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Mutación y Reparación
del DNA

Biología Molecular
2011

Mutación
Tienen lugar en todo el genoma
•  Sec. Codificantes
•  Sec. No codificantes
•  Células germinales Variabilidad genética
•  Células somáticas

Mutación
Recombinación meiótica
•  Evolución
•  Identidad genética
•  Alteraciones patológicas
•  Diagnostico prenatal

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Mutación
Región reguladora
Región estructural

§  Producto génico (RNA, proteína) funcionalmente alterado

§  Producto génico (proteína) cantidades alteradas

Mutación
Tipo de células Germinal
Somática
Mutaciones

Magnitud Grandes (anomalías cromosómicas)

Medianas
Pequeñas (puntuales)

Mecanismos M. Endógenas Error en la replicación

(espontaneas) Desanimación oxidativa
Inestabilidad química
Mutágenos endógenos

M. Exógenas Agentes químicos

(inducidas) Agentes físicos
Agentes biológicos

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Mutación
- Transmisión solo a células hijas

Células Somática -  No son heredables

Importantes en el envejecimiento y cáncer.
-  Determinan características
normales o patológicas del
organismo
-  Cuanto antes ocurra la mutación
durante el desarrollo, más grande
será el clon mutante.

Mutación - Puede no influir en el fenotipo de la

célula o individuo.
Células germinales
-  Heredable, transmitiéndose a todas
las células del organismo hijo
(alteración o enfermedad)

- Dependiendo de cual sea la función

afectada:

•  Esencial origina individuos inviables

(abortos tempranos).

•  No esencial enfermedad congénita o

hereditaria.

Se cree que la mutación ligada al cromosoma X (recesiva) causante

de la Hemofilia en las familias reales europeas apareció en las
células germinales de la Reina Victoria o de uno de sus padres

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Tipos de mutación

•  MUTACIÓN CROMOSÓMICA

•  ALTERACIONES CROMOSÓMICAS ESTRUCTURALES:

- Reorganización de partes de un cromosoma

•  ALTERACIONES CROMOSÓMICAS NUMÉRICAS:

- Cambio en el número de cromosomas

Identificación de cada cromosoma

individual:

- Longitud

- Relación de tamaño entre brazos

- La heterocromatina y los engrosamientos

Permite detectar cambios en la estructura
cromosómica

Tipos de mutación

•  MUTACIÓN CROMOSÓMICA

El estudio de las series normales y anormales de cromosomas se conoce como

Citogenética

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Tipos de mutación

•  MUTACIÓN CROMOSÓMICA

El estudio de las series normales y anormales de cromosomas se conoce como

Citogenética

Tipos de mutación

MUTACIONES PUNTUALES implican normalmente a un solo
nucleótido

•  SUSTITUCIÓN:
Aparición de un nucleótido en una posición de la secuencia ocupada
originalmente por otro.
•  Relativamente común en DNA codificante y no codificante.

Transición: sustituciones de una pirimidina a otra, o de una purina

por otra.

T --- A (normal) T* --- G (transición)

C --- G (normal) C* --- A (transición)

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Tipos de mutación

MUTACIONES PUNTUALES implican normalmente a un solo
nucleótido

•  SUSTITUCIÓN:
Aparición de un nucleótido en una posición de la secuencia ocupada
originalmente por otro.
•  Relativamente común en DNA codificante y no codificante.

Transverción: sustituciones de una purina por una pirimidina o

viceversa.

T --- A (normal) T* --- C (transverción)

C --- G (normal) C* --- T (transverción)

Tipos de mutación

MUTACIONES PUNTUALES implican normalmente a un solo
nucleótido

Sustitución de una única base

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Tipos de mutación

MUTACIONES PUNTUALES implican normalmente a un solo
nucleótido

•  DELECIÓN O INSERCIÓN:
Se elimina o añade uno o más pares de bases, alterando el marco
de lectura de todas las tripletas de pares de bases.

•  Comunes en DNA no codificante, infrecuentes en DNA codificante.

DNA T T A C G C G T T G A T T C T
RNA A A U G C G C A A C U AA G A
Met – Arg – Asn - Terminación

DNA T T A C G A C G T T G A T T C T
RNA A A U G C U G C A A C U A A G A
Met – Leu – Gln – Leu – Arg….

Tipos de mutación

Translocación cromosoma 4 y 20

www.nhgri.nih.gov/DIR/VIP

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Tipos de mutación

Deleción
Duplicación
Inversión

www.nhgri.nih.gov/DIR/VIP

Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones silenciosas (sense mutation)

•  Numerosas (23-25% de todas las mutaciones del DNA

codificante).

•  A pesar de haber un cambio en la secuencia de DNA, no se

altera la secuencia de su producto proteico.

•  Esto es posible debido a la degeneración del código genético.

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Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
•  La alteración de la secuencia de nucleótidos afecta la secuencia
proteica
•  Codifica uno a varios aminoácidos diferentes a la secuencia original.
•  Efecto beneficioso <1%

Tipos mutaciones:
•  Alteran el sentido (missense mutation)
•  Cambian el marco de lectura (frameshift mutation)
•  Terminación prematura de la proteína (nonsense mutation)

Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
•  La alteración de la secuencia de nucleótidos afecta la secuencia
proteica
•  Codifica uno a varios aminoácidos diferentes a la secuencia original.
•  Efecto beneficioso <1%

Alteración del sentido:

•  La sustitución de una base origina un nuevo triplete que codifica a un aminoácido
diferente

•  La mayoría de las mutaciones en regiones codificantes son de este tipo (73%)

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Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
Alteración del sentido:

Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
Alteración del sentido:

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Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
•  La alteración de la secuencia de nucleótidos afecta la secuencia
proteica
•  Codifica uno a varios aminoácidos diferentes a la secuencia original.
•  Efecto beneficioso <1%

Cambio del marco abierto de lectura:

Consiste en la inserción o deleción de nucleótidos en uno a más pares de bases, no
múltiplo de 3.

Cambia la forma en que se leen los tripletes.

Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
Cambio del marco abierto de lectura:

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Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
•  La alteración de la secuencia de nucleótidos afecta la secuencia
proteica
•  Codifica uno a varios aminoácidos diferentes a la secuencia original.
•  Efecto beneficioso <1%

Termino prematuro de la síntesis de proteína:

Mutación que no afecta la secuencia de aminoácidos

codificados, sino que la sustitución, inserción o deleción de
uno o varios nucleótidos tiene como efecto la aparición de
un codón de terminación o paro.

Poco frecuentes, 4% de las sustituciones en el DNA
codificante.

Efecto de las mutaciones sobre la

proteína sintetizada
Mutaciones no silenciosas
Termino prematuro de la síntesis de proteína:

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Si los cambios no son reparados . . .

•  Las células en proliferación o quiescentes

acumularían tantas mutaciones que morirían.

•  Detección y Reparación mantención de la

integridad estructural del genoma y genes
•  Sistemas enzimáticos in vivo

Daño del DNA

Lesión del DNA Ejemplo / Causa

Base faltante Remoción de purinas por ácido y calor (en codiciones fisiológicas
≈104 purinas/dia /célula en un genoma de mamífero); remoción de
bases alteradas (ej. Uracilo por las DNA glicosilasas
Base alterada Radiaciones ionizantes, agentes alquilantes (ej. Alquil metano
sulfonato)
Base incorrecta Mutaciones que afectan la corrección de errores 3′ → 5′ por la
acción exonucleasa de bases incorporadas incorrectamente.
Salientes por deleciones Agentes Intercalantes (ej., acridinas) que causan adiciones o
o inserciones de un pérdidas de nucleótidos durante la recombinación o replicación.
nucléotido.
Pirimidinas unidas Dimeros Cyclobutilol (usualmente dímeros de timina) resultantes
de radiación UV
Rompimientos en hebra Rompimiento de enlaces fosfodiester por radiación ionizante o
sencilla o doble agentes químicos (ej., bleomicina)
Hebras con enlaces Enlaces covalentes de dos hebras por agentes alquilantes
cruzados bifuncionales (e.j., mitomicina C)
Fragments 3’- Disrupción de la estructura de la estructrua de la desoxiribosa por
desoxiribosa radicales libres que llevan a rompimiento de hebras.

SOURCE: Adapted from A. Kornberg and T. Baker, 1992, DNA

Replication, 2d ed., W. H. Freeman and Company, pp. 771 – 773.

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Reparación del DNA

Corrección de pruebas de la DNA Polimerasa

DNAPol I, II y III actividad exonucleasa 3’--5’

•  DNAPol reconoce el error
•  Detiene la adición de nucleótidos
•  Libera último nucleótido mal incorporado

DNAPol I actividad exonucleasa 5’– 3’. Hidroliza DNA o RNA a

partir del extremo 5’ (eliminador de cebadores).

DNAPol III incorpora un error cada 104 nucleótidos adicionados

Experimentalmente la frecuencia de mutaciones es menor a un

error cada 109 nucleótidos, equivalente a 10-5 - 10-6 mutaciones

por gen y por generación.

Reparación del DNA

Corrección de pruebas de la DNA Polimerasa

DNAPol β, δ y ε reparación del DNA

DNAPol δ, γ y ε actividad exonucleasa 3

DNAPol de eucariontes no tienen actividad exonucleasa 5’.

•  Casi todas la DNAPol presentan actividad de exonucleasa

3 --5 , excepto la polimerasa α de eucariotes.

•  Si se muta el sitio o la subunidad con actividad de

corrección la tasa de mutación aumenta 1000 veces en
promedio

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Reparación del DNA

•  Las lesiones al DNA pueden ocurrir en células

en división pero también en células que no se
dividen.

•  Si el proceso de reparación fuera óptimo, no

habría acumulación de errores.

•  La acumulación de errores lleva al

envejecimiento.

¿ La mutación es un proceso anormal ?

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Diferencia entre polimorfismo y mutación

El polimorfismo ésta
referido a variaciones
genéticas que se
presentan en más del 1%
Mutación de la población.
o
polimorfismo ?

Concepto de Polimorfismo Genético

Una serie de fenotipos alternativos normales y
comunes
. . . se refiere a la ocurrencia de alelos múltiples en un locus, donde
al menos dos alelos aparecen con una frecuencia >1% en la
población general

•  La mayoría no tienen efectos sobre el fenotipo (regiones no

codificantes)

•  Fenotipo: Estatura: alta/baja; Cabello: claro/oscuro; Color de ojos,

etc.

•  Algunos polimorfismos son responsables de enfermedades

genéticas (1/20 Habitantes de Europa del Norte portan el gene de la
Fibrosis Quística)

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Detección y medida del polimorfismo a nivel de

DNA
Si una persona se diferencia de otra en 1/300, 10
millones de pb nos diferencia unos de otros.

Esta variabilidad no puede detectarse a nivel de

proteínas, donde los polimorfismos que se conocen no
explican la variabilidad existente en la secuencia de
DNA.

Tipos de Polimorfismo

SNP: Polimorfismo de único nucleótido
•  Ocurre de 1 en 100 a 300 bases
•  Genoma humano - 3 millones SNPs (~0,1%)
•  800.000 SNPs identificados (mapeados)
•  Diferentes SNPs por población

Polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) son variaciones en la secuencia

de DNA de un par de bases.

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Tipos de Polimorfismo

•  RFLP: (Restriction Fragment Long Polymorphism) Polimorfismos de
la longitud de fragmentos de restricción.

. . . . Son variaciones en la secuencia de DNA de un par de bases que afectan a la secuencia

de reconocimiento de una enzima de restricción. Se detectan por Southern blot

Tipos de Polimorfismo

•  VNTR: (Variable Number of Tandem Repeats) Repeticiones en
tándem de número variable.

. . . Son variaciones en la secuencia de DNA que afectan al número de repeticiones de una
secuencia. Corresponden normalmente a los minisatélites y microsatélites. Se detectan por
PCR. Muy polimórfico.

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Tipos de Polimorfismo

MICROSATÉLITES: (Dinucleotide
Microsatellite Repeat Polymorphism)
Repeticiones de un par de nucleótidos
en regiones no codificantes.

CODONES POLIMÓRFICOS: (Coding

Sequence Polymorphism)
Va r i a c i o n e s e n s e c u e n c i a s
codificantes.

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Aplicaciones de los polimorfismos

http://www.labgenetics.com.es/conocenos.htm

1.  Marcadores en el mapeo de genes

2.  Diagnóstico presintomático y prenatal de enfermedades hereditarias

3.  Detección de heterocigotos de riesgo

4.  Pruebas de paternidad

5.  Medicina forense

Aplicaciones de los polimorfismos a la Medicina

Forense
La información genética de un individuo es única todas las células de un individuo
tienen la misma información





Identificación de personas con la huella de DNA definida por un conjunto de
marcadores genéticos que el individuo heredó de sus padres

RFLP poco polimórficos

regiones muy variables
STR decenas

(polimorfismos)
VNTR miles

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Aplicaciones de los polimorfismos a la Medicina

Forense
Casos de paternidad

Padre
B

C
A

Madre
A
B

D

C

hijo 1 hijo 2 hijo 3 hijo 4

D

¿?

Aplicaciones de los polimorfismos a la Medicina

Forense
Identificación de individuos

Se analizan diferentes VNTR o STR, lo que

da un perfil de bandas para cada individuo

Cada alelo tiene una frecuencia

La frecuencia del perfil será el producto de

dichas frecuencias

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