TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tijuana

Nanomedicine drug and delivery

“Nanogeles”

15/11/2019

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Introducción
A través de los años la medicina ha avanzado exponencialmente tanto teórica como
instrumentalmente y tecnológicamente

Proteínas terapéuticas a base de anticuerpos, citoquinas, enzimas y factores de

transcripción han recibido crecientes intereses para el tratamiento de muchas
enfermedades tales como las enfermedades cardiovasculares y los tumores
malignos

En los últimos años, se ha incrementado el interés por sistemas poliméricos de

tamaño submicrónico. Algunos nanogeles son capaces de regular la liberación de
fármacos en respuesta a estímulos externos. Esta nanoestructura ofrece muchas
características avanzadas como:

● Sistema de administración de fármacos (SAF)

● Simplicidad de formulación

● Estabilidad excepcional de la dispersión

● Almacenamiento en forma liofilizada

Los nanogeles son actualmente objeto de intensa investigación para la

administración y liberación controlada de fármacos, análogos de nucleósidos,
péptidos, proteínas, genes y vacunas.

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 Hipótesis

Desarrollar y caracterizar nanogeles de ácido hialurónico redox-sensibles e

intrínsecamente fluorescentes dirigidos a tumor de cáncer de mama en ratones.

Se desarrollaran gracias a soluciones de HA-OEG-Tet y MA-Cys-MA en acetona,

por métodos de UV.

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 Objetivos

Objetives Generales
Aplicación medicinal de nanogeles a tumores de cáncer de mama en ratones

Objetives Específicos
1) Síntesis de Nano geles con ácido hialuronico fluorescentes a través de UV

2) Obtener reacciones de polimerización del aminoácido Cisteína con

metacrilato

3) Síntesis de MA-Cys-MA

4) Formación de HA-NGs

5) Preparación y reducción de la capacidad de respuesta de los HA-NG

fluorescentes.
6) Encapsulación y liberación del CC.

7) Caracterización de HA-NGs

8) Penetración tumoral in vivo y eficacia terapéutica

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 Resultados y discusiones

Se demostró que los nanogeles de ácido hialurónico (HA-NG) sensibles a redox e

intrínsecamente fluorescentes exhibieron una carga altamente eficiente y una
administración dirigida de citocromo C (CC) al tumor de mama MCF-7 xenoinjertado
en ratones.

Las imágenes CLSM de las secciones de tumor MCF-7 mostraron que la mayoría
de los HA-NG (fluorescencia verde) colocalizados con vasos sanguíneos
(fluorescencia roja) a 1 h después de la inyección (Figura 6). Con el tiempo
extendido a 6 h, los NG se alejaron de los vasos sanguíneos y se ubicaron
principalmente en la vecindad de los vasos sanguíneos. En particular, los HA-NG
se diseminaron por todo el tumor a las 24 h después de la inyección, corroborando
que poseen una capacidad de penetración tumoral excepcional en xenoinjertos de
tumor MCF-7 humano.

El efecto antitumoral de CC-NG se investigó en ratones con tumor MCF-7. Los

ratones con un volumen tumoral de aproximadamente 30-60 mm3 se trataron
mediante inyección intravenosa de CC-NG a una dosis de 80 o 160 nmol CC
equiv./kg. Como se esperaba, los ratones administrados con PBS y los controles
CC libres mostraron una rápida progresión tumoral con un tamaño relativo del tumor
en el día 16 alcanzado 52 y 44, respectivamente (Figura 7A). La ligera diferencia de
tamaños de tumor entre PBS y los grupos CC libres indicaron que la administración
directa de proteínas terapéuticas produce un efecto antitumoral muy limitado
posiblemente debido a su rápida degradación in vivo, la absorción celular ineficiente
y el proceso de tráfico intracelular deficiente. Por el contrario, el crecimiento tumoral
fue significativamente inhibido por CC-NG en 80 y 160 nmol CC equiv./kg (Figura
7A).

La dosis de proteína más alta resultó en una regresión tumoral obviamente mejor.
En particular, los ratones tratados con CC-NG, como aquellos con PBS, no
mostraron pérdida de peso corporal (Figura 7B), lo que indica que los CC-NG tienen

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poca toxicidad sistémica. Por lo tanto, los CC-NG con alta estabilidad,
direccionamiento tumoral activo y liberación intracelular desencadenada exhibieron
una terapia eficaz de proteína contra el cáncer con efectos adversos mínimos. Es
razonable deducir que los HA-NG pueden emplearse como una nanoplataforma
decente para la administración dirigida al tumor de proteínas terapéuticas
intracelulares más potentes como GrB, apoptina y TRAIL.

(i) se forman a través de una reacción fotoclick "tetrazol-alqueno".

(ii) exhiben un excelente contenido de carga CC de hasta 40,6% en peso.

(iii) pueden dirigirse activamente y ser internalizados de manera eficiente por las
células cancerosas con alta expresión del receptor CD44.

(iv) pueden liberar rápidamente proteínas terapéuticas bajo la condición reductora

citoplasmática.

(v) exhiben fluorescencia intrínseca que puede emplearse para controlar su

captación celular in vitro y la penetración tumoral in vivo.

Ventajas de los nanogeles:

1. Altamente biocompatibles.

2. Biodegradables.

3. Respuestas no inmunológicas.

4. Buenas caracteristicas de transporte.

5. Aplicaciones en fármacos hidrofóbicos como hidrofílicos y solutos cargados.

6. Buenas capacidades de permeación debido al tamaño extremadamente

pequeño.

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 7. La liberación de la terapéutica puede regularse mediante densidades de
reticulación.

Desventajas de los nanogeles:

1.Técnica costosa para eliminar completamente los solventes y surfactantes al final

del proceso de preparación.

2. Pueden quedar restos de tensoactivos o monómeros y pueden impartir efectos

adversos.

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 Metodologia

Reacción de amidación entre el Tetrazol y la tridecanodiamina (TTDA) seguido de

injerto al HA.

El HA disuelto en agua desionizada se activó con EDC y NHS a pH 6.0 por 30 min.
15 ml de DMSO y una solución de NH2-OEG-Tet en DMSO se agregaron
secuencialmente

Síntesis de MA-Cys-MA
Cys (1.2 g, 5.0 mmol) en NaOH (1.5 M, 10 mL) fue añadido lentamente al MAC (2.0
mL, 20.6 mmol) en DCM (10 mL) at 0 °C.

Formación de HA-NGs
Los HA NGs se prepararon añadiendo gota a gota una solución acuosa de HA-OEG-
Tet y MA-Cys-MA en acetona, seguido de irradiación UV durante 90 s.

Irradiación UV (320-390 nm, 37.5 mW / cm2) 90 segundos, seguido de la

evaporación del disolvente de acetona para obtener la dispersión de HA-NG en
agua.

La reacción de reticulación fotoclick entre los grupos tetrazol de HA-OEG-Tet y los

grupos metacrilato de MA-Cys-MA se siguió con UV.

Preparación y reducción de la capacidad de respuesta de los HA-

NG fluorescentes.

Irradiado con UV (320-390 nm, 37,5 mW / cm2) durante 90 s seguido de la

evaporación del disolvente de acetona para obtener la dispersión de HA-NG en
agua.

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Encapsulación y liberación del CC.

Los HA NG cargados con CC (CC-NG) se obtuvieron de añadir una cierta cantidad

de CC (contenidos de carga teóricos que varían de 30%, 40% a 50%) en la solución
acuosa, antes de inyectar en acetona.

Caracterización de HA-NGs

Espectros de absorción UV de nanodroplets de HA con y sin radiación UV. El pico

de absorción a 275 nm deriva de los grupos tetrazol

tamaño y distribución de tamaños de HA-NG medidos por DLS y TEM. La barra de

escala en la micrografía TEM representa 100 nm.

espectros de emisión de fluorescencia de nanodroplets de HA y HA-NG (λex = 350

nm). El recuadro mostró la imagen de fluorescencia de los HA-NG;

cambio de distribución de tamaños de HA-NG contra la dilución o GSH 10 mM a 37

° C.