Química Analítica General Lic.

en Biotecnología 2019

Serie Nº 10
Métodos Cromatográficos
1. Los siguientes datos se aplican a una columna de cromatografía de líquidos:
Longitud del empaquetado: 24,7 cm; Caudal: 0,313 mL/min; VM: 1,37 mL; VST: 0,164 mL
Del cromatograma obtenido del análisis de las especies A, B, C y D se obtienen los siguientes
datos:
Soluto tr Ancho de base del pico (Wb)
(min) (min)
No retenido 3,1 -
A 5,4 0,41
B 13,3 1,07
C 14,1 1,16
D 21,1 1,72
Calcular:
a) El número de platos teóricos a partir de cada pico (Ni).
b) El número medio de platos teóricos en la columna (N)
c) La altura equivalente de plato teórico de la columna (H o HETP)
d) El factor de capacidad (o factor de retención) para cada compuesto (k')
e) El coeficiente de reparto para cada compuesto (D).
2. A partir de los datos del problema 1, calcular para las especies B y C:
a) La resolución (Rs),
b) El factor de selectividad (αBC)
c) La longitud de columna (L) necesaria para separar las dos especies con Rs=1,5
d) El tiempo necesario (tr) para separar las dos especies con Rs=1,5.
3. Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 14,2 y 15,43 minutos,
respectivamente, cuando se analizan en una columna de 30,0 cm. Una especie no retenida
pasa a través de la columna en 1,30 minutos. Los anchos de pico de A y B (en la base) son
1,11 y 1,21 minutos, respectivamente. Calcular: Rs, N, H y la longitud de columna necesaria
para obtener Rs = 1,5.
4. a) Dibuje un diagrama de bloques e identifique los componentes fundamentales de un
cromatógrafo de gases.
b) ¿En qué circunstancias es conveniente derivatizar un analito antes de realizar un análisis
por CG?
c) ¿Cuándo conviene utilizar programación de tempen CG?

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d) ¿Qué ventajas tiene una fase estacionaria ligada en CG?

f) Comparar las propiedades de una columna tubular abierta con las de una columna
empaquetada
g) Explique cuando conviene utilizar la inyección con división de flujo y sin división de flujo
en GC.

5. Para determinar la velocidad óptima del gas portador (op) de una CGL, se procede a
inyectar alícuotas iguales de una misma muestra, a distintas velocidades de flujo. Los datos
obtenidos son los siguientes:

Alícuota tr (min) W (min)  (cm/seg)

1 5.53 0.70 5
2 8.58 0.85 10
3 11.33 0.80 20
4 11.64 0.85 30
5 11.92 0.90 40
6 12.16 1.00 50
7 6.9 0.70 70

a) Con esta información dibuje la curva de Van Deemter, indicando en la gráfica la op y la
altura de plato mínima de la columna (Hmin). La longitud de la columna es de 90 cm.
b) ¿Qué proceso considera cada uno de los términos de la ecuación de Van Deemter?
6. Dado el siguiente cromatograma cómo mejoraría la resolución de los picos 3-4 y 5-6 sin
modificar significativamente el tiempo de análisis.

7. Se desea determinar la concentración de etanol en sangre por el método de patrón interno.

Para ello se procesan (de la misma manera) una serie de soluciones acuosas patrón de etanol y
una muestra de suero: una alícuota de 0,01 mL de cada solución se diluyen con 0,1 mL de una
solución patrón de 2-propanol 0,1 mg/mL. Se inyectan 0,1 L de cada solución en un CG

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provisto de un detector FID (ionización de llama), un integrador y una columna PEG-400

(polietilenglicol) a 80 °C. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

Medida del integrador

Patrones de etanol
(mg/mL) Pico del propanol
Pico del etanol
(estándar interno)
0,50 5518 12754
0,75 7563 11893
1,00 10350 12084
1,25 13935 12870
1,50 15628 12314
Muestra de sangre 9862 12604

a) Construir el gráfico de calibración correspondiente y usarlo para determinar la

concentración de etanol en la muestra de sangre.
b) ¿Qué ventajas tiene emplear las áreas integradas de los picos en vez de sus alturas para
realizar la cuantificación?
8. Se analizan trazas de benceno en una muestra de agua usando análisis de espacio de cabeza.
Las muestras y los estándares se adicionan con una cantidad fija de tolueno, como estándar
interno. Se obtienen los datos siguientes:

Benceno Área del máximo Área del máximo

(ppb) del benceno del tolueno

10,0 252 376

15,0 373 370
25,0 636 371
Muestra 533 368
¿Cuál es la concentración de benceno en la muestra?

9. Se utilizó la metodología validada de Van Atta y Van Atta para determinar la concentración
de salicilato de metilo (% v/v) en alcohol para pulir (alcohol isopropílico) mediante
cromatografía de gases. Se preparó un conjunto de estándares transfiriendo 20,00 mL de
alcohol para pulir a matraces volumétricos de 25 mL y pipeteando 0,00 mL, 0,20 mL y 0,50
ml de salicilato de metilo a los matraces. Los tres matraces se diluyeron a volumen usando
isopropanol. El análisis de las tres muestras proporcionó alturas máximas para salicilato de
metilo de 57,00 mm, 88,50 mm y 132,50 mm, respectivamente. Determine el % v/v de
salicilato de metilo en el alcohol para pulir.

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10. La cantidad de alcanfor en una pomada analgésica se puede determinar mediante GC

utilizando el método de los estándares internos. Se preparó una muestra estándar colocando
45,2 mg de alcanfor y 2,00 mL de una solución estándar interna de hidrato de terpeno de 6,00
mg/mL en un matraz volumétrico de 25 mL y diluyéndolo al volumen con CCl4. Cuando se
inyectó una muestra de 2 μL del estándar, las señales FID para los dos componentes (en
unidades arbitrarias) fueron 67,3 para alcanfor y 19,8 para hidrato de terpeno. Se preparó una
muestra de 53,6 mg de una pomada analgésica para su análisis colocándola en un matraz
Erlenmeyer de 50 mL junto con 10 mL de CCl4. Después de calentar a 50ºC en un baño de
agua, la muestra se enfrió por debajo de la temperatura ambiente y se filtró. El residuo se lavó
con dos porciones de 5 mL de CCl4, y los filtrados combinados se recogieron en un matraz
volumétrico de 25 mL. Después de agregar 2,00 mL de la solución estándar interna, el
contenido del matraz se diluyo a volumen con CCl4. El análisis de una muestra de 2 μL dio
señales de FID de 13,5 para el hidrato de terpeno y 24,9 para el alcanfor. Reportar el % p/p de
alcanfor en la pomada analgésica.
11. La GC-MS puede determinar la concentración de residuos de pesticidas en productos
agrícolas, como las naranjas. Los residuos de pesticidas se extraen de la muestra usando
cloruro de metileno, y las concentraciones de los pesticidas extraídos se concentran
evaporando el cloruro de metileno a un volumen menor. La calibración se realiza utilizando
antraceno-d10 como estándar interno. En un estudio para determinar las partes por billon de
epóxido de heptacloro en naranjas, se tomó una muestra de 50,0 g de cáscara de naranja y se
extrajo con 50,00 mL de cloruro de metileno. Después de eliminar cualquier material
insoluble por filtración, el cloruro de metileno se redujo en volumen, se añadió una cantidad
conocida del patrón interno y se diluyó a 10 mL en un matraz volumétrico. El análisis de la
muestra da una relación de área de pico (Aanalito / Aestandar interno) de 0,108. Una serie de
patrones de calibración, cada uno con la misma cantidad de antraceno-d10 que la muestra, da
los siguientes resultados.

Epóxido de heptacloro
Aanalito / Aestandar interno
(ppb)
20,0 0,065
60,0 0,153
200,0 0,637
500,0 1,554
1000,0 3,198

Reportar la concentración de residuos de epóxido de heptacloro (ng/g) en las naranjas.

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