol. 2011; 25(3): 302-10.
Y
49. Senthilkumar N, Varma P, Gurusubramanian G. Larvicidal and adulticidal
A
IC
activities of some medicinal plants against the malarial vector, Anopheles
ÁT
stephensi (Liston). Parasitol Res. 2009; 104(2): 237-44.
RM
50. Lucia A, Licastro S, Zerba E, Gonzalez P, Masuh H. Sensibilidad de

FO
adultos de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) a los vapores de eucalipto

IN
DE
aceites esenciales. Bioresour Technol. 2009; 100(23): 6083-7.

AS
51. Hyun SR, Eun GL, Jin WK, Chung GP. Acaricidal and oviposition deterring
EM
effects of santalol identified in sandalwood oil against two-spotted spider

ST
mite, Tetranychus urticae Koch (Acari: Tetranychidae). J Pest Sci. 2011; 84

SI
(4): 495-501.
DE
52. Choi HY, Yang YC, Lee SH, Clark JM, Ahn YJ. Efficacy of spray
N
O
CI
formulations containing binary mixtures of clove and eucalyptus oils against

EC
susceptible and pyrethroid/malathion-resistant head lice (Anoplura:

R
DI
Pediculidae). J Med Entomol. 2010; 47(3): 387-91.
53. Esmaeili D, Mohabati A, Tohidpour A. Anti-Helicobacter Pylori Activities
of Shoya Powder and Essential Oils of Thymus vulgaris and Eucalyptus
Globulus. Open Microbiol J. 2012; 6: 65 – 69.
34
54. Tohidpour A, Sattari M, Omidbaigi R, Yadegar A, Nazemi J. Antibacterial
effect of essential oils from two medicinal plants against Methicillin-
resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Phytomedicine 2010; 17(2): 142-
5.
N
IÓ
55. Daroui-Mokaddem H, Kabouche A, Bouacha M, Soumati B, El-Azzouny A,
AC
IC
Bruneau C et al. GC/MS analysis and antimicrobial activity of the essential
UN
oil of fresh leaves of Eucalytus globulus, and leaves and stems of Smyrnium
M
CO
olusatrum from Constantine (Algeria). Nat Prod Commun. 2010; 5(10):
Y
1669-72.
A
IC
56. Singh R., Fungitoxicity of some higher plants and synergistic activity of
ÁT
their essential oils against Sclerotium rolfsii causing foot-rot disease of
RM
barley. Hindustan Antibiot Bull. 2006; 47-48(1-4): 45-51.

FO
57. Pallavi L. Effect of Plant Extracts Formulated in Different Ointment Bases

IN
DE
on MDR Strains Indian J Pharm Sci. 2010; 72(3): 397–401.

AS
58. Fabio A, Cermelli C, Fabio G, Nicoletti P, Quaglio P. Detección de los

EM
efectos antibacterianos de una variedad de aceites esenciales sobre los

ST
microorganismos responsables de las infecciones respiratorias. Phytother

SI
Res. 2007; 21: 374-377.

DE
59. Zonyane S, Van Vuuren S, Makunga N. Antimicrobial interactions of Khoi-

N
O
CI
San poly-herbal remedies with emphasis on the combination; Agathosma

EC
crenulata, Dodonaea viscosa and Eucalyptus globulus. J Ethnopharmacol.

R
DI
2013. 12 [Epub ahead of print]
60. Tyagi A, Malik A. Antimicrobial action of essential oil vapours and
negative air ions against Pseudomonas fluorescens. Int J Food Microbiol.
2010; 143(3): 205-10.
35
61. Bachir R, Benali M. Antibacterial activity of the essential oils from the
leaves of Eucalyptus globulus against Escherichia coli and Staphylococcus
aureus. Asia Pac J Trop Biomed 2012; 2(9): 739 – 742.
62. Ahlem S, Khaled H, Wafa M, Sofiane B, Mohamed D, Jean-Claude M et al.
N
IÓ
Oral administration of Eucalyptus globulus extract reduces the alloxan-
AC
IC
induced oxidative stress in rats. Chem Biol Interact. 2009; 181(1): 71-6.
UN
63. Amakura Y, Yoshimura M, Sugimoto N, Yamazaki T, Yoshida T. Marker
M
CO
constituents of the natural antioxidant Eucalyptus leaf extract for the
Y
evaluation of food additives. Biosci Biotechnol Biochem. 2009; 73(5):
A
IC
1060-5. ÁT
64. Pastene E, Gómez M, Speisky C, Hernán and Núñez L. A system for
RM
detection of volatile antioxidant commonly emitted from spices and

FO
medicial herbs. Quim. Nova. 2010; 32 (2): 482-494.

IN
DE
65. Aazza S, Lyoussi B, Miguel M. Antioxidant and antiacetylcholinesterase

AS
activities of some commercial essential oils and their major compounds.

EM
Molecules. 2011; 16(9): 7672-90.

ST
66. Maccioni A, Anchisi C, Sanna A, Sardu C, Dessì S. Preservative systems

SI
containing essential oils in cosmetic products. Int J Cosmet Sci. 2002; 24(1):
DE
53-9.
N
O
CI
67. Organización Mundial de la Salud. Boletín de Medicamentos Esenciales.

EC
2000; 28- 29:7-19.

R
DI
68. Centro Europeo de Prevención y control de Enfermedades. Vigilancia de la
resistencia a los antimicrobianos en Europa. Informe Anual de la Red de
Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos Europea (EARS-Net).
Estocolmo, ECDC, 2011.
36
69. Perdomo I y Melendez P. Determinación y Aislamiento de Staphylococcus
aureus y Clostridium perfringens enterotoxigénicos a partir de alimentos.
Rev. Col. Cienc. Quím. Farm. 4004; 33 (1), 59-69.
70. Ministerio de Salud y Protección Social. Evaluación de riesgos de
N
IÓ
Staphylococcus aureus enterotoxigénico en alimentos preparados no
AC
IC
industriales en Colombia. Instituto Nacional de Salud. 2011
UN
71. Figueroa G, Navarrete P, Caro M. Portación de Staphylococcus aureus
M
CO
enterotoxigénicos en manipuladores de alimentos. Rev. Méd. Chile. 2002;
Y
130(8): 859-864.
A
IC
72. Soberón G. Pseudomonas aeruginosa. Centro de investigación sobre
ÁT
fijadores de nitrógeno. 2010; 23 (3): 125-132
RM
73. Cardona L y Mejía L. Evaluación del efecto antioxidante de aceites

FO
esenciales y extractos de Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare y

IN
DE
Thymus vulgaris. Biosalud. 2009; 8: 58-70.

AS
74. Seenivasan P, Manickkam J, Savarimuthu I. In vitro antibacterial activity of

EM
some plant essential oils. BMC Complementary and Alternative Medicine

ST
2006; 6: 39.
SI
75. Bergey DH, Buchanan RE, NE Gibbons. Bergey's Manual of Determinative

DE
Bacteriology. 8ª ed. Baltimore, MD: El Williams y Wilkins Company, 1974.

N
O
CI
76. CLSI. Métodos de dilución para determinar la sensibilidad a los

EC
antimicrobianos de bacterias que crecen en condiciones aeróbicas. Norma

R
DI
aprobada. 2009. 29(2).
77. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos para la prueba de
sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Perú. Instituto
Nacional de Salud. 2002
37
78. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos para la determinación de
sensibilidad a los antibacterianos en bacterias aisladas de humanos.
Argentina. Instituto Nacional de enfermedades infecciosas. 2001.
79. Ait-Ouazzou A, Lorán S, Bakkali M, Laglaoui A, Rota C, Herrera A, et
N
IÓ
al. La composición química y la actividad antimicrobiana de los aceites
AC
IC
esenciales de Thymus algeriensis, Eucalyptus globulus y Rosmarinus
UN
officinalis de Marruecos. J Sci. Food Agric. 2011; 91 (14): 2643-2651.
M
CO
80. Elaissi A, Hadj Salah K, Mabrouk S, Mohamed Larbi K, Chemli R, Skhiri
Y
F. Antibacterial activity and chemical composition of 20 Eucalyptus species'
A
IC
essential oils. Food Chem. 2011; 129(4): 1427–1434. ÁT
81. Bachheti R, Joshi A, Singh A. Oil content variation and Antimicrobial
RM
activity of Eucalyptus leaves oils of three different Species of Dehradun,

FO
Uttarakhand, India. Int J Chem Tech Res. 2011; 3(2): 625-628.

IN
DE
82. Inouye S, Takizawa T, Yamaguchi H. Antibacterial activity of essential oils

AS
and their major constituents against respiratory tract pathogens by gaseous

EM
contact. J Antimicrob Chemother. 2001; 47: 565-573.

ST
83. Salari M, Amine G, Shirazi M, Hafezi R, Mohammadypour M.

SI
Antibacterial effects of Eucalyptus globulus leaf extract on pathogenic

DE
bacteria isolated from specimens of patients with respiratory tract

N
O
CI
disorders. Clin Microbiol Infect. 2006; 12: 194-196.

EC
84. Chung KH, Yang KS, Kim J, Kim JC, Lee KY. Antibacterial activity of
R
DI
essential oils on the growth of Staphylococcus aureus and measurement of
their binding interaction using optical biosensor. J Microbiol
Biotechnol. 2007; 17: 1848-1855.
38
85. Chhetri HP, Yogol NS, Sherchan J, Anupa KC, Mansoor S, Thapa P.
Phytochemical and antimicrobial evaluations of some Medicinal plants of
Nepal. Kathmandu Univ J Sci Engineer Technol. 2008; I(V): 49–54.
86. Armando CC, Rahma HY. Evaluation of the yield and the antimicrobial
N
IÓ
activity of the essential oils from: Eucalyptus globulus, Cymbopogon
AC
IC
citratus and Rosmarinus officinalis in Marara district (Uganda) Rev
UN
Colombiana Cienc Anim.2009; 1: 240–249.
M
CO
87. Fit IN, Rapuntean G, Rapuntean S, Chirila F, Nadas GC. Antibacterial
Y
effect of essential vegetal extracts on Staphylococcus aureus compared to
A
IC
Antibiotics. Not Bot Hort Agrobot Cluj. 2009; 37: 117–123.
ÁT
88. Nezhad FM, Zeigham H, Mota A, Sattari M, la actividad Yadegar A.
RM
antibacteriana de los extractos de eucalipto sobre la resistencia a la

FO
meticilina Staphylococcus aureus. Res. J Biol. Sci. 2009; 4 (8): 905-908

IN
DE
89. Boland, D. J.; Brophy, J. J.; House, A. P. N., Eucalyptus Leaf Oils. 1st ed.;
AS
Inkata Press: Melbourne, 1991.

EM
90. Cuéllar A, Hussein R. Evaluación del rendimiento y la actividad

ST
antimicrobiana de los aceites esenciales de Eucalyptus globulus,

SI
Cymbopogon citratus y Rosmarinus officinalis en el distrito de Mbarara

DE
(Uganda). Rev. Colombiana Cienc. Anim. 2009; 1(2): 240-249.

N
O
CI
91. Albaldo P, Saez E, Ataucusi G. Composición química y actividad

EC
antibacteriana del aceite esencial de Origanum vulgare. Rev Med Hered,

R
DI
ene/mar. 2001, 12 (1):16-19.
92. Chaudhry N, Tariq P. in vitro las actividades antibacterianas de Kalonji,
comino y semilla de amapola. Pakistán J Bot. 2008; 40: 461-467.
39
93. Farah H, Abdelhafid B. Huiles. Utilizaciones et activités
biologiques. Aplicación à deux plantes aromatiques. Les tecnologías de
laboratoire. 2008; 8: 20-27.
94. Pirbalouti A, Malekpoor F, Enteshari S, M Yousefi, Momtaz H, Hamedi B.
N
IÓ
Antibacterial activity of some folklore medicinal plants used by Bakhtiari
AC
IC
tribal in Southwest Iran.. Intl J Biol. 2010; 2: 55-63.
UN
95. Oyedemi SO, Afolayan AJ. Antibacterial y las actividades antioxidantes de
M
CO
extracto de corteza del tallo hidroalcohólico de Schotia latifolia . Jacq . Asia
Y
Pac J Med 2011; 4(2): 952-958
A
IC
96. Madhumitha G, Saral AM. El ÁT análisis preliminar fitoquímico,
antibacterianas, antifúngicas y actividades anticandidiales de extractos

RM
sucesivos de Crossandra infundibuliformis. Asia Pac J Med. 2011; 4(3):

FO
192-195.
IN
DE
97. Johnson M, Wesely EG, Kavitha MS, Uma V. Antibacterial activity of

AS
leaves and inter-nodal callus extracts of Mentha arvensis L. Asia Pac J

EM
Med. 2011; 4 .(3): 196-200.

ST
98. Peixoto J, Silva GC, Costa RA, res Lira de Sousa Fontenelle Joseí, Vieira G,
SI
Filho A, et al. In vitro antibacterial effect of aqueous and ethanolic Moringa

DE
leaf extracts. Asian Pac J Med 2011; 4 (3): 201204.

N
O
CI
99. Chatterjee SK, Bhattacharjee I, Chandra G. Aislamiento e identificación de

EC
componentes antibacterianos bioactivos en extractos de hojas de Vangueria

R
DI
spinosa (Rubiaceae) de Asia Pac J Med. 2011; 4. (1): 35-40
100. Johnson M, Wesely EG, Zahir Hussain MI, Selvan N. in vivo y in vitro la
eficacia fitoquímico y antibacteriana de Baliospermum montanum (Willd.)
Muell. Arg . Asia Pac J Med 2011; 3 (11): 894-897.
40
101. Moussa Ahmed, Noureddine Djebli, Abdelmelek Meslem, Saad
Aissat. Antibacterial activity of various honey types of Algeria against
Pathogenic Gram–Negative Bacilli: Escherichia coli and Pseudomonas
aeruginosa. Asian Pac J Dis. 2012; 2(3): 211-214.
N
IÓ
102. Ravikumar S, Gokulakrishnan R, Boomi P. in vitro the antimicrobial
AC
IC
activity of metal oxide nanoparticles against pathogens of urinary tract
UN
infectious bacteria. Asia Pac J Dis. 2012; 2 (2): 85-89.
M
CO
103. Wang J, Chen C. Biosorbents for heavy metals removal and their future.
Y
Biotechnol Adv. 2009; 27(2): 195-226.
A
IC
104. Mazutti M, Mossi A, Cansian R, Corazza M, Dariva C, Oliveira V.
ÁT
Chemical profile and antimicrobial activity of Boldo (Peumus boldus
RM
Molina) extracts obtained by compressed carbon dioxide extraction.. Braz J

FO
Chem. Eng. 2008; 25: 427 -434.

IN
DE
105. Knobloch K, Weigand, Weis N, Schwarm HM, Vigenschow H. Acción

AS
de terpenoides en el metabolismo energético. En: Brunke EJ,

EM
editor. Progreso en Investigación Esencial Aceite: 16 º Simposio

ST
Internacional de Aceites Esenciales. De Gruyter, Berlin, 1986. 429-445.

SI
106. Sikkema J, De Bont JAM, Poolman B. Interacciones de hidrocarburos

DE
cíclicos con membranas biológicas. J Biol Chem. 1994; 269: 8022-8028.

N
O
CI
107. Denyer S, Hugo W. Daño inducido por Biocida a la membrana

EC
citoplasmática bacteriana. En: Denyer SP, Hugo WB, editor. Mecanismos

R
DI
de acción de los biocidas químicos La Society for Applied Bacteriología,
Serie Técnica N º 27. Oxford Blackwell Scientific Publication, Oxford,
1991. pp 171-188.
41
108. Zaika LL. Especias y hierbas: su actividad antibacteriana y su
determinación. J Food Saf. 1988; 23:97-118.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
42
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
ANEXOS
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
43
ANEXO 1
Hojas de Eucalyptus globulus, provenientes del distrito de Tayabamba, provincia Pataz;
cortadas.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
44
ANEXO 2
Equipo de destilación por arrastre de vapor, utilizado para la extracción de aceite de las
hojas de Eucalyptus globulus.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
45
ANEXO 3
Concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite esencial de las hojas de Eucalyptus
globulus, provenientes del distrito de Tayabamba, provincia Pataz.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
46
ANEXO 4
Estandarización del inóculo bacteriano, suspensión equivalente al tubo 0.5 de Mac
Farland (1.5x108 UFC/ml)
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
47
ANEXO 5
A) Siembra por superficie de Staphylococcus aureus en agar Müller-Hinton y b)
Siembra por superficie de Pseudomonas aeruginosa en agar Müller-Hinton.
N
IÓ
Prueba de sensibilidad.
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
a
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
48
ANEXO 6
Halos de sensibilidad de Staphylococccus aureus frente a las concentraciones de 25, 50,
75 y 100% del aceite esencial de Eucalyptus globulus y frente a Vancomicina.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
49
ANEXO 7
Halos de sensibilidad de Pseudomonas aeruginosa frente a las concentraciones
de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de Eucalyptus globulus y frente a
N
Ciprofloxacina.
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
50
ANEXO 8
N
Ó
CI
Diámetros de los halos de inhibición (mm) de Staphylococcus aureus por acción de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de
A
IC
Eucalyptus globulus y del grupo control Vancomicina (control positivo) y Etanol Absoluto (control negativo). Por triplicado y con 4
UN
M
repeticiones.
CO
Y
Halo de inhibición de crecimiento (mm)
A
IC
Concentración del aceite Eucalyptus globulus
ÁT
Repetición 25% 50% 75% 100% Vancomicina Etanol
RM
1ra 15 14 14 16 17 16 23 23 24 26 26 28 18 18 17 0 0 0
FO
2da 14 14 14 16 16 17 22 23 23 25 26 26 18 18 17 0 0 0
IN
3ra 13 15 14 16 17 17 24 24 23 27 27 28 16 18 17 0 0 0
DE
4ta 14 13 14 16 17 17 23 24 23 26 27 26 17 18 17 0 0 0
AS
14 16.5 EM 23.3 26.5 17.4 0
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
51
ANEXO 9
N
Ó
CI
Diámetros de los halos de inhibición (mm) de Pseudomonas aeruginosa por acción de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de
A
IC
Eucalyptus globulus y del grupo control Ciprofloxacina (control positivo) y Etanol Absoluto (control negativo). Por triplicado y con 4
UN
M
repeticiones.
CO
Y
Halo de inhibición de crecimiento (mm)
A
IC
Concentración del aceite Eucalyptus globulus
ÁT
Repetición 25% 50% 75% 100% Ciprofloxacina Etanol
RM
1ra 10 11 11 17 16 17 20 22 22 25 26 26 21 20 21 0 0 0
FO
2da 11 11 12 18 17 17 21 22 21 25 25 25 20 20 21 0 0 0
IN
DE
3ra 11 12 11 17 18 17 21 21 21 25 25 26 21 20 21 0 0 0
4ta 12 12 11 17 18 18 21 21 22 25 26 26 21 21 21 0 0 0
AS
EM
11.3 17.3 21.3 25.4 20.7 0
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
52
ANEXO 10
Análisis estadístico realizado a los halos de sensibilidad de Staphylococcus aureus a las
concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de Eucalyptus globulus y del grupo
N
control Vancomicina.
IÓ
AC
A. Prueba de Kolmogorov Smirnov para deteminar la normalidad de los halos
IC
UN
formados por Staphylococcus aureus. Realizada en el programa estadístico SPSS
M
Statistics 20.0
CO
Y
Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra
A
IC
ÁT Halo
N 60
RM
Media 19,533
a,b
Parámetros normales Desviación
4,7029
FO
típica
IN
Absoluta ,228
Diferencias más extremas Positiva ,228
DE
Negativa -,153
Z de Kolmogorov-Smirnov 1,765
AS
Sig. asintót. (bilateral) ,058

EM
a. La distribución de contraste es la Normal.

ST
b. Se han calculado a partir de los datos.

SI
DE
En todas las concentraciones se obtiene un p > 0.05, lo que significa que se acepta
N
la Ho; por lo tanto se tienen que realizar análisis Paramétricos.

O
CI
R EC
DI
53
B. Prueba de Análisis de Varianza ANOVA de un factor para determinar la
significancia entre los halos de sensibilidad formados por Staphylococcus aureus a
las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de Eucaliptus globulus y por el
control Vancomicina.
N
IÓ
AC
IC
ANOVA de un factor
UN
Halo
Suma de Gl Media F Sig.
M
cuadrado cuadrática
CO
s
Y
Inter-grupos 1279,767 4 319,942 699,210 ,000
A
Intra-grupos 25,167 55 ,458
IC
Total 1304,933 59
ÁT
RM
p-valor: 0.000; indica que existe diferencia significativa entre los diferentes
FO
tratamientos realizados.
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
54
C. Prueba Post Hoc Comparaciones múltiples, método Tukey 95% para determinar
que tratamientos existe diferencia significativa de los halos de sensibilidad
formados por Staphylococcus aureus a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100%
del aceite de Eucalyptus globulus y por el control Vancomicina.
N
IÓ
AC
IC
UN
Comparaciones múltiples
Variable dependiente: Halo
M
HSD de Tukey
CO
(I) Concentración (J) Concentración Diferencia de Error Sig. Intervalo de confianza al
medias (I-J) típico 95%
Y
Límite inferior Límite
A
IC
ÁT superior
50% -2,5000* ,2762 ,000 -3,279 -1,721

*
RM
75% -9,2500 ,2762 ,000 -10,029 -8,471

25%
100% -12,5000* ,2762 ,000 -13,279 -11,721
FO
*
Vancomicina -3,4167 ,2762 ,000 -4,196 -2,638
IN
*
25% 2,5000 ,2762 ,000 1,721 3,279
*
75% -6,7500 ,2762 ,000 -7,529 -5,971
DE
50% *
100% -10,0000 ,2762 ,000 -10,779 -9,221
AS
*
Vancomicina -,9167 ,2762 ,013 -1,696 -,138
*
25% 9,2500 ,2762 ,000 8,471 10,029
EM
*
50% 6,7500 ,2762 ,000 5,971 7,529
75%
ST
*
100% -3,2500 ,2762 ,000 -4,029 -2,471
*
Vancomicina 5,8333 ,2762 ,000 5,054 6,612
SI
*
25% 12,5000 ,2762 ,000 11,721 13,279
DE
*
50% 10,0000 ,2762 ,000 9,221 10,779
100% *
75% 3,2500 ,2762 ,000 2,471 4,029
N
O
*
Vancomicina 9,0833 ,2762 ,000 8,304 9,862
CI
*
25% 3,4167 ,2762 ,000 2,638 4,196
EC
50% ,9167* ,2762 ,013 ,138 1,696

Vancomicina
R
*
75% -5,8333 ,2762 ,000 -6,612 -5,054
DI
100% -9,0833* ,2762 ,000 -9,862 -8,304
*. La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
55
ANEXO 11
Análisis estadístico realizado a los halos de sensibilidad de Pseudomonas aeruginosa a las
concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de Eucalyptus globulus y del grupo
N
control Ciprofloxacina.
IÓ
AC
Prueba de Kolmogorov Smirnov para deteminar la normalidad de los halos formados por
IC
UN
Pseudomonas aeruginosa. Realizada en el programa estadístico SPSS Statistics 20.0
M
CO
Prueba de Kolmogorov-Smirnov para una muestra
Y
Halo
A
N 60
Media
IC 19,1667
ÁT
Parámetros normalesa,b
Desviación típica 4,80525
RM
Absoluta ,169
Diferencias más extremas Positiva ,132
FO
Negativa -,169
IN
Z de Kolmogorov-Smirnov 1,308
DE
Sig. asintót. (bilateral) ,065

a. La distribución de contraste es la Normal.
AS
b. Se han calculado a partir de los datos.

EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
56
B. Prueba de Análisis de Varianza ANOVA de un factor para determinar la
significancia entre los halos de sensibilidad formados por Pseudomonas aeruginosa
a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite de Eucaliptus globulus y por
el control Ciprofloxacina.
N
IÓ
AC
IC
ANOVA de un factor
UN
Halo
Suma de Gl Media F Sig.
M
cuadrados cuadrática
CO
Inter-grupos 1344,000 4 336,000 1008,000 ,000
Y
Intra-grupos 18,333 55 ,333
A
Total 1362,333 59
IC
ÁT
RM
p-valor: 0.000; indica que existe diferencia significativa entre los diferentes
FO
tratamientos realizados.
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
CI
R EC
DI
57
D. Prueba Post Hoc Comparaciones múltiples, método Tukey 95% para determinar
que tratamientos existe diferencia significativa de los halos de sensibilidad
formados por Pseudomonas aeruginosa a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100%
del aceite de Eucalyptus globulus y por el control Ciprofloxacina
N
IÓ
AC
IC
UN
Comparaciones múltiples
M
Variable dependiente: Halo
CO
HSD de Tukey
(I) Concentración (J) Diferencia de Error típico Sig. Intervalo de confianza al
Y
Concentración medias (I-J) 95%
A
IC
ÁT Límite Límite
inferior superior
*
50% -6,00000 ,23570 ,000 -6,6648 -5,3352
RM
75% -10,00000* ,23570 ,000 -10,6648 -9,3352

25%
FO
*
100% -14,16667 ,23570 ,000 -14,8314 -13,5019
IN
Ciprofloxacina -9,41667* ,23570 ,000 -10,0814 -8,7519

*
25% 6,00000 ,23570 ,000 5,3352 6,6648
DE
*
75% -4,00000 ,23570 ,000 -4,6648 -3,3352
50% *
AS
100% -8,16667 ,23570 ,000 -8,8314 -7,5019

*
Ciprofloxacina -3,41667 ,23570 ,000 -4,0814 -2,7519
EM
*
25% 10,00000 ,23570 ,000 9,3352 10,6648
ST
*
50% 4,00000 ,23570 ,000 3,3352 4,6648
75% *
100% -4,16667 ,23570 ,000 -4,8314 -3,5019
SI
Ciprofloxacina ,58333 ,23570 ,111 -,0814 1,2481

DE
*
25% 14,16667 ,23570 ,000 13,5019 14,8314
*
50% 8,16667 ,23570 ,000 7,5019 8,8314
N
100% *
O
75% 4,16667 ,23570 ,000 3,5019 4,8314

CI
*
Ciprofloxacina 4,75000 ,23570 ,000 4,0852 5,4148
EC
*
25% 9,41667 ,23570 ,000 8,7519 10,0814
*
50% 3,41667 ,23570 ,000 2,7519 4,0814
R
Ciprofloxacina
DI
75% -,58333 ,23570 ,111 -1,2481 ,0814

*
100% -4,75000 ,23570 ,000 -5,4148 -4,0852
*. La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
58

T. Aceites Esenciales

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

T. Aceites Esenciales

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas

aeruginosa frente a diferentes concentraciones del aceite

esencial de Eucaliptus globulus.

PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL

AUTOR: Br. SAGUMA MONTALVÁN GRACE FYORELLA

ASESOR: Ms. C. VASQUEZ VALLES MARIA NELLY

COASESOR: Ms. CASANOVA LUJÁN JUAN

DIRECTIVOS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. Orlando Velásquez Benites

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

Dr. William Zelada Estraver

PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE

Dra. Bertha Soriano Bernilla

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO

MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR

concordancia con las normas de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y

Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.

Ms. C. Anibal Quintana Diaz

Ms.C. María Nelly Vásquez Valles

Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, declaran

Ms. C. Anibal Quintana Diaz

Ms.C. María Nelly Vásquez Valles

CERTIFICACIÓN DEL ASESOR

La que suscribe, Ms. C. Nelly Vásquez Valles, asesora de la tesis titulada:

establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de

Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto y que el informe ha

sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por lo tanto autorizo a la Bachiller GRACE FYORELLA SAGUMA MONTALVÁN,

continuar con el trámite del reglamento correspondiente.

Ms. C. Nelly Vásquez Valles

A DIOS, por iluminar y cuidar

ser mi modelo a seguir.

A mis abuelitos Víctor Montalván y

Priscila Miranda, por sus cuidados, amor,

alegría e incondicionalidad para conmigo,

porque me enseñaron con delicadeza los

valores de vida y lo maravilloso que es

tener una familia unida.

A mis hermanas Natalia y

Geraldine por su compañía, amor y

 Al Ing. Wilson Reyes por su apoyo en la extracción del aceite de Eucalyptus

A cada uno de ustedes, muchas gracias

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

criterio establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.

Trujillo, Abril del 2014

Br. Grace Fyorella Saguma Montalván

Directivos de la Universidad Nacional de Trujillo ........................................................... ii

ABSTRACT ................................................................................................................... xii

MATERIAL Y MÉTODOS ............................................................................................ 11

Material Biológico ........................................................................................................... 11

A. Obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus ........................................ 11

1. Obtención de hojas de Eucalyptus globulus .................................................. 11

2. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus ................................. 11

2.2. Lavado ................................................................................................... 12

2.3. Cortado .................................................................................................. 12

4. Estandarización de los inóculos bacterianos ................................................. 14

E. Prueba de sensibilidad ......................................................................................... 15

G. Análisis de Datos ................................................................................................. 16

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 28

inhibitorio en ambas bacterias; se determinó que Staphylococcus aureus presentó

mayor sensibilidad, estadísticamente significativa (p < 0.05), a las