Вы находитесь на странице: 1из 289

ПРЕДИСЛОВИЕ

В настоящее время из всех биологических дисциплин наиболее интенсивно развивающейся является генетика. Это обусловлено тем, что только новые генетические знания могут обеспечить дальнейший прогресс в области сельского и лесного хозяйства, микробиологической промышленности, медицины и экологии. Осознать это может только человек, знакомый с основами общей генетики и представляющий, что объяснение многих биологических явлений может быть достигнуто только на основе генетических законов. Знание основ генетики требуется и в быту, поскольку XXI век — это время стремления к массовому клонированию животных, получению трансгенных растений и животных, созданию генно-модифицированных продуктов и лекарств, исправлению врожденных и наследственных дефектов у человека и т.п. Идея написания данного учебного пособия возникла на основе опыта многолетнего преподавания автором курса «Общей генетики» студентам агрономического и агрохимического факультетов Российского государственного аграрного университета (РГАУ) – МСХА им. К.А.Тимирязева. Необходимость его появления обусловлена нехваткой учебников и учебных пособий, в которых в краткой форме излагались бы основы генетики с оптимальным числом рисунков, диаграмм и таблиц, позволяющих понять логику изложения лекционного материала и пользоваться собственными конспектами. Последнее часто затруднено, так как даже самый прилежный студент не успевает перерисовать на лекции все рисунки, схемы и таблицы. Для более глубокого изучения курса «Общей генетики» в целом и отдельных ее разделов в конце книги приведен соответствующий перечень учебных и научных изданий. Надеюсь, что предлагаемая читателям книга будет полезна не только студентам, но и всем тем, кто приступает к изучению основ генетики. Выражаю благодарность коллегам по лаборатории генетики растений Института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН и кафедры генетики РГАУ – МСХА им. К.А.Тимирязева за

3

помощь в разработке плана настоящего издания и подготовке его к печати Особую признательность выражаю сотрудникам лаборатории Т.В. Коростылсвой, Л.А. Оболенковой, Е.В. Елизаровой и доцентам кафедры генетики А.А.Соловьеву и Л.С.Большаковой, без помощи которых данное издание вряд ли было бы осуществлено. Буду признателен читателям за замечания и пожелания по содержанию данного пособия, которые прошу направлять по адресу: 124550, Москва, ул. Тимирязевская, 49, РГАУ-МСХА им. К.А.Тимирязева, кафедра генетики. Е- mail: genetics@timacad.ru. pukhalsk@vigg.ru В.А. Пухальский

4

Лекция 1.

ВВОДНАЯ

Генетика – наука, изучающая наследственность и изменчивость живых организмов. Как и любой другой науке, ей присущи свои методы исследования. Это:

генетический анализ;

цитогенетические методы;

анализ действия генов в онтогенезе;

молекулярные методы.

Данные, полученные с помощью этих методов, дают возможность понять основы видового и внутривидового разнообразия живых существ, населяющих нашу планету. Это разнообразие складывается под влиянием как наследственных факторов (гены, плазмогены), так и условий жизни организма. Последнее хорошо иллюстрирует рисунок 1.1, на котором представлена форма листьев у стрелолиста, произрастающего в различных условиях. Если же семена с этих растений высеять в одинаковых условиях, то и листья у всех потомков будут одинаковыми.

всех потомков будут одинаковыми. Рисунок 1.1. Изменчивость формы

Рисунок 1.1. Изменчивость формы листа у стрелолиста, произрастающего в различных условиях: А - полное погружение, Б - частичное затопление, В – берег.

Это только один пример, а их можно наблюдать в природных условиях бесчисленное количество. Естественно, что задумываться над всеми этими вопросами человек начал на заре

3

своего становления, и основание для этого ему давали наблюдения за животными и растениями в дикой природе, при одомашнивании растений и животных, а также наблюдения над самим собой и своими соплеменниками. Сейчас трудно судить о том, какие гипотезы по всем этим вопросам выдвигали люди много тысяч лет назад и к каким умозаключениям они приходили, однако результаты их деятельности уникальны. Это и селекция полбы (T. dicoccum Schuebl.), занимавшей наибольшие площади посевов пшеницы в Европе в каменном веке (7 т.л. до н.э.), и финиковой пальмы, и, наконец, создание арабской породы лошадей. И, что самое уникальное, полба и финиковая пальма, и арабские лошади служат человеку по сей день. Эти результаты тем более впечатляют, если вспомнить, что в Европе до начала ХVII в. даже не знали о существовании пола у растений. Первое экспериментальное доказательство наличия пола у растений мы находим в труде немецкого ботаника Рудольфа Я. Камерариуса ―Записки о поле у растений‖(1694 г.), сравнивавшего половые органы растений и животных. Однако сомнения по этому вопросу остались и приблизительно через 70 лет (1759 г.). Российская Академия наук объявила конкурс на эту же тему, а в 1760 г. премия была присуждена шведскому ботанику К.Линнею за труд ―Исследование пола у растений‖. И в том же году И. Кельрейтер (1733-1806), работавший в Российской Академии наук получил первый гибрид* между двумя видами табака. Самое важное в этих работах – доказательство факта передачи наследственных признаков через пыльцу, как и через яйцеклетку, т.е. того, что обе эти структуры обеспечивают материальную преемственность между поколениями. В последующем эта преемственность получила название наследственность. Таким образом, под наследственностью понимается процесс воспроизведения организмами в ряду последовательных поколений одинаковых признаков и свойств. Однако на чем основано наследование признаков, свойственных родителям и прародителям, долгое

* ‖первый ботанический мул‖, как его назвали по аналогии с гибридом между лошадью (2n=60) и ослом (2n=66).

4

время оставалось неизвестным. Выдвигались различные гипотезы, которые следует отнести к умозрительным. Наиболее широкую известность получила выдвинутая Ч. Дарвином ―временная гипотеза пангенезиса.‖ (рис. 1.2), изложенная в его книге ―Изменения животных и растений в состоянии приручения‖ (1868 г.). Сущность этой гипотезы заключается в следующем: во всех частях тела клетки отделяют «зародышки», или геммулы, которые в большом количестве скапливаются в органах размножения (яйцеклетки, сперматозоиды, спермии, почки). При возникновении нового организма эти геммулы превращаются в такие клетки, из которых они происходят т.е. по мнению Ч. Дарвина, не организм как целое воспроизводит свою природу, а каждая единица воспроизводит себе подобную. Свою гипотезу он обосновал в трех основными положениях:

при половом и бесполом размножении возникают одинаковые организмы, так как в гаметах и в почках (растения) содержатся одинаковые геммулы;

факты атавизма объясняются тем, что некоторые геммулы передаются в покоящемся состоянии и переходят в активное состояние через ряд поколений;

приобретенные организмом в процессе его развития признаки и свойства наследуются.

признаки и свойства наследуются. Рисунок 1.2. Теория пангенезиса

Рисунок 1.2. Теория пангенезиса Ч. Дарвина (Э.Стил, Р.Линдли, Р.Бландэн, 2002, с. 25).

5

Следует отметить, что последнее положение перекликается с теорией эволюции Ж.Б. Ламарка, обосновавшего в своей книге ―Философия зоологии‖ (1809 г.) принцип, согласно которому признаки, приобретенные организмом в течение его жизни, могут наследоваться. Теории Ч.Дарвина противоречила теория «зародышевой плазмы» А.Вейсмана (1885), по которой зародышевую плазму несут только половые клетки, остальные же клетки организма (соматические) лишены этой плазмы. Поэтому изменения, возникающие в них изменения в процессе развития организма, не могут передаваться потомству (рис. 1.3)

передаваться потомству (рис. 1.3) Рисунок 1.3. Барьер Вейсмана

Рисунок 1.3. Барьер Вейсмана (Стил, Линдли, Бландэн, 2002, с.28)

Несмотря на умозрительные основы своей теории, А.Вейсман проводил много экспериментов по ее доказательству и как ответ критикам (неоламаркистам). Наиболее известны его эксперименты по отрубанию хвостов у крыс в течение 22 поколений, что так и не привело к рождению бесхвостых крысят. Здесь следует отметить, что, по Ж.Б.Ламарку, наследуются только изменения индуцированные реакцией организма на условия внешней среды. Следует иметь в виду, что все споры велись и ведутся вокруг модификационной изменчивости, т.е. изменений, возникающих в результате взаимодействия наследственных факторов (генотип) со средойи не передающихся по наследству. Существует и второй тип изменчивости -

6

мутационная, возникающая спонтанно или под действием мутагенных факторов. Возникшие в этом случае изменения в отличие от модификационных передаются по наследству. Споры об истинности теории Ж.Б.Ламарка ведутся со времени ее появления и не прекращаются до сих пор. Здесь можно вспомнить большой период противостояния дарвинистов и классических генетиков в Европе, Т.Д. Лысенко и классических генетиков в СССР. Однако, сегодняшние данные, полученные молекулярными генетиками при изучении иммуногенетики (Т. Стил, 1979; Э. Стил, Р. Линдли, Р. Бандэн, 1998 г.) заставляют задуматься над вопросом, так ли уж были не правы Ч.Дарвин, Ж.Б. Ламарк и их последователи. Будущее покажет.* Естественно, что умозрительные теории наследственности в какой-то степени подталкивали исследователей к осмысливанию наблюдаемых явлений в живой природе. Однако для построения действенной теории нужны были специальные экспериментальные исследования, которые с блеском и осуществил Г.Мендель. Г.Мендель (1822-1884 гг.) – монах Августинского монастыря в австрийском г. Брюнне (ныне г. Брно, Чехия), проводил опыты с гибридами гороха и результаты опубликовал в изданиях Общества естествоиспытателей в Брюнне в 1865г. под названием ―Опыты над растительными гибридами‖ («Versuche uber Pflanzenhybriden»).** Однако эта работа, открывающая новую эпоху в учении о наследственности и закладывающая фундамент современной генетики, оставалась неизвестной для научной общественности до 1900 г., то есть до переоткрытия законов Менделя (см. разделы 4, 5), давшего начало интенсивным экспериментальным исследованиям по изучению материальных основ наследственности и изменчивости,

*Здесь мы остановились на двух (Ч.Дарвин, А.Вейсман) наиболее распространенных теориях. Имелись и другие умозрительные теории: ―теория корня‖ (Гальтон, 1875); ―теория идиоплазмы‖(Негли, 1884); ―естественная наследственность‖(Люка, 1847); ―Законы консервативной и прогрессивной изменчивости― (Геккель, 1866) и др. **Полный перевод на русский язык работы Г. Менделя впервые был осуществлен крупнейшим тритикологом проф. К.А. Фляксбергером в 1910 г.

7

проводившиеся учеными в разных стран и позволившим впоследствии расшифровать действие генов на молекулярном уровне. Оказалось, что гены передаются из поколения в поколение в форме молекул ДНК (и только у части вирусов – молекул РНК). У всех живых организмов на нашей планете:

наследственная информация зашифрована в

нуклеотидной последовательности ДНК (крайне редко РНК);

реализация наследственной информации

происходит путем синтеза белка, при котором последовательность аминокислот детерминируется нуклеотидной последовательностью;

генетический код, связывающий

последовательность нуклеотидов ядерной ДНК с последовательностью аминокислот, един для всех живых организмов, будь то бактерии, растения, животные или человек. На сегодня генетика* заняла ведущее положение в биологии, ибо только на основе генетических данных могут быть расшифрованы и объяснены биологические явления, свойственные живой природе. Генетические исследования в настоящее время ведутся на четырех уровнях: молекулярном, клеточном, организменном и популяционном по многим направлениям, таким, как молекулярная генетика, цитогенетика, генетика онтогенеза, генетика злокачественных новообразований, эволюционная и популяционная генетика, иммуногенетика, генетика изоферментов, генетика поведения, частная генетика микроорганизмов, растений и животных, генетика человека, экологическая генетика и т.д. По каждому из этих направлений получены уникальные результаты на уровне, как фундаментальных исследований, так и приложимости к прикладным исследованиям, как-то (селекции

микроорганизмов, растений, животных), и человеческому сообществу в целом.

* генетика - термин

предложен У. Бетсоном в 1907 г.

8

Лекция 2. ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ НАСЛЕДСТВЕННОСТИ.

Клеточное строение организмов.- Строение растительной клетки. – Хромосимы, их типы и строение. – Деление растительной клетки, митоз. – Отклонения от типичного протекания митоза. - Ключевые слова и понятия.

2.1. Клеточное строение организмов. Клетка была открыта Р.Гуком в 1665 г., а клеточное строение растений итальянцем М.Мальпиги (1675 г.) и англичанином Н.Грю (1682 г.). Теорию клеточного строения организмов разработали значительно позднее М.Я.Шлейден (1938 г.) и Т.Шванн (1839 г.). Окончательное ее оформление следует отнести к 1858 г., когда Р. Вирхов сформулировал принцип: ‖каждая клетка из клетки‖. Развитию клеточной теории способствовало совершенствование методов изучения клетки, в первую очередь микроскопических. Живые организмы, имеющие клеточное строение, делятся на два типа. Первый тип - прокариоты (предъядерные), к которым относятся бактерии. Особенность прокариотической клетки - отсутствие ядра и органелл, окруженных мембранами. Размер бактерий колеблется от 0,2- 0,6 мкм до 2 - 10 мкм. По форме они подразделяются на сферические (кокки), палочковидные и извитые (спириллы) и нитевидные. Как правило, единственная хромосома (нуклеоид) представляет собой молекулу ДНК, не связанную с каким-либо белком (исключение составляют архе- и цианобактерии, у которых нуклеоид связан с гистонами). В генетических исследованиях из бактерий чаще всего используют кишечную палочку (Escherichhia coli), возбудителя бактериальной пневмонии (Pneumococcus pneumoniae) и цианобактерии. (Cyanobacterium). Бактериям свойственно прямое деление клетки, которое происходит после редупликации хромосомы. Второй тип живых организмов - эукариоты (собственно ядерные). К ним относятся как одноклеточные, так и многоклеточные организмы. В генетических исследованиях чаще всего используют из одноклеточных – дрожжи

9

(Saccharomyces cerevisiae), инфузорию (Paramecium aurelia) и водоросль хламидомонаду (Chlamidomonas reinhcrdi), а из грибов - Neuraspora crassa и Aespergillus nidulans. Классическими генетическими объектами среди растений являются арабидопсис (Arabidopsis taliana), горох (Pisum sativum) и кукурузу (Zea mays). Много важных исследований выполнено и на других сельскохозяйственных и декоративных культурах. Из древесных пород абсолютное первенство в генетических экспериментах принадлежит различным видам хвойных. Из насекомых классическим объектом генетических исследований служит плодовая мушка дрозофила (Drosophila melanogaster), а из позвоночных животных - домовая мышь (Mus musculus).

2.2. Строение растительной клетки. Растительная клетка, как и животная, имеет очень сложное строение (рис. 2.1). Ее основные составные части - оболочка, цитоплазма и ядро Оболочка (первичная оболочка) меристематической клетки состоит из гемицеллюлезы и фибрилл целлюлозы. Оболочки двух смежных меристематических клеток плотно соединены тонким слоем пектинового межклеточного вещества. Первичные оболочки соседних клеток вместе с межклеточным веществом образуют трехслойную клеточную стенку толщиной от 0,5 до 1 мкм. В процессе дифференциации клетки оболочка постепенно утолщается за счет вторичных отложений. Оболочка растительной клетки имеет поры, через которые от клетки к клетке проходят цитоплазменные тяжи (плазмодесмы), соединяющие клетки растения. Цитоплазма состоит из полужидкой массы и органелл. В растительной клетке это эндоплазматическая сеть, или эндоплазматический ретикулум, в первую очередь рибосомы, митохондрии, аппарат Гольджи, пластиды и вакуоли. Эндоплазматическая сеть представляет собой внутриклеточную мембранную структуру, в которой синтезируются белки.

10

Рибосомы - участвуют в синтезе белка. У всех растительных и животных организмов они построены одинаково. Рибосомы состоят из двух субъединиц - большой и малой с общим диаметром около 20 нм и константами седиментации соответствено 60S и 40S. В состав рибосомы входят четыре молекулы РНК, различающиеся по длине: от 120

11

Рисунок 2.1. Схема строения растительной клетки: 1 - 2 стенки клетки;

Рисунок 2.1. Схема строения растительной клетки: 1 - 2 стенки клетки; 3 - пора в оболочке; 4 - оболочка ядра; 5 – эндоплаз- матическая сеть; 6 - аппарат Гольджи; 7 - ядро с ядрышком; 8 - митохондрия; 9 - капли жира; 10 - вакуоль; 11 - крахмальное зерно; 12 - хлоропласт; 13 – пластида (Атабекова, Устинова, 1967. С. 15).

до 5 000 нуклеотидов, и рибосомные белки. Число рибосом в клетке, как правило, чрезвычайно велико (до 10 7 ). Митохондрии – клеточные органеллы, осоновная функция которых связана с синтезом аденозинтрифосфата (АТФ). Чаще всего представляют собой гранулы, реже нитевидные образования. Длина гранулярных митохондрий колеблется от 0,5 мкм до 7 мкм, а нитевидных - может достигать 60 мкм. Митохондрии состоят из наружной и внутренней мембран и системы внутренних гребней-крист. В их состав входят липопротеиды и нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК). ДНК митохондрий по своему строению напоминает строение ДНК прокариот. В митохондриях содержатся мелкие

12

митохондриальные рибосомы с общей константой седиментации 50S 70S. Аппарат Гольджи. известен в клетках животных и человека с 1898 г., а в растительных клетках был открыт только в 1957 г. Представляет собой систему уплощенных цистерн, маленьких пузырьков и вакуолей, ограниченных мембранами. Выполняет секреторные функции и участвует в построении клеточной перегородки при делении растительной клетки, вырабатывая полисахариды матрикса. Пластиды – органеллы, наличие которых служит одним из основных отличий растительной клетки от животной. К ним относятся хлоропласты, лейкопласты и хромопласты. Хлоропласты осуществляют функции фотосинтеза, лейкопласты - синтез крахмала из сахаров, хромопласты синтез каратиноидов каротин, ксантофил). В специальных тканях лейкопласты внутри себя откладывают крахмал. Такие лейкопласты получили название амилопласты. Генетическая система хлоропластов представлена молекулами ДНК. При этом в отличие от ядерной ДНК хлоропластов не образует комплексов с гистонами. В хлоропластах выявлены все типы РНК, а также рибосомы (общая константа седиментации 50S 70S), участвующие в синтезе хлоропластных белков. Ядро имеет сферическую форму и состоит из ядерного сока (кариолимфа), ядерного белкового матрикса, хромосом и ядерной оболочки.

У растений ядро клетки включает также небольшое сферическое тельце, получившее название ядрышка. У некоторых видов растений в ядрах клеток имеется несколько ядрышек.

Диаметр ядра у высших организмов обычно колеблется от 10 до 30 мкм. Основная масса ядра (~ 80%) состоит из комплекса нуклеиновых кислот с низкомолекулярными белками – гистонами. Комплекс носит название нуклеопротеид или нуклеогистон. В ядре есть и другие высокомолекулярные белки, связанные в комплекс с липидами (липопротеиды) или с нуклеогистоном.

13

2.3. Хромосомы, их типы и строение.

Наиболее

важной

составной

частью

ядра

являются

хромосомы.

Им

принадлежит

ведущая

роль

в

явлениях

ведущая роль в явлениях Рисунок 2.2 Типы метафазных

Рисунок 2.2 Типы метафазных хромосом в зависимости от положения центромеры, слева направо – метацентрические, субметацентрические, субакроцентрические, акроцентрические, телоцентрические (схема, по: Levan, 1968).

наследственности. Хромосомы в момент деления клетки хорошо видны в световой микроскоп. Хромосомы неделящихся ядер не видны, т.к. деконденсируются. В то же время показано, что чем выше степень деконденсации хромосом, тем активнее протекают метаболические процессы в самом ядре. Морфологически хромосомы растений чаще всего имеют нитевидную или палочкообразную форму. Большинство хромосом первичной перетяжкой разделено на два плеча. Под микроскопом первичная перетяжка представлена светлой (не окрашенной) зоной, получившей название центромера. Она играет основную роль в перемещении хромосом при делении ядра. Центромера на каждой из хромосом занимает строго определенное место. По положению центромеры хромосомы делятся на метацентрические (приблизительно равноплечие), субметацентрические (неравноплечие), субакроцентрические, акроцентрические (головчатые) и телоцентрические, у которых центромера сдвинута к одному из концов (рис. 2.2). Встречаются хромосомы, у которых имеется и вторичная перетяжка. Она, как

14

правило, располагается у дистального конца хромосомы и отделяет небольшой участок хромосомы, получивший название спутник. Вторичная перетяжка не участвует в движении хромосом при ядерном делении. Вторичные перетяжки получили название ядрышковых организаторов, т.к. в этом месте происходит образование ядрышка. Концевые участки хромосом получили название теломерных. Теломерные концы хромосом препятствуют соединению одной хромосомы с другой.

одной хромосомы с другой. Рисунок 2.3 Диплоидный набор

Рисунок 2.3 Диплоидный набор метафазных хромосом в клетке Crepis capilaris (2n=6). Одинаковыми буквами помечены гомологичные хромосомы. (Лобашов, 1967. С. 9).

Каждому из населяющих нашу планету видов растений и животных свойственно строго определенное число хромосом, обозначаемое как 2n (табл. 2.1). В половых клетках число хромосом уменьшено в два раза (гаплоидное число) и обозначается n. В соматических клетках организма каждая из хромосом имеет пару, идентичную как морфологически (рис. 2.3), так и генетически. Исключение из этого правила у гетерогаметных особей составляют половые хромосомы. Специфический для определенного вида набор хромосом по числу и структуре получил название кариотип.

15

Графическое изображение кариотипа, показывающее его структурные особенности, называется идиограммой (рис. 2.4).

идиограммой (рис. 2.4) . Рисунок 2.4. Идиограмма хромосом

Рисунок 2.4. Идиограмма хромосом сорта твердой пшеницы Капелли (B Giorgi 1964 с модификациями)

16

Таблица 2.1

Число хромосом некоторых видов растений

№ п/п

Вид

Число хромосом

(2n)

1.

Пшеница мягкая (Triticum aestivum)

42

2.

Пшеница твердая (Triticum durum)

28

3.

Ячмень (Hordeum vulgare)

14

4.

Рожь (Secale cereale)

14

5.

Овес (Avena sativa)

42

6.

Кукуруза (Zea mays)

20

7.

Рис (Orysa sativa)

24

8.

Горох (Pisum sativum)

14

9.

Бобы конские (Vicia faba)

12

10.

Соя (Glycine hispida)

28

11.

Арабидопсис (Arabidopsis thaliana)

10

12.

Люпин узколистный (Lupinus angustifolius)

40

13.

Чечевица (Lens esculenta)

36

14.

Лен (Linum usitatissimum)

30

15.

Картофель (Solanum tuberosum)

48

16.

Лук (Allium cepa)

16

17.

Свекла (Beta vulgaris)

18

18.

Подсолнечник (Helianthus annus)

34

19.

Топинамбур (Helianthus tuberosus)

102

20.

Салат (Salix alba)

18

21.

Томат (Lycopersicon esculentum)

24

В последние годы получил распространение метод дифференциального окрашивания хромосом. При этом на каждой из хромосом прокрашиваются специфические, характерные для нее гетерохроматиновые участки (бэнды), что значительно облегчает идентификацию отдельных хромосом кариотипа (рис.

2.5).

Хромосомы, по которым отличаются особи разного пола, получили название половых хромосом, а все остальные хромосомы – аутосом.

17

Рисунок 2.5 Дифференциально окрашенные хромосомы T. durum (фото

Рисунок 2.5 Дифференциально окрашенные хромосомы T. durum (фото любезно предоставлено Е. Бадаевой).

предоставлено Е. Бадаевой). Рисунок 2.6 Схема

Рисунок 2.6 Схема субметацентрической хромосомы. А – внешний вид: 1 – спутник; 2 – вторичная перетяжка; 3 – центромера; 4 – волокно веретена. Б – внутреннее строение: 1 – две хромонемы (а – большая и б малая спирали). (Робертис, Новински, Саэрс – из Атабекова, Устинова, 1967, с. 70.

Внутреннее строение каждой хромосомы чрезвычайно сложно. По химическому составу хромосомы состоят из ДНК (до 40%), РНК и белков, из которых в среднем около 60% приходится на гистоны. Строение метафазной хромосомы при исследовании с

18

помощью светового микроскопа представляется следующим образом (рис. 2.6). Каждая хромосома состоит из двух хроматид, спирально закрученных и располагающихся параллельно оси хромосомы. Для прокрашивающихся в интерфазном ядре участков хромосом употребляется термин ―хромонема- красящаяся нить. Утолщения на хромонемах получили название хромомер. Особенность вышеописанного строения хромосом зависит от

уровня компактизации хроматина (комплекс ДНК с гистонами), который меняется при переходе от интерфазного состояния хромосом к метафазному. Процесс компактизации хроматина проходит по Ченцову (1995 г.) следующие уровни (рис. 2.7). Первый, получивший название нуклеосомный, определяет скручивание ДНК по поверхности гистоновой сердцевины.

– объединение нескольких

Второй

– объединение нескольких Второй Рисунок 2.7. Схема различных

Рисунок 2.7. Схема различных уровней компактизации хромосом (Ченцов, 1995, с. 129).

нуклеосом (до 10) в бусину называется нуклеомерный. Третий уровень – это объединение скрепками из негистоновых белков фибрилл дезоксирибонуклеопротеида в петлевой домен, называемый хромомер. Четвертый уровень – это образование

19

хромонем, которое происходит при сближении в линейном порядке хромомер, и образование толстой нити (0.1 – 0.2 мкм). Далее, по-видимому, хромонема укладывается в виде спирали в хроматиде, хотя весьма вероятно, что это еще один уровень ―петлистых структур‖. Размеры, которые приобретают хромосомные фибриллы в результате компактизации, представлены на рис. 2.8.

, представлены на рис. 2.8. Рисунок 2.8. Размеры хромосомных

Рисунок 2.8. Размеры хромосомных фибрилл (Russell, 1998 из Жимулев, 2002, с. 309).

2.4. Деление растительной клетки. Деление растительной клетки начинается с деления ядра. Деление ядра соматической клетки носит название митоз и протекает в меристематических тканях. В результате этого

20

деления из одной клетки образуются две дочерние, имеющие то же число хромосом, какое было у родительской клетки. Между двумя клеточными делениями проходит определенный период, во время которого внешне в поле зрения микроскопа клетка находится в состоянии видимого покоя (интерфаза). Однако это ―покой‖ только внешний, а в клетке протекают интенсивные процессы на молекулярном уровне, подготавливающие вновь образовавшиеся клетки к новому делению. Период от окончания одного митоза до окончания следующего получил название клеточный цикл (рис. 2.9).

название клеточный цикл (рис. 2.9). Рисунок 2.9 Клеточный цикл: G 1 –

Рисунок 2.9 Клеточный цикл:

G 1 – пресинтетический период; S - синтетический период; G 2 – постсинтетический период; П – профаза; М – метафаза; А – анафаза; Т – телофаза.

Он включает следующиеп периоды. Пресинтетический (G 1 ), в течение которого продолжается рост клетки, синтезируются специфические белки и РНК.

Синтетический (S), характеризуется синтезом ДНК (ее количество в клетке удваивается) и гистонов. Удвоение содержания ДНК связано с репликацией хромосом. В резульиаие в конце этого периорда каждая из хромосом состоит из двух хроматид. Постсинтетический (G 2 ) характеризуется накоплением некоторых веществ и энергии, необходимых для протекания митоза. В этот период начинаются процессы конденсации хромосом. Перед расхожлением в дочерние клетки хромосомы постепенно переходят в метаболически неактивное состояние. Митоз процесс деления клетки, который подразделяется на следующие стадии:

21

Рисунок 2.10. Схема митоза в растительной клетке: 1 – интерфаза; 2 –

Рисунок 2.10. Схема митоза в растительной клетке: 1 – интерфаза; 2 – профаза; 3 – метафаза; 4 – анафаза; 5 – телофаза; 6 – цитокинез.

профаза, метафаза, анафаза и телофаза (рис. 2.10). Профаза митоза характеризуется продолжением процесса конденсации хроматина, в результате чего хромосомы становятся видимыми в световой микроскоп. На этой стадии происходит процесс разрушения ядрышка (ядрышек). Метафаза, к началу которой ядерная мембрана (оболочка) разрушается, а хромосомы достигают максимального уровня конденсации. В то же время образуется веретено деления, состоящее из пучков протеиновых нитей, идущих от полюса к полюсу (опорные) и от полюсов к центромерам хромосом (тянущие). В результате хромосомы располагаются перпендикулярно к нитям веретена на равном удалении от полюсов, образуя метафазную пластинку. Анафаза. На этой стадии центромеры, удерживающие сестринские хроматиды, делятся в продольном направлении и хроматиды (теперь это самостоятельные хромосомы) под действием тянущих нитей веретена начинают движение к полюсам. Деление центромер происходит синхронно. К концу анафазы в экваториальной плоскости клетки на опорных нитях веретена образуются небольшие узелки, которые в дальнейшем (по завершению телофазы) сливаются и дают начало клеточной перегородке. Телофаза. Во время этой фазы начинается деконденсация хромосом, формируются ядрышки и ядерная мембрана. Продолжительность каждого из периодов клеточного цикла зависит от типа клеток, в которых проходит митоз. Так, по данным К. Свенсона и П. Уэбстера, в кончиках боковых корешков конских бобов (Vicia faba) средняя продолжительность

22

клеточного цикла в меристематических клетках при 22 о С составила 14 часов: период G 1 продолжался 2,5 ч., период S - 6 ч., период G 2 – 3,5 ч. и собственно митоз 2 ч. Все процессы, протекающие в период клеточного цикла контролируются определенными генами. Мутации этих генов, что было показано в опытах на дрожжах и других низших эукариотах, приводят к нарушению клеточного цикла на разных его этапах. Митоз свойственен всем эукариотам. Его биологическое значение заключается в том, что в результате все дочерние клетки имеют одинаковое с родительской число хромосом. Индивидуальность хромосом полностью сохраняется. В этом состоит и генетическое значение, ибо каждая из возникающих в результате деления клеток несет полный набор генов, свойственных инициальной клетке. Последнее очень важно при все более широком внедрении в практику биотехнологических методов, в результате которых из отдельных соматических клеток развиваются нормальные фертильные растения.

2.5. Отклонения от типичного протекания митоза.

Помимо митоза имеются еще три типа деления ядра соматических клеток: эндомитоз, политения и амитоз. Эндомитоз. При этом типе деления ядерная оболочка не распадается. Редупликация хромосом происходит так же, как при митозе. Таким образом, увеличивается многократно число хромосом в ядре и размеры самого ядра. Эндомитоз впервые был описан для клеток тапетума шпината (Spinacia sativa), а затем был обнаружен в антиподах семейств сложноцветных (Compositae) и лютиковых (Ranunculaceae).

23

Рисунок 2.11 Политенные хромосомы из клеток слюнных желез Drosophila

Рисунок 2.11 Политенные хромосомы из клеток слюнных желез Drosophila melanogaster (Tamarin, 1999, p. 182).

Политения. Политению можно рассматривать как частный случай эндомитоза. При политении образуются гигантские хромосомы за счет многократной редупликации хроматид, но без разделения центромеры. При этом степень конденсации хроматид меньше, чем у митотических хромосом. Хроматиды плотно прилегают друг к другу, при этом хромомеры многочисленных хроматид образуют поперечные диски и пуффы (рис. 2.11, 2.12). Впервые политенные хромосомы были обнаружены в слюнных железах личинки комара, а затем и в ядрах эндосперма и антипод различных семейств растений.

различных семейств растений. Рисунок 2.12. Схема образования

Рисунок 2.12. Схема образования гигантских политенных хромосом. (Du Praw, 1970 – по S. Borojevic, K. Borojevic, 1976, p. 40).

24

Амитоз или прямое деление ядра. При амитозе ядро делится на две части перетяжкой. Затем происходит разделение цитоплазмы клетки и возникает клеточная перегородка. Амитотическое деление приводит к неравномерному распределению ДНК в дочерних клетках. Амитоз свойственен, как правило, дифференцированным тканям, таким как клетки стенок завязи, крахмалообразующие клетки клубней картофеля, клетки перисперма и др.

анафаза аппарат Гольджи веретено деления амилопласты амитоз

генофор

6. Ключевые слова и понятия. митохондрии нуклеогистон нуклеопротеид пластиды политения прокариоты профаза

гаплоидный набор хромосом

рибосомы

диплоидный набор хромосом

телофаза

идиограмма

хлоропласты

интерфаза

хромомер

кариолимфа

хромосома

кариотип

центромера

клеточный цикл

цитоплазма

лейкопласты

цитокинез

метафаза

эндомитоз

митоз

эукариоты

25

Лекция 3. ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ НАСЛЕДСТВЕННОСТИ.

Мейоз. - Генетический контроль мейоза. - Генетическое значение мейоза. – Микроспорогенез и развитие мужского гаметофита. – Мегаспорогенез и развитие женского гаметофита. – Типы размножения растений. – Оплодотворение, развитие эндосперма и зародыша. – Явление ксенийности. – Апомиксис.

1. Мейоз. Мейоз или редукционное деление – представляет собой особый тип деления клеток, характерный только для спорогенных тканей. При этом число хромосом в дочерних клетках уменьшается вдвое (редукция числа хромосом). Мейозу предшествует интерфаза, которая аналогична таковой при митозе. В S-период интерфазы происходит редупликация хромосом, поэтому хромосомы, вступающие в прцесс мейотического деления, состоят из двух хроматид. Мейоз (рис. 3.1) состоит из двух ядерных делений, которые следуют одно за другим.

При первом делении (мейоз I) число хромосом в клетке уменьшается в два раза. Второе деление (мейоз II) протекает по типу митоза. Как и при митозе, первое и второе деления мейоза подразделяются на следующие фазы: профаза, метафаза, анафаза и телофаза. Соответственно эти фазы обозначают: метафаза I, метафаза II, анафаза I и т.д. Мейоз I начинается с профазы I. Это наиболее продолжительная фаза мейоза. Она, в свою очередь, подразделяется на стадии лептотена, зиготена, пахитена, диплотена и диакинез. На стадии лептотены в ядре появляются слабоспирализованные хромосомы. Постепенно они приобретают нитевидную форму. Зиготена начинается с постепенного

26

Рисунок 3.1 Схема мейоза у покрытосеменных растений: 1 - интер -

Рисунок 3.1 Схема мейоза у покрытосеменных растений: 1 - интер- фазное ядро; 2 - 5 профаза I (2 - лептотена; 3 - зиготена; 4 - пахитена; 5 – диакинез); 6, 7 – метафаза I; 8 - анафаза I; 9 – интеркинез (диада микроспор); 10 - метафаза II; 11 - анафаза II; 12 - телофаза II. (Атабекова, Устинова, 1971. с. 99).

27

попарного соединения (конъюгация, синапсис) по длине параллельно уложенных гомологичных хромосом. Соединенные попарно хромосомы образуют биваленты. В связи с тем, что перед началом мейоза произошла редупликация хромосом, каждый бивалент состоит из четырех хроматид. Функцию синапсиса выполняет синаптонемный комплекс. Синаптонемный комплекс белковое образование (рис. 3.2) входящее в состав бивалента и имеет вид трехслойной ленты, располагающейся между конъюгирующими хромосомами. Синаптонемный комплекс формируется постепенно по принципу застежки ―молнии‖ на протяжении всей стадии зиготены. Образование бивалентов создает предпосылки для возможности обмена гомологичными участками между гомологичными хромосомами (кроссинговер), что представляет важное генетическое событие. Одновременно продолжается процесс конденсации хромосом. Пахитена – это стадия, на которой синаптонемный комплекс сформирован по всей длине хромосом (стадия стабильного синапсиса). Она характеризуется продолжающимся утолщением хромосом в результате непрерывной конденсации хроматина. На этой стадии происходит кроссинговер – обмен гомологичными участками хроматид и, как следствие, рекомбинация сцепленных генов (рис. 3.3). На следующей за пахитеной стадии, получившей название диплотена, продолжается конденсация хромосом, но при этом начинается процесс расхождения гомологичных хромосом, которые удерживаются в точках обмена участками, возникшими при кроссинговере. Эти точки получили название хиазм.

28

Рисунок 3.2. Синаптонемный комплекс: а – вид под электронным

Рисунок 3.2. Синаптонемный комплекс: а – вид под электронным микроскопом; б - схема; в - модель. 1- хроматин, 2 – осевой элемент, 3- боковые элементы (Ченцов, 1995. С. 381).

элементы (Ченцов, 1995. С . 381). Рисунок 3.3. Схема одинарного и

Рисунок 3.3. Схема одинарного и двойного кроссинговера. (Айала, Кайгер, 1987. т. 1. с. 30).

Диакинез – последняя стадия профазы I. Характеризуется максимальной конденсацией хромосом. Исчезает ядрышко, а биваленты располагаются по периферии ядра. При этом

29

гомологичные хромосомы удерживаются в составе бивалентов благодаря хиазмам. Далее начинается метафаза I. Ее началу соответствует распад оболочки ядра и формирование веретена деления. Биваленты располагаются в экваториальной плоскости. Затем начинается анафаза I, во время которой гомологичные хромосомы расходятся к полюсам. В результате число хромосом во вновь образующейся клетке будет в два раза меньше (n), чем в родительской (2n). В этом отличие анафазы I мейоза от анафазы митоза.

Окончательное расхождение хромосом к полюсам свидетельствует о том, что началась телофаза I. За стадией телофазы I у ряда видов следует очень короткий интеркинез, во время которого синтез ДНК и редупликация хромосом не происходят, и начинается второе деление мейоза. В этом случае хромосомы не деконденсируются. Однако, у некоторых видов растений интерфаза между первым и вторым делением мейоза продолжается довольно долго. В этом случае хромосомы деконденсируются, образуются два ядра, разделенные клеточной перегородкой (диада микроспор или макроспор). Второе деление мейоза протекает сравнительно быстро по типу обычного митоза, но уже в клетках с гаплоидным числом хромосом. В тех случаях, когда интерфаза короткая, профаза II выпадает и второе деление начинается с метафазы II. В метафазе II происходит образование веретена деления, и хромосомы располагаются в экваториальной плоскости. В анафазе II центромеры делятся в продольном направлении, и начинается расхождение хроматид к полюсам, которое заканчивается на стадии телофазы II. На этой стадии происходит полная деконденсация хроматина, образуются ядра и клеточные перегородки. В конечном итоге, в результате мейоза образуется 4 клетки (микроспоры или макроспоры). Каждая из этих клеток содержит в ядре гаплоидное (n) число хромосом.

2. Генетический контроль мейоза. В генотипе каждого растения существует большое число генов, контролирующих прохождение различных стадий мейоза. Их описание стало возможным при обнаружении мутантных

30

форм с нарушенным мейозом. Такие мутантные формы были найдены у кукурузы (табл. 3.1), томата, ржи, гороха и др. культур. Они получили название мей-мутантов.

Таблица 3.1 Мейотические мутанты кукурузы (Голубовская, 1989).

Цитогенетический

эффект

mei-

Ген

Хромосомная

гена

локализация

Замена мейотического деления на митотическое

am

5S*

Замена первого деления мейоза на митоз

afd

6L

Слипание хромосом

st

4S

Десинапсис хромосом

dy

-

Ненормальная

хромосомная

dv

5S

сегрегация

Нарушения

второго

деления

el

8L

мейоза

Нарушенный цитокинез

va

7L

Множественный митоз в процессе формирования пыльцевого зерна

po

6S

* L- длинное плечо хромосомы, S- короткое плечо хромосомы. Мутации отдельного гена могут иметь плейотропный эффект, т.е. нарушаются одновременно несколько идущих друг за другом мейотических событий. Например, у кукурузы обнаружен мутант afd (absence of the first division). У этого мутанта выявлены следующие нарушения в первом и втором делении мейоза: в профазе Iотсутствует конъюгация гомологичных хромосом, в анафазе I происходит деление центромеры и к полюсам отходит по 20 хроматид вместо 10 гомологичных хромосом, что вызывает аномальное расхождение хроматид в анафазе II. В результате образуются многоядерные тетрады.

3. Генетическое значение мейоза. Генетическое значение мейоза, во-первых, состоит в том, что в результате редукционного деления половые клетки эукариот получают гаплоидный (n) набор хромосом. После

31

слияния в результате оплодотворения половых клеток образуется зигота, несущая диплоидный набор хромосом (2n), свойственный особям данного вида. Во-вторых, материнские клетки пыльцы или микроспор содержат наборы хромосом, попавшие к ним в процессе оплодотворения от отцовской и материнской особи. В процессе анафазы I каждая материнская и отцовская хромосома имеют равновероятные возможности отойти к тому или иному полюсу. Вероятность того, что к одному полюсу отойдут материнские хромосомы, а к другому только отцовские, чрезвычайно мала и будет равна (1/2) n-1 , где n – гаплоидный набор хромосом. В результате образовавшиеся гаметы содержат новое сочетание генов по сравнению с гаметами, давшими начало данному организму. И, в-третьих, процесс кроссинговера при мейозе доводит перекомбинацию генов в образующихся гаметах практически до бесконечности.

4. Микроспорогенез и развитие мужского гаметофита. На ранних этапах развития конуса нарастания происходит заложение тычиночных бугорков. В дальнейшем из верхней части этих бугорков развивается пыльник, а из нижней тычиночная нить. Вначале в пыльнике в четырех участках его образуются крупные клетки мужского археспория с большими ядрами и густой цитоплазмой. Затем археспориальные клетки делятся путем мейоза, и образуется тетрада микроспор, в которой четыре клетки окружены общей оболочкой. Затем начинается процесс образования пыльцы или микрогаметогенез (рис. 3.4) Оболочка, окружающая тетраду микроспор, распадается. Вокруг каждой микроспоры постепенно образуется по две оболочки: внутренняя (интина) и наружная (экзина). Ядро переходит из центра к периферии клетки. Затем ядро делится по типу митоза и образуется две клетки: вегетативная (большая) и генеративная (малая). Далее происходит деление по типу митоза ядра генеративной клетки, и образуются два спермия. На этом заканчивается образование мужского гаметофита - пыльцевого зерна, состоящего из вегетативной клетки и двух спермиев (мужские гаметы).

32

Рисунок 3.4. Развитие пыльцевого зерна у кукурузы: 1, 2 – деление

Рисунок 3.4. Развитие пыльцевого зерна у кукурузы: 1, 2 – деление первичного ядра микроспоры; 3, 4 - образование вегетативной и генеративной клеток; 5, 6, 7 – деление в ядре генеративной клетки (спермиогенез); 8 – образование спермиев; 9 – зрелое пыльцевое зерно (по Поддубной- Арнольди и Пащенко из: Атабекова, Устинова, 1971. С. 150).

5. Мегаспорогенез и развитие женского гаметофита. В завязи пестика образуется семяпочка. Вначале появляется небольшой бугорок, который быстро увеличивается в размерах. Из верхней части бугорка образуется тело семяпочки – нуцеллус, а из нижней – ножка семяпочки (фуникулюс). По бокам нуцеллуса возникают специфические образования – покровы семяпочки, называемые интегументы. Интегументы на верхушке семяпочки не срастаются и образуют пыльцевход или микропиле (рис. 3.5). В дальнейшем в субэпидермальном слое закладывается крупная археспориальная клетка (у некоторых растений закладывается несколько таких клеток). Далее археспориальная клетка претерпевает деление путем мейоза. В результате образуется тетрада мегаспор (макроспор), характерным признаком которой является линейное расположение мегаспор, определяющееся расположением веретен деления при первом и втором делении мейоза. В дальнейшем происходит дегенерация трех мегаспор и остается одна. Ядро этой клетки делится путем митоза и образуется двухядерный зародышевый мешок. При этом ядра отходят к полюсам клетки, а цитоплазма перегородкой не делится. Далее происходят еще два деления ядер зародышевого

33

мешка путем митоза и последовательно образуются четырехядерный и восьмиядерный зародышевые мешки. В восьмиядерном зародышевом мешке у каждого полюса, т.е. на микропилярном и халазальном концах зародышевого мешка располагается по 4 ядра. Затем от каждого полюса по одному ядру отходит к центру зародышевого мешка, где они обычно сливаются, образуя центральное ядро зародышевого мешка с числом хромосом, равном 2n. В других ядрах зародышевого мешка число хромосом равно n. Затем происходит образование клеток на противоположных концах зародышевого мешка. У микропилярного конца формируется яйцевой аппарат:

яйцеклетка и две синергиды, а у халазального – три антиподы. На этом заканчивается формирование зародышевого мешка или женского гаметофита. Женской гаметой является яйцеклетка. Подобный тип формирования зародышевого мешка называется нормальный или Polygonum-тип.

6. Типы размножения растений. Большинство растений размножаются половым путем, хотя в отличие от животных они могут размножаться и вегетативно, т.е. частями растения. При этом даже из отдельных клеток можно получить нормальные растения, продуцирующие половые клетки- гаметы. Эта способность растений широко используется в биотехнологии, когда из отдельных клеток, и даже пыльцы, получают нормально развитые фертильные растения. При половом размножении в жизненном цикле высших растений имеют место две фазы: диплофаза и гаплофаза (рис. 3.6). Эволюционные процессы, приведшие к становлению высших растений, а также животных и человека, привели к тому, что в их жизненном цикле преобладает диплофаза. Гаплофаза свойственна только половым клеткам.

34

Рисунок 3.5. Развитие зародышевого мешка Polygonum - типа: 1 -

Рисунок 3.5. Развитие зародышевого мешка Polygonum-типа: 1 - материнская клетка макроспоры; 2 - метафаза I; 3 - интеркинез; 4 - метафаза II; 5 - тетрада макроспор; 6 - 11 - деление ядер макроспоры; 12 - сформировавшийся зародышевый мешок (по Шарпу из: Петров, 1954. с. 86).

35

Рисунок 3.6 Жизненный цикл растения. 7. Оплодотворение, развитие

Рисунок 3.6 Жизненный цикл растения.

7. Оплодотворение, развитие эндосперма и зародыша. Процесс оплодотворения происходит у большинства растений следующим образом. Пыльца, попав на рыльце пестика,

36

начинает прорастать, образуя пыльцевую трубку. Содержимое пыльцевого зерна (два спермия и ядро вегетативной клетки) постепенно переходит в пыльцевую трубку. Через некоторое время, прорастая в тканях столбика, пыльцевая трубка достигает зародышевого мешка и врастает в него. У большинства растений пыльцевая трубка врастает через микропиле (порогамия), но отмечены случаи, когда пыльцевая трубка врастает в зародышевый мешок через халазу (халазогамия) или через интегументы (мезогамия). При попадании в зародышевый мешок пыльцевая трубка лопается и изливает в него свое содержимое. Далее происходит процесс так называемого двойного оплодотворения*. Один из спермиев внедряется в яйцеклетку, и ядро спермия сливается с ядром яйцеклетки. В результате образуется зигота с числом хромосом = 2n. В дальнейшем из зиготы развивается зародыш семени. Второй спермий сливается с центральным ядром зародышевого мешка, имеющем 2n хромосом, в результате новое ядро имеет тройной набор хромосом (3n). Деление этого ядра дает начало развитию эндосперма. Поэтому ядра эндосперма всегда триплоидны. Развитие эндосперма начинается раньше развития зародыша и протекает в два этапа: рост эндосперма и накопление в эндосперме запасных питательных веществ. Образуется ткань, питающая зародыш при его развитии. Описано три типа образования эндосперма: нуклеарный, целлюлярный и базальный. При нуклеарном типе деление ядер вначале не сопровождается образованием клеточных перегородок. Они появляются позже. При целлюлярном типе эндосперма деление ядер сопровождается образованием клеточных перегородок. Базальный тип образования эндосперма занимает промежуточное положение между нуклеарным и целлюлярным. У некоторых видов растений питательные вещества накапливаются в клетках нуцеллуса и образуется так называемый перисперм. Развитие зародыша начинается после того, как сформируется эндосперм.

8. Явление ксенийности. У растений процесс двойного оплодотворения является причиной явления, получившего название ксенийность. Это сравнительно редкое явление, при котором признаки отцовского растения проявляются уже на гибридных зернах, развивающихся на материнском растении. Так, у кукурузы окраска зерен зависит от цвета алейрона, а не перикарпа (семенная оболочка). Если растение с белыми зернами опылить пыльцой растения с фиолетовыми зернами, то гибридные зерна на початке будут фиолетовыми (алейрон фиолетового цвета) (рис. 3.7).

фиолетового цвета) (рис. 3.7). Рисунок 3.7. Ксенийные зерна в

Рисунок 3.7. Ксенийные зерна в початке кукурузы (S. Borojevic, K. Borojevic, 1976, p. 158).

9. Апомиксис. У некоторых видов растений отмечено развитие зародыша без оплодотворения – апомиксис. Существует четыре типа апомиксиса: партеногенез, апогамия, апоспория, адвентивная эмбриония. Партеногинез. Описано два типа партеногенеза:

редуцированный и нередуцированный. При редуцированном партеногенезе зародыш развивается из неоплодотворенной яйцеклетки, имеющей число хромосом равное n. В дальнейшем из такого зародыша развивается гаплоидное растение. Такие растения полностью стерильны. Нередуцированный партеногенез свойственен видам родов Poa, Ranunculus, Taraxacum и др. При этом типе партеногенеза при развитии зародышевого мешка

38

мейоз отсутствует, его заменяет митоз. В этом случае яйцеклетка в зародышевом мешке имеет нередуцированный набор хромосом 2n. Из такой яйцеклетки при нередуцированном партеногенезе развивается вполне плодовитое растение. Апогамия. При этом виде апомиксиса развитие зародыша происходит из синергид или антипод. Подобный тип развития зародыша встречается у льна и кукурузы. Растения при этом, как правило, гаплоидны, т.е. имеют редуцированный набор хромосом (n).

Апоспория. Зародышевый мешок развивается из клеток семяпочки, нуцеллуса или интегументов. Редукции числа хромосом при этом не происходит. Как правило, такие зародышевые мешки после образования отмирают. Адвентивная эмбриония – развитие зародыша из клеток нуцеллуса (нуцелярная эмбриония) или из клеток интегумента (интегументальная эмбриония). Первая встречается в семействах пасленовых (Solanaceae), орхидных (Orchidaceae), мятликовых (Poaceae) и др., а вторая описана для семейств гвоздичные (Caryophyllaceae), луковичные (Alliaceae)и др. Эволюционное значение апомиксиса до сих пор не совсем ясно. Большинство исследователей согласны с гипотезой о вторичности явления апомиксиса по сравнению с процессами нормального оплодотворения (амфимиксис).

10.Ключевые слова и понятия.

амфимиксис антиподы апомиксис бивалент двойное оплодотворение диада макроспор диада микроспор диакинез диплотена женская гамета женский гаметофит

зигота зиготена ксенийность лептотена мей-гены мейоз мужская гамета мужской гаметофит партеногенез пахитена синапсис

39

синаптонемный

комплекс

синергиды

яйцеклетка

40

Лекция 4. МЕНДЕЛИЗМ. ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Методология работ Менделя. – Наследование признаков при моногибридном скрещивании. – Доминантность. – Рецессивность. – Единообразие первого гибридного поколения. – Расщепление гибридов второго поколения. – Анализирующее скрещивание. – Закон ―чистоты гамет‖. – Ключевые слова и понятия.

1. Методология работ Менделя. Начало ХХ в. ознаменовалось выходом в свет (1900 г.) работ трех ученых: голландца Гуго де Фриза, немца Карла Корренса и австрийца Эриха Чермака, в которых, независимо друг от друга, авторы изложили результаты своих исследований по изучению закономерностей наследования гибридами признаков родительских форм . Однако, оказалось, что еще в 1865 г. в малоизвестным издании общества естествоиспытателей в Брюнне (ныне г. Брно) была опубликована работа монаха августинского монастыря Грегора Менделя под названием ―Опыты над растительными гибридами‖. В этой работе Мендель изложил результаты своих опытов по скрещиванию гороха и вывел законы наследования признаков гибридными организмами. Приоритет Г. Менделя в этом вопросе был неоспорим и признан учеными всего мира, и по выражению Н.И.Вавилова ―рассматривается в современной биологии как основной ключ к пониманию явлений наследственности‖ (стр.98)*. До Менделя многие ученые пытались понять закономерности, лежащие в основе явлений наследственности. Однако отсутствие четкой методики в подходах к изучению гибридов приводило к обескураживающим результатам. В одном случае изучаемые у гибридов признаки соответствовали признакам первого родителя, в другом второго, в третьем проявлялись признаки обоих родителей, а иногда возникали признаки, вообще отсутствовавшие у родительских форм.

Н.И.Вавилов Менделизм и его значение в биологии и агрономии. В кн. Г.Мендель Опыты над растительными гибридами. М. 1965.

41

Мендель разработал собственную методологию проведения экспериментов, которая позволила избежать ошибок, присутствовавших в работах предшественников и современников. Ее сущность заключалась в следующем:

во-первых,

в

скрещивания

брались

растения,

различающиеся

по

одному

или

очень

немногим

признакам;

во-вторых, учитывалось

наследование

каждого

отдельного признака;

в-третьих, при анализах рассматривались в отдельности каждое из растений;

в-четвертых, в отдельности высевались семена от каждого из гибридных растений;

- в-пятых, им был применен математический анализ изучения частот проявления альтернативных признаков (семена гладкие - семена морщинистые, семена желтые – семена зеленые и т.п.). Закономерности, выявленные Менделем, легли в основу принципов генетического анализа, до сих пор используемого в генетических исследованиях. Перед детальным рассмотрением закономерностей наследования, открытых Менделем, следует ознакомиться с принятой в настоящее время генетической символикой, которая отличается от символов, использованных Менделем. Общепринято, что родительские формы при скрещиваниях обозначаются буквой Р (лат. parent-родители). Если берутся несколько родительских форм, то они обозначаются цифрами: P 1 , P 2 , P 3 P n . Если данный родитель является материнской формой, то он обозначается значком ♀ (зеркало Венеры) а если – отцовской – значком ♂ (щит и копье Марса). Скрещивания обозначаются знаком умножения ―х‖: P 1 x P 3 . Родитель, используемый в качестве материнской формы, всегда записывается первым, а после знака ― х ‖записывается родитель, взятый в качестве отцовской формы. Гибриды обозначаются буквой F (лат. filius- сын). При этом первое поколение записывается как F 1 , второе F 2 , третье F 3 и т.д. до F n .

42

2. Наследование признаков при моногибридном скрещивании.

2.1. Доминантность и рецессивность. Единообразие гибридов первого поколения. Одним из основных объектов опытов Менделя был горох. Горох является самоопылителем и с ним легко проводить скрещивания, получать гибриды и наблюдать за гибридным потомством. Мендель для своих экспериментов отбирал сорта, различающиеся по окраске семенной кожуры (серая, прозрачная), окраске незрелого боба (зеленый, желтый), длине стебля (длинный, короткий), типу семян (гладкие, морщинистые), окраске семян (желтые, зеленые), расположение соцветий (пазушное, верхушечное). И первым его открытием было выявление того, что из двух альтернативных (контрастных) признаков при скрещивании в первом поколении проявляется только один. Так, при скрещивании растений с незрелыми зелеными бобами (материнская форма) с растением с незрелыми желтыми (отцовская форма) в первом поколении все растения имели незрелые зеленые бобы (рис.4.1). Такая же картина имела место, если в качестве материнской формы использовались растения с желтыми бобами, а в качестве отцовской формы с зелеными. Подобные результаты были получены Менделем и по другим, изучавшимся признакам. В F 1 проявлялись только такие признаки, как серая окраска семенной кожуры, лущильный тип боба, гладкие семена, желтая окраска семян, пазушное расположение соцветий, длинный стебель. Признаки, которые проявлялись у гибридов в F 1 , Мендель назвал доминантными (преобладающими), а альтернативные признаки – рецессивными (отсутствующими). Явление единообразия всех особей первого поколения по преобладающему признаку было названо полным доминированием. В дальнейшем были обнаружены факты, свидетельствующие о том, что полное доминирование является не универсальным явлением. Так, при скрещивании линии львиного зева (Antirrhinum majus) с красными цветками с линией

43

Рисунок 4.1. Наследование окраски незрелого боба у гороха ( Pisum sativum )

Рисунок 4.1. Наследование окраски незрелого боба у гороха (Pisum sativum)

44

Рисунок 4.2. Наследование окраски цветка у львиного зева ( Antirrhinum majus)

Рисунок 4.2. Наследование окраски цветка у львиного зева (Antirrhinum majus).

у львиного зева ( Antirrhinum majus) . Рисунок 4.3. Наследование

Рисунок 4.3. Наследование гордеинов ячменя, контролируемых локусом Hrd A. Электрофоретические спектры гордеина: 1- родительская форма (Р 1 ); 2 F 1 от скрещивания Р 1 х Р 2 ; 3 F 1 от скрещивания Р 2 х Р 1 ; 4 – родительская форма Р 2 (фото любезно предоставлено А.А.Поморцевым).

45

с белыми цветками, все растения в F 1 имели розовые цветки

(рис.4.2).

Наследование признаков подобного типа получило название неполное доминирование. И, наконец, в потомстве могут одновременно проявляться признаки обоих родителей. Этот тип наследования получил название кодоминирование. Примером кодоминирования может служить наследование групп крови у человека (в системе АВ0) . Если один из родителей имеет группу крови А, а другой В, то в крови детей присутствуют антигены, характерные как для группы A, так и группы В. Наличие этих антигенов определяется специальной антигенной реакцией. Применительно к растениям это наследование различных типов запасных белков у растений, выявляемых методом электрофореза (глиадины, глютенины и гордеины) (рис. 4.3). Из рисунка 4.3 видно, что на электрофореграммах гордеинов гибридов, как от прямого, так и от обратного скрещивания, присутствуют белковые компоненты от обоих родителей. Иными словами, электрофоретический спектр белков гибридов представляет собой сумму всех белков, присущих родительским формам. Вместе с тем, как видно на рис. 4.3, электрофореграммы гордеинов гибридов от прямого и обратного скрещиваний различаются между собой по относительной интенсивности белковых полос.У гибрида Р 1 х Р 2 (прямое скрещивание) интенсивнее выражены белковые компоненты первой родительской формы, а у гибрида Р 2 х Р 1 (обратное скрещивание) компоненты второй родительской формы. Это обусловлено тем, что гордеины являются тканеспецифичными белками и синтезируются только в эндосперме. Эндосперм же является триплоидной тканью (3n), в клетках которой присутствует двойной набор (2n) хромосом от материнской формы (центральное ядро зародышевого мешка) и одинарный (n) – от отцовской формы (спермий). Следовательно, аллели материнской формы у гибрида представлены в двух дозах, а от отцовской в одной. Именно по этой причине на электрофореграммах гибридов белковые компоненты материнской формы проявляются более интенсивно в сравнении с белковым компонентом отцовской формы. При анализе электрофореграмм запасных белков отдельных зерен F 2 можно различить не только

46

родительские классы (гомозиготы), но и гетерозиготы можно разделить на два различных класса, учитывая дозы аллелей (таблица 4.1). В этом случае расщепление в F 2 как по генотипам, так и по фенотипическим классам (элетрофоретическим спектрам) будет соответствовать отношению 1:1:1:1.

Таблица 4.1.

Расщепление в F 2 по аллелям локуса, контролирующего гордеин А

Р 1

Р 2

Генотип спермия Генотип центрального ядра
Генотип спермия
Генотип
центрального ядра

Р 1 Р 1

Р 1 Р 1 Р 1

Р 1 Р 1 Р 2

Р 2 Р 2

Р 1 Р 2 Р 2

Р 2 Р 2 Р 2

Следует отметить, что явление доминирования открытое Менделем, не такое простое, как может показаться на первый взгляд. Было установлено, что в ряде случаев доминирование может видоизменяться под влиянием внешних условий, возраста, пола, особенностей самого организма и других, часто не установленных факторов. Так, у дурмана (Datura stramonium) пурпурная окраска стебля растения доминирует над зеленой, если растения выращиваются в полевых условиях. Однако, при выращивании этих же гибридов в теплице, гибриды первого поколения имеют значительно более светлую окраску стебля, чем родительская форма с пурпурным стеблем. Имеется множество и других примеров, свидетельствующих о случаях видоизменения доминирования. Явление единообразия гибридов первого поколения получило в дальнейшем название – первый закон Менделя. При этом неважно, имеет ли исследователь дело с фактом полного доминирования, фактом неполного доминирования или случаем кодоминирования. Во всех этих случаях исследователь имеет дело с единообразием особей первого гибридного поколения.

47

2.2 Правило расщепления гибридов второго поколения. Под расщеплением гибридов понимаются закономерности в распределении среди потомков F 2 особей с доминантными и рецессивными признаками. Мендель, высевая семена, полученные на гибридных растениях гороха первого поколения, в F 2 получал растения с признаками обоих родителей (рис. 4.1). Следовательно, в отличие от первого поколения второе не было единообразным. Растений с доминантными признаками было приблизительно в три раза больше, чем с рецессивными. Причем, эта закономерность наблюдалась по всем изучавшимся Менделем признакам (табл. 4.2). Высевая в дальнейшем семена, собранные с каждого из растений F 2 , Мендель увидел, что некоторые растения с доминантными признаками в F 3 не расщеплялись, и все их потомство было единообразным, тогда как другие такие же особи давали расщепляющееся потомство. Причем соотношение особей с доминантными и рецессивными признаками, как и в F 2 было 3:1. Гибридные растения F 2 с рецессивными признаками во всех случаях давали нерасщепляющееся потомство. Соотношение растений с доминантным признаком, не давшими расщепляющегося потомства, к растениям, давшим в F 3 расщепление и к растениям с рецессивным признаком, соответствовало 1:2:1. Мендель писал: ―… теперь ясно, что гибриды по двум различающимся признакам образуют семена, из которых половина дает вновь гибридную форму, тогда как другая дает растения, которые остаются константными и в равных долях содержат доминирующий и рецессивный признаки‖ (стр.20)*. Таким образом, Мендель впервые показал, что внешний вид растения (фенотип)** не всегда отражает наследственные задатки (генотип). Изучая последующие гибридные поколения, Мендель показал, что от поколения к поколению число гибридных форм уменьшается, а число нерасщепляющихся особей возрастает. Явление расщепления во втором и последующих поколениях, открытое Менделем, приложимо и к случаям неполного доминирования (рис.4.2) и кодоминирования. Однако в этих случаях потомство F 2 может быть сгруппировано не в 2, а в 3

48

Таблица 4.2

Результаты опытов Г.Менделя.

Изучавщиеся

F

1

Число растений в F 2

Соотношени

признаки

   

с

с

е

числа

доминантными

рецессивным

растений

с

 

признаками

и принаками

доминантны

ми

и

рецессивным

и

признаками

гладкие 1

гладкие

5474

1850

2.96:1

морщинистые

семена

 

семена

 

желтые

и

зеленые

желтые

6022

2001

3.01:1

семена

семена

 

семенная кожура серая и прозрачная

серая

 

705

224

3.15:1

семенная

 

кожура

длинный и короткий стебель

длинный

782

277

2.84:1

стебель

пазушное

и

пазушное

651

207

3.14:1

верхушечное

располож

расположение

ение

 

цветов

цветов

незрелые бобы зеленого и желтого цвета

зеленый

428

152

2.82:1

цвет боба

бобы лущильного и сахарного типа

лущильн

882

299

2.95:1

ый

тип

 

боба

1 - первыми указаны доминантные признаки

класса: ¼ составляют особи с признаком первого родителя (Р 1 ),

¼ - с признаком второго родителя (P 2 ) и ½ потомства составляют гибридные особи с выраженностью признака идентично F 1 . Особи, несущие признаки родительских форм, при пересевах не расщепляются.

*Грегор Мендель Опыты над растительными гибридами.М.1965. **Термины фенотип и генотип были предложены В.Иогансеном в 1903 г.

49

Искусственное получение гибридов путем гибридизации, а также факты расщепления гибридов во втором и последующих поколениях позволили Менделю прийти к выводу, что подобные результаты могут быть объяснены только, если предположить, что половые гаметы (зачатковые и пыльцевые клетки по Менделю) несут постоянные и обособленные единицы наследственности - факторы (в 1909 г. В.Иогансеном названные генами). По Менделю эти единицы наследственности в неизменном виде передаются от одного поколения к другому. Мендель ввел буквенные обозначения для факторов, определяющих альтернативные признаки. При этом фактор, детерминирующий доминантный признак, он обозначил заглавными буквами латинского алфавита, а рецессивный – строчными. Мендель совершенно правильно считал, что половые клетки содержат только по одному фактору (гену), а гибридные растения по два. Например, сорта гороха с гладкими семенами несут гены АА, а с морщинистыми аа. В первом случае каждая из половых клеток несет ген А, а во втором – а. При самоопылении гены соединятся А+А=АА и a + а = aa. При скрещивании растения с гладкими семенами с растением с морщинистыми семенами картина будет следующая: А+а= Аа (F 1 ). Формы, у которых в зиготе объединяются два идентичных гена АА или аа получили название гомозиготные*, а объединяющие два разных аллеля Аа гетерозиготные*. Мендель пришел к выводу, что гибридные растения образуют два типа половых клеток (и женских и мужских), один с геном А, а другой с геном а. Оба типа половых клеток образуются с равными частотами и имеют равные вероятности на соединения в зиготе, что легко представить, используя решетку, предложенную английским генетиком Р.Пеннетом. Так гибрид F 1 Аа продуцирует гаметы А и а, образующиеся соответственно с частотами ½ и ½. В данном случае решетка Пеннета имеет 4 клетки.

*Термины предложены У.Бетсоном в 1902 г.

50

Если сверху написать мужские гаметы, а слева женские, то получим :

Мужские гаметы

 

A

a

Женские

A AA

Aa

гаметы

a Aa

aa

В каждой из клеток решетки записывается результат соединения женской и мужской гамет, т.е. тип получаемой зиготы. Исходя из приведенных данных мы имеем четыре комбинации: 1 гомозигота с доминантными генами (АА), 1 гомозигота с рецессивными генами (аа) и 2 гетерозиготы (Aa). Если же представить, что из этих зигот вырастут растения гороха, то мы можем предвидеть, что растения с генотипом АА будут иметь гладкие семена, как и растения с генотипом Аа, а вот растения с генотипом аа будут иметь морщинистые семена. То есть соотношение растений с доминантными и рецессивными признаками будет 3:1. Соотношение же гомозигот к гетерозиготам среди растений с доминантным признаком составит 1:2. Прямое доказательство гипотезы Менделя, что именно половые клетки несут ― постоянные и обособленнные ‖ единицы наследствеености (гены) было получено Демереку в 1924 г. при изучении пыльцы гибрида между линиями нормальной и восковидной кукурузы. Дело в том, что у большинства сортов кукурузы накапливается в зернах крахмал. Однако имеются формы, у которых вместо крахмала в эндосперме накапливается декстрин (восковидная кукуруза). Детерминирует накопление и крахмала, и декстрина ген waxy. Если этот ген в генотипе растения находится в доминантном состоянии (Wx), то накапливается крахмал, а если в рецессивном (wx), то декстрин. При окрашивании йодом крахмалистого эндосперма он окрашивается в синий цвет, а восковидный - в красный. Демереку окрасил йодом пыльцу F 1 гибрида с генотипом Wxwx (рис. 4.4) . В результате ½ пыльцевых зерен окрасилась в синий цвет, а ½ - в красноватый. Это очень интересный, но частный случай, т.к.

51

другие гены (а их множество) не поддаются локализации в пыльце на основе гистохимических реакций.

основе гистохимических реакций. Рисунок 4.4. Микрофотография

Рисунок 4.4. Микрофотография пыльцы из пыльника кукурузы (генотип Wxwx). Пыльца подверглась обработке йодом, делающим пыльцевые зерна с геном Wx заметно темнее пыльцевых зерен с геном wx (по Демереку из S.Borojevic, K.Borojevic, 1976. c.114).

3.Анализирующее скрещивание Проверить образование того или иного типа гамет можно при помощи анализирующего скрещивания, что и используется в генетическом анализе. Анализирующим скрещиванием называется скрещивание гибридной формы с формой (например, P 2 ), рецессивной по изучаемому признаку:

 

x

Гаметы

Потомство

F 1 (Aa) A и a Aa

F 1 ( Aa ) A и a Aa P 2 ( aa ) a aa

P 2 (aa) a

F 1 ( Aa ) A и a Aa P 2 ( aa ) a aa
F 1 ( Aa ) A и a Aa P 2 ( aa ) a aa

aa

1

:

1

Так как P 2 дает гаметы только одного типа, то выявление в потомстве от анализирующего скрещивания двух типов особей

52

свидетельствует о том, что гибридная форма (F 1 ) продуцирует гаметы двух типов, а их соотношение 1:1, говорит о том, что распределение доминантных и рецессивных генов в гаметах происходит с равной частотой. Мендель не знал о существовании хромосом, о локализации генов в хромосомах, и о механизме клеточного деления (мейоз), приводящего к редукции числа хромосом в половых клетках. Значительно позже его работ было установлено, что гены, отвечающие за одну пару признаков, находятся в одинаковых точках (локусах) гомологичных хромосом. В результате же мейоза гомологичные хромосомы расходятся в половые гаметы. А так как одна половая клетка содержит только одну из двух гомологичных хромосом, то в нее и попадает только один из пары генов. Это хорошо видно на примере генов, детерминирующих безостость – остистость колоса у мягкой пшеницы (рис. 4.5 и рис. 4.6). При скрещивании растений пшеницы с безостыми колосьями с растениями с остистыми колосьями у растений F 1 колосья безостые (генотип Gg). При самоопылении F 1 поколения (F 1 xF 1 ) (рис.4.6) в яйцеклетки и спермии попадают уже гены G и g и, соединяясь в зиготе, дают генотипы 1GG : 2Gg: 1gg, из которых вырастут растения пшеницы безостые и остистые в соотношении 75% :

25% (3:1). При образовании гамет у гибридов любая из них с равной вероятностью может получить или ген G или g. При соединении же в зиготе гены не смешиваются и в дальнейшем такими же отдельностями переходят потомкам. Это правило получило название: закон чистоты гамет.

53

Рисунок 4.5. Схема, иллюстрирующая поведение гомологичных

Рисунок 4.5. Схема, иллюстрирующая поведение гомологичных хромосом, при скрещивании безостой пшеницы с остистой (S.Borojevic, K.Borojevic, 1976. с.110).

54

Рисунок 4.6. Схема, иллюстрирующая поведение гомологичных

Рисунок 4.6. Схема, иллюстрирующая поведение гомологичных хромосом и образование разных типов зигот у гибридов F 1 пшеницы (S.Borojevic, K.Borojevic, 1976. с.111)

4. Ключевые слова и понятия

Анализирующее скрещивание Генотип Доминантность Единообразие первого поколения Закон чистоты гамет

Кодоминирование Локус Моногибридное скрещивание Неполное доминирование Рецессивность Фенотип

55

Лекция 5. МЕНДЕЛИЗМ. ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА.

Закономерности наследования признаков при дигибридном скрещивании. – Закономерности наследования признаков при тригибридном скрещивании. – Общие формулы расщепления при независимом наследовании. – Ключевые слова и понятия

1. Закономерности наследования при дигибридном скрещивании Скрещивания, в которых родительские формы различаются по одной паре признаков, называются моногибридными, по двум парам признаков - дигибридными, а по многим - полигибридными * . В предыдущих разделах мы рассмотрели закономерности наследования при моногибридном скрещивании. Надо сказать, что Мендель интересовался и закономерностями одновременного наследования двух признаков. В одном из опытов он произвел скрещивание растений с круглыми желтыми семенами с растениями с морщинистыми и зелеными семенами (дигибридное скрещивание). Генотип первого родителя P 1 был обозначен как AABB, а второго P 2 - aabb (рис. 5.1). В F 1 этого скрещивания было получено единообразие всех растений по изучаемым признакам. Все растения имели круглые семена желтого цвета. Генотип их может быть обозначен как AaBb. Посев семян F 1 дал расщепляющееся F 2 . При этом 9/16 семян были похожи на семена, полученные в F 1 , - круглые желтые, 3/16 семян были круглые, но зеленые, 3/16 были морщинистые, желтые семена и только 1/16 часть семян походила на семена второго родителя и имела морщинистые, зеленые семена (расщепление 9:3:3:1). Этот фенотипический эффект мог быть объяснен только в том случае, если гибриды F 1 продуцировали (рис. 5.1) гаметы четырех типов AB, Ab, aB и ab. Мендель провел анализирующее скрещивание F 1 (AaBb) x P 2

полигибрид.

1900

г.

Г.

де

Фриз

ввел

термины

56

моногибрид,

дигибрид,

тригибрид,

(aabb) и получил четыре типа потомков: ABab : Abab : aBab :

abab, их соотношение было равно 1:1:1:1. Тем самым было подтверждено образование гамет четырех типов: AB, Ab, aB и ab. Из приведенной на рисунке 5.1 решетки Пеннета можно видеть, что, как и при моногибридном скрещивании, число фенотипов значительно уступает числу генотипов:

уступает числу генотипов: Рисунок 5.1. Наследование

Рисунок 5.1. Наследование окраски и формы семян у гороха (Pisum sativum) (Лобашов, 1967, с.129).

57

Частота

Генотип

Фенотип

 

семян

1/16

AABB

2/16

AABb

2/16

AaBB

4/16

AaBb

1/16

Aabb

2/16

Aabb

1/16

aaBB

2/16

aaBb

1/16

aabb

круглые желтые

круглые желтые

круглые желтые

круглые желтые

круглые зеленые

круглые зеленые

В 9/16 зигот присутствуют оба доминантных гена

В 3/16 зигот присутствует только доминантный ген A

морщинистые желтые

морщинистые желтые

В 3/16 зигот присутствует только доминантный ген B

морщинистые зеленые

1/16 всех зигот не имеет доминантных генов

Следовательно, при расщеплении F 2 по фенотипу в отношении 9:3:3:1, расщепление по генотипу составит 1:2:2:4:1:2:1:2:1. В результате подобных опытов Менделем было сформулировано очень важное положение, говорящее о том, что гены, определяющие различные признаки, наследуются независимо друг от друга. И, хотя позднее было показано, что этот вывод справедлив только для генов находящихся в разных хромосомах, закономерность, выявленная Менделем, получила название закон независимого комбинирования признаков. И еще одно важное обстоятельство следует отметить. При независимой рекомбинации генов образуются женские и мужские гаметы с новыми сочетаниями генов. При их слиянии могут быть получены гомозиготные формы растений с новыми сочетаниями признаков. В приведенном выше примере Мендель скрещивал растение с круглыми желтыми семенами с растением с морщинистыми зелеными семенами. В результате продуцирования гибридами гамет с новыми сочетаниями генов были получены гомозиготные рекомбинантные растения с

58

круглыми зелеными (AAbb) и морщинистыми желтыми (aaBB) семенами. Подобный подход к получению и отбору рекомбинантов является одним из основных при создании сортов сельскохозяйственных культур.

2. Тригибридные скрещивания. Подтверждение закона ―независимого комбинирования‖ было получено Менделем при скрещивании константных форм растений различавшихся по трем признакам. Это хорошо видно на следующем примере (рис. 5.2).

Признаки материнской формы (P 1 ):

гладкие семена – AA желтые семена – BB серо-коричневая семенная кожура – CC Признаки отцовской формы (P 2 ):

морщинистые семена – aa зеленые семена – bb бесцветная семенная кожура – cc

P 1

AABBCC x

P 2

aabbcc

Гаметы

ABC

abc

Гаметы ABC abc F 1 AaBbCc (тройная гетерозигота)
Гаметы ABC abc F 1 AaBbCc (тройная гетерозигота)

F 1

AaBbCc (тройная гетерозигота)

Рисунок

скрещивании.

5.2.

Схема

образования

зиготы

при

тригибридном

Семена F 1 по фенотипу будут гладкими и желтыми, а семенная кожура серо-коричневая. Растения первого гибридного поколения образуют 8 типов гамет в равном соотношении, т.к. вероятность попадания в гамету доминантного или рецессивного гена из пары альтернативных признаков равна ½: 1/2 x 1/2 x 1/2 =

1/8.

Таким образом, мы имеем следующие типы гамет:

59

1/8 ABC

1/8 Abc

1/8 ABc

1/8 aBc

1/8 AbC

1/8 abC

1/8 aBC

1/8 abc

В свою очередь это определяет высокое разнообразие зигот, как это видно из рисунка 5.3.

1/8

ABC

1/8

ABc

1/8

AbC

1/8

Abc

1/8

aBC

1/8

aBc

1/8

abC

1/8

abc

1/8

1/8

1/8

1/8

1/8

1/8

1/8

1/8

ABC

ABc

AbC

Abc

aBC

aBс

abC

abc

ABC

ABc

AbC

Abc

aBC

aBс

abC

abc

ABC

ABC

ABC

ABC

ABC

ABC

ABC

ABC

ABC

ABc

AbC

Abc

aBC

aBс

abC

abc

ABc

ABc

ABc

ABc

ABc

ABс

ABc

ABc

ABC

ABc

AbC

Abc

aBC

aBс

abC

abc

AbC

AbC

AbC

AbC

AbC

AbC

AbC

AbC

ABC

ABc

AbC

Abc

ABC

aBс

abC

Abc

Abc

Abc

Abc

Abc

Abc

Abc

Abc

Abc

ABC

ABc

AbC

Abc

aBC

aBс

abC

abc

aBC

aBC

aBC

aBC

aBC

aBC

aBC

aBC

ABC

ABc

AbC

Abc

ABC

aBс

abC

abc

aBc

aBc

aBc

aBc

aBc

aBс

aBc

aBc

ABC

ABc

AbC

Abc

ABC

aBс

abC

abc

abC

abC

abC

abC

abC

abC

abC

abC

ABC

ABc

AbC

Abc

аBC

aBс

аbC

аbc

abc

abc

abc

abc

abc

abc

abc

abc

Рисунок 5.3 Образование разных типов зигот при независимом комбинировании трех пар генов в гаметах.

60

Таблица 5.1 Численность особей и их генотипы при тригибридном скрещивании (по Джонсу из Синнота и Денна с добавлениями)

Частота Генотип Фенотип в F 2 Частота Характер потомства в F 3
Частота
Генотип
Фенотип в F 2
Частота
Характер потомства в F 3
гено-
фено-
типа
типа
1/64
AABBCC
2/64
AaBBCC
2/64
AABbCC
Круглые,
Не расщепляется
Расщепляется на круглые и
морщинистые 3:1
Расщепляется на желтые и
зеленые 3:1
желтые
2/64
AABBCc
семена,
27/64
оболочка
семени
Расщепляется на
Семена с серо-коричневой и
бесцветной оболочкой 3:1
светло-
коричневая
4/64
AaBbCC
4/64
AaBBCc
4/64
AABbCc
8/64
AaBbCc
Расщепляется на круглые,
морщинистые, желтые и
зеленые 9:3:3:1
Расщепляется на круглые,
морщинистые, с серо-
коричневой и бесцветной
семенной оболочкой 9:3:3:1
Расщепляется на желтые,
зеленые, с серо-коричневой и
бесцветной семенной
оболочкой 9:3:3:1
Расщепляется на круглые,
морщинистые, желтые,
зеленые, с серо-коричневой и
бесцветной семенной
оболочкой 27:9:9:9:3:3:3:1
1/64
AABBcc
Круглые,
2/64
AABbcc
желтые
семена,
9/64
2/64
AaBBcc
семенная
оболочка
Не расщепляется
Расщепляется на желтые и
зеленые 3:1
Расщепляется на круглые и
морщинистые 3:1
бесцветная
4/64
AaBbcc
Расщепляется на круглые,
морщинистые, желтые и
зеленые 9:3:3:1

61

1/64

2/64

2/64

4/64

1/64

2/64

2/64

4/64

1/64

2/64

1/64

2/64

1/64

2/64

AAbbCC

AAbbCc

AabbCC

AabbCc

aaBBCC

aaBbCC

aaBBCc

aaBbCc

aabbCC

aabbCc

aaBBcc

aaBbcc

AAbbcc

Aabbcc

aaBBCc aaBbCc aabbCC aabbCc aaBBcc aaBbcc AAbbcc Aabbcc Круглые, зеленые семена,

Круглые,

зеленые

семена,

оболочка

семян серо-

коричневая

Морщи-

нистые, желтые семена, с серо- коричневой оболочкой

Морщи-

нистые,

зеленые

семена,

с серо-

коричневой

оболочкой

Морщи-

нистые,

желтые

семена,

бесцветная

семенная

оболочка

Круглые,

зеленые

семена, с

бесцветной

оболочкой

семена, с бесцветной оболочкой 9/64 9/64 3/64 3/64 3/64 Не расщепляется
семена, с бесцветной оболочкой 9/64 9/64 3/64 3/64 3/64 Не расщепляется

9/64

9/64

3/64с бесцветной оболочкой 9/64 9/64 3/64 3/64 Не расщепляется

3/64 с бесцветной оболочкой 9/64 9/64 3/64 3/64 Не расщепляется Расщепляется

3/64бесцветной оболочкой 9/64 9/64 3/64 3/64 Не расщепляется Расщепляется на

Не расщепляется Расщепляется на окрашенные и с бесцветной семенной оболочкой 3:1

Расщепляется на круглые и морщинистые 3:1

Расщепляется на круглые, морщинистые, с серо- коричневой и бесцветной семенной оболочкой 9:3:3:1

Не расщепляется Расщепляется на желтые и зеленые 3:1 Расщепляется на семена с серо-коричневой и бесцветной семенной оболочкой 3:1 Расщепляется на желтые, зеленые семена, с серо- коричневой и бесцветной семенной оболочкой 9:3:3:1

Не расщепляется Расщепляется на семена с серо-коричневой и бесцветной семенной оболочкой 3:1

Не расщепляется Расщепляется на желтые и зеленые 3:1

Не расщепляется Расщепляется на круглые и морщинистые 3:1

62

1/64 aabbcc Морщи- 1/64 нистые Не расщепляется зеленые семена, с
1/64
aabbcc
Морщи-
1/64
нистые
Не расщепляется
зеленые
семена, с
бесцветной
оболочкой

Таким образом (табл. 5.1), соотношение фенотипических классов при тригибридном скрещивании будет 27 : 9 : 9 : 9 : 3 : 3 : 3 : 1.

3.Общие формулы расщепления при независимом наследовании генов Сравнивая данные по моно-, ди- и тригибридному скрещиванию, легко увидеть, что при увеличении числа изучаемых признаков на один, число типов гамет возрастает каждый раз в 2 раза, как и число фенотипов, а число генотипов в три раза (табл. 5.2).

Таблица 5.2 Общие формулы расщепления при независимом наследовании генов

Число

Число типов гамет в F 1

Число комбинаций между гаметами в F 1

Число генотипов в F 2

Число фенотипов в F 2

пар

генов

1

2

4

3

2

2

4

16

9

4

3

8

64

27

8

4

16

256

81

16

n

2

n

4

n

3

n

2

n

Следует отметить, что формула расщепления для фенотипов, приведенная в табл. 5.2, будет справедлива только для случаев полного доминирования. В случае неполного доминирования или кодоминирования, гетерозиготные особи будут фенотипически отличаться в первом случае от родительской формы, несущей доминантные гены, а во втором

63

(кодоминирование) – от обеих родительских форм. Например, Т.С. Фадеева (ЛГУ) изучала наследование окраски ягод и формы чашечки у земляники (Fragaria resca). Она проводила скрещивание формы с красными ягодами и нормальной чашечкой (генотип AABB) с формой с белыми ягодами и листовидной чашечкой (генотип aabb). Первое гибридное поколение имело розовые ягоды и промежуточную чашечку (генотип AaBb), т.е. по обоим признакам было выявлено неполное доминирование. В F 2 было получено расщепление на 9 фенотипических классов в отношении 1 : 2 : 2 : 4 : 1 : 2 : 1 : 2 : 1, что отличается от расщепления при полном доминировании, равном 9 : 3 : 3 : 1. Не трудно подсчитать, что в случае, если в дигибридном скрещивании только в одной из двух пар генов имеет место неполное доминирование, то расщепление в F 2 по фенотипу будет иметь 6 классов - 3 : 6 : 1 : 2 : 3 : 1, а не 4.

4. Ключевые слова и понятия

дигибридное скрещивание закон комбинирования

независимого

моногибридное скрещивание полигибридное скрещивание тригибридное скрещивание

64

Лекция 6. МЕНДЕЛИЗМ. ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА.

Контроль за расщеплением. – Условия осуществления менделевских законов. – Обозначения генов. – Множественный аллелизм. – Ключевые слова и понятия.

1. Контроль за расщеплением. В предыдущих лекциях были показаны основные закономерности наследования при расщеплении гибридов. Эти закономерности составляют основу генетического анализа, применяемого при постановке экспериментов, связанных со скрещиванием форм растений и животных. При этом исследователь не только должен описать гибриды и произвести подсчеты потомства второго или любого другого расщепляющегося поколения, но и получить свидетельство совпадения ожидаемых и наблюдаемых чисел. Получение подобного свидетельства связано с проведением специальных биометрических расчетов. В основе применяемых методов лежит положение, что какое-либо явление считается случайным, если происходит реже, чем 1 раз на 20 случаев, т.е. с вероятностью не превышающей 5% (0.05). При генетическом анализе характера расщепления в потомстве гибридов применяется метод хи- квадрат (2 ). Для ознакомления с этим методом попробуем оценить данные Менделя, полученные им при дигибридном скрещивании растений гороха, а именно соответствие фактических данных расщепления в F 2 двухгенной гипотезе детерминации признаков гладкие - морщинистые и желтые - зеленые семена. Процесс расчетов представлен в таблице 6.1. Как видно из таблицы в опыте Менделя во втором поколении было получено 556 семян, из которых 315 были гладкие желтые, 101 – гладкие зеленые, 108 – морщинистые желтые и 32 – морщинистые зеленые. Основываясь на данных предыдущих разделов, мы вправе предположить, что имеем дело с дигибридным скрещиванием и расщепление теоретически должно соответствовать отношениям 9:3:3:1. Следовательно 556 семян составляют 16 частей. А одна часть равна 34.75 семян. Умножив эту величину последовательно на 9, 3, 3 и 1, мы получим теоретически ожидаемое по нашей гипотезе число семян

65

по каждому фенотипу (q). Затем вычисляется отклонение (d) фактического значения расщепляющегося класса от теоретически ожидаемого. Для ликвидации знаков + и – значение d возводится в квадрат по каждому из фенотипов и делится на показатель q. Хи-квадрат вычисляется по формуле 2 =d 2 : q. Как видно из таблицы 2 равен 0.45.

Таблица 6.1

Анализ расщепления в F 2 гибридов гороха методом 2

Фенотип семян

Данные

Гладкие

желтые

Гладкие

зеленые

Морщинис-

тые желтые

Морщинис-

тые зеленые

Наблюдаемые

в опыте

315

101

108

32