Аналитический обзор

“Перспективные радиофармпрепараты для ПЭТ-онкологии”

1. 6-[18F]-L-ФДОФА ((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2-
аминопропионовая кислота.
2. [18F]NaF ([18F]натрия фторид)
3. [18F]ФЭТ ([18F]фторэтилтирозин)
4. [18F]ФЭХол ([18F]фторэтилхолин)
5. [18F]ФЭС ([18F]фторэстрадиол)
6. [18F]ФЛТ ([18F]фтортимидин)
7. [18F]фторированные аналоги PSMA .

Подготовлен:
Красикова Раиса Николаевна, к.х.н.,
Федорова Ольга Сталлитовна, к.х.н.

2016 г.

1
 Содержание

Стр.

3
Список сокращений

5
Введение. Методы получения РФП на основе фтора-18

6-[18F]-L-ФДОФА ((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2- 10
аминопропионовая кислота.

26
Список использованных источников для раздела 6-[18F]-L-ФДОФА

30
[18F]NaF ([18F]натрия фторид)

37
Список использованных источников для раздела [18F]NaF

39
[18F]ФЭТ ([18F]фторэтилтирозин)

55
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭТ

59
[18F]ФЭХол ([18F]фторэтилхолин)

71
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭХол

74
[18F]ФЭС ([18F]фторэстрадиол) [18F]ФЭС

86
Список использованных источников для раздела [18F]ФЭС

89
[18F]ФЛТ ([18F]фтортимидин) [18F]ФЛТ

102
Список использованных источников для раздела [18F]ФЛТ

105
[18F]фторированные аналоги PSMA .

108
Список использованных источников для раздела Аналоги [18F]PSMA

2
 Список сокращений

ПЭТ Позитронная эмиссионная томография

РФП Радиофармпрепарат
Good manufacturing practice for medicinal products – надлежащая
GMP производственная практика для производства лекарственных
средств
Na[18F]F [18F]фторид натрия
[99mTc]МДФ Метилендифосфонат технеция-99m
[18F]ФДГ 2-[18F]фтор-2-дезокси-D-глюкоза
[11C]МЕТ [11C]метил-L-метионин
[18F]ФЭХол [18F]фторэтилхолин
([18F]ФМетХол [18F]фторметилхолин
[18F]ФЭТ [18F]фторэтил тирозин
[18F]ФАА [18F]фторированные аминокислоты
[18F]ФЭС 16α-[18F]фтор-17β-эстрадиол
[18F]ФМИЗО [18F]фторомизонидазол

18
((S)-3-[3,4-дигидрокси-6-[18F]фторфенил]-2-аминопропионовая
6-[ F]-L-ФДОФА
кислота
[18F]ФЛТ 3’-дезокси-3’-[18F]фтортимидин

18
Меченные [18F] аналоги PSMA (prostate specific membrane
F-ПСМА
antigen)
Сульфурильный
прекурсор для синтеза 3-О-метоксиметил-16,17-О-сульфурил-16-эпиэстрол
[18F]ФЭС
РЭ Рецепторы к эстрогенам
РП Рецепторы к прогестерону
Ms Мезил. Метилсульфонат ион
Tf Трифлат. Трифторометилсульфонат ион
Ns Нозил. 4-нитробезилсульфонат ион
Ts Тозил. Пара-толуол-сульфонат ион.
Boc Трет-бутокси карбонил

3
Boc-DMTr-Ns 3-N-Boc-5'-O-диметокситритил-3'-O-нозил-тимидин
Boc-Boc-Ns 3-N-Boc-5'-O-Boc-3'-O-нозил-тимидин
МФХК Межфазный хиральный катализатор
EOS End of synthesis - выход на конец синтеза
EOB End of bombardment - выход в пересчете на конец облучения
ТФЭ Твердофазная экстракция
Бк Беккерель, единица измерения радиоактивности, 1 расп/c
Ки Кюри, единица измерения радиоактивности, 3,7×1010 расп/c

4
 Введение

Методы получения РФП на основе фтора-18

Современный этап развития метода ПЭТ характеризуется интенсивным
использованием РФП на основе наиболее долгоживущего из циклотронных ПЭТ
радионуклидов, фтора-18, ядерно-физические характеристики которого практически
идеально подходят для ПЭТ. Использование фтора-18 позволяет достичь наиболее высокого
пространственного разрешения, что обусловлено низкой энергией испускаемых позитронов
(β+) и, соответственно, минимальным пробегом в клетке (2.4 мм). Относительно большой по
сравнению с другими циклотронными ПЭТ радионуклидами (15О, 13
N и 11
С) период
полураспада 18
F (110 мин) позволяет осуществлять сложные радиохимические синтезы и
доставлять РФП на достаточно большие расстояния в клиники, не имеющие собственного
циклотронно-радиохимического комплекса. В настоящее время число устанавливаемых ПЭТ
камер намного выше, чем инсталлируемых циклотронов, и именно РФП, меченные фтором-
18, пользуются наибольшим спросом у клиницистов
К достоинствам фтора-18 относится и возможность получения радиотрейсеров без
добавления носителя (no carrier added, n.c.a.) с высокой мольной активностью, 1000-10000
Ки/мМоль. Мольная (удельная) активность является «краеугольным камнем» использования
ПЭТ в рецепторных исследованиях, где количество вводимого в составе РФП
нерадиоактивного субстрата должно быть сведено к минимуму (на уровне нано- и пико
молей) с тем, чтобы избежать «насыщения» активных мест связывания рецепторов. В
исследованиях новых лекарственных препаратов все более широко применяются ПЭТ
сканнеры для мелких лабораторных животных (small animals PET), где, с учетом малой
массы животных, высокая удельная активность РФП является определяющей.
Из более двадцати известных методов получения фтора-18 наибольшее практическое
применение получили две ядерные реакции, основные характеристики которых приведены в
табл. 1. Радионуклид, генерируемый в реакции 18
О(p,n)18F при облучении воды-18О
(обогащение 95-97%) в водной мишени циклотрона протонами, стабилизируется в
химической форме [18F]фторида, пригодной для синтеза РФП методом нуклеофильного
радиофторирования. Радионуклид в газообразной форме [18F]F2, используемой для введения
метки в молекулы по реакции электрофильного фторирования, чаще всего получают
облучением газовой мишени, заполненной смесью неона и фтора, дейтонами, по реакции
20
Ne(d,α)18F или кислородной газовой мишени, заполненной обогащенным [18О]О2, в которой
[18F]F2 получают по ядерной реакции 18О(p,n)18F.
5
 Таблица 1. Наиболее распространенные ядерные реакции получения фтора-18 в
коммерческих циклотронах
Ядерная Облучаемое Химическая Сечение, Макс. Добавление
реакция вещество форма фтора-18 max мбарн активность носителя
18
О(p,n)18F [18O]Н2О [18F]фторид 700 до 25 Ки*) Нет
20
Ne(d,α)18F Ne (0.5-1% F2) [18F]F2 115 300 мКи Да
18
О(p,n)18F [18O]О2 [18F]F2 700 1.3 Ки Да

*) при одновременном облучении двух мишеней током пучка 80 µА в течение двух

часов
Выбор метода получения фтора-18 определяется выбором стратегии синтеза РФП.
Нуклеофильное фторирование - наиболее распространенный метод получения различных
классов радиотрейсеров; именно он применяется в производстве большинства
радиотрейсеров, используемых в клинической практике, начиная с [ 18F]ФДГ и других.
Простой и удобный метод получения высокоактивных количеств радионуклида при
облучении водной мишени протонами на циклотронах средних энергий делает этот метод
особенно привлекательным для рутинного производства РФП. В сочетании с современными
способами извлечения фтора-18 из облученной воды на анионообменных одноразовых
картриджах, метод оказался очень удобным для автоматизации. Принципиально важным
является тот факт, что фтор-18, генерируемый в ядерной реакции 18
O(p,n)18F в водной
мишени циклотрона, производится без добавления носителя (no carrier added), что снимает
многие проблемы, связанные с низкой удельной (мольной) активностью при синтезе РФП
электрофильным методом.
При получении фтора-18 в газовой мишени необходимо добавление носителя,
стабильного [19F]F2, для эффективного извлечения [18F]F2 (эффективность извлечения не
превышает 85%). В итоге полученные электрофильным методом радиотрейсеры имеют
низкую удельную (мольную) активность, и метод не может применяться при мечении
Поэтому электрофильный метод не может применяться в синтезе потенциально токсичных
фторпроизводных, например, 3-[18F]фтор-L-тирозина, а также всех рецепторных
радиолигандов.
Ограничением электрофильного метода, кроме низкой удельной активности, является
невысокая производительность газовой мишени: 150-300 мКи для реакции 20
Ne(d,α)18F. При
этом некоторые коммерческие ПЭТ циклотроны (MINITrace, RDS CTI, KOUNTRON)
6
оперируют только пучками протонов и не имеют опции для генерирования дейтронов. В
последние годы для получения фтора-18 в форме [18F]F2 используют реакцию 18
О(p,n)18F с
более высоким сечением (σmax 700 мбарн). Хотя этот метод был предложен еще в 80-е годы,
коммерческие версии газовых мишеней для облучения [18О]O2 стали доступными
сравнительно недавно. Необходимость применения двух ступенчатого протокола облучения,
а также работа с дорогостоящим обогащенным кислородом-18 (стоимость 1 л около 800
долларов США) представляют определенные технические сложности для использования в
качестве рутинного метода производства РФП. Кроме того, теоретический выход
электрофильного радиофторирования составляет лишь 50%, поскольку в молекулу
«внедряется» лишь один из двух атомов фтора. Поэтому электрофильный метод не дает
возможности получать высокие активности РФП. Метод применяется в тех случаях, когда
введение метки в молекулу нуклеофильным методом невозможно или требует
многостадийного синтеза, как, например, в случае 6-[18F]-L-ФДОФА ((S)-3-[3,4-дигидрокси-
6-[18F]фторфенил]-2-аминопропионовая кислота.
Все РФП, кроме 6-[18F]-L-ФДОФА, рассмотренные в данном аналитическом обзоре,
получают методом нуклеофильного радиофторирования; для синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА
используются и нуклеофильный, и электрофильный методы (будут рассмотрены
преимущества и недостатки каждого из них).
Ниже дается очень краткое описание принципов каждого из методов.
Электрофильное фторирование - исторически первый метод получения соединений,
меченных фтором-18, для использования в ПЭТ. В настоящее время в рутинном синтезе
РФП методом электрофильного фторирования используется только газообразного фтора
[18F]F2, (хотя ранее использовали и другие агенты - [18F]ацетилгипофторид, [18F]XeF2.
Реакции прямого электрофильного радиофторирования «природных» субстратов
электрофильным фтором или другими агентами применяются редко, поскольку имеют
достаточно низкую селективность и приводят к образованию смеси нескольких продуктов.
Так, в результате прямого фторирования ароматических аминокислот получается смесь
изомеров с различным положением фтора-18 в ароматическом кольце, тогда как для
применения в ПЭТ подходит лишь один из них. Для стереоспецифичного
(региоселективного) введения метки, обеспечивающего образование лишь одного
стереоизомера, было предложено использовать реакции деметаллирования, в которых
субстратами для электрофильного фторирования служат металл органические производные.
Чаще всего применяется реакция дестаннилирования; исходным веществом
(предшественником) в которой служит модифицированная молекула аминокислоты,
содержащая в 6-ом положении бензольного кольца «уходящую» группу Sn(CH3)3. Эта группа
7
и замещается на фтор-18, при этом целевая аминокислота получается с энантиомерной
чистотой более 99%. Электрофильный синтез включает всего две стадии (фторирование и
снятие «защиты» амино-, карбокси- и гидрокси- групп) и успешно автоматизирован в
современных модулях для синтеза РФП для ПЭТ.
При кажущейся простоте процесса электрофильный метод синтеза включает много
промежуточных этапов, что в сочетании с длительным временем облучения, приводит к
очень большому общему времени получения РФП и невысокой активности конечного
продукта. Возможности получения 6-[18F]-L-ФДОФА этим методом будут рассмотрены в
соответствующем разделе.
Нуклеофильное фторирование - наиболее распространенный метод получения
различных классов РФП на основе фтора-18. Для использования в реакциях нуклеофильного
фторирования [18F]фторид выделяют из облученной воды методом анионообменной
хроматографии, для этого используются коммерчески доступные одноразовые
анионообменные картриджи, чаще всего SepPak QMA light (WATERS). Облученную в
мишени обогащенную воду доставляют на вход модуля синтеза, где обычно и установлен
картридж, током гелия. Удерживаемый на картридже [18F]фторид может быть элюирован
растворами различного состава непосредственно в реакционный сосуд, что существенно
упрощает автоматизацию процесса. Для участия в реакциях нуклеофильного замещения
фтор-18, получаемый в водной мишени в сильно сольватированной форме, разработаны
специальные приемы. Перевод [18F]фторида из водной в органическую фазу достигается
путем использования межфазных катализаторов (МФК) - краун-эфиров или криптандов - в
комбинациях с различными основаниями; в а также соли тетрабутил- или тетраэтил-
аммония.
В синтезе большинства РФП для рутинных ПЭТ исследований в качестве МФК
используют аминополиэфир криптофикс (4,7,13,16,20,24-гексаокса-1,10-
диазабицикло[8.8.8]гексакозан или К2.2.2.). Эффективным и удобным для автоматизации
является метод элюирования фтора-18, адсорбированного на анионообменном картридже,
раствором криптофикса и карбоната калия в смеси ацетонитрил:вода в объемном отношении
96:4 или другими комбинациями. Растворители удаляют дистилляцией в токе азота, получая
в итоге «сухой» реакционноспособный комплекс [K/K2.2.2] +18F-, который и является
фторирующим агентом. В этом случае можно избежать традиционно применяемой в ПЭТ
процедуры так называемой азеотропной отгонки следов воды, в процессе которой в смесь
порциями добавляется ацетонитрил.
Реакции нуклеофильного фторирования проводят в безводных апротонных
растворителях, таких как ДМСО, ДМФ, MeCN и других; присутствие следов воды является
8
одним из факторов, снижающих радиохимический выход. При проведении реакции прямого
нуклеофильного замещения уходящей группы функциональные группы с подвижными
атомами водорода в молекуле субстрата должны быть защищены для предотвращения атаки
нуклеофила в нежелательное положение. В этом случае защитные группы удаляют по
окончании синтеза в результате гидролиза (кислотного или щелочного), после чего конечный
продукт выделяют из реакционной смеси методами полупрепаративной ВЭЖХ или
твердофазной экстракции.
Очистка методом твердофазной экстракции всегда предпочтительна, поскольку
позволяет существенно упростить саму процедуру синтеза (а также стадию подготовки
модуля), существенно сократить время синтеза. Однако, при ее использовании (в отличие от
классической полупрепаративной ВЭЖХ) нужно особо тщательно проводить контроль за
содержанием нерадиоактивных примесей в продукте; обычно это делается на стадии
разработки технологии, а в рутинном производстве контроль качесвта осуществляется в
соответствии со спецификацией. Класическим примером успешного применения этого
метода очистки является синтез [18F]ФДГ; метод успешно применен и в синтезе и очистке
многих РФП, рассматриваемых в данном обзоре.

9
 6-[18F]-L-ФДОФА
Применение 6-[18F]-L-ФДОФА в клинических ПЭТ исследованиях.

Использование [18F]ФДОФА в ПЭТ-диагностике изначально было сфокусировано на

изучении тяжелых расстройств центральной нервной системы и оценке больных с
симптомами болезни Паркинсона. [18F]ФДОФА - меченый фтором-18 аналог L-ДОФА (L-
3,4-дигидроксифенил аланина), эндогенного предшественника дофамина. L-ДОФА в
лекарственной форме Леводопа применяется для лечения Паркинсонизма в течение многих
десятилетий. Также как и L-ДОФА, 6-[18F]-L-ФДОФА проникает через
гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), декарбоксилируется L-дофадекарбоксилазой с
образованием меченого дофамина, аккумулируемого в дофаминергических нейронах
различных участков мозга, главным образом в субстанции Нигра (черном теле). Это
позволяет методом ПЭТ с 6-[18F]-L-ФДОФА получать количественную информацию о
плотности дофаминергических нейронов.
Болезнь Паркинсона (БП) - хроническое прогрессирующее нейродегенеративное
заболевание, связанное преимущественно с дегенерацией нейронов в субстанции Нигра и
нарушением функции базальных ганглиев [Шток, 2002]. Это заболевание впервые описал
лондонский врач Дж. Паркинсон еще в 1817 году в «Эссе о дрожательном параличе», и
впоследствии оно было названо его именем. По данным ВОЗ в мире насчитывается около 3,7
млн (0,06% населения) людей с БП. С возрастом (после 50 лет) наблюдается рост
заболеваемости, который достигает максимума в возрасте 70–79 лет, средний возраст начала
заболевания составляет 55 ± 10 лет. В последнее время в развитых странах отмечается
некоторый рост заболеваемости БП, что связывают с увеличением средней
продолжительности жизни населения, а также с улучшением диагностических возможностей
современной медицины [Шток, 2002].
На ранних стадиях БП гибель части дофаминергических нейронов компенсируется
усиленным синтезом дофамина оставшимися клетками. Клиническая симптоматика может
появляться при гибели 50–80% дофаминергических нейронов, что соответствует снижению
плотности нейронов в стриатуме по данным ПЭТ-ФДОФА на 60–80% [Brooks, 2000]. Ранняя
диагностика паркинсонизма, еще до появления тяжелых неврологических нарушений,
позволяет начать поддерживающее лечение раньше и продлить период активной жизни
пациента.
Мониторинг с 6-[18F]-L-ФДОФА помогает отличить болезнь Паркинсона от других
неврологических отклонений с похожими симптомами и отслеживать действенность

10
примененной терапии [Seibyl, 2005]. Возможно проводить и уточняющую диагностику
других заболеваний, связанных с нарушением дофаминергической функции мозга, как
например, болезни Альцгеймера [Braak, 2003].
Кроме того, с недавнего времени 6-[18F]-L-ФДОФА эффективно применяется в ПЭТ
диагностике нейроэндокринных опухолей (НЭО). Исследование [Montravers, 2006]
описывает результаты ПЭТ-6-[18F]-L-ФДОФА у 30 пациентов с карциноидными опухолями,
где верный диагноз по результатам ПЭТ был поставлен в 93% случаев. При диагностике
феохромоцитом исследование с 6-[18F]-L-ФДОФА продемонстрировало 100%
чувствительность и 100% специфичность [Hoegerle, 2002]. Работа той же группы ученых
показала пригодность этого РФП для диагностических исследований медуллярной
карциномы щитовидной железы [Hoegerle, 2001]. В большом обзоре 2013 года [Balogova,
2013] подробно описываются клинические случаи и статистика исследований с [18F]ФДГ и 6-
[18F]-L-ФДОФА при разных типах нейроэнодкринных опухолей. Авторы пришли к
заключению о том, что для диагностики необходим ряд последовательных исследований,
одним из которых является ПЭТ-скан с 6-[18F]-L-ФДОФА. В целом в диагностике НЭО
метод ПЭТ с 6-L-[18F]ФДОФА успешно конкурирует с 68
Ga-DOTATATE - наиболее
распространенным РФП на основе генераторного галлия-68 (T1/2 68 мин). В сравнении с
классическим ОФЭКТ исследованием с меченным йодом-123 мета йодбензил гуанидином
([123I]MIBG), применяемым более 30 лет в диагностике НЭО, ПЭТ исследование с 6-L-
[18F]ФДОФА выигрывает ввиду более высокой разрешающей способности метода ПЭТ и
лучшей контрастности ПЭТ изображений.
6-[18F]-L-ФДОФА является важнейшим РФП для дифференциальной диагностики
опухолей мозга методом ПЭТ. Визуализация таких новообразований с [18F]ФДГ
затруднительна ввиду повышенного фонового накопления глюкозы в сером веществе мозга.
Поэтому применение РФП другой химической природы, в частности аминокислот, позволяет
получить более контрастные ПЭТ изображения в сравнении с [18F]ФДГ. В настоящее время
лучшим диагностическим агентом этого класса признан L-[11C-метил]метионин ([11C]МЕТ),
применяемый во многих ПЭТ центрах России. Ограничением [11C]МЕТ является малый
период полураспада углерода-11 (20.4 мин). Использование меченых фтором-18
аминокислот п в последние годы приобретает все большее значение за счет появлений
большого числа ПЭТ центров, не оборудованных собственным циклотроном и работающих
на поставляемых централизованно РФП. Сравнение 6-[18F]-L-ФДОФА с [11C]МЕТ и
[18F]ФДГ убедительно возможность применения 6-[18F]-L-ФДОФА в диагностике опухолей
мозга наравне с [11C]МЕТ [Becherer, 2003; Chen, 2006]. На основании данных исследования
кинетики накопления 6-[18F]-L-ФДОФА в мозге пациентов с опухолями мозга со степенью
11
злокачественности от II до IV были выстроены двух- и трех-компартментная модели для
расчета накопления-выведения препарата из опухолевой ткани [Schiepers, 2007].
6-L-[18F]ФДОФА вошла в список РФП класса аминокислот (наряду с [ 18F]ФЭТ),
рекомендованных в 2016 г. для диагностики глиом методом ПЭТ Европейской рабочей
группой [Albert, 2016].

Подробное описание синтезов.

Электрофильный синтез 6-[18F]-L-ФДОФА

Синтез 6-[18F]-L-ФДОФА электрофильным методом был разработан с использованием

в качестве прекурсоров модифицированных молекул аминокислот с органометаллическими
(ртуть, олово) или силильными уходящими группами и защищенными реакционно-
способными амино-, гидрокси- и карбоксильными группами (Boc, Bn, OCH3, OEt, CHO).
Региоселективность введения метки увеличивается благодаря перераспределению
электронной плотности кольца из-за образования связи металл-углерод. Выход реакции со
станнильной (производной олова) уходящей группой был выше, нежели с другими, а
токсичность - ниже, чем для производного ртути. В настоящее время только предшественник
с уходящей группой Sn(CH3)3 является коммерчески доступным и используется при
рутинном производстве 6-[18F]-L-ФДОФА (. Схема синтеза показана на Рис.1).

EtOOC EtOOC HOOC

R R NH2
N N
H [18F]F2 H HBr
18
Sn(CH3)3 18
F F
CHCl3 130oC, 10 мин

BocO BocO HO
OBoc OBoc OH

R = Boc, CHO

Рис. 1. Электрофильный синтез 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием реакции

дестаннилирования.

12
 В качестве растворителя на первой стадии фторирования долгие годы использовали
фреон (фтортрихлорметан), а после запрещения его применения - обычный или
высокочистый дейтерированный хлороформ [Kao, 2011]. Второй стадией синтеза является
снятие защиты функциональных и гидроксильных групп с использованием сильных кислот
(водных растворов HBr или HI). Преимуществами данного метода является высокая
региоселективность (Табл.1) и простая процедура синтеза, включающая всего две стадии.
Метод дестаннилирования успешно автоматизирован в современных модулях для синтеза
РФП для ПЭТ и применяется в большинстве ПЭТ центров для рутинного производства 6-
[18F]-L-ФДОФА. Следует отметить, что при использовании в качестве фторирующего агента
[18F]F2 в реакции фторирования необходимы большие (40-60 мг) количества прекурсора.
Даже при очистке методом полупрепаративной ВЭЖХ в продукте могут оставаться следы
токсичного металла, содержание которых надо строго контролировать.
Подробное описание процедуры электрофильного синтеза будет представлено в
разделе «Автоматизация».

Автоматизация синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА электрофильным методом (включая

методы очистки)

Реакции дестаннилирования позволяют достичь достаточно высоких

радиохимических выходов (максимальный теоретический выход 50%), см. Табл.2.

Таблица 2. Результаты электрофильных синтезов 6-[18F]-L-ФДОФА, выполненных

различными ПЭТ-группами. Очистка препарата выполняется методом ВЭЖХ во всех
случаях.

Время синтеза, Удельная

Радиох.выход,
Модуль включая ВЭЖХ активность, Ссылка
EOB, %
очистку, мин ГБк/µмоль

FDG Synthesizer
45 33 10 De Vries, 1999
(Nuclear Interface)

Tracerlab FX FE (GE
Нет данных 40 39 Kao, 2011
Healthcare)

SynChrom FDOPA 50-60 23 121 Luurtsema, 2016

13
 F2 (Raytest)

Однако в сочетании с низкой начальной активностью [18F]F2 даже этот метод не дает
возможностей нарабатывать 6-[18F]-L-ФДОФА в количествах, соответствующих
возрастающей потребности в применении этого РФП в ПЭТ диагностике. Так в типичном
синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА по методу [Kao, 2011] стартовая активность [18F]F2 после
облучения составляет около 9 ГБк (243 мКи). После завершения всех стадий синтеза,
включая очистку методом полупрепаративной радиоВЭЖХ, получают 2,6 ГБк или 70 мКи
(3-5 клинических доз РФП) радиотрейсера с удельной мольной активностью 39 ГБк/µмоль
(1,05 Ки/µмоль).
Методика синтеза электрофильным методом очень близка для разных модулей,
приведем для примера процедуру, которая дает в результате максимальный
радиохимический выход [Kao, 2011]. Газ [18F]F2 с носителем получают по ядерной реакции
20
Ne(d,α)18F путем облучения неоновой мишени дейтонами в течение 150 мин. Мишенный
неон содержит 0,3% фтора-19 (нерадиоактивного), который необходим для лучшего
выделения изотопа фтора-18 из мишени. После облучения мишенный газ доставляется в
сосуд, содержащий 60 мг станнильного прекурсора (ABX, Германия), растворенного в 10 мл
CFCl3. Реакция фторирования проходит при комнатной температуре, затем растворитель
упаривают. Гидролиз проводится путем добавления 48% HBr при температуре 130 °С в
течение 10 минут. Реакционную смесь остужают и частично нейтрализуют, после чего
подвергают очистке методом полупрепаративной ВЭЖХ на колонке VP250/16 Nucleosil 100-
7 C18 (Macherey-Nagel), элюент 6,9 г дигидрофосфата натрия в 1 л воды с добавлением 0,5
мл 0,5 N NaOH и 20 мл этанола. После очистки к раствору 6-[18F]-L-ФДОФА в элюенте
добавляют небольшое количество раствора аскорбиновой кислоты (100 мкл, 75 мг в 600 мкл
0,5 N NaOH) для стабилизации.

Нуклеофильный синтез 6-[18F]-L-ФДОФА, автоматизация метода, способы

очистки конечного продукта

Как уже отмечалось (см. введение), наиболее распространенным методом получения

РФП на основе фтора-18 является реакция нуклеофильного фторирования (замещения) с
использованием [18F]фторида, прежде всего благодаря простому и удобному методу
получения и выделения радионуклида в этой химической форме. Метод нуклеофильного

14
фторирования применяется для введения фтора-18 как в алифатические, так и в
ароматические субстраты. В случае сложных ароматических соединений, таких как
ароматические аминокислоты, содержащие фтор-18 в бензольном кольце (в том числе 6-
[18F]-L-ФДОФА), прямое введение метки невозможно, поскольку положение «уходящей»
группы сильно дезактивировано. В этом случае синтез радиотрейсера проводится в
несколько этапов. Сначала фтор-18 вводится в относительно простые молекулы (синтоны),
которые обладают высокой реакционной способностью в определенных реакциях.
Классическим методом синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА является предложенный в конце 90-х
годов метод асимметрического синтеза [Lemaire, 1994; Krasikova, 2004], протекающий в пять
стадий, как это схематично показано на Рис.2. Радиоактивными синтонами служат
замещенные бензил бромиды или бензил йодиды, меченные фтором-18. Эти соединения
используются в качестве электрофильных агентов в реакции асимметрического
алкилирования хиральных комплексов, содержащих глициновый или аланиновый фрагмент -
необходимый «кирпичик» для построения молекулы аминокислоты. Следует отметить, что
синтез лишь галогенирующего агента (бромида или йодида) выполняется в три стадии,
начиная с введения метки в молекулу замещенного бензальдегида, стадию восстановления
альдегида в спирт и галогенирования. На каждой стадии необходима промежуточная
очистка, в результате его очень сложно автоматизировать. Критичной стадией синтеза также
является снятие защиты гидрокси групп бензольного кольца с использованием 57% водного
раcтвора йодистоводородной кислоты при высокой температуре; что также ассоциируется со
сложностью автоматизации и риском повреждения компонентов (вентилей, клапанов и др.)
дорогостоящих модулей синтеза.

15
 Рис. 2. Общая схема асимметрического метода синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА [Орловская,
2014].

Асимметрические методы синтеза, при условии тщательного подбора хирального агента

и условий алкилирования, позволяют получать [18F]ФАА с высокой энантиомерной чистотой
(более 95%), необходимой для использования в ПЭТ.
Стехиометрический вариант метода (Рис. 3) синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с применением
комплекса NiII основания Шиффа глицина с хиральным реагентом - (S)-N-(2-бензоилфенил)-
1-(3,4-дихлобензил)пирролидин-2-карбоксамидом (DСBPB) разработан в ИНЭОС РАН,
Москва, и использован в радиохимическом синтезе в ИМЧ РАН, Санкт-Петербург
[Красикова, 2007]. Метод был автоматизирован с помощью лабораторного робота Anatech
RB86, которые в настоящее время не производятся и не применяются в рутинном синтезе.
Автоматизация этого метода на многофункциональном модуле синтеза, например, TracerLab
FX N Pro, в принципе возможна, но сильно затруднительна.
CHO O CHO O CH2OH
O NaBH4
[K/K2.2.2]+
DMSO,140oC, 18
O NO2 5 min O
18
F O F

Ph3PBr2
CH2Cl2 , 5 min

Cl Cl
Cl O Cl
Br

18
O F
O O
O CH2Cl2, t-BuOK O
N N
18
H 5 min, 40oC Ni F
Ni
H H
N N H
N H N
O O
Ph Ph
1) 6N HCl O O
5 min,140oC
COOH
18
F 2) 57% HI
Ni-DCBPB-Gly 10 min,170oC
NH2

HO OH
[18F]ФДОФА

Рис. 3. Cхема синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА методом стехиометрического

асимметрического синтеза [Красикова, 2007].
Другим вариантом асимметрического синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА является метод
межфазного хирального катализа (МФХ) с использованием различных катализаторов в
16
основном бинафтолов. Так в работе [Krasikova, 2004] в качестве МФХК катализатора
предложен 2-амино-2’-гидрокси-1,1’-бинафтил ((S)-NOBIN), а субстратом в реакции
энантиоселективного алкилирования выступал ахиральный комплекс Ni II основания Шиффа
глицина с (2-бензоилфенил)амидо-пиридил-2-карбоновой кислотой (NiIIPBPGly),
cодержащий активный метиленовый фрагмент глицина. В роботизированном варианте
синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА была получена с 96 % энантиомерной чистотой и 25% РХВ (с
поправкой на радиоактивный распад, EOB). Автоматизация этого метода на
многофункциональном модуле синтеза, например, TracerLab FX N Pro, также сильно
затруднительна, но возможна при наличии опытного радиохимика.
В работе [Libert, 2013] синтез 6-[18F]-L-ФДОФА проводили реакцией
асимметрического алкилирования субстрата О’Доннелла с участием двух МФХК (бифенил
или четвертичная аммониевая соль на основе алкалоидов семейства Cinchona).
Принципиально важным является то, что в отличие от традиционно применяемого в
асимметрическом синтезе замещенного [18F]фторбензибромида, авторы [Libert, 2013]
использовали [18F]фторбензилйодид, который в свою очередь получали реакцией с водным
57% раcтвором HI (а не агрессивными бромирующими агентами типа
трифенифосфиндибромида [Lemaire, 1994; Krasikova, 2004]). Предложенное в этой же
работе проведение самой реакции галогенирования в режиме on-line на одноразовом
картридже С18 является оптимальным решением для автоматизации процесса,
реализованном в кассетном варианте на модуле синтеза GE FASTlab. Эффективность метода
была продемонстрирована на примере получения мультидозовых количеств 6-[18F]-L-
ФДОФА. Начиная со 185 ГБк (5 Ки) [18F]фторида (активность на выходе из мишени после
100 мин. облучения) и времени синтеза 63 мин было получено более 45 ГБк (1,2 Ки) 6-[18F]-
L-ФДОФА с 96 % энантиомерной чистотой и удельной мольной активностью более 0.75
ТБк/ммоль. Однако, технология не была доведена до конца; кассета на рынке не появилась
ввиду сложности автоматизации последней стадии синтеза - снятия защиты гидрокси групп
бензольного кольца. Для этой цели были необходимы очень жесткие условия - нагревание с
57% раcтвором HI при 180-200оС в течение 20 мин; их не выдерживал материал кассеты. В
итоге эта стадия проводилась в отдельно стоящем нагревательном блоке, что нарушало всю
концепцию «синтеза в кассете» [Lemaire, 2015].
Эта проблема была недавно решена с использованием другого кассетного модуля
AllInOne, фирмы Trasis, Бельгия. Несмотря на то, что для проведения стадии гидролиза были
использованы те же жесткие условия, фирмой был разработан специальный устойчивый к
агрессивной йодистоводородной кислоте материал. Кассетная версия асимметрического
синтеза позволяет получать 6-[18F]-L-ФДОФА с воспроизводимым и высоким РХВ (>35% без
17
поправки на радиоактивный распад, EOS) c очень высокой удельной мольной активностью
(35 000 Ки/мМоль) и отличной энантиомерной чистотой ≥97%. Очистка 6-[18F]-L-ФДОФА
проводилась методом полупрепаративной ВЭЖХ с помощью встроенной в модуль системы,
что является исключительно удобным. В недавнем докладе канадских ученых [Pelerin, 2016]
сообщалось о выходе 6-[18F]-L-ФДОФА в 38% (EOS) с использованием этого же модуля.
После двух часов облучения фторной танталовой мишени (циклотрон Siemence Eclipse RH)
из 215 ГБк (5,8 Ки) фтора-18 было получено 82 ГБк (2,2 Ки) 6-[18F]-L-ФДОФА при времени
синтеза 73 мин. Немаловажен тот факт, что полученный продукт был стабилен в течение 12
часов при хранении при комнатной температуре. По мнению авторов, это позволит
поставлять 6-[18F]-L-ФДОФА на большие расстояния, в центры с 5-часовой доставкой.
Реализацию столь сложного многостадийного метода, как асимметрический синтез 6-
[18F]-L-ФДОФА, в кассетном модуле синтеза, при этом с высоким радиохимическим
выходом, можно считать огромным достижением и успехом современной автоматизации в
области ПЭТ радиохимии. На данный момент синтез 6-[18F]-L-ФДОФА на модуле AllInOne,
Trasis, занимает первое место по производительности, а сам модуль находит все более
широкое применение в рутинном производстве РФП, в особенности, при необходимости
получения мультидозовых количеств.
Тем не менее, несмотря на достигнутый успех (и принимая во внимание высокую
стоимость кассеты для AllInOne, Trasis, состоящую из трех отдельных «мини касет»),
огромные усилия ПЭТ-радиохимиков сосредоточены на разработке методов, основанных на
прямом введении метки в ароматическое кольцо с тем, чтобы максимально приблизить
технологию синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА к [18F]ФДГ. [18F]ФЛТ, [18F]ФЭТ и другим широко
применяемым РФП.
Для решения этой задачи было предложено несколько абсолютно разных подходов, что
отражено в целом ряде публикаций, появившихся в последние два-три года и рассмотренных
в обзорах [Орловская, 2014; Edwards, 2015; Prietze, 2014].
Наибольший интерес в настоящее время получила разработка немецких ученых,
выполненная в сотрудничестве с фирмой АВХ - известного поставщика и производителя
прекурсоров для ПЭТ [Hoepping, 2014]. В основе их работы лежат результаты исследования
группы ученых из Юлиха, Германия [Wagner, 2009], впервые предложивших трех стадийный
метод синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА (Рис. 4). Метод основан на реакции изотопного обмена
стабильного фтора-19 (который является в данном случае «уходящей» группой) на
радиоактивный фтор-18 в молекуле субстрата, где положение нуклеофильной атаки
активировано карбонильной группой, а амино- и карбокси- функции аминокислоты
защищены стерически объемным заместителем, с тем, чтобы обеспечить сохранение
18
структуры L-изомера в условиях радиофторирования. После окисления Байера-Виллигера
(Bayer-Villiger) m-хлорнадбензойной кислотой и кислотного гидролиза 6-[18F]-L-ФДОФА
выделяют из реакционной смеси методом полупрепаративной ВЭЖХ. Метод обеспечивает
получение 6-[18F]-L-ФДОФА с энантиомерной чистотой более 95%. Тем не менее, процесс
синтеза являлся достаточно длительным и нуждался в улучшении радиохимического выхода.
Кроме того, из-за использования в качестве уходящей группы фтора-19, 6-[18F]-L-ФДОФА
получается в форме «с добавлением носителя», хотя удельная мольная активность
существенно выше, чем при электрофильном синтезе данного РФП.

Рис. 4. Схема синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием реакции изотопного обмена

и последующей реакции окисления Байера-Виллигера [Wagner, 2009]

Разработка фирмой АВХ [Hoepping, 2014] метода синтеза предшественника сходной

структуры, но с уходящей нитро группой (Рис.5) позволила решить эту проблему, обеспечив
получение радиотрейсера «без добавления носителя» (no carrier added) с высокой удельной
мольной активностью. Использование авторами метилметокси (МОМ) группы в качестве
защиты гидроксильной группы амино- и карбокси- функций аминокислоты дает ряд
преимуществ в автоматизации процесса, поскольку снятие защиты в этом достигается при
гидролизе водным раствором соляной кислоты. Метод защищен патентом ЕР [Hoepping,
2014], а сам прекурсор является коммерчески доступным и крайне дорогостоящим (цена на
российском рынке 240 000 руб. за 200 мг при расходе на один синтез в 20 мг). Высокая
стоимость обусловлена очень сложным синтезом данного прекурсора и тенденциями рынка.

19
 Рис. 5. Схема синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием нитро-прекурсора фирмы
АВХ [Hoepping, 2014]

Метод был автоматизирован в кассетном модуле синтеза FastLab, GE Health Care.

Неоптимизирвоанный выход по данным 2014 г (GE PET users Foum, Goteborg, презентация
ABX) составлял 20%. Данных о доступности кассеты на рынке и спецификации, а также о
РХВ на сайте фирмы пока нет.
Очень интересный метод введения фтора-18 в неактивированное положение
ароматического кольца предложен недавно группой ученых из Кембриджа [Tredwell, 2014].
Он основан на реакции прямого нуклеофильного фторирования пинакол замещенных
арилбороновых эфиров в присутствии катализаторов - комплексов меди. В основу этой
разработки была положена реакция Чана-Лама, а именно образование новой связи C-Х (где
Х= C, N, O и др.) при взаимодействии арилбороновых кислот с различными
нуклеофильными агентами, катализируемое комплексами меди. Схема синтеза в применении
к получению 6-[18F]-L-ФДОФА приведена на Рис.6. Метод считается очень перспективным,
так как включает всего две стадии (в методе ABX – 3 стадии). Однако, использование в
реакции гидролиза агрессивной йодистоводородной кислоты делает его сложным и мало
привлекательным для автоматизации в современных модулях синтеза, а радиохимический
выход составляет всего 12% (EOS). Метод разработан не в ПЭТ центре, а в академическом
институте, и, несмотря на представление данных в очень престижных изданиях, его
доработка до варианта, пригодного в рутинном синтезе, потребует времени. Согласно
последней публикации этой группы совместно с фирмой ABX [Preshlock, 2016] метод был
автоматизирован на модуле Synthra (Германия); 6-[18F]-L-ФДОФА была получена с РХВ в
9% (EOS) при времени синтеза в 120 мин, включая очистку методом полупрепаративной
ВЭЖХ.

20
 Рис. 6. Схема нуклеофильного синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием пинакол
замещенных арилбороновых эфиров [Tredwell, 2014]
Некоторые другие методы нуклеофильного синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА с
использованием прекурсоров на основе солей йодония, гипервалентного йода,
рассмотренные в обзорах [Орловская, 2014; Edwards, 2015; Prietze, 2014], пока не получили
практического применения и не будут обсуждаться в данном обзоре.

Методы контроля качества [18F]ФДОФА

Контролируемый
Критерий допустимости Метод определения
параметр
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность
Соответствие стандарту РадиоВЭЖХ, условия*
(идентичность)
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия *) Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФДОФА должно
>95%
чистота, % быть в пределах ±5% от Rt
нерадиоактивного стандарта
Энантиомерная
>95% РадиоВЭЖХ, условия **
чистота, %
Объемная Достаточная для проведения Измерение объема шприцом,
активность, Ки/мл ПЭТ-исследования на измерение активности в изотопном
или МБк/мл человеке калибраторе

21
 Химическая чистота >99%,

Электр. способ
производства:
Триметил хлорид олова 0,5
Химическая
мг/V и 6-гидрокси-ДОФА ВЭЖХ, #
чистота (%) и
0,025 мг/V, V -
химические
максимально вводимая доза,
примеси:
мл#
Нуклеоф.способ
производства: наличие и
количество примесей ВЭЖХ
зависят от типа
нуклеоф.синтеза
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,0 – 5,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Раствор должен быть Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
стерильным питательных средах; ОФС 42-0066-07
Уровень Менее 175/V, где V -
бактериальных максимально вводимая доза,
ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-0062-07
эндотоксинов, мл#
EU/ml

#) European Pharmacopoea 8.0;

*)
колонка EC Nucleodur Pyramid C18, 5 µm, 250 x 4.6 мм (Macherey-Nagel), подвижная фаза:
раствор 0,1% CH3COOH в воде + 15% метанола, длина волны 254 нм; 1 мл/мин; Rt [18F]
ФДОФА 6,2 мин [Kao, 2011];

22
**)
хиральная колонка Crownpak (+) (Daicel), 150 x 3 мм; подвижная фаза - раствор хлорной
кислоты, рН 2, 0,8 мл/мин; времена удерживания (Rt) L- и D изомеров [18F] ФДОФА
составляли 5,3 и 6,5 мин, соответственно. [Красикова, 2007]
***)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100 мм,
элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v);. Интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку.

Главные параметры, влияющие на то, сколько именно 6-[18F]-L-ФДОФА можно

получить на конечном этапе.

В настоящее время для синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА для рутинного производства на

коммерчески доступных модулях имеется несколько возможностей. Итогом многолетних
усилий по усовершенствованию вех стадий классического многостадийного
асимметрического синтеза [Liebert, 2014; Lemaire, 2015], предложенного еще в 90-е годы 20
века [Lemaire, 1994], была, наконец, создана полностью автоматизированная технология
синтеза данного РФП. Более того, эта сложная технология была реализована в кассетном
варианте (но с очисткой методом ВЭЖХ), удобном для производителя и соответствующим в
полной мере требованиям GMP. Параллельно разрабатывались методы, основанные на
реакции прямого введения метки в ароматическое кольцо, активированное альдегидной
группой, в молекуле нитропрекурсора, разработанного фирмой ABX [Hoepping, 2014]. Этот
метод также реализован по крайней мере в двух коммерчески доступных модулях синтеза
(Табл. 2). Он отличается простотой, включает только ТФЭ очистку, однако уступает по
производительности пяти стадийному методу асимметрического синтеза (метод 1 в табл. 2).
В принципе метод 2 может быть легко адаптирован к любому модулю синтеза стационарного
(не кассетного) типа, например, TracerLab FX N Pro. Однако воспроизведение технологии
является не тривиальной задачей, в особенности стадия окисления по Байеру-Виллигеру
(Рис. 5).
Выбор того или иного кассетного метода синтеза в большой степени зависит от стоимости
кассеты, а также наличия того или иного модуля синтеза в конкретном ПЭТ центре.
Заслуживает внимания и новый перспективный метод синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА (метод 3),
так как он включает не три, а две стадии синтеза, и в этом отношении максимально
приближен к [18F]ФДГ. Однако, несмотря на кажущуюся простоту, время синтеза на модуле
Synthra (Германия) составляло 120 мин, РХВ также был невысок, и технология нуждается в
доработке. В отличие от метода 2, стоимость прекурсора на основе пинакол замещенных
23
арилбороновых эфиров [Preshlock, 2016] ожидается не столь высокой, а недорогой
катализатор - комплекс трифлата меди с пиридином (Рис. 6) - коммерчески доступен в фирме
Aldrich.

Таблица 3. Синтез 6-[18F]-L-ФДОФА методами нуклеофильного радиофторирования:

метод 1 – многостадийный (5 стадий) асимметрический синтез с межфазным хиральным
катализом; метод 2 – прямое нуклеофильное фторирование (3 стадии, нитро прекурсор АВХ,
кат. номер 3366); 3 - прямое нуклеофильное фторирование (2 стадии, прекурсор на основе
пинакол замещенных арилбороновых эфиров, ожидается к производству фирмой АВХ)

Время
Радиохим Удельная
Метод Метод Метод синтеза Литер.
. выход, активность,
синтеза автоматизации очистки (включая источник
% (EOS) ГБк/мкмоль
очистку)

GE FastLab*, Lemaire,
1 + ВЭЖХ 62 мин 36 >740
кассета 2015

ВЭЖХ Pelerin,
1 AllInOne, Trasis 73 мин 38 -
(встроенная) 2016

GE PET
GE FastLab, Нет
2 ТФЭ 12,4 - users forum
кассета данных
2014

IBA SYNTHERA
Sauvage,
2 (на двух ТФЭ 90 >10 -
2015
кассетах)

Preshlock,
3 Synthra ВЭЖХ 120 9 -
2016

*) модуль дополнен выносным дополнительным нагревательным блоком, т.к. стадию

гидролиза (57% HI, 180-200оС, 20 мин) не удалось провести в кассете; очистка методом
ВЭЖХ на отдельно стоящем хроматографе; метод не используется в рутинном производстве.

24
 Выводы о производстве 6-[18F]-L-ФДОФА

Сравнение двух альтернативных стратегий синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА – электрофильной

и нуклеофильной - позволяет однозначно прийти к выводу о преимуществах методов,
основанных на нуклеофильном введении метки фтор-18 в ароматическое кольцо
аминокислоты. Благодаря пионерским работам ПЭТ радиохимиков и специалистов по
автоматизации за последние 3-5 лет в этой области достигнут большой прогресс. Уже сейчас
на рынке имеется предложение как кассетных, так и стационарных модулей синтеза, на
которых можно производить 6-[18F]-L-ФДОФА в мультидозовых количествах. Можно
ожидать появления в ближайшее время новых методов прямого введения метки фтор-18 в 6-
[18F]-L-ФДОФА с использованием недавно разработанных прекурсоров с различными
уходящими группами (солей йодония, соединений гипервалентнго йода и др.).

Расчетная активность конечного продукта 6-[18F]-L-ФДОФА, исходя из

максимальной производительности [18F]фторной мишени циклотрона.

При максимальной производительности фторной мишени циклотрона - 12 Ки

[18F]фторида - на модуле AllInOne, Trasis можно произвести 4,5 Ки готового 6-[18F]-L-
ФДОФА (Табл. 3, метод 1). Данных об устойчивости к радиолизу при такой высокой
активности нет. По истечении 30 мин (контроль качества) останется 3,7 Ки 6-[18F]-L-
ФДОФА. Остальные методы пока отстают по производительности, хотя точных данных для
синтеза методом 2 на модуле FASTLab пока не появлялось, равно как и информации о
выходе кассет на российский рынок. Модуль AllInOne, Trasis пока еще только продвигается
на российский рынок.

Возможность и перспективность доставки 6-[18F]-L-ФДОФА в удаленные ПЭТ-

центры.

6-[18F]-L-ФДОФА можно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае

необходимости перевозки РФП в течение 2 периодов полураспада (220 мин) из 4,5 Ки
останется 1,1 Ки 6-[18F]-L-ФДОФА, что более чем достаточно для проведения диагностики
20 пациентов в течение рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния контроль

25
качества РФП возможно выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для
доставки, т.е. время на контроль качества не тратится.

Трудности в синтезе и контроле качества 6-[18F]-L-ФДОФА. Анализ возможных

рисков

При производстве 6-[18F]-L-ФДОФА в больших количествах необходимо помнить о

неустойчивости данного РФП к радиолизу. Полученный продукт стабилизируют
добавлением аскорбиновой кислоты. Рекомендовано проводить контроль радиохимической
чистоты «на месте» в случае длительной доставки (хотя бы в первое время при отработке
логистической цепочки). В случае использования кассетных модулей риски в синтезе РФП
минимальны. При разработке синтеза конечный продукт должен быть проверен на предмет
химической и радиохимической деградации в течение установленного срока годности.
Поскольку 6-[18F]-L-ФДОФА относится к РФП класса аминокислот, контроль качества РФП
в дополнение к стандартным ВЭЖХ и ГЖХ анализам включает определение энантиомерной
чистоты. Содержание L-изомера должно быть не менее 95%; для проведения этого анализа
нужна дорогостоящая хиральная колонка, которую нужно хранить при температуре 4 оС (в
холодильнике) и главное - не допускать попадания в колонку органических растворителей.
Желательно для этого анализа иметь отдельную систему ВЭЖХ. Необходимо тщательно
контролировать состояние колонки на предмет хорошего разделения L-D-изомеров (колонка
«садится»). В России ПЭТ центры, производящие другой РФП класса аминокислот 11
С-МЕТ
в варианте «изготовление», обычно определяют энантиомерную чистоту в каждом десятом
синтезе, уже после выпуска РФП.

Список использованных источников для раздела 6-[18F]-L-ФДОФА

Albert N.L., Weller M., Suchorska B., Galldiks N., Soffietti R., Kim M.M., la Fougere C.,
Pope W., Law I., Arbizu J., Chamberlain M.C., Vogelbaum M., Ellingson B.M., Tonn J.C.
Response Assessment in Neuro- Oncology working group and European Association for Neuro-
Oncology recommendations for the clinical use of PET imaging in gliomas. Neuro-Oncology. 2016;
18: 1199-1208.

Becherer A, Karanikas G, Szabo M, et al: Brain tumour imaging with PET: a comparison
between [18F]fluorodopa and [11C]methionine. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2003. 30:1561-1567.

Braak H, Del K, Tredici U, et al: Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson’s
disease. Neurobiol Aging 2003. 24:197-211.
26
 Brooks D.J. Morphological and functional imaging studies on the diagnosis and progression of
Parkinson’s disease. J Neurol. 2000; 247: II/11–II/18.

Chen W, Silverman DHS, Delaloye S, et al: 18F-FDOPA PET imaging of brain tumors:
comparison study with 18F-FDG PET and evaluation of diagnostic accuracy. J Nucl Med. 2006; 47:
904-911.

Edwards R., Wirth T. [18F]6-fluoro-3,4-dihydroxy-L-phenylalanine – recent modern syntheses

for an elusive radiotracer. J Label Compd Radiopharm. 2015; 58: 183-187.

Hoegerle S, Altehoefer C, Ghanem N, et al: 18F-DOPA positron emission tomography for

tumour detection in patients with medullary thyroid carcinoma and elevated calcitonin levels. Eur J
Nucl Med. 2001; 28: 64-71.

Hoegerle S, Nitzsche E, Altehoefer C, et al: Pheochromocytomas: detection with 18F DOPA

whole body PET -initial results. Radiology. 2002; 222:5 07-512.

Hoepping A., Muller M., Smits R., Mollitor J., Clausnitzer A., Baumgart D. EP 2 746 250 A1,
2014.

Kao C.-H. K., Hsu W.-L., Xie H.-L., Lin M.-C., Lan W.-C., Chao H.-Y. GMP production of
[18F]FDOPA and issues concerning its quality analyses as in USP ‘‘Fluorodopa F 18 Injection’’Ann
Nucl Med. 2011; 25:309-316.

Krasikova R. PET radiochemistry automation: State of the art and future trends in 18F-
nucleophilic fluorination. Curr Org Chem. 2013; 17; 2097-2107.

Krasikova R.N., Zaitsev V.V., Ametamey S.M., Kuznetsova O.F., Fedorova O.S., Mosevich
I.K., Belokon Y.N., Vyskočild Š., Shatik S.V., Nader M., Schubiger P.A. Catalytic enantioselective
synthesis of 18F-fluorinated α-amino acids under phase transfer conditions using (S)-NOBIN. Nucl
Med Biol. 2004; 31:597-603.

Lemaire C., Damhaut P., Plenevaux A., Comar D. Enantioselective synthesis of 6-[fluorine-
18]-fluoro-L-dopa from no-carrier-added fluorine-18-fluoride. J Nucl Med. 1994; 35: 1996-2002.

Lemaire C., Libert L., Franci X., Genon J.-L., Kuci S., Giacomelli F., Luxen A. Automated
production at the curie level of no-carrier-added 6-[18F]fluoro-L-dopa and 2-[18F]fluoro-L-tyrosine
on a FASTlab synthesizer. J Label Compds Radiopharm. 2015; 58 281–290.

Libert L.C., Franci X., Plenevaux A.R., Ooi T., Maruoka K., Luxen A.J., Lemaire C.F.
Production at the Curie Level of No-Carrier-Added 6-18F-Fluoro-L-Dopa. J Nucl Med. 2013; 54: 1-
8.
27
 Luurtsema G., Boersma H.H., Schepers M., de Vries A.M.T., Maas B., Zijlma R., de Vries
E.F.J., Elsinga F. Improved GMP-compliant multi-dose production and quality control of 6-
[18F]fluror-L-DOPA. EJNMMI Radiopharmacy and Chemistry 2016, 1:7. DOI 10.1186/s41181-
016-0009-1.

Montravers F, Grahek D, Kerrou K, et al: Can fluorodihydroxyphenylalanine PET replace

somatostatin receptor scintigraphy in patients with digestive endocrine tumors? J Nucl Med. 2006;
47:1455-1462.

Pelerin E. High yield 18F-FDOPA using nucleophilic synthesis in a PET clinical study. J Nucl
Med. 2016; 57, Suppl. 2: 2695.

Preshlock S., Calderwood S., Verhoog S., Tredwell M., Huiban M., Hienzsch A., Gruber
S., Wilson T.C., Taylor N.J., Cailly T., Schedler M., Collier T.L., Passchier J., Smits R., Mollitor
.J., Hoepping A., Mueller M., Genicot C., Mercier J., Gouverneur V. Enhanced copper-mediated
(18)F-fluorination of aryl boronic esters provides eight radiotracers for PET applications. Chem
Commun (Camb). 2016; 28; 52(54):8361-4.

Pretze M., Wängler C., Wängler B. 6-[18F]Fluoro-L-DOPA: A Well-Established Neurotracer

with Expanding Application Spectrum and Strongly Improved Radiosyntheses. BioMed Research
International, 2014, Article ID 674063, http://dx.doi.org/10.1155/2014/674063.

18
Sauvage C., Lazarova N., Goblet D., Mueller M. Synthesis of F-LDOPA via nucleophilic
pathway on IBA Synthera. ISRS congress 2015 (poster).

Schiepers C., Chen W., Cloughesy T., Dahlbom M., Huang S.-C. 18F-FDOPA Kinetics in
Brain Tumors. J Nucl Med 2007, 48:1651-1661.

Seibyl J, Jennings D, Tabamo R, Marek K: The role of neuroimaging in the early diagnosis
and evaluation of Parkinson’s disease. Minerva Med. 2005; 96:353-364.

Trasis. F-DOPA as easy as FDG - Newsletter June 2014. [Online] Available from:
http://www.trasis.com/pages/downloads_press.html [Accessed: 4th December 2014].

Tredwell M., Preshlock S.M., Taylor N.J., Gruber S., Huiban M., Passchier J., Mercier J.,
Genicot Ch., Gouverneur V. A General Copper-Mediated Nucleophilic 18F Fluorination of Arenes.
Angew Chem Int Ed. 2014; 53: 7751-7755.

28
 de Vries E.F.J., Luurstema G., Brussermann M., Elsinga P.H., Vaalburg W. Fully automated
synthesis module fort he high yield one-pot preparation of 6-[18F]fluoro-L-DOPA. Appl Radiat Isot.
1999; 51:389-394.

Wagner F.M., Ermert J., Coenen H.H. Three-Step, ‘‘One-Pot’’ Radiosynthesis of 6-Fluoro-3,4-
Dihydroxy-L-Phenylalanine by Isotopic Exchange. J Nucl Med. 2009; 50: 1724-1729.

Голубев В.Л., Левин Я.И., Вейн A.M. Болезнь Паркинсона и синдром паркинсонизма. М.:
МЕДпресс, 1999. 416 с

Красикова Р.Н., Кузнецова О.Ф., Федорова О.С., Мосевич И.К., Малеев В.И., Белоконь
Ю.Н., Савельева Т.Ф., Сагиян А.С., Дадаян С.А., Петросян А.А. Асимметрический синтез 6-
18
F-L-FDOPA с использованием хиральных комплексов никеля (II). Радиохимия. 2007; 49:
449-454.

Орловская В.В., Федорова О.С., Красикова Р.Н. Методы синтеза меченных фтором-18
ароматических аминокислот, радиотрейсеров для позитронной эмиссионной томографии
(ПЭТ). Изв. Ак. наук. Сер. Хим. 2015; 7: 1518-1535.

Шток В.Н., Федорова Н.В. Болезнь Паркинсона. В кн.: Экстрапирамидные

расстройства: руководство по диагностике и лечению. Под ред. Штока В.Н., Ивановой-
Смоленской И.А., Левина О.С. М.: МЕДпресс-информ, 2002. C.87–124.

29
 [18F] натрия фторид

Введение, история создания РФП

Фторид натрия представляет собой неорганическую соль, белое кристаллическое
вещество, хорошо растворимое в воде. В медицинских целях используется как препарат для
укрепления костной ткани. Наиболее известное применение – добавление в зубные пасты
для уплотнения зубной эмали и предотвращения кариеса. Для этой цели во многих странах
производится фторирование питьевой воды. Фторид натрия в форме таблеток является давно
известным средством для лечения остеопороза. Он эффективен для процессов
костеобразования и увеличения костной массы. Плотность костей позвоночника
увеличивается на 4-5% в год, а частота переломов значительно снижается, особенно у
женщин со слабой и умеренной формой остеопороза [http://mshealthy.com.ua].
Меченый аналог [18F]фторид натрия (Na[18F]F) – один из самых первых ПЭТ-
радиофармпрепаратов. С 70-х годов прошлого века он применяется для диагностики
злокачественных новообразований в костях. В последние годы его применение
расширилось, и Na[18F]F используют в диагностике различных заболеваний, связанных с
кальцификацией кровеносных сосудов. Этот РФП в 1972 г был утвержден к применению
FDA (Food Drug Administration) в США и внесен в Американскую Фармакопею [Hoh, 1993].
Однако в 1975 году был введен новый метод для локализации метастазов в костях - более
доступный и дешевый метод ОФЭКТ с метилендифосфонатом технеция-99m ([99mTc]МДФ),
который по чувствительности не уступал ПЭТ-исследованию с натрия фторидом-18F.
Преимущество [99mTc]МДФ заключалось в более длительном периоде полураспада изотопа,
что давало широкие возможности для транспортировки РФП, а также в низкой цене, которая
была обусловлена наличием централизованного производства [Scott, 2011].
Востребованность Na[18F]F на рынке РФП сильно уменьшилась. Ситуация резко изменилась
в 2009-2010 году, когда мировой рынок технеция-99m резко сократился из-за
«молибденового кризиса». В этот момент только три реактора в мире продолжали
производить молибден-99, материнский изотоп для генератора технеция-99m. Этого было
явно недостаточно для обеспечения потока пациентов, ожидающих ОФЭКТ-диагностики с
([99mTc]МДФ. Клиницисты вернулись к использованию метода ПЭТ с Na[18F]F, и в 2011 году
этот препарат был вновь одобрен FDA [Scott, 2011].
Первая детальная публикация, посвященная Na[18F]F, появилась в Америке в 1972 г [Blau,
1972]. Этот обзор обобщал 10-летний опыт группы исследователей в ПЭТ-диагностике
костей с Na[18F]F, из чего можно заключить, что первое введение этого РФП произошло еще

30
в 1962 г. Получение изотопа фтора-18 осуществлялась по абсолютно иным, непривычным в
настоящее время ядерным реакциям, поскольку в 60-70 годы просто не существовало
медицинских специализированных циклотронов. Ученые получали фтор-18 по нескольким
реакциям. Облучение воды α-частицами с энергией 30 МэВ позволяло проводить реакции
16
O(4He, np)18F; 16
O(4He,d)18F; 16
O(4He, 2n)18Ne. Согласно третьей реакции получается 18
Ne,
который быстро распадается до 18
F. Облучение воды частицами 3He с энергией 22 МэВ
давало в результате реакцию 16
O(3He, p)18F, и наконец облучение неона дейтронами c
энергией 8 МэВ запускало реакцию 20Ne(d,α)18F. Все эти реакции позволяли получать фтор-
18 с высоким выходом и не приводили к загрязнению конечного продукта тритием [Blau,
1972].
Подробностей синтеза Na[18F]F в работе не приводится, публикация посвящена в
основном медицинским аспектам. В процессе облучения водной мишени циклотрона
радионуклид фтор-18 стабилизируется в форме 18
F-фторид-аниона, и его перевод в
необходимую инъекционную форму натрия фторида-18F не требует сложных химических
операций. Необходимо просто перевести 18
F-фторид-анион в химическую форму натриевой
соли. Мы можем предположить, что клиницисты просто разбавляли полученный в
циклотроне изотоп фтора-18 в воде раствором 0,9% NaCl для инъекций и подвергали
дальнейшей стерилизации в автоклаве. Упоминаний о контроле качества готового препарата
в данной публикации нет.

Виды заболеваний, для диагностики которых используется Na[18F]F

Основное применение Na[18F]F в ПЭТ диагностике - это заболевания костной системы.

Первое и самое известное применение - это онкодиагностика, а именно выявление
метастазов в костях [de Arcocha, 2011; Tateishi, 2013; Jadvar, 2015]. К настоящему времени у
клиницистов накоплен огромный опыт в применении Na[18F]F в онкологии. Роль метода
ПЭТ в исследовании метастазов в скелете возросла с появлением ПЭТ/КТ технологии, что
позволило существенно увеличить чувствительность определения метастазов в костях
скелета при раке предстательной железы, раке молочной железы и других онкозаболеваниях
[Grant, 2008].
Кроме онкологических заболеваний, данный РФП применяют для визуализации
воспалительных процессов – артрита, травмы костей, гиперплазии, остеопороза,
постоперационных изменений и дистрофии костных тканей [de Arcocha, 2011]. Ряд
публикаций посвящены диагностике васкулярной кальцификации, т.е. количественного
определения кальциевых образований в крупных и периферических кровеносных сосудах
31
[Johnson, 2013; Raynor, 2016]. В статье 2016 года [Alexanderson-Rosas, 2016] обсуждается
роль Na[18F]F для диагностики аутоиммунного воспалительного заболевания стенки крупных
артерий - неспецифического аортоартериита (синдрома Такаясу). В экспериментальной
работе на лабораторных животных [Han 2014] корейские ученые применили Na[18F]F для
диагностики инфаркта миокарда.

Описание синтеза Na[18F]F

Синтез данного РФП крайне прост и не включает никаких химических реакций, кроме
перевода аниона фтора [18F-] в форму натриевой соли. [18F]Фторид-анион производится на
циклотроне при облучении водной мишени протонами с энергией 16 МэВ по реакции
16
O(p,α)18F. Мишень заполнена водой, обогащенной кислородом-18 – 97% H2O18. По
окончании облучении вода, содержащая фтор-18, переводится по трубке током инертного
газа в горячую камеру и on-line пропускается через одноразовый картридж, содержащий
анионообменную смолу. Анион фтора [18F-] сорбируется на смоле, т.е. активность
конденсируется на картридже. Затем картридж промывают 0,9% раствором NaCl в
отдельный сосуд, при этом активность десорбируется и в форме Na[18F]F переходит в
раствор. Раствор подвергается стерилизации путем автоклавирования или пропускания через
стерилизующий фильтр. На Рис.1 представлена схема синтеза. В синтезе применяют разные
анионообменные картриджи или их комбинацию, а также меняют режимы их
кондиционирования (предварительной промывки). Возможности использования разных
картриджей будут подробно описаны в разделе «Автоматизация синтеза».

Рис. 1. Схема получения Na[18F]F

Автоматизация синтеза Na[18F]F. Методы очистки и выделения конечного продукта.

Как описано в работе [Kao 2010] Na[18F]F можно производить на очень простом модуле,
состоящем из двух трехходовых вентилей, сосуда для слива и стерильного флакона со
стерилизующим фильтром для приема конечного продукта. Несмотря на простоту, модуль
соответствует стандартам GMP-производства. Схема модуля показаны на Рис.2.
32
Рис.2. Схема модуля для получения Na[18F]F по работе [Kao 2010].

Для выделения Na[18F]F использовалось два типа анионообменных картриджей – SepPak

light QMA (Waters) и Chromafix PS-OH (Macherey-Nagel), каждый из которых применялся
либо в исходной ионной форме (предварительное кондиционирование водой), либо в
карбонатной форме (предварительная промывка раствором карбоната калия или
гидрокарбоната натрия). Таким образом, испытания проводились на четырех типах
анионообменных взаимодействий, результаты синтезов приведены в Табл.1. Расшифровки
названий картриджей приведены в подписи к Табл.1.

Таблица 1. Результаты синтезов Na[18F]F по работе [Kao 2010].

QMA-Cl: Картридж SepPak light QMA, промытый 20 мл воды;
QMA-CO3: Картридж SepPak light QMA, промытый 10 мл 0,5 М K2CO3 и затем 20 мл воды
PS-OH: Картридж Chromafix PS-OH, промытый 20 мл воды;
PS-HCO3: Картридж Chromafix PS-OH, промытый 10 мл насыщенного раствора NaHCO3 и
затем 20 мл воды;

QMA-Cl QMA-CO3 PS-OH PS-HCO3

Радиохимический
96.2 ± 0.9 97.6 ± 1.2 96.7 ± 0.6 94.1 ± 2.1
выход, %

pH 6.69 ± 0.24 9.09 ± 0.04 9.11 ± 0.07 9.25 ± 0.03

Время синтеза во всех случаях не превышало 2 мин с момента доставки облученной воды
из мишени. Было показано, что разные способы выделения дают в результате близкие
33
радиохимические выходы (94-97%), но разные значения рН конечного продукта. Картриджи
в ионной форме OH-, CO32- или HCO3- позволяли получить раствор Na[18F]F с рН>9, что
превышает разрешенные границы рН для инъекционных растворов. Авторы признали
наилучшим способ производства с QMA-Cl (pH конечного продукта 6,7) как
удовлетворяющий всем критериям качества РФП.
Был разработан синтез Na[18F]F на модифицированном модуле GE Tracerlab FXFN
[Hockley, 2010; Shao, 2010]. В этих публикациях описано использование двух других
картриджей, соединенных последовательно, а именно: SepPak Accell Plus CM Light
(катионообменный) и SepPak light QMA (анионообменный). Катионообменный картридж
был добавлен для удаления возможных примесей катионной природы, образующихся в
мишени циклотрона. Оба картриджа предварительно кондиционировались 10 мл этанола и
после этого 10 мл воды. При выполнении синтеза в таких условиях радиохимический выход
продукта был более 90% (без поправки на распад), время синтеза не более 10 мин,
радиохимическая чистота конечного продукта более 95%. Все параметры контроля качества
соответствовали нормам.
Использование модуля для синтеза [18F]ФДГ GE Tracerlab MX также описано в
применении к Na[18F]F [Martinez, 2011]. В данной работе был задействован только картридж
SepPak light QMA, но авторы апробировали три способа кондиционирования:
А) Промывка 10 мл 0,5 М K2CO3 и затем 10 мл этанола;
Б) Промывка 10 мл 0,5 М K2CO3 и затем 10 мл воды;
В) Промывка 10 мл этанола и затем 10 мл воды.
Результаты синтезов представлены в Табл.2, число опытов равно пяти для каждого
способа кондиционирования.

Таблица 2. Результаты синтезов Na[18F]F по работе [Martinez, 2011].

Способ
кондиционирования SepPak А Б В
light QMA

Радиохимический выход, % 98,2 ± 0,6 97,6 ± 0,2 96,0 ± 0,4

pH 10,15±0,1 9,27±0,8 7,07±0,6

Из данных таблицы можно заключить, что предварительная подготовка картриджа с

использованием карбоната калия (способы А и Б) приводит к значению рН конечного

34
раствора >9. Выходы синтеза во всех случаях больше 95%, общее время синтеза 6 мин, но к
производству может быть принят только метод кондиционирования В (рН 6,5-7,5).
Кассетные модули также используются для синтеза Na[18F]F. Публикация 2015 г [Collet,
2015] посвящена разработке производства на двух кассетных модулях фирмы TRASIS –
AllInOne и miniAllInOne. Этот тип модулей представляет собой очень гибкую платформу, на
которой можно выполнять синтезы различных РФП, меченных фтором-18, углеродом-11 и
галлием-68 с применением различных кассет. В настоящее время разработана кассета и для
производства Na[18F]F. Для улавливания фтора-18 в кассете используется картридж SepPak
light QMA, способ кондиционирования не описывается. Судя по результатам контроля
качества конечного продукта, где рН раствора был в рамках 6-7,5, исследователи применяли
способ подготовки картриджа без карбоната калия. Для обоих модулей время производства
равнялось 4 мин, радиохимический выход был около 97% с поправкой на распад, параметры
контроля качества были в соответствии с установленными нормами.
В настоящее время существуют GMP-методы производства Na[18F]F на других модулях,
таких как Modular-Lab PharmTracer (Eckert&Ziegler), FASTlab Multi-Tracer-Plattform (GE) и
Synthera synthesis unit (IBA), но посвященных этому публикаций в открытой печати найти не
удалось.
Методы контроля качества. Требования к параметрам контроля качества
Na[18F]F.

Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Чистый,
Визуальное
бесцветный Визуальный осмотр
соответствие
раствор
радиоВЭЖХ, условия *или условия **
Подлинность Соответствие
Время удерживания Rt Na[18F]F должен быть в
(идентичность) стандарту
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фторида калия
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
≥99%
чистота, % полураспада
радиоВЭЖХ, условия * или условия **
Радиохимическая
≥95% Время удерживания Rt Na[18F]F должен быть в
чистота, %
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фторида калия
Объемная Достаточная для Измерение объема шприцом или по весу,

35
 активность, Ки/мл проведения ПЭТ- измерение активности в изотопном калибраторе
исследования
4,5 – 8,0
(US Pharmacopeia)
рН Потенциометрия
5,0 - 8,5
(Pharm Europa)
Изотоничность, Раствор должен
Осмометрия
мОсм быть изотоничным
Раствор должен Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
быть стерильным питательных средах
Уровень
<175 на общий
бактериальных LAL-тест
объем препарата
эндотоксинов, EU
ГЖХ
Остаточное
≤ 5000 Данный параметр контроля качества задан
содержание
[Martinez 2011] только в работе [Martinez 2011], в других
этанола, ppm
публикациях не упоминается

Условия *, радиоВЭЖХ [Li, 2010]:

Колонка RCX-10 anion-exchange (7 мкм, 250 х 4,0 мм, Hamilton, USA) и колонка-супрессор
7.0 ×7.5 мм ID (HP Peak Low Capacity, Alltech, USA), элюент 7,5 мМ Na2CO3/ 0,018 мМ
KSCN, pH 9,5; скорость потока 1 мл/мин, детектор кондуктометрический и детектор по
радиоактивности, Rt Na[18F]F =5,1 мин
Условия **, радиоВЭЖХ [Collet, 2015]. Данный пример хроматографической системы
удобен тем, что он совпадает с ВЭЖХ-анализом [18F]ФДГ.
Колонка Dionex PA10, элюент 50 мМ NaOH, детектор УФ, длина волны 220 нм и детектор
по радиоактивности. Rt Na[18F]F = 9,3 мин

Главные параметры, влияющие на то, сколько именно Na[18F]F реально получить на

конечном этапе.
Основными определяющими параметрами для возможности получения большой
активности РФП являются время синтеза и радиохимический выход готового РФП. В случае
производства Na[18F]F на разных автоматических системах время синтеза и выход
варьируются незначительно. Время составляет 4-10 мин, радиохимический выход более 95%
(EOS) или более 90% (EOB). Время необходимое для контроля качества, как правило, не
36
превышает 20 мин и определяется временем, необходимым для проведения ВЭЖХ
хроматографии. Остальные анализы занимают меньше времени и делаются параллельно.

Расчетная активность конечного продукта Na[18F]F, исходя из максимальной

производительности [18F]фторной мишени циклотрона.

При максимальной производительности [18F]фторной мишени циклотрона 12 Ки

возможно произвести 10,8 Ки готового Na[18F]F, исходя из расчета радиохимического
выхода 90% без поправки на распад. По истечении 20 мин, необходимых на контроль
качества останется 9,5 Ки Na[18F]F.

Возможность и перспективность доставки Na[18F]F в удаленные ПЭТ-центры.

Na[18F]F возможно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае необходимости
перевозки РФП в течение 4 часов (около двух периодов полураспада), из 9,5 Ки останется 2,3
Ки Na[18F]F, что хватит на несколько ПЭТ-камер для проведения диагностики в течение
рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния контроль качества РФП возможно
выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для доставки, т.е. время на
контроль качества не тратится.

Трудности в синтезе и контроле качества РФП. Анализ возможных рисков

Трудностей в синтезе и контроле качества Na[18F]F не предвидится. Синтез очень прост,

хорошо изучен и описан, не представляет сложностей при автоматизации.

Список использованных источников для раздела Na[18F]F

http://mshealthy.com.ua
Alexanderson-Rosas E., Monroy-Gonzalez A.G., Juarez-Orozco L.E., Martinez-Aguilar M.M.,
Estrada E., Soldivilla I., Garcia-Perez O., Soto-Lopez M.E. [18F]-Sodium fluoride uptake in
Takayasu arteritis. J Nucl Cardiology, 2016, doi:10.1007/s12350-016-0627-8
De Arcocha M., Portilla-Quattrociocchhi H., Medina-Quiroz P., Carril J.M. Current Status of the
Use of 18F-Sodium Fluoride in Bone Disease. Rev Esp Med Nucl 2012, 31(1):51-57.
Blau M., Ganatra R., Bender M.A. 18F-Fluoride for Bone Imaging. Sem in Nucl Med, 1972, 2(1),
P. 31-37.

37
 Collet C., Otabashi M., Giacomelli F., Veran N., Karcher G., Chapleur Y., Lamande-Langle S.
Fully automated production of sodium [18F]fluoride on AllInOne and miniAllInOne synthesizers.
Appl Rad Isot, 2015, 102, P. 87-92.
Grant F.D., Fahey F.H., Packard A.B., Davis R.T., Alavi A., Treves S.T. Skeletal PET with 18F-
fluoride: applying new technology to an old tracer. J. Nucl. Med. 2008, 49:68-78.
Hockley B.G., Scott P.J.H. An automated method for preparation of [18F]sodium fluoride for
injection, USP to address the technetium-99m isotope shortage. Appl Rad Isot, 2010, 68, P.117-
119.
Hoh C.K., Hawkins R.A., Dahlbom M., Glaspy J.A., Seeger L.L., Choi Y., Schiepers C.W.,
Huang S.C., Satyamurthy N., Barrio J.R. Whole body skeletal imaging with [18F]fluoride ion and
PET. J. Comput Assist Tomogr 1993; 17: 34-41.
18
Jadvar H., Desai B., Conti P.S. Sodium F-Fluoride PET/CT of Bone, Joint, and Other
Disorders. Semin Nucl Med, 2015, 45:58-65.
18
Johnson L.L. Novel application of F-sodium fluoride an old tracer to a clinically neglected
condition. J Nucl Cardiol, 2013, 20:506-509.
Kao C.-H.K., Hsu W.-L., Kao P.-F., Lan W.-C., Xie H.-L., Lin M.-C., Chao H.-Y. An efficient
and aseptic preparation of “sodium fluoride (18F) injection”in a GMP compliant facility. Ann Nucl
Med, 2010, 24, P. 149-155.
Martinez T., Cordero B., Medin S., Sanchez Salmon A. Adaptation of the 18FDG Module for the
Preparation of a Sodium Fluoride [18F] Injection Solution in Agreement with the United States
(USP 32) and European Pharmacopeia (PhEur 6). Rev Esp Med Nucl, 2011, 30(6), P. 351-353.
Raynor W., Houshmand S., Gholami S., Emamzadehfard S., Rajapakse C.S., Blomberg B.A.,
Werner T.J., Hoilund-Carlsen P.F., Baker J.F., Alavi A. Evolving Role of Molecular Imaging with
18F-Sodium Fluoride PET as a Biomarker for Calcium Metabolism. Curr Osteoporos Rep, 2016,
14:115-125.
Scott, Peter J. H., and Hockley, Brian G., eds. Wiley Series on Radiochemical Syntheses :
Radiochemical Syntheses, Volume 1 : Radiopharmaceuticals for Positron Emission Tomography
(1). Hoboken, US: Wiley, 2011
Shao X., Hoareau R., Hockley B.G., Tluczek L.J.M., Henderson B.D., Padgett H.C., Scott P.J.H.
Highlighting the versatility of the tracerlab synthesis modules. Part 1: fully automated production of
[18F]labelled radiopharmaceuticals using a Tracerlab FXFN. Label Comp and Radiopharm, 2011, 54,
P. 292-307.
Tateishi U., Morita S., Inoue T. Diagnostic accuracy of 18F-fluoride PET and PET/CT in patients
with bone metastases: a systematic review and meta-analysis update. Clin Transl Imaging, 2013,
1:123-134.
38
 O-(2’-[18F]фторэтил)-L-тирозин ([18F]ФЭТ)
Введение, история создания РФП

O-(2’-[18F]фторэтил)-L-тирозин ([18F]ФЭТ) - наиболее широко применяемый

радиотрейсер класса фторированных аналогов аминокислот, меченных фтором-18
([18F]ФАА). Использование различных аналогов меченых аминокислот в ПЭТ основано на их
участии в важнейших метаболических процессах: синтезе белков, транспорте аминокислот в
клеточные мембраны, образовании нейротрансмиттеров. В первых ПЭТ исследованиях с
использованием [18F]ФАА рассматривалась возможность количественного определения
скорости синтеза белка в опухоли [Lemaire, 1993]. Позднее было показано, что накопление
[18F]ФАА обусловлено повышенной потребностью пролиферирующих клеток в
аминокислотах и, соответственно, более высокими транспортными характеристиками
[Laverman P., 2002; Ermert J., 2013]. Преимуществом меченых аминокислот является то, что
в отличие от [18F]ФДГ, они практически не накапливаются в сером веществе, и это
определяет их высокую специфичность и дает возможность получения высококонтрастных
ПЭТ изображений злокачественных новообразований мозга. Кроме того, предполагается, что
[18F]ФАА в гораздо меньшей степени накапливаются в очагах воспаления в сравнении с
[18F]ФДГ и могут рассматриваться как перспективные агенты для дифференциации
опухолевого и воспалительного процессов.
Перспективность меченных фтором-18 производных тирозина, в частности, 2-
[18F]фтор-L-тирозина (2-[18F]ФТИР), в онкодиагностике была показана еще в 80- годы
прошлого века [Coenen, 1989]. Однако, введение метки фтор-18 в ароматическое кольцо
аминокислоты представляет сложную радиохимическую задачу. Для этой цели наиболее
пригоден метод электрофильного радиофторирования, широко применяемый в классической
органической химии. Однако его использование в радиоактивном синтезе включает стадию
генерирования фтора-18 в форме [18F]F2 при облучении газовой мишени циклотрона, что
сопряжено с техническими трудностями управления процессом, низкой
производительностью мишени и в целом низким радиохимическим выходом РФП [Adam,
1986]. Поэтому, несмотря на перспективность полученных производных тирозина и других
радиотрейсеров класса [18F]ФАА, их применение в клинической практике долгое время
ограничивалось лишь несколькими ПЭТ центрами именно из-за сложности и низкой
производительности электрофильного метода.
Интерес к применению меченных фтором-18 производных тирозина в ПЭТ
диагностике возобновился а 90-е годы прошлого века именно с появлением в 1999 г.
39
[18F]ФЭТ - фторалкильного аналога тирозина, в молекуле которого радиоактивная метка
находится в алифатическом положении [Wester, 1999]. В этом случае синтез РФП может
осуществляться более простым и высокопроизводительным методом нуклеофильного
радиофторирования, основанным на использовании [18F]фторида, поулчаемого в количествах
до 20 Ки в водной мишени циклотрона. Были синтезированы и другие о-фторалкильные
производные тирозина: О-(2’-[18F]фторметил)-L-тирозин и О-(2’-[18F]фторпропил)-L-
тирозин. Однако, в клинических исследованиях применение нашел только [ 18F]ФЭТ,
благодаря огромному сходству туморотропных характеристик последнего с широко
известным [11C]МЕТ [Weber, 2000]. Метаболизм [18F]ФЭТ подробно описан в работе
[Langen, 2006].
В первой работе по синтезу [18F]ФЭТ радиотрейсер получали реакцией 18
F-
фторэтилирования ди-натриевой соли L-тирозина, где в качестве алкилирующего агента
использован [18F]фторэтилтозилат (ФТОЗ) [Wester, 1999]. Этот синтез требует
промежуточной стадии очистки ФТОЗ методом полупрепаративной ВЭЖХ, что приводит к
длительной и трудоемкой процедуре получения 18
F-ФЭТ. Более привлекательным является
метод прямого нуклеофильного радиофторирования предшественника, содержащего
«уходящую» тозильную группу в алкильной цепочке в молекуле «защищенного» тирозина.
Именно этот метод был предложен в 2001 г. немецкими учеными [Hamacher, 2001], которые
запатентовали исходный субстрат (предшественник) через фирму ABX, Германия. Сразу
после появления этой работы число публикаций по применению [ 18F]ФЭТ в ПЭТ
исследований пациентов с различными опухолями стремительно возросло. Оба подхода к
синтезу будут подробно рассмотрены ниже.

Применение [18F]ФЭТ в клинических ПЭТ исследованиях.

В настоящее время [18F]ФЭТ широко применяется в Европейских ПЭТ центрах, и с

недавнего времени - в отдельных ПЭТ центрах России (в частности, в РНЦРХТ, Санкт-
Петербург). Радиотрейсер практически не используется в США, поскольку не
зарегистрирован FDA (Food Drug Administration). В Европе [18F]ФЭТ применяется в рамках
различных клинических испытаний и активно вытесняет традиционный ПЭТ с 11
C-L-метил
метионином (>10,000 [18F]ФЭТ ПЭТ сканов в некоторых центрах [Langen., 2016]). В 2014 г.
[18F]ФЭТ одобрен для клинического применения в Швейцарии [Swiss Agency, 2014], а в 2016
г. внесен в Европейскую Фармакопею. Широкое применение [18F]ФЭТ обусловлено не
только отличными диагностическими характеристиками этого агента, но и возможностью

40
его получения в больших количествах для централизованной поставки в ПЭТ центры, не
имеющие собственного циклотрона (подобно [18F]ФДГ, хотя и в меньшем масштабе).

Рис.1. Обоснование для проведения ПЭТ исследования с РФП класса аминокислот

[Albert, 2016]

ПЭТ исследование с [18F]ФЭТ используется главным образом в диагностике

церебральных опухолей и не применяется для периферичеcких опухолей. В 2016 г.
Европейской рабочей группой были выработаны и опубликованы рекомендации по ПЭТ
диагностике глиом [Albert, 2016] (Рис.1). В качестве основных агентов были указаны РФП
класса ароматических аминокислот, а именно, [18F]ФЭТ и 6-[18F]ФДОПА, и проведено их
сравнение с [18F]ФДГ. В целом результатам ПЭТ исследований с [18F]ФЭТ посвящено
огромное количество работ, начиная с сопоставления этого РФП с L-11C-метил-метионином
([11C]МЕТ), хорошо известной и давно используемой аминокислотой. Было показано, что оба
РФП имеют похожие характеристики накопления в церебральных опухолях. Контраст
изображений между опухолью и нормальным мозгом был почти идентичным при ПЭТ с
[11C]МЕТ и ПЭТ с [18F]ФЭТ, а исследование динамики накопления показало
тождественность и интрацеребральной кинетики сравниваемых РФП [Weber, 2000]. Тем не
менее, в отличие от [11C]МЕТ, ПЭТ исследование с [18F]ФЭТ оказалось малоинформативным
при визуализации первичной аденомы щитовидной железы, ввиду очень низких отношений
накопления мишень-фон (1,5-1,7 через 30 мин.) [Krakauer, 2016]. В сравнении с [123I]-α-

41
метилтирозином - широко используемым агентом для ОФЭКТ диагностики опухолей мозга -
выявлена высокая корреляция [18F]ФЭТ с накоплением как при первичных опухолях, так и
при их продолженном росте [Pauleit, 2004]. Авторы установили, что ПЭТ с [18F]ФЭТ дает
лучшую дискриминацию анатомических структур и контрастность изображений по
сравнению с ОФЭКТ с [123I]-α-метилтирозином - благодаря значительно более высокому
пространственному разрешению ПЭТ [Pauleit, 2004].

Рекомендации к применению ПЭТ исследования с [ 18F]ФЭТ проиллюстрированы

подробно на схеме (Рис. 1). Так в работе [Dunet 2012] на основании данных ПЭТ
исследований 462 пациентов (мета анализ) была продемонстрирована высокая
информативность [18F]ФЭТ и его преимущества в диагностике вновь диагностируемых
(первичных) опухолей мозга. Позднее той же группой авторов [Dunet 2016] было проведено
сравнительное исследование [18F]ФЭТ и [18F]ФДГ (мета анализ данных исследований 5 ПЭТ
центров, всего 119 пациентов), где авторы пришли к заключению о несомненных
преимуществах ПЭТ с использованием меченых производных тирозина в диагностике и
выявлении первичных опухолей. Их вывод, тем не менее, был подвергнут критике из-за
больших различий в характере и природе новообразований пациентов в различных
исследованиях и несоответствия протоколов, используемых различными авторами [Huang
2016]. Несомненно, для окончательных выводов о преимуществах нового РФП необходимо
большее количество данных, а также необходима стандартизация протоколов и проведение
согласованных мультицентровых исследований.

При установлении степени злокачественности (grading) опухоли данные ПЭТ

исследования с [18F]ФЭТ не всегда однозначны, и значения накопления могут перекрываться
для опухолей I/II и III/IV степени по классификации ВОЗ [Popperl, 2007]. В этом случае
более информативным является проведение ПЭТ исследования в динамическом режиме.
Следует отметить, что с вступлением в силу в 2016 г. новой классификации глиом, в основе
которой лежит исследование с биомаркерами, а не классическое морфологическое
исследование, эти критерии будут пересматриваться.

Проведение ПЭТ исследования с [18F]ФЭТ позволяет точно локализовать точку

биопсии, что существенно влияет на выбор последующего лечения. Экономическая
эффективности проведения биопсии под контролем [18F]ФЭТ ПЭТ была подтверждена
учеными из Германии (в соответствии с их страховой медициной) [Heinzel, 2012]. В целом
ПЭТ с [18F]ФЭТ играет важную роль на всех этапах лечения пациентов с церебральными
опухолями, включая локализацию хирургической резекции, планирование радиотерапии

42
[Walter, 2012], оценку эффективности радиотерапии и прогноз, дифференциацию
послеоперационного некроза и метастаз [Galldiks, 2012] и др. (Рис. 1).

На примере [18F]ФЭТ на различных экспериментальных моделях была впервые

продемонстрирована и потенциальная возможность использования меченных фтором-18
аминокислот ([18F]ФАА) для дифференциации опухоли и очага воспаления - основного
источника ложно положительных заключений в ПЭТ исследованиях с [ 18F]ФДГ. Так,
накопление [18F]ФЭТ в инфильтрированных лимфатических узлах [Rau, 2001] или
инфицированных мягких тканях морских свинок было незначительным, в сравнении с
[18F]ФДГ. При изучении накопления 2-18F-фтор-L-тирозина ([18F]ФТИР) и [18F]ФЭТ в
опухоли «Крысиная Глиома 35» и абсцессе, индуцированных в мышце крыс Вистар, в
сравнении [18F]ФДГ было показано, что относительные индексы накопления РФП класса
аминокислот в абсцессе существенно ниже, чем [ 18F]ФДГ [Федорова, 2009]. Вместе с тем
отношения «опухоль/мышца» (2.9 для [18F]ФЭТ и 3.9 для [18F]ФТИР на 120 мин. после
инъекции) достаточно велики для надежной визуализации опухоли. Полученные данные
указывают на принципиальную возможность применения [18F]ФТИР и [18F]ФЭТ в
дифференцированной ПЭТ диагностике опухоли мозга и очага воспаления. Из изученных
производных тирозина [18F]ФЭТ является более предпочтительным ввиду простого и
удобного для автоматизации метода получения.

Следует отметить, что полученные данные не нашли полного подтверждения в ПЭТ

исследованиях человека. Так результаты ПЭТ исследования с [18F]ФЭТ, направленного на
уточнение природы одиночного церебрального очага с кольцевидным контрастным
усилением, обнаруженного при МРТ с применением контрастных веществ, показали, что
повышенное накопление [18F]ФЭТ отмечалось не только в церебральных опухолях, но и в
абсцессах мозга и очаге острого демиелинизирующего поражения [Floeth, 2006].

Подробное описание синтеза [18F]ФЭТ

Принципиально важным с точки зрения синтеза и его автоматизации является тот факт,
что молекула [18F]ФЭТ содержит алифатический фрагмент, в который введение фтора-18
возможно методами нуклеофильного фторирования, эффективно применяемого в синтезе
большинства клинически значимых РФП для онкодиагностики. В идеальном варианте для
использования в рутинном производстве метод синтеза должен включать минимальное
количество стадий, при проведении их в одном и том же реакционном сосуде, а очистка
должна проводиться методом твердофазной экстракции на одноразовых картриджах. Именно
43
такая стратегия синтеза обеспечила в свое время доступность [18F]ФДГ и ее широкое
применение. Однако традиционным методом введения фтора-18 в алкильную группу
молекул, в том числе и производных аминокислот, является реакция фторалкилирования.

Синтез [18F]ФЭТ реакцией 18F-фторалкилирования тирозина или его ди-натриевой соли,

включая методы очистки

Реакция 18
F-фторэтилирования молекулы тирозина или его ди-натриевой соли была
использована в первых работах по синтезу [18F]ФЭТ в 1999 г. [Wester, 1999]. Алкилирующим
агентом служил [18F]фторэтилтозилат ([18F]ФЭТОЗ), который получается с высоким выходом
на первой стадии синтеза – реакции нуклеофильного радиофторирования диэтилтозилата
(Рис.2).

Рис. 2. Синтез [18F]ФЭТ реакцией алкилирования ди-натриевой соли тирозина

[18F]фторэтилтозилатом [Wester, 1999].

Хотя синтез [18F]ФЭТОЗ не представляет трудностей, перед использованием на

стадии алкилирования необходимо полностью отделить исходный диэтилтозилат, который
является конкурирующим агентом в реакции алкилирования тирозина. Для промежуточной
очистки первоначально [Wester, 1999] использовался метод полупрепаративной ВЭЖХ, что, с
учетом еще одной ВЭЖХ очистки на конечной стадии синтеза (с использованием другой
ВЭЖХ системы и колонки ВЭЖХ), делало систему синтеза очень громоздкой, а сам метод -
длительным и трудоемким. Для очистки [18F]ФЭТОЗ может быть использован и метод
твердофазной экстракции на одноразовых картриджах, хотя разработка такого метода требует
больших усилий. Например, образующийся [18F]ФЭТОЗ сорбируют на картридже LiChrolut
EN (Merck) и затем смывают горячим ДМСО во второй реакционный сосуд, содержащий
раствор ди-натриевой соли тирозина [Mueller, 2011]. Другими авторами для более полного

44
отделения предшественника была применена методика частичного осаждения, а именно:
после проведения реакции [18F]фторирования в ацетонитриле в реакционный сосуд
добавляли раствор 0,007 М уксусной кислоты, чем вызывали осаждение
непрореагировавшего диэтилтозилата. После этого реакционную смесь, содержащую осадок,
пропускали через маленький фильтр для механической очистки (размер пор 0,45 μм) и далее
через два последовательно соединенных картриджа Sep-Pak C18 Plus (Waters), на которых и
происходила сорбция [18F]ФЭТОЗ. Картриджи промывали водой, продували инертным газом
и смывали очищенный продукт 35% раствором метанола в воде [Schoultz, 2012]. Такая
методика позволяет исключить промежуточную процедуру хроматографирования. Вместе с
тем для реализации процесса необходимо два реакционных сосуда, как, например, в модуле
TracerLab FX N Pro.

Альтернативой является использование [18F]фторэтилбромида ([18F]ФЭБ) - высоко

летучего алкилирующего агента (темп. кипения 71.5оС), широко применяемого в синтезе
многих РФП для ПЭТ. Очистка [18F]ФЭБ достигается методом дистилляции [Гомзина., 2007;
Zhang, 2003], что с одной стороны является преимуществом, поскольку нет необходимости в
дополнительной очистке алкилирующего агента, но с другой стороны предъявляет огромные
требования к герметичности автоматизированной системы синтеза. Этот метод часто
приводит к потере радиоактивности именно на стадии дистилляции [18F]ФЭБ. В то же время,
если синтез [18F]ФЭТ проводится методом фторалкилирования с использованием летучих
агентов, очистка конечного продукта возможна более простым и удобным методом
твердофазной экстракции, поскольку число возможных химических примесей практически
ограничивается самим субстратом (L-тирозина), присутствие которого в конечном растворе
не является критичным. Так, в работе [Zuhayra, 2009] было показано, что при использовании
"дистиллированного" [18F]ФЭБ в синтезе ([18F]ФЭТ конечный продукт может быть легко
выделен из реакционной смеси путем пропускания через два одноразовых картриджа С18
Chromafix (Macherey Nagel). После этого картриджи промывали последовательно раствором
ацетата аммония и 5% раствором этанола в 0.9% NaCl, а [18F]ФЭТ затем элюировали
раствором 0.9% хлорида натрия, содержащим 10% этанола. Анализ конечного продукта
методом радиоВЭЖХ подтвердил 100% радиохимическую чистоту. При анализе химической
чистоты методом ВЭЖХ не было зарегистрировано никаких химических примесей, за
исключением нерадиоактивного [19F]ФЭТ. Методом ГЖХ было показано отсутствие каких-
либо посторонних примесей, за исключением пика этанола (подтверждение содержания 10%
этанола в растворе) и наличие ультрамалого пика ацетона, который был использован при
промывке модуля синтеза.

45
 В целом методы ТФЭ-очистки [18F]ФЭТ, полученного реакцией фторалкилирования
с использованием различных фторалкилирующих агентов, позволяют получить продукт
высокой радиохимической и химической чистоты, однако реализация этого процесса,
включающего перенос реагентов через несколько видов картриджей и промежуточные
промывки, является технически сложной, требует установки дополнительных вентилей и
тщательного контроля за переносом жидкости или газа.

Поэтому, несмотря на отличные результаты, полученные отдельными группами,

метод 18
F-фторалкилирования не получил широкого применения в рутинной практике ПЭТ;
он используется лишь в единичных ПЭТ центрах Европы. Более эффективным и пригодным
для автоматизации и рутинного производства оказался предложенный в 2002 г. метод
прямого нуклеофильного фторирования, подробно рассмотренный ниже.

Синтез [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного радиофторирования, включая

методы очистки

В 2002 г. немецкими учеными [Hamacher, 2002] был разработан метод прямого

нуклеофильного радиофторирования предшественника, содержащего «уходящую» тозильную
группу в алкильной цепочке в молекуле «защищенного» тирозина - трет-бутилового эфира О-
(2-тозилоксиэтил)-N-тритил-L-тирозина (Исходное вещество на Рис. 3). Синтез
предшественника защищен международным патентом, он производится компанией ABX
(Advanced Biochemical Compounds), Германия, лидирующей на рынке предшественников для
ПЭТ, и является крайне дорогостоящим.

Рис. 3. Синтез [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного фторирования [Bourdier,

2011].

В качестве «уходящей» группы выступает тозильная группа, замещение которой на

[18F]фторид протекает с высоким выходом в присутствии тетрабутил аммоний карбоната
46
(Bu4N+18F-), а последующий гидролиз трифторуксусной кислотой в метилен хлориде
приводит к высвобождению свободной меченой аминокислоты. На стадии конечной очистки
радиотрейсера был использован традиционный методом полупрепаративной обращено-
фазовой ВЭЖХ в следующих условиях: колонка ODS (Prontosil 120-5-C18-ace-EPS, 250 x 100
мм), элюент этанол / вода (2/98, v/v), скорость потока 5 мл/мин, k' [18F]ФЭТ = 9,1.
Радиоактивную фракцию, содержащую целевой продукт (5-8 мл 2% раствора этанола),
собирали в отдельный сосуд и, после стерильного фильтрования, получали инъекционную
форму РФП, пригодную для введения человеку. Энантиомерная чистота [ 18F]ФЭТ достигала
98%, а радиохимический выход - 60% с поправкой на радиоактивный распад при времени
синтеза 80 мин.

Другими авторами вместо тетрабутил аммоний карбоната в качестве межфазного

катализатора позднее был использован «классический» криптофикс, а снятие «защиты»
достигалось нагреванием с разбавленным водным раствором соляной кислоты, что является
более предпочтительным для автоматизации процесса (Рис.3). Этот вариант метода
автоматизирован на модуле GE Healthcare TracerLab FX F-N [Bourdier, 2011]. В реакции
фторирования использовали 6 мг предшественника в 2 мл ацетонитрила (100оС, 10 мин).
После этого смесь охлаждали до 30оС и добавляли 1 мл 2 N раствора HCl, гидролиз и
одновременное снятие защитных групп проводили при 100оС в течение 3 мин. После
охлаждения до 30оС реакционную смесь нейтрализовали путем добавления 400 μl 4 N
NaOH, а затем добавляли 1 мл воды и 1 мл фосфатного буфера (1,5 М, рН 6) для подготовки
раствора к введению в колонку ВЭЖХ для полупрепаративной очистки. Смесь
перемешивали. Для удаления возможного осадка раствор пропускали через фильтр с
размером пор 0,45 мкм. Условия ВЭЖХ очистки: колонка Gemini C18 (250 x 21 мм),
подвижная фаза: 15 мM фосфатный буфер (pH 6)/ EtOH (88/12, v/v), скорость потока 10
мл/мин, УФ, 220 нм и детектор радиоактивности. Фракция, содержащая целевой продукт -
[18F]ФЭТ, собиралась между 15 и 16 минутами, раствор пропускали через стерилизующий
фильтр с диаметром пор 0,22 мкм в стерильный флакон. Перед введением пациенту препарат
разбавляли стерильным физиологическим раствором. Радиохимический выход конечного
продукта составил 35±5% (n=22) без поправки на распад, 55±5% с поправкой на распад;
энантиомерная чистота [18F]ФЭТ - более 99%.

Способы автоматизации [18F]ФЭТ. Возможность осуществления синтеза на

стационарном автоматизированном модуле синтеза или на кассетном модуле

47
 В целом, метод прямого нуклеофильного фторирования с использованием в качестве
предшественника коммерчески доступного трет-бутилового эфира О-(2-тозилоксиэтил)-N-
тритил-L-тирозина, предложенного в работе [Hamacher, 2002], является наиболее
распространенным для производства [18F]ФЭТ для рутинных ПЭТ исследований и
оптимальным для поставки РФП в отдаленные ПЭТ центры. Описанный выше метод
получения и очистки [18F]ФЭТ на автоматизированном модуле Tracer Lab FX FN фирмы GE
Healthcare может быть адаптирован и к другим аналогичным модулям стационарного типа,
таким как RayTest, Synthra, к модульной платформе EckertZigler [Krasikova., 2013].
Тем не менее, наиболее удобными для наработки больших количеств РФП для
обеспечения работы нескольких ПЭТ камер или поставки в сателлитные ПЭТ центры
являются так называемые кассетные модули синтеза, широко применяемые при
автоматизации процессов работы с фтором-18. В этом случае необходимые реагенты,
картриджи для твердофазной экстракции и другие компоненты установлены в стерильную
одноразовую кассету, а проведение синтеза в полной мере соответствует требованиям GMP
(Good Manufacturing Practice) и не требует высококвалифицированного персонала
(радиохимика). Применительно к [18F]ФЭТ кассетный вариант синтеза разработан недавно
для модуля GE FastLab; разработка была представлена еще в 2014 г. на митинге
пользователей оборудования GE HealthCare в Гетеборге. Однако до настоящего времени
кассеты для синтеза [18F]ФЭТ на этом модуле в продажу не заявлены. Есть кассеты для
получения [18F]ФЭТ на кассетном модуле фирмы Scintomics типа GRP (Good
Radiopharmaceuticals Practice), но в России модули этой фирмы пока не представлены.

Другие предшественники для синтеза [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного

фторирования.

В ряде ПЭТ центров проводятся разработки по созданию новых предшественников

для получения [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного радиофторирования. Авторы
практически всех опубликованных работ за основу взяли структуру защищенной молекулы
алкилированного тирозина производства ABX, в которую были введены другие «уходящие»
или «защитные группы». В качестве межфазных катализаторов (МФК) были использованы
как криптофикс-2.2.2. в комбинации с карбонатом калия, так и карбонат тетрабутил аммония.
Подробное рассмотрение достоинств и недостатков этих предшественников приводится в
работе [Fedorova, 2014]. Публикации об их использовании этих предшественников в
производстве радиотрейсера в клинических ПЭТ исследованиях не появлялись.

48
 Отдельного внимания заслуживает российская разработка - совместный проект
ИМЧ РАН, Санкт-Петербург, и ИНЭОС РАН, Москва, в результате которой был предложен
принципиально другой метод асимметрического синтеза [18F]ФЭТ. В этом методе в качестве
предшественника в реакции прямого нуклеофильного фторирования был использован
комплекс никеляII основания Шиффа (S)-[N-2-(N’-бензилпролил)амино]бензофенона (BPB) и
алкилированного (S)-тирозина (Ni-BPB-TyrO-CH2CH2OTs) (Рис. 4) [Krasikova, 2008].

Рис. 4. Синтез [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного фторирования

предшественника на основе комплекса никеля II [Krasikova, 2008].

В молекуле предшественника амино- и карбокси- группы молекулы тирозина

«защищены» одновременно фрагментом комплекса хиральной природы, что позволяет
сохранить L-изомер аминокислоты в щелочных и достаточно жестких условиях
радиофторирования. Снятие «защиты» достигается за счет нагревания меченого
промежуточного продукта с водным раствором соляной кислоты.

Первоначально очистка полученного [18F]ФЭТ производилась методом ВЭЖХ

[Krasikova, 2008]. Реакционную смесь, полученную на стадии гидролиза, после частичной
нейтрализации вводили без дополнительной очистки в кран-дозатор жидкостного
хроматографа. Условия очистки: колонка C18 -Bondapak (Waters, 300 x 7.8 мм), элюент 0.01
M CH3COONH4, pH 4/C2H5OH 90/10 (v/v), скорость потока 4 мл/мин. Радиохимический
выход конечного продукта составлял 40-45% (с поправкой на радиоактивный распад) мин.
Радиохимическая чистота [18F]ФЭТ была более 95%, энантиомерная чистота - 95-97%.

Позднее была разработана автоматизированная технология синтеза с использованием

ТФЭ очистки [Fedorova, 2014] и коммерчески доступного модуля HotBox1 Scintomics.
Реакцию проводили в тех же условиях (Рис. 4), используя (5±0.5) мг предшественника в 600
мкл ацетонитрила, после чего снятие защиты и гидролиз проводили при 120оС в течение 10
мин. Гидролизат переносили током азота в сосуд для разбавления, где заранее помещали 20 мл
воды и 2 мл 0.1 M NaOH. При этом наблюдалось образование никель содержащего осадка,

49
который удалялся пропусканием полученной смеси через специальный гидрофильный фильтр
SLGV013NK, Millipore. Фильтрат пропускали через картридж tC18 plus SepPak, который
удерживал большую часть продукта. Картридж промывали 5 мл воды, затем продукт смывали
8 мл буфера (5 мМ ацетат натрия, pH 4/этанол 95/5 по объему) и пропускали через
катионообменную смолу LC-SCX (0.5 г, помещенные в стандартную пластиковую колонку
Supelco объемом 3 мл). Для этой цели могут быть использованы и катионообменные
картриджи, например, CM Light SepPak, Waters. Полученный раствор после стандартной on-
line стерилизации фильтрованием и разбавления при необходимости физ. раствором может
быть использован для инъекций. Радиохимический выход конечного продукта составлял 35%
(с поправкой на радиоактивный распад), время синтеза 45 мин. Радиохимическая чистота
[18F]ФЭТ была более 99%, энантиомерная чистота - более 95%.

Содержание никеля как потенциальной химической примеси часто вызывает вопросы.

Его контролировали масс-спектрометрическим методом индуктивно связанной плазмы (ICP),
данные приведены в таблице 1. Метод ТФЭ является более эффективным для удаления
следов никеля; полученные значения концентрации никеля в инъекционном растворе
составляли около 1 мкг/л, что существенно ниже средней концентрации никеля в плазме
крови 2-5 мкг/л, то все эти значения не превышали пределов, разрешенных к инъекции
человеку.

Таблица 1. Анализ содержания никеля в пробах после очистки [18F]ФЭТ различными

методами [Krasikova, 2008; Fedorova, 2014]
Содержание никеля после
Содержание никеля ВЭЖХ очистки и Содержание никеля
Номер
после ВЭЖХ фильтрования через после ТФЭ очистки
эксперимента
очистки (мкг/л) дополнительный никель- (мкг/л)
удаляющий картридж (мкг/л)
1 3,5 2,0 1,2
2 4,8 2,5 0,9
3 4,7 2,8 1,1

Предложенный метод может быть автоматизирован практически на любом

стационарном модуле синтеза, как это было сделано, например, в ПЭТ центре РНЦРХТ,
Санкт-Петербург с использованием широко применяемого в России модуля TracerLab FX N
Pro (GE Health Care). Радиохимический выход составил 32±3.5% без поправки на

50
радиоактивный распад, при времени синтеза 33 мин. Проведенные доклинические испытания
подтвердили безопасность и диагностические свойства полученного [ 18F]ФЭТ; РФП в
настоящее вреям производится для ПЭТ исследований пациентов в рамках клинических
испытаний.
Преимуществом предложенного метода является, наряду с его простотой в
автоматизации, невысокая стоимость предшественника отечественного производства,
отличающегося высокой устойчивостью при хранении при комнатной температуре (лаб.
проф. Малеева В.И., ИНЭОС РАН, Москва) и других реагентов, а также высокий
радиохимический выход. Метод может быть рекомендован к использованию в ПЭТ центрах
России.

Методы контроля качества [18F]ФЭТ

Контролируемый
Критерий допустимости Метод определения
параметр
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность РадиоТСХ, условия*
Соответствие стандарту
(идентичность) РадиоВЭЖХ, условия**
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия *) Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФЭТ должно
>95%
чистота, % быть в пределах ±5% от Rt
нерадиоактивного стандарта
Энантиомерная
>95% РадиоВЭЖХ, условия ***
чистота, %
Объемная Достаточная для Измерение объема шприцом,
активность, Ки/мл проведения ПЭТ- измерение активности в изотопном
или МБк/мл исследования на человеке калибраторе
Химическая
чистота (%) и
>99% ВЭЖХ, условия **
химические
примеси

51
 Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия****
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,5 - 5,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Отсутствие роста микроорганизмов в
Раствор должен быть
Стерильность питательных средах; ОФС 42-0066-
стерильным
07
Уровень Менее 175/V, где V -
бактериальных максимально вводимая
ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-0062-07
эндотоксинов, доза, мл#
EU/ml

#) European Pharmacopoea 8.0;

*)
ТСХ пластинки силикагель, элюент CH3СООН / MeOH (10/90, v/v), Rf [18F]фторида = 0,0;
Rf [18F]ФЭТ 0,7 (European Pharmacopoea 8.5, P. 4935-4937)
**)
колонка Nucleosil C18, 5 µm, 150 x 4.6 мм (Supelco), подвижная фаза: водный раствор
ацетата натрия 5 мМ, доведенный до рН 4.0 ледяной уксусной кислотой / этанол (95 / 5 v/v),
длина волны 254 нм; 1 мл/мин; Rt [18F] ФЭТ 7.0 мин [Fedorova, 2014].
***)
хиральная колонка Crownpak (+) (Daicel), 150 x 3 мм; подвижная фаза - раствор хлорной
кислоты, рН 2, 0,8 мл/мин; времена удерживания (Rt) L- и D изомеров [18F] ФДОФА
составляли 5,3 и 6,5 мин, соответственно [Fedorova, 2014].
****)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100 мм,
элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v);. Интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку;

Главные параметры, влияющие на то, сколько именно [18F]ФЭТ можно получить на

конечном этапе.

52
 Как уже отмечалось, для производства [18F]ФЭТ в большинстве ПЭТ центров
используется метод прямого нуклеофильного фторирования с использованием в качестве
предшественника коммерчески доступного трет-бутилового эфира О-(2-тозилоксиэтил)-N-
тритил-L-тирозина, предложенного в работе [Hamacher, 2002] и оптимизированного другими
авторами. Основным параметром, определяющим возможность получения большой
активности РФП, является радиохимический выход на момент окончания синтеза (EOS).
Многие авторы приводят РХВ на момент окончания облучения (EOB), но эта величина не
имеет практического значения, и зная время синтеза, РХВ надо пересчитывать на момент
окончания синтеза. Результаты получения [18F]ФЭТ на некоторых автоматизированных
модулях в таблице 2.

Таблица 2. Синтез [18F]ФЭТ методом прямого нуклеофильного радиофторирования

прекурсора 1 (АВХ, кат. номер 3050) и 2 (никелевый комплекс, ИНЭОС РАН) на различных
автоматизированных модулях

Время Радиохим. Удельная

Пре
Метод Метод синтеза выход, % активность, Литер.
курс
автоматизации очистки (включая (EOB или ГБк/мкмол источник
ор
очистку) EOS) ь
Самодельный
полуавтоматизи- Hamacher
1 ВЭЖХ 80 мин 55-60% EOB 18
рованный модуль 2002
для синтеза ФДГ
TRACERlab FX Bourdier
1 ВЭЖХ 50 мин 35±5% EOS >90
FN 2011
TRACERlab FX Нет Lakshminara
1 ТФЭ 75 мин 8,7 EOS
FN данных yanan 2016
Кассета +
Нет Vaneycken
1 IBA SYNTHERA ВЭЖХ 66 25-30 EOS
данных 2012
очистка
GE PET
Кассета Нет данных Нет
1 GE FastLab* 37,5 EOS users meeting
(ТФЭ) мин данных
2014
Scintomics Федорова,
2 ТФЭ 45 35 EOB >14
HotBox1 2014

53
 TRACERlab FX N Нет РНЦРХТ,
2 ТФЭ Нет данных 32 EOS
Pro данных СПб

*) до настоящего времени кассеты для синтеза [18F]ФЭТ на модуле GE FAST lab не

продаются. Есть кассеты для получения [18F]ФЭТ на других модулях синтеза (Scintomics
GRP, например)

Из приведенных данных можно заключить, что наиболее простым и эффективным с

точки зрения производительности является метод синтеза на модуле GE FastLab, кассеты для
синтеза [18F]ФЭТ можно в скором времени ожидать на российском рынке. Стоимость
кассеты ожидается достаточно высокой.
Хорошей производительностью отличается и метод с использованием прекурсора
производства ИНЭОС РАН, Москва, стоимость которого крайне незначительна (20 000 руб.
за 200 мг). Однако, прекурсор не имеет GMP сертификата, хотя отличается высоким
качеством и устойчивостью при хранении при комнатной температуре.

Расчетная активность [18F]ФЭТ, исходя из максимальной производительности

[18F]фторной мишени циклотрона.

При максимальной производительности фторной мишени циклотрона - 12 Ки

[18F]фторида – на модуле GE FastLab можно произвести 5,2 Ки готового [18F]ФЭТ (Табл. 2).
Данных об устойчивости к радиолизу при такой высокой активности нет. По истечении 30
мин (контроль качества) останется 4,35 Ки [18F]ФЭТ.

Возможность и перспективность доставки [18F]ФЭТ в удаленные ПЭТ-центры.

[18F]ФЭТ можно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае необходимости

перевозки РФП в течение 2 периодов полураспада (220 мин) из 5,2 Ки останется 1,3 Ки
[18F]ФЭТ, что более чем достаточно для проведения диагностики 20-25 пациентов в течение
рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния контроль качества РФП возможно
выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для доставки, т.е. время на
контроль качества не тратится.

54
 Трудности в синтезе и контроле качества [18F]ФЭТ. Анализ возможных рисков

В случае использования кассетного модуля GE FastLab риски в синтезе РФП

минимальны. Особое внимание необходимо уделить исследованию стабильности готового
продукта, что важно в случае длительной транспортировки, однако такие данные для
[18F]ФЭТ отсутствуют. Следует при покупке кассеты потребовать предоставление таких
данных поставщиком (или они должны быть указаны в паспорте к кассете). При разработке
синтеза конечный продукт должен быть проверен на предмет химической и
радиохимической деградации в течение установленного срока годности. Поскольку [ 18F]ФЭТ
относится к РФП класса аминокислот, контроль качества РФП в дополнение к стандартным
ВЭЖХ и ГЖХ анализам включать определение энантиомерной чистоты. Содержание L-
изомера должно быть не менее 95%; для проведения этого анализа нужна дорогостоящая
хиральная колонка, которую нужно хранить при температуре 4оС (в холодильнике) и главное
- не допускать попадания в колонку органических растворителей. Желательно для
проведения этого анализа иметь отдельную систему ВЭЖХ. Необходимо тщательно
контролировать состояние колонки на предмет хорошего разделения L-D-изомеров (колонка
«садится»). В России ПЭТ центры, производящие другой РФП класса аминокислот 11
С-МЕТ
в варианте «изготовление», обычно определяют энантиомерную чистоту в каждом десятом
синтезе, уже после выпуска РФП.

Список использованных источников к разделу [18F]ФЭТ

Adam M.J., Ruth T.J., Grierson J.R., Abeysekera B., Pate B.D. Routine synthesis of L-[18F]6-
fluorodopa with fluorine-18 acetyl hypofluorite. J. Nucl. Med, 1986; 7:1462-1468.

Albert N.L., Weller M., Suchorska B., Galldiks N, Soffietti R, Kim M.M, la Fouge`re C., Pope,
Law I., Arbizu J., Chamberlain M.C., Vogelbaum M., Ellingson B.M and Tonn J.C. Response
Assessment in Neuro- Oncology working group and European Association for Neuro-Oncology
recommendations for the clinical use of PET imaging in gliomas. Neuro-Oncology. 2016; 18:
1199-1208, 2016; doi:10.1093/neuonc/now058.

Bourdier T., Greguric I., Roselt P., Jackson T, Faragalla J., Katsifis A. Fully automated one-pot
radiosynthesis of O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine on the TracerLab FXFN module. Nucl Med
Biol. 2011; 38: 645-651.

Coenen H.H., Kling P., Stocklin G. Cerebral metabolism of L-[2-18F] fluorotyrosine. J Nucl
Med. 1989; 30:1367-1372.
55
 18 18
Dunet V, Pomoni A, Hottinger A, et al. Performance of F-FET versus F-FDG-PET for the
diagnosis and grading of brain tumors: systematic review and meta-analysis. Neuro Oncol.
2016;18:426 - 434.

Dunet V, Rossier C, Buck A, Stupp R, Prior J.O. Performance of 18F-fluoro-ethyl-tyrosine (18F-

FET) PET for the differential diagnosis of primary brain tumor: a systematic review and
Metaanalysis. J Nucl Med. 2012; 53: 207-214.

Ermert J., Coenen H.H. Methods for 11C- and 18F-labelling of amino acids and derivatives for
positron emission tomography imaging. J Label Comp Radiopharm. 2013; 56: 225-236.

18
Floeth F.W., Pauleit D., Sabel M., Reifenberger G., Stoffels G., Stummer W. F-FET PET
differentiation of ring-enhancing brain lesions. J Nucl Med. 2006; 47: 776-782.

Galldiks N, Stoffels G, Filss CP, Piroth MD, Sabel M, Ruge MI, Herzog H, Shah NJ, Fink GR,
Coenen HH, Langen KJ. Role of O-(2-18F-fluoroethyl)-L-tyrosine PET for differentiation of local
recurrent brain metastasis from radiation necrosis. J Nucl Med. 2012; 53: 1367-1374

Hamacher K, Coenen H. Convenient synthesis of N.C.A. O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine. J

Label Compds Radiopharm. 2001; 44, Suppl.1: S855-856.

18
Hamacher K., Coenen H. H. Efficient routine production of the F-labelled amino acid O-(2-
[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine. Appl Radiat Isot. 2002; 57: 853-856.

Heinzel A., Stock S., Langen K.-J., Müller D.Cost-effectiveness analysis of FET PET-guided
target selection for the diagnosis of gliomas. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2012; 39: 1089-1096.

Huang X, Bai H, Zhou H, Tang H, Yang L. Performance of 18F-FET-PET versus 18F-FDG-PET

for the diagnosis and grading of brain tumors: inherent bias in meta-analysis not revealed by quality
metrics. Neuro Oncol. 2016; 18: 1028–1029.

Kaim A.H., Weber B., Kurrer M.O., Westera G., Schweitzer A., Gottschalk J., von Schulthess
G.K., Buck A. Eur J Nucl Med. 2002; 29: 648-654.
18
Krakauer M., Kjaer A., Bennedbuk F.N. F-FET-PET in Primary Hyperparathyroidism:A
Pilot Study. Diagnostics 2016; 6:30.

Krasikova R., Orlovskaya V., Stepanova M., Fedorova O. The effect of reaction media and
phase transfer catalyst on the fluorination yield and enantiomeric purity in asymmetric synthesis of
O-(2’-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine. Curr Org Chem. 2013; 17: 2159-2163. DOI:
10.2174/13852728113179990108

56
 Lakshminarayanan N., Kumar A., Pawar Y., Chaudhari P.R., Rajan M.G.R. Fully automated
synthesis of O-(2′-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine ([18F]FET) using solid phase extraction (SPE)
purification with neutral alumina. Radioanal Nucl Chem Articles (2016) doi:10.1007/s10967-016-
4900-8.

Langen K.-J., Hamacher K., Weckesser M., Floeth F., Stoffels G., Bauer D., et al. O-(2-
[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine: uptake mechanisms and clinical applications. Nucl Med Biol. 2006;
33:287-94.

Langen K.-J., Watts C. Amino acid PET for brain tumours - ready for the clinic? Nature
Reviews/Neurooncology, 2016, doi:10.1038/nrneurol.2016.80

Laverman P., Boerman O.C., Corstens F.H.M, Oyen J.G.W. Fluorinated amino acids for
tumour imaging with positron emission tomography. Eur J Nucl Med. 2002; 29: 681-690.

Lemaire C. Production of L-[18F]fluoroamino acids for protein synthesis: overview and recent
developments. In PET studies on Amino Acid Metabolism and Protein Synthesis. Developments in
Nuclear Medicine. 1993; 23:89-108.

Mueller D., Klette I., Kalb F., Baum R.P. Synthesis of O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine based
on a cartridge purification method. Nucl Med Biol. 2011; 38: 653-658.

Pauleit D., Floeth F., Tellmann L. Comparison of O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine PET and
3-123I- iodo- - methyl-L-tyrosine SPECT in brain tumors. J Nucl Med. 2004; 45:374-381.

Popperl G., Kreth F.W., Mehrkens J.H., Herms J., Seelos K., Koch W., Gildehaus F.J.,
Kretzschmar H.A., Tonn J.C., Tatsch K. FET PET for the evaluation of untreated gliomas:
correlation of FET uptake and uptake kinetics with tumour grading. Eur J Nucl Med Mol Imaging.
2007; 34: 1933-1942.

Rau F.C., Weber W.A., Wester W.J., Herz M., Bescker I., Kruger A., Schwaiger M.,
Senekovitsch-Schmidtke R. O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine (FET): a tracer for differentiation of
tumour from inflammation in murine lymph nodes. Eur J Nucl Med. 2002; 29:1039-1046.

Schoultz B.W., Reed B.J., Marton J., Willoch F., Henriksen G. A Fully Automated
Radiosynthesis of [18F]Fluoroethyl-Diprenorphine on a Single Module by Use of SPE Cartridges
for Preparation of High Quality 2-[18F]Fluoroethyl Tosylate. Molecules. 2013; 18:7271-7278.

Swiss Agency for Therapeutic Products. New registrations, products for use in humans. J.
Swissmed. 2014, 13:651.

57
 18
Vaneycken I., Anneleen B., Xavier C., Caveliers V. Fully automated synthesis of F-FET
using the Synthera® Platform. Presentation (#1476) in the SNM 59th Annual Meeting 2012.

Walter F., la Fougère C., Belka C., Niyazi M. Technical issues of [18F]FET-PET imaging for
radiation therapy planning in malignant glioma patients - a review. Frontiers in oncology. 2012, 2:
1-4.

Weber W.A., Wester H.J., Grosu A.L. Herz M., Dzewas B., Feldmann H.-J., Molls M.,
Stocklin G., Schwaiger M. O-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tyrosine and L-[methyl-11C]methionine uptake
in brain tumours: initial results of comparative study. Eur J Nucl Med. 2000; 27: 542-549.

Wester H., Herz M., Weber W., Heiss P., Senekovitsch-Schmidtke R., Schwaiger M., Stocklin
G. Synthesis and radiofarmacology of O-(2-[18F] fluoroethyl)-L-tyrosine for tumor imaging. J Nucl
Med. 1999; 40: 205-212.

Zhang M.-R., Furutsuka K., Yoshida Y., Suzuki K. How to increase the reactivity of
[18F]fluoroethylbromide: [18F]fluoroethylation of amine, phenol and amide functional groups with
[18F]FEtBr, [18F]FEtBr/NaI and [18F]FEtOTf. J Label Comp Radiopharm. 2003; 46: 587-598.

Zuhayra M., Alfteimi A., Von Forstner C., Lutzen U., Meller B., Henze E. New approach for
the synthesis of [18F]fluoroethyltyrosine for cancer imaging: Simple, fast, and high yielding
automated synthesis. Bioorg Med Chem. 2009; 17: 7441-7448.

Гомзина Н.А., Васильев Д.А., Красикова Р.Н. Использование 2-[18F]фторэтилбромида в

синтезе O-(2-[18F]фторэтил)-L-тирозина – радиотрейсера для диагностики опухолей мозга
методом ПЭТ. Радиохимия. 2007; 49: 264-269.

О.С. Федорова, О.Ф. Кузнецова, С.В. Шатик, М.А. Степанова, Ю.Н. Белоконь, В.И.
Малеев, Р.Н. Красикова. Производные тирозина, меченные фтором-18: синтез и
экспериментальное исследование накопления в опухоли и абсцессе. Биоорганическая химия.
2009; 35:334-343.

58
 [18F]фторэтилхолин ([18F]ФЭХол)
Введение, история создания [18F]фторэтилхолина ([18F]ФЭХол)

Использование меченых производных холина в ПЭТ основано на том, что холин

является предшественником в биосинтезе фосфатидилхолина - основного компонента
клеточных мембран, уровень которого, благодаря более высокой концентрации
холинкиназы, в пролиферирующих клетках значительно выше по сравнению с нормальной
тканью. Первые исследования с N-[11C-метил]холином (1, Рис.1), выполненные на обезьянах,
были опубликованы еще в 1983 г [Friedland, 1983]. Поскольку радиоактивные аналоги
холина практически не накапливаются нормальной тканью мозга, это позволяет получать
высококонтрастные ПЭТ изображения опухоли. Однако, N-[11C-метил]холин получил
широкое применение в диагностике рака предстательной железы (РПЖ) и некоторых других
(рак прямой кишки, легких и др.) и в 2012 г. был одобрен к клиническому использованию
FDA (США). Тем не менее, с изменением мировых тенденций в сторону использования
фторированных аналогов известных РФП, но с меткой фтор-18 с более высоким периодом
полураспада, были синтезированы и фторированные аналоги холина. Прямое введение метки
фтор-18 в молекулу холина невозможно. Также как и N-[11С-метил]холин, 18
F-производные
холина получают реакцией алкилирования диметиламиноэтанола (ДМАЭ), но синтез
является гораздо более сложным. Первым фторированным аналогом холина был именно
[18F]ФЭХол (3, Рис.1), предложенный в работе [Hara, 1997]. В 2002 г тот же ученый [Hara,
2002] провел сравнительное ПЭТ исследование нового РФП с широко известным N-[11C-
метил]холином и доказал их сходство как диагностических агентов для визуализации
первичного рака простаты пациентов.
Тем не менее в последующие годы наибольшее распространение получил
синтезированный позднее 18
F-фторметилированный аналог (2, рис.1) ([18F]ФМетХол,
предложенный в работе [DeGrado, 2001]. В этой работе было проведено и первое
сравнительное исследование фторметил и фторэтил-производных холина (включая еще и 18F-
фторпропил холин), где в in-vitro исследованиях на клетках типа PC-3 рака предстательной
железы наилучшее связывание было выявлено для ([18F]ФМетХол. Авторами было
высказано предположение о том, что фторметилированный аналог обладает большим
сходством с холином, нежели [18F]ФЭХол, с более длинной алкильной цепочкой (плюс одна
метиленовая (СН2) группа) и поэтому является более предпочтительным.

59
 Рис. 1. Меченные аналоги холина.

Таким образом в большинстве клинических ПЭТ исследований используется именно

[18F]ФМетХол. Фирмами-производителями различных модулей уделяется огромное
внимание автоматизации синтеза данного РФП. [18F]ФМетХол получают реакцией
фторметилирования диметиламиноэтанола (ДМАЭ), который играет одновременно роль
предшественника, растворителя и основания. Наиболее критичной является стадия
получения 18
F-фторметилирующего агента, [18F]фторобромометана, для промежуточной
очистки которого первоначально применялся технически сложный для автоматизации метод
газовой хроматографии [DeGrado, 2001]. Позднее для этой цели был предложен более
простой метод, основанный на перегонке летучего [18F]фторобромометана через четыре
соединенные последовательно одноразовых картриджа SepPak Silica Plus, Waters, с
последующей его конвертацией в [18F]фторметил трифлат (Схема 1). С использованием этого
реагента реакция фторметилирования ДМАЭ протекает быстро при комнатной температуре
на одноразовом картридже С18 SepPak. Окончательная очистка достигалась с помощью
метода твердофазной экстракции на катионообменном картридже CM-Light, Waters. В 2016
г. в Европейской Фармакопее вышла соответствующая монография (фарм. статья) [European
Pharmacopoeia 8.8, 2016].

1. [18F]KF/K2.2.2, 18
N F
AcN, 80oC OH +
CH2Br2 18FCH OTf
2 N
2. AgOTf OH

Схема 1. Получение [18F]фторметил холина

Предложенная технология позволила существенно упростить автоматизацию

процесса синтеза [18F]ФМетХол. Тем не менее, синтез этого соединения неизменно сопряжен
с потерями радиоактивности при перегонке летучего фторметилирующего агента, что
определяет основные риски при его получении. Синтез автоматизирован на кассетном
модуле Synthera IBA, но для этого нужно два модуля (синтез на этом модуле выполняют,
например, в РОНЦ им. Блохина [Долгушин, 2015].
60
 В то же время синтез [18F]ФЭХол намного проще, чем [18F]ФМетХол, поскольку
может проводиться с использованием в качестве алкилирующего агента
[18F]фторэтилтозилата. При этом все стадии синтеза могут быть проведены в одном
реакционном сосуде (one-pot) с последующей очисткой методом ТФЭ. Исследования с
[18F]ФЭХол были начаты в нескольких Европейских ПЭТ центрах, (главным образом, в
Германии), результаты начали публиковаться только начиная с 2010 г. В 2009-2011 г.г.
вышло несколько работ по автоматизации метода синтеза этого РФП на различных
коммерчески доступных модулях. .

Применение [18F]ФЭХол в клинических ПЭТ исследованиях

По мере появления первых публикаций с использованием [18F]ФЭХол на различных

конгрессах по ядерной медицине появлялась и полемика на тему: «какой из двух
фторированных аналогов лучше?». В некоторых публикациях вообще не указывалось, какой
конкретно аналог холина был использован, поскольку используемая авторами аббревиатура
FC (Fluorocholine) не давала возможности определить формулу используемого РФП. С этим
столкнулись авторы недавнего обзора [Evangelista, 2015], целью которого было именно
сравнение диагностической ценности [18F]ФЭХол и [18F]ФМетХол в ПЭТ исследованиях
РПЖ по данным литературы с 2000 по 2014 г.г. Несомненно, число исследований,
расмотренных в данном обзоре, с [18F]ФМетХол (28) было намного больше, чем с
[18F]ФЭХол (4). В единственном ПЭТ исследовании пациентов с РПЖ (82 пациента) были
использованы как [18F]ФМетХол, так и [18F]ФЭХол. Однако, к сожалению, авторы этой
работы [Graute, 2012] не провели никакого сравнения двух РФП. Выбор того или иного РФП
в их исследовании определялся доступностью радиотрейсера в момент исследования (оба
радиотрейсера в настоящее время коммерчески доступны в Германии и Австрии), а в
суммарной таблице данных был «единый радиотрейсер» - “Fcholine”.
Несмотря на явно недостаточное для статистического анализа числа ПЭТ
исследований с [18F]ФЭХол авторы выше упомянутого обзора [Evangelista, 2015] пришли к
заключению о некоторых преимуществах [18F]ФМетХол по сравнению и [18F]ФЭХол.
Рассмотрение конкретных (хоть и немногочисленных) работ приводит к противоречивым
данным. Так в одной их первых работ [Steuber, 2010] с использованием [18F]ФЭХол было
проведено ПЭТ исследование 20 пациентов с РПЖ с подозрением на метастазы в
лимфатические узлы. При радикальной простатэктомии (РПЭ) было удалено 285
пораженных лимфатических узлов, из них в 31 случае методом ПЭТ было поставлено ложно-
отрицательное заключение и в 254 - отрицательное заключение. Авторы [Steuber, 2010]
61
показали, что [18F]ФЭХол не позволяет визуализировать новообразования (lesions) размером
менее 10 мм и в целом не эффективен при выявлении метастазирующих лимфатических
узлов при локализованной РПЖ ввиду большого числа ложно-отрицательных заключений.
Согласно результатам исследования данный РФП не может быть рекомендован при
исследовании пациентов с подозрением на скрытые метастазы.
По данным других авторов [Tilka, 2013] при ПЭТ исследовании 56 пациентов после
РПЭ с биохимическим рецидивом (медианный уровень ПСА около 6 нг/мл) выявлена
корреляция между накоплением [18F]ФЭХол и результатами гистологического исследования
метастазирующих лимфатических узлов (PPV - positive predictive value - 75%). Однако, оно
не позволило выявить все пораженные метастазами лимфатические узлы (NPV – negative
predictive value). Тем не менее в последующей дискуссии в том же номере журнала другие
авторы [Schiavina, 2013] высказали мнение, этот результат следует оценивать более
оптимистично, поскольку выявление всех метастаз в лимфатических узлах ни одним из
неинвазивных радиологических методов в настоящее время не достигается.
В целом, ни один из аналогов холина (включая N-[11C-метил]холин) не эффективен
при выявлении метастаз в близлежащие лимфатические узлы, а также в ПЭТ исследованиях
пациентов с низким уровнем ПСА. Кроме того, ввиду высокого накопления в мочевом
пузыре для получения высоко контрастного ПЭТ изображения с F-производными холина
18

необходим достаточно длительный «двухфазный» протокол.

Поэтому в последние годы огромное внимание уделяется разработкам высоко
специфичных РФП на основе ПЭТ изотопов металлов, связываемых с различными
рецепторами, экспрессируемыми на поверхности неоплазматических новообразований РПЖ.
Новейшие разработки в этой области направлены на создание агентов, специфичным к
простат-специфическому мембранному антигену (ПСМА) (prostate specific membrane antigen,
PSMA), интегрированному мембранному протеину, состоящему из 750 аминокислот (100–
120 kDa) с интрацеллюлярным, интрамембранным и экстрацеллюлярным доменами.
Несмотря на название, ПСМА не является антигеном, специфичным для РПЖ, он
детектируется и в нормальных клетках других эндокринных желез, а также экспрессируется
не только опухолью ПЖ, но и другими карциномами (рак прямой кишки, карцинома почек и
др.). Однако, большинство работ посвящено ПСМА-специфичным радиотрейсерам для
диагностики РПЖ, где, как показано высокая экспрессия этого антигена обнаруживается при
кастрат-резистентных и метастазирующих формах рака.
Наиболее успешным радиотрейсеры на основе малых молекул, являющихся ПСМА-
ингибиторами, оказался 68
Ga-Glu-urea-Lys(Ahx)-HBED-CC (68Ga-PSMA-11 или 68
Ga-DKFZ-
11) (Рис. 2), ПЭТ радиотрейсер, разработанный в 2012 г. группой ученых из Heidelberg,
62
Германия [Eder, 2012] (хелатор HBED-CC: N,N’-bis[2–hydroxy-5-(carboxyethyl)-
benzyl]ethylenediamine-N,N’-diacetic acid). В рекордные сроки 68Ga-PSMA-11 прошел путь от
разработки и первых исследований на пациентах [Afshar-Oromieh, 2013] до клинического
применения. Проведенное в Европейских ПЭТ центрах мультицентровое исследование
подтвердило исключительно высокие диагностические свойства 68
Ga-PSMA-11,
позволяющего выявлять рецидив РПЖ при очень низких (0.2 нг/мл) уровнях ПСА, что
невозможно в исследованиях с 18
F-производными холина. В 2015 г. в рамках концепции
тераностики получен и радиотерапевтический агент 177
Lu-DKFZ-11. При его использовании
в лечении пациента с метастазирующей формой РПЖ наблюдался заметный отклик на
радиотерапию, сопровождавшийся и большим уменьшением уровня ПСА с 38 до 4.6 нг/мл.

Рис. 2. Структурная формула 68Ga-PSMA-HBED-CC.

Сравнительное исследование 68
Ga-PSMA-HBED-CC и [18F]ФЭХол двух групп
пациентов с РПЖ и метастазами в лимфатические узлы подтвердило более высокую
точность при выявлении метастаз, а также более высокую прогностическую ценность
отрицательного результата (NPV – negative predictive value) в случае 68
Ga-PSMA-HBED-СС
[Pfister, 2016]. Следует отметить, что в целом результаты этих авторов с [18F]ФЭХол были
намного лучше, чем в рассмотренной выше работе [Tilka, 2012].
ПЭТ центры, оснащенные собственными циклотронами, несомненно, заинтересованы в
использовании ПСМА-агентов, меченных фтором-18 с большим периодом полураспада и
лучшим качеством ПЭТ изображений, обеспечиваемым фтором-18 по сравнению с галлием-
68. Разработки в данной области только начинаются и будут рассмотрены ниже.

Подробное описание синтеза и очистки [18F]ФЭХол

63
 Так же, как и в случае [18F]ФМетХол, в основе синтеза [18F]ФЭХол лежит реакция
фторакилирования ДМАЭ, однако с использованием меченного фтором-18 фторэтильного
алкилирующего агента. В зависимости от природы этого агента различают два
принципиально разных с точки зрения автоматизации метода получения [18F]ФЭХол.
В первой работе по синтезу [18F]ФЭХол в качестве алкилирующего агента
использовался [18F]фторэтилтозилат ([18F]ФТОЗ), который получали известной реакцией
нуклеофильного радиофторирования предшественника, диэтилтозилата (Схема 2) [Hara,
2002] в присутствии тетрабутил аммония в качестве межфазного катализатора (МФК).

Схема 2. Синтез [18F]ФЭХол с использованием в качестве алкилирующего агента

[18F]фторэтилтозилата [Hara, 2002].

Далее реакцию 18
F-фторалкилирования ДМАЭ (0.3 мл) c помощью [18F]ФТОЗ
проводили в реакционном сосуде при температуре 100оС в течение 5 мин. Для выделения
продукта из реакционной смеси использовали метод полупрепаративной ВЭЖХ (колонка
ODS силикагель, 250 х 10 мм; элюент - 0.05 М H3PO4 + 1 ммоль 2-нафталенсульфоновой
кислоты, скорость потока 5 мл/мин. Фракцию, содержащую продукт, разбавляли водой и
пропускали через катионообменный картридж Accel Plus CM Light, на котором (будучи
катионной формой) и сорбировался [18F]ФЭХол. После промывки картриджа 20 мл воды
продукт смывали 2 мл физ. раствора, и после стерильного фильтрования разбавляли до
нужного объема физ. раствором или другим буфером. Радиохимический выход составлял 40%
(с поправкой на радиоактивный распад); время синтеза 65 мин.
Метод синтеза [18F]ФЭХол с использованием [18F]ФТОЗ использовался и в других
работах, где в качестве МФК был использован как классический криптофикс К.2.2.2.,
[Steiber, 2010; Pascali, 2011], так и тетрабутил аммоний карбонат [Asti, 2010]. Замена
трудоемкой и длительной стадии полупрепаративной ВЭЖХ очисткой методом твердофазной
экстракции позволила существенно упростить автоматизацию процесса и увеличить
радиохимический выход. Так в работе [Pascali, 2011] для очистки была использована серия
последовательно соединенных картриджей: tC18, Accell CM и два картриджа Silica Plus.

64
Синтез был выполнен на модуле Modular Lab (Eckert and Zigler); радиохимический выход
составил 36% (без поправки на радиоактивный распад) при времени синтеза 35 мин.
Интересный подход был предложен авторами [Piel 2007], которые показали, что
добавление на стадии алкилирования йодидов щелочных металлов приводит к
существенному увеличению выхода реакции алкилирования. Тем не менее, ввиду того, что
для очистки был использован метод полупрепаративной ВЭЖХ, радиохимический выход
составлял 30% (без поправки на радиоактивный распад) при времени синтеза 50 мин.
В качестве альтернативы [18F]фторэтилтозилату было предложено использовать
[18F]фторэтилбромид ([18F]ФЭБ) - высоко летучий алкилирующий агент (темп. кипения
71.5оС), широко применяемый в синтезе многих РФП для ПЭТ. Очистка [18F]ФЭБ обычно
достигается методом дистилляции, что может сопровождаться потерей радиоактивности,
поэтому к герметичности всех соединений автоматизированной системы синтеза
предъявляются особые требования. Для получения [18F]ФЭБ было предложено использовать
2-бромэтил трифлат (Схема 3) [Zuhayra, 2008]; при этом реакция нуклеофильного
радиофторирования проводится в растворителе с очень высокой температурой кипения (о-
дихлорбензол), с тем, чтобы избежать попадания растворителя во второй реакционный
сосуд, где проводится реакция 18F-фторалкилирования.

Схема 3. Синтез [18F]ФЭХол с использованием в качестве алкилирующего агента

[18F]фторэтилбромида [Zuhayra, 2008].

Метод обеспечивает высокий радиохимический выход - 45% без поправки на

радиоактивный распад при времени синтеза 40 мин. Однако, он не получил широкого
распространения ввиду необходимости синтезировать исходный предшественник бромэтил
трифлат, а также использования двух реакционных сосудов.
Несмотря на то, что классическим методом получения [18F]ФЭБ считается реакция
нуклеофильного фторирования дибромоэтана (C2H4Br2), в применении к синтезу [18F]ФЭХол

65
на стадии получения [18F]ФЭБ используются достаточно «экзотические» предшественники,
как, например, бромэтилнозилат (Схема 4) [Schmaljohanna, 2011].

Схема 4. Синтез [18F]ФЭХол с использованием в качестве алкилирующего агента

[18F]фторэтилбромида, полученного из бромэтилнозилата [Schmaljohanna, 2011].

Преимуществом этого метода является то, что очистка [18F]ФЭБ достигается не за счет
классической дистилляции (которая может приводить к потере продукта из-за
негерметичности соединений), а за счет пропускания реакционной смеси, содержащей
[18F]ФЭБ (стадия 1, схема 4) через три последовательно соединенных картриджа. Очистка
конечного продукта, полученного на третьей стадии, также осуществляется методом ТФЭ с
использованием двух соединенных последовательно картриджей Accell Plus CM, Waters.
Радиохимический выход был несколько ниже, чем в методе [Zuhayra, 2008] и составлял
27±5% с использованием модуля Synchrom, RayTest и 23±5 % на модуле HotBox III,
Scintomics.

Способы автоматизации. Возможность осуществления синтеза [18F]ФЭХол на

стационарном автоматизированном модуле синтеза или на кассетном модуле

Как уже отмечалось, синтез [18F]ФЭХол является двухстадийным, причем первая

стадия включает реакцию получения 18
F-алкилирующего агента с последующей
промежуточной очисткой и стадию алкилирования в растворе или на одноразовом
картридже. При очистке конечного продукта используемый ранее метод полупрепаративной
ВЭЖХ [Hara, 2002] в настоящее время не используется. Благодаря тому, что продукт
получается в катионной форме, он хорошо удерживается на катионообменном картридже
Accell Plus CM, Waters (этот тип картриджа используется во всех опубликованных работах) и
затем элюируется физ. раствором.

66
 В принципе любой из методов и подходов, описанных выше, может быть реализован на
стандартном автоматизированном модуле синтеза стационарного (не кассетного) типа:
TracerLab FX N Pro (GE HealthCare); Synthra (RayTest); Modular lab (Eckert and Zigler);
Scintomics Hot Box III и аналогичных. Кассетной версии до настоящего времени на рынке не
предлагается.
Наиболее подходящим для рутинного производства представляется метод синтеза с
использованием в качестве фторалкилирующего агента [ 18F]ФТОЗ (Схема 1) в комбинации с
методом очистки на основе твердофазной экстракции, уже используемый в ряде ПЭТ центров
[Steiber, 2010; Pascali, 2011, Asti, 2011]. Интересное решение было предложено в работе [Asti,
2011], где реагенты для первой стадии синтеза (диэтилтозилат) и второй стадии синтеза
(ДМАЭ) а ацетонитриле добавлялись непосредственно в реакционный сосуд, содержащий
активированный комплекс [18F]фторида с тетрабутиаммоний карбонатом (TBA18F). Выход
реакции сильно зависел от объема ацетонитрила. В оптимизированном варианте с
использованием модуля Tracer Lab FX FN (12 мг диэтилтозилата, 0,03 мл ДМАЭ, 0,4 мл
ацетонитрила) радиохимический выход составил 48% (без поправки на радиоактивный
распад) при времени синтеза 43 мин. Об использовании этого эффективного метода другими
авторами не сообщалось. Новых публикаций по автоматизации синтеза [18F]ФЭХол после
2011 г. не появлялось, видимо потому, что существующие методы уже позволяют
нарабатывать РФП в мультидозовых количествах.

Методы контроля качества [18F]ФЭХол

Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Визуальное Чистый, бесцветный
Визуальный осмотр
соответствие раствор
Подлинность
Соответствие стандарту РадиоВЭЖХ, условия*
(идентичность)
Радионуклидная
>99% Оценка гамма-спектра
чистота, %
РадиоВЭЖХ, условия * Время
Радиохимическая удерживания Rt [18F]ФЭХол
>95%
чистота, % должно быть в пределах ±5% от
Rt нерадиоактивного стандарта

67
 Достаточная для
Объемная Измерение объема шприцом,
проведения ПЭТ-
активность, Ки/мл измерение активности в
исследования на
или МБк/мл изотопном калибраторе
человеке
ДМАЭ < 1 mg/v ГЖХ, условия **
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии с ОФС
растворители,
не более 0,30 «Остаточные растворители»
мг/мл
рН 4,5 - 8,5# Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен быть
Осмометрия
мОсм изотоничным
Отсутствие роста
Раствор должен быть
Стерильность микроорганизмов в питательных
стерильным
средах; ОФС 42-0066-07
Уровень
бактериальных Менее 25 EU/ml ЛАЛ-тест согласно ОФС 42-
эндотоксинов, 0062-07
EU/ml

#) European Pharmacopoea 8.8,, 2016, P. 5987-5989;

*)
колонка Luna SCX, 5 µm, 150 x 4.6 мм (Supelco), подвижная фаза: CH3CN/0.25 M NaH2PO4
(10 90 v/v), длина волны 254 нм; 1 мл/мин; Rt ФЭХол 13.0±0.3 мин [J. Schmaljohann, 2011];
**) ГЖХ; колонка fused silicа, 30 м, поли[(цианопропил)][фенил диметилсилоксан] R;
толщина пленки 1,8 мкм; поток азота 1,5 мл/мин; детектор ДИП (температура детектора 275
о
С, температура инжектора 250 оС); 0-3 мин. - 60 оС; 3-5 мин 60-160 оС; 5-13 мин - 160 оС.
[European Pharmacopoea 8.8,, 2016, P. 5987-5989];
***)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100 мм,
элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v); интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку;

68
Главные параметры, влияющие на то, сколько именно [18F]ФЭХол реально получить
на конечном этапе.

Основным параметром, определяющим возможность получения большой активности

РФП, является радиохимический выход на момент окончания синтеза (EOS). Многие авторы
приводят РХВ на момент окончания облучения (EOB), но эта величина не имеет
практического значения, и, зная время синтеза, РХВ надо пересчитывать на момент
окончания синтеза. Результаты получения [18F]ФЭХол на некоторых автоматизированных
модулях в таблице 1.

Таблица 1. Синтез [18F]ФЭХол на различных автоматизированных модулях

Время Радиохим.
Фтор-
Метод Метод синтеза выход, % Литер.
№ алкилир.
автоматизации очистки (включая (EOB или источник
агент
очистку) EOS)

Самодельный

1 полуавтоматизи- ВЭЖХ 65 мин 40, EOB [18F]ФТОЗ Hara 2002

рованный модуль

Modular lab,
2 ТФЭ 35 мин 36±3, EOS [18F]ФТОЗ Pascali, 2010
Eckert Zigler

TRACERlab FX
3 ТФЭ 43 мин 48, EOS [18F]ФТОЗ Asti, 2010
FN

11
С-модуль для
4 метилирования ВЭЖХ 50 мин 36±3, EOS [18F]ФТОЗ Piel, 2007
GE Health Care

[18F]ФЭБ

5 - ТФЭ 40 мин 47±5, EOS из бромэтил Zuhayra, 2008

трифлата

Scintomics [18F]ФЭБ Schmaljohann,

6 ТФЭ - 23±5, EOS
HotBoxIII из бромэтил 2011

69
 нозилата

[18F]ФЭБ
Schmaljohann,
2 Synchrom, RayTest ТФЭ - 27±5% EOS из бромэтил
2011
нозилата

Из приведенных в таблице данных можно заключить, что несмотря на различия в

процедурах синтеза [18F]ФЭХол с использованием [18F]ФТОЗ у различных авторов,
достигаемые РХВ близки и составляют около 40% (EOS). Использование в реакции
фторалкилирования ДМАЭ летучего [18F]ФЭБ также дает хорошие результаты (строка 5 в
табл.1). Однако использование этого метода в рутинном производстве РФП сопряжено с
определенными рисками (см. далее).

Расчетная активность конечного продукта, исходя из максимальной

производительности [18F]фторной мишени циклотрона.

При максимальной производительности фторной мишени циклотрона - 12 Ки

[18F]фторида - на модуле TRACERlab FX FN, GE Healthcare (строка 3 в Табл.1) можно
произвести 5,7 Ки готового [18F]ФЭХол. Данных об устойчивости к радиолизу при такой
высокой активности нет. По истечении 30 мин (контроль качества) останется 4,7 Ки
[18F]ФЭХол.

Возможность и перспективность доставки [18F]ФЭХол в удаленные ПЭТ центры.

[18F]ФЭХол можно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае необходимости

перевозки РФП в течение 2 периодов полураспада (220 мин) из 5,7 Ки останется 1,4 Ки
[18F]ФЭХол, что более чем достаточно для проведения диагностики 20-25 пациентов в
течение рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния контроль качества РФП
возможно выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для доставки, т.е.
время на контроль качества не тратится.

Трудности в синтезе и контроле качества [18F]ФЭХол. Анализ возможных рисков

70
 Технология синтеза [18F]ФЭХол, основанная на реакции фторалкилирования ДМАЭ
летучего [18F]ФЭБ, несет в себе определенные риски ввиду возможных потерь
радиоактивности на стадии дистилляции агента. Это в свою очередь будет приводить к
невоспроизводимости радиохимического выхода РФП и трудностям в планировании числа
пациентов. Во избежание этого необходимо тщательно контролировать герметичность всех
линий и соединений перед синтезом (leak test), а также показания датчиков радиоактивности
на стадии дистилляции. При разработке технологии желательно сразу остановиться на
методе, где используется минимальное количество ДМАЭ. Следует отметить, что ДМАЭ не
относится к высоко токсичным соединениям (LD50 для крыс более 234 мг/кг), и его
контрольный уровень в РФП лимитирован не токсичностью, но способностью ингибировать
процесс внедрения меченого холина в клеточную мембрану. Контроль за содержанием
ДМАЭ в конечном продукте является не тривиальной задачей, поскольку молекула не имеет
ароматических групп и не детектируется УФ-детектором. Использование для этой цели
рефрактометрического детектора затруднительно ввиду его низкой чувствительности. Метод
ГЖХ позволяет контролировать ДМАЭ в низких концентрациях с использованием ГЖХ
колонок определенного типа.

Список использованных источников к разделу [18F]ФЭХол

Afshar-Oromieh, A. Malcher, M. Eder, M. Eisenhut, H. B.Linhart, T. Hadaschik, F. Holland-

Letz, C. Giesel, S. Kratochwil, U. Haufe, C. Haberkorn and C. Zechmann, PET imaging with a
[68Ga]gallium-labelled PSMA ligand for the diagnosis of prostate cancer: biodistribution in humans
and first evaluation of tumour lesions. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2013, 40, 486-495.

Asti M., Farioli D., Iori M., Guidotti C., Versari A., Salvo D. Efficient automated one-step
synthesis of 2-[18F]fluoroethylcholine for clinical imaging: optimized reaction conditions and
improved quality controls of different synthetic approaches. Nucl Med Biol., 2010; 39:310-315.

European Pharmacopoea 8.8, 2016. Fluorocholine (18F) injection. P. 5987-5989.

18
Evangelista L., Cervino A.R., Guttilla A., Zattoni F., Cuccurullo V., Mansi L. F-
18
fluoromethylcholine or F-fluoroethylcholine pet for prostate cancer imaging: which is better? A
literature revision. Nucl Med Biol., 2015, 42:340-348.

DeGrado T.R., Coleman R.E., Wang S, Baldwin S.W., Orr M.D., Robertson C.N. Synthesis
18
and evaluation of F-labeled choline as an oncologic tracer for positron emission tomography:
initial findings in prostate cancer. Cancer Res. 2001; 61:110-117.

71
 Eder M., Schafer M., Bauder-Wust U., Hull W. E., Wangler C., Mier W., Haberkom U. and
Eisenhut M., Bioconjug. Chem., 2012, 23, 688.

Friedland R.P., Mathis C.A., Budlinger T., Moeyr B.R., M. Rosen. Labelled choline and
phosphorylcholine. Body distribution and brain autoradiography: concise communication. J Nucl
Med 1983; 24: 812-815.

Graute V, Jansen N, Ubleis C, Seitz M, Hartenbach M, Scherr MK, et al. Relationship between
PSA kinetics and (18F)fluorocholine PET/CT detection rates of recurrence in patients with prostate
cancer after total prostatectomy. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2012; 39:271–82.

Hara T, Kosala N, Kishi H. Development of (18)F-fluoroethylcholine for cancer imaging with

PET: synthesis, biochemistry, and prostate cancer imaging. J Nucl Med 2002; 43:187-199.

Hara T, Yamamoto M. Automated synthesis of fluorine-18 labeled choline analogue: 2-

fluoroethyl-dimethyl-2-oxyethylammonium. J Nucl Med., 1997; 38:44P.

Kratochwil A., Giesel F. L., Eder M., Afshar-Oromieh A., Benešová M., Mier W., Kopka K.
and Haberkorn U. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2015, 42, 987.

Pascali G., D'Antonio L., Bovone P., Gerundivi P., August T. Optimization of automated large-
scale production of [18F] fluoroethylcholine for PET prostate cancer imaging. Nucl Med Biol.,
2009; 36: 569-574.

Pfister D., Porres D., HeidenreichA., Heidegger I., Knuechel R., Steib F., Behrendt F.F.,
Verburg F.A. Detection of recurrent prostate cancer lesions before salvage lymphadenectomy is
68 18
more accuratewith Ga-PSMA-HBED-CC than with F-Fluoroethylcholine PET/CT. Eur J Nucl
Med Mol Imaging. 2016; 43; 1410-1417.

Piel M., Bauman A., Baum R.P. Improved automated synthesis of [18F]fluoroethylcholine as a
radiotracer for cancer imaging. Bioorg Med Chem 2007; 15:3171-5.

Schiavina R., Martorana G. The Promise of Choline-PET/CT in the Detection of Recurrent

Prostate Cancer: What Are the Limits of Our Investigation? Eur J Urol., 2013; 63: 792-796.

Schmaljohanna J., Schirrmacher E., Wängler B., Wängler C., Schirrmacher R., Guhlke S. Fully
automated SPE-based synthesis and purification of 2-[18F]fluoroethyl-choline for human use. Nucl
Med Biol., 2011, 38:165-170.

Steuber T., Schlomm T., Heinzer H., Zacharias M., Ahyai S., Chun K.F. Haese A., Klutmann
S., Kollermann J., Sauter G., Mester J., Mikecz P., Fisch M., Huland H., Graefen M., Salomon G..
[F18]-fluoroethylcholine combined in-line PET-CT scan for detection of lymph-node metastasis in
72
high risk prostate cancer patients prior to radical prostatectomy: Preliminary results from a
prospective histology based study. Eur J Cancer, 2010; 46: 449-455.

Tilka D., Reich O., Graser A., Hacker M, Silchinger J., Becker A.J., Khoder W., Bartenstein
P., Stief C.G, Loidl W., Seitz M. 18F-Fluoroethylcholine PET/CT Identifies Lymph Node Metastasis
in Patients with Prostate-Specific Antigen Failure After Radical Prostatectomy but Underestimates
Its Extent. Eur J Urol., 2013; 63: 792-796.

Tuncel M., Souvatzoglou M., Herrmann K., Stollfuss J., Schuster T., Weirich G., et al. [(11)C]
Choline positron emission tomography/computed tomography for staging and restaging of patients
with advanced prostate cancer. Nucl Med Biol., 2008; 35:689-95.

Zuhayra M., Alfteimi A., Papp L., Lutzen U., Lutzen A., Von Forstner C., Meller B., Henze E.
Simplified fast and high yielding automated synthesis of [ 18F]fluoroethylcholine for prostate cancer
imaging. Bioorg Med Chem., 2008; 16: 9121-6.

Долгушин М. Б., Оджарова А. А., Михайлов А. И., Ширяев С. В., Тулин П. Е., Невзоров
Д. И., Матвеев В. Б.. ПЭТ/КТ с 18F-фторхолином в режиме двухэтапного сканирования при
биохимических рецидивах рака предстательной железы. Онкоурология. 2015; 2: 46-54.

73
 [18F]фторэстрадиол ([18F]ФЭС)

Введение, история создания РФП

Эстрогены (греч. οίστρος - живость и яркость + греч. Γενος - род) — общее
собирательное название подкласса стероидных женских половых гормонов. У человека
выделяют три типа эстрогенов: эстрадиол, эстриол и эстрон. Они образуются в организме
путём сложной ферментативной реакции из андрогенов: эстрадиол образуется из
тестостерона, а эстрон из андростендиона под воздействием фермента ароматазы. Эстрон по
эффективности имеет более слабый эффект, и после менопаузы его уровень преобладает над
эстрадиолом. [https://ru.wikipedia.org]. Эстриол имеет самый короткий период
полувыведения и наименьшую биологическую активность, но играет важную роль в
процессах роста и развития матки при беременности, так как плацента плода производит
очень большие количества именно эстриола. Вне беременности гормон эстриол присутствует
в организме женщины, но в низкой концентрации.
Эстрадиол — основной женский половой гормон группы эстрогенов. Он присутствует как
в женском, так и в мужском организме. У женщин вырабатывается в яичниках, в плаценте и
в сетчатой зоне коры надпочечников под влиянием фолликулостимулирующего гормона,
лютеинизирующего гормона и пролактина. В небольших количествах эстрадиол образуется в
ходе периферического преобразования тестостерона. У мужчин эстрадиол образуется в
семенниках, в коре надпочечников, но большая часть - в периферических тканях за счёт
преобразования тестостерона. [www.invitro.ru]
У женщин эстрадиол обеспечивает формирование половой системы по женскому типу,
развитие женских вторичных половых признаков в пубертатном периоде, становление и
регуляцию менструальной функции, развитие яйцеклетки, рост и развитие матки в течение
беременности; отвечает за психофизиологические особенности полового поведения.
Обеспечивает формирование подкожной жировой клетчатки по женскому типу. Снижая
сопротивление сосудов матки, повышает в ней кровоток и стимулирует гиперплазию
эндометрия. Эстрадиол обладает анаболическим действием, усиливает обмен костной ткани
и ускоряет созревание костей скелета. Способствует задержке натрия и воды в организме.
Снижает уровень холестерина и повышает свёртывающую активность крови. Эстрадиол
влияет на выделение нейротрансмиттеров, способствуя повышению нервного напряжения,
раздражительности. Структура эстрадиола представлена на Рис.1

74
Рис. 1. Стероидный женский половой гормон эстрадиол.

Рецепторы к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) относятся к внутриклеточным

рецепторам стероидных гормонов. Они присутствуют в различных тканях-мишенях, в том
числе в молочных железах и матке, где участвуют в механизмах гормональной индукции
синтеза матричной РНК, белков, высвобождении цитокинов и факторов роста.
ЭР и ПР вовлечены в механизмы развития и метастазирования некоторых опухолей, в
частности, рака молочной железы (МЖ). Это самое распространенное онкологическое
заболевание у женщин (частота встречаемости в течение жизни у женщин в возрасте от 13 до
90 лет – 1:9-1:13). [Волченко, 2000]. Большинство этих опухолей гормонально зависимы,
эстрогены и прогестерон стимулируют их рост и метастазирование. Исследование
экспрессии ЭР и ПР в опухоли в настоящее время рекомендовано проводить всем больным
раком молочной железы для определения гормональной чувствительности опухоли,
уточнения прогноза заболевания и потенциального эффекта гормонального лечения.
Опухоли с высоким содержанием ЭР и ПР, как правило, высокодифференцированные, с
низкой пролиферативной активностью и минимально агрессивным течением, они хорошо
отвечают на гормональную терапию и обычно имеют хороший прогноз. Эффективность
гормональной терапии составляет около 50% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к
эстрогенам (ЭР+), и доходит до 75% при опухолях, экспрессирующих рецепторы как к
эстрогенам, так и к прогестерону (ЭР+/ПР+).
Если опухолевые клетки экспрессируют мало рецепторов к эстрогенам (ЭР-),
гормональная терапия обычно неэффективна. Исключение составляют варианты, когда
клетки опухоли экспрессируют рецепторы к прогестерону (ЭР-/ПР+) – гормональная терапия
эффективна у 10% таких больных.
Несмотря на то, что изредка резистентность к гормональной терапии наблюдается даже у
пациентов с ЭР+/ПР+ опухолями, в настоящее время исследование ЭР и ПР в опухолевой
ткани входит в «золотой стандарт» диагностики при раке молочной железы.
Частота встречаемости рецепторов к эстрогенам и прогестерону в клетках опухоли рака
молочной железы:
 Около 75% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-позитивны (ЭР+).
75
  Около 65% эстроген-позитивных опухолей имеют также рецепторы к прогестерону
(ЭР+/ПР+).
 Около 25% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-прогестерон-
негативны (ЭР-/ПР-), либо их гормональный статус неизвестен.
 Около 10% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-позитивны и при этом
прогестерон-негативны (ЭР+/ПР-).
 Около 5% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-негативны и при этом
прогестерон-позитивны (ЭР-/ПР+). [Волченко, 2000]
Гормональная терапия заключается в применении антагонистов эстрогенов (тамоксифен)
или препаратов-ингибиторов фермента ароматазы (анастразол, летрозол), которые
предотвращают преобразование андрогенов в эстрогены [Sundararajan]. Гормональная
терапия может быть весьма эффективна и сопровождается меньшим количеством побочных
эффектов, нежели химотерапия. Несмотря на то, что изредка резистентность к гормональной
терапии наблюдается даже у пациентов с ЭР+/ПР+ опухолями, в настоящее время
исследование ЭР и ПР входит в «золотой стандарт» диагностики при раке молочной железы.
Такое исследование в рутинной практике в России производится иммуногистохимическим
анализом биоптата, т.е. путем взятия биопсии из опухолевой ткани. Этот метод не исключает
вероятность ошибки при неоднородности опухоли. Особенно трудно взять биопсию костной
ткани, при том, что именно метастазы в костях часто появляются при раке МЖ. Экспрессия
ЭР в метастатических очагах может сильно отличаться от таковой в основной опухоли, что
встречается в 20-35% случаях заболеваний [Spataro, 1992]. В связи со всеми этими фактами,
открытие неинвазивного и точного способа определения экспрессии ЭР при раке МЖ
методом ПЭТ дало неоценимую помощь клиницистам.
Идея ввести метку позитронного эмиттера в эстрогены для дальнейшей ПЭТ-диагностики
исходит из американской лаборатории Велча-Катценнеленбогена, их первая публикация на
эту тему появилась в 1984 г [Kiesewetter, 1984, две публикации]. Был выполнен
радиохимический синтез [18F]фторэстрадиола, метка фтора-18 была введена в 16 положение
D-кольца, при этом остальная структура молекулы эстрадиола с ОН-группами в положениях
3 и 17 в кольцах А и D была сохранена (см. Рис 2). В исследовании на крысах было
продемонстрировано высокое накопление [18F]ФЭС в матке (отношение матка/кровь = 39) и
в опухолевой ткани. В дальнейшем этой группой ученых было показано высокое связывание
[18F]ФЭС с ЭР путем проверки накопления РФП в конкурентной реакции с тамоксифеном и
создание модели рецепторного связывания на животных [Katzenellenbogen, 1993]. В
последующие годы было синтезировано и исследовано на животных несколько других
производных эстрадиола, меченных фтором-18, как например, ряд этинильных производных
76
[VanBrocklin, 1992; VanBrocklin, 1993], ряд ди-фторо-производных [Siembille, 2002],
метокси-производное [Ahmed, 2007]. Наиболее используемым и успешно применяемым в
настоящее время остается именно [18F]ФЭС, поскольку остальные производные показывают
худшее значение афинности к ЭР.

Рис. 2. [18F]фторэстрадиол ([18F]ФЭС), метка фтора-18 введена в D-кольцо.

Виды заболеваний, для диагностики которых используется [18F]ФЭС.

В первую очередь [18F]ФЭС применяется для диагностики эстроген-зависимых форм рака

МЖ [Liao, 2016]. Еще в 1988 г было показана высокая сходимость между количественным
накоплением [18F]ФЭС и концентрацией ЭР, полученных путем in vitro исследования
биоптата первичных опухолей МЖ [Mintun, 1988]. В последующие годы многие
исследования подтвердили этот факт [Peterson, 2008; Gemignani, 2013].
[18F]ФЭС может быть крайне полезен для предсказания эффекта гормональной терапии.
Группа Велча-Катценнеленбогена в течение ряда лет проводила изучение накопления
данного РФП у пациентов, получающих лечение тамоксифеном [Dehdashti, 1999, Mortimer,
2001]. Ими было показано, что положительное значение прогноза достигается в 79-87%
случаев, а отрицательное значение прогноза – в 88-100% ответа на лечение. В настоящее
время исследователи пытаются применить другие известные РФП для предсказания эффекта
гормональной терапии при раке МЖ, как например, провести сравнение ПЭТ-исследований с
[18F]ФДГ, [18F]ФМИЗО и [18F]ФЭС [He, 2016]. В этом исследовании было однозначно
продемонстрировано, что [18F]ФЭС является лучшим препаратом для данной цели.
В некоторых случаях [18F]ФЭС используют как РФП для сканирования всего тела для
поиска ЭР-зависимых опухолей. Было показано, что, хотя первичная опухоль является
эстроген-зависимой, вторичные очаги могут не экспрессировать ЭР или могут
экспрессировать нефункциональные ЭР [Tonkin, 2010]. Проведение последовательных ПЭТ-

77
исследований всего тела с [18F]ФДГ и [18F]ФЭС позволяют отличать разные типы вторичных
новообразований.
Были опубликованы результаты применения [18F]ФЭС в диагностике заболеваний кроме
рака МЖ [Liao, 2016].. Японская группа ученых использовала этот препарат для поиска
различий при гиперплазии эндометрия матки и карциномой матки [Tsujikawa, 2011].
Исследователи из Голландии изучали пациенток с раком яичников, применяя [18F]ФЭС-ПЭТ-
диагностику [van Kruchten, 2015]. Они показали, что существует корреляция при накоплении
[18F]ФЭС и иммуногистохимическим анализом во вторичных новообразованиях.
В 2001 году было проведено обширное исследование, посвященное измерению
получаемых радиационных доз на все тело и отдельно на органы и ткани при ПЭТ-
исследовании с [18F]ФЭС [Mankoff, 2001]. Было выяснено, что при введении этого РФП
общая радиационная нагрузка не превышает рекомендованной FDA (Food and drug
administration, USA), и составляет от 30 до 50 мГрей при введении 6 мКи РФП.

Описание синтеза [18F]ФЭС.

Впервые синтез аналога эстрадиола, меченного фтором-18, был выполнен группой Велча-
Катценнеленбогена в 1984 г [Kiesewetter, 1984, две публикации], рис. 3. В качестве
предшественника было взято производное эстрадиола с трифлатной защитой гидрокси-
группы (положение 3) A-кольца, карбоксильной защитой гидрокси-группы (положение 17)
D-кольца и Tf-уходящей группой D-кольца (положение 16, будущий 18
F) (Соединение 1 на
Рис 3).

Рис. 3. Синтез [18F]ФЭС по схеме группы Велча-Катценнеленбогена [Kiesewetter,

1984, две работы].
Синтез выполнялся вручную и занимал много времени. Он включал в себя такие сложные
стадии, как восстановление карбоксильной группы LiAlH4 в эфире при -78 оС, смену
нескольких растворителей для проведения последовательных реакций и экстракцию эфиром
после гидролиза HCl. Очистка конечного продукта выполнялась методом прямофазной
ВЭЖХ, и конечный продукт был выделен в смеси гексан/дихлорометан/изопропанол.
Требовалось дополнительное время для перевода готового РФП в инъекционно-пригодную
форму. Радиохимический выход синтеза был равен 45% (с поправкой на распад), время
78
синтеза 75-90 мин. Была достигнута удельная активность 200-275 Ки/ммоль, достаточная для
проведения экспериментов на крысах по рецепторному связыванию РФП.
Более удачный прекурсор, и, соответственно, более простой синтез был предложен спустя
10 лет, в 1994 г, другой группой американских ученых [Lim, 1994], см. Рис. 4. 3-гидрокси
группа предшественника защищена легкоудаляемой метоксиметокси (МОМ) группой, а
положения 16 и 17 кольца D соединяются единой О-сульфурильной группой (Соединение 1
на Рис.4)

Рис. 4. Синтез [18F]ФЭС по работе [Lim 1994] из «сульфурильного» прекурсора.

Нуклеофильное замещение [18F]фторида происходит в 16-α положение, поскольку

благоприятной является именно атака с менее защищенной α-позиции атома С-16. Атом С-17
менее выгоден для атаки, поскольку соединен с тремя 1,3-диаксиальными взаимодействиями
Н-Н [Romer, 1996].
Синтез выполнялся в режиме “one-pot”, и включал в себя введение метки фтора-18 с
использованием осушенного [18F]тетраметиламмоний фторида и снятие защиты 2N HCl,
более подробно условия не описывались. Очистка конечного продукта проводилась методом
ВЭЖХ. Радиохимический выход синтеза 50-60% (с поправкой на распад), время синтеза 60
мин. В этой же работе был описан синтез «сульфурильного» предшественника, который
выполнялся из коммерчески доступного стероида 16-эпиэстрола.
Во второй половине 90-х годов XX века немецкие ученые из Розендорфа повторили
синтез «сульфурильного» прекурсора и оптимизировали синтез [18F]ФЭС, подробно
исследовав обе стадии процесса - [18F]фторирования и гидролиза вместе со снятием защиты
[Romer, 1996]. Условия синтеза показаны на Рис.5. Конечный продукт не подвергался
очистке и переводу в инъекционную форму, поскольку авторы ставили перед собой
исключительно химическую задачу. Данные о радиохимическом выходе [18F]ФЭС не
приводятся.

79
Рис. 5. Оптимизация синтеза [18F]ФЭС по работе [Romer, 1996] из «сульфурильного»
прекурсора. Реакция (I) – стадия нуклеофильного [18F]фторирования, реакция (II) – стадия
гидролиза вместе со снятием защитных групп.

Автоматизация синтеза [18F]ФЭС. Методы очистки и выделения конечного продукта.

Все дальнейшие публикации, посвященные синтезу [18F]ФЭС, как правило, содержат

незначительные изменения в условиях реакций и посвящены автоматизации на различных
типах модулей, но тип прекурсора и химического превращения прекурсора в [18F]ФЭС
остаются неизменными.
Через несколько лет группа ученых из Розендорфа осуществила автоматизированный
синтез [18F]ФЭС по хорошо исследованному ими химическому пути [Romer, 1996] на модуле
для синтеза [18F]ФДГ с последующей очисткой методом полупрепаративной ВЭЖХ [Romer,
1999]. В таблице десяти экспериментов, приведенных в публикации, радиохимические
выходы [18F]ФЭС сильно разнятся, и составляют от 10 до 48% (с поправкой на распад).
Время синтеза с ВЭЖХ очисткой составляет 50 мин, удельная активность 80-180 ГБк/мкмоль
(2,1-4,8 Ки/мкмоль).
Синтез был внедрен для производства на кассетном модуле TRACERlab MXFDG с
последующей ВЭЖХ очисткой готового [18F]ФЭС на отдельно стоящем хроматографе.
Первая публикация, посвященная этому, появилась в 2006 г [Mori, 2006]. Кассетный модуль
обеспечивает прекрасную воспроизводимость от синтеза к синтезу, что дало возможность
исследователям добиться прекрасного суммарного выхода реакций фторирования и
гидролиза 76,4±1,9% (до ВЭЖХ очистки). Для синтеза применяли 2 мг прекурсора, реакцию
фторирования (химическое превращение (I) на Рис. 5) выполняли с криптофиксом в
безводном ацетонитриле, при 105 оС в течение 10 мин. Затем реакционная смесь упаривалась
и гидролизовалась 0,2 N HCl в 90% смеси ацетонитрил/вода, 10 мин, 95 оС, при повышенном
давлении (химическое превращение (II) на Рис. 5). После гидролиза неочищенный [18F]ФЭС
частично нейтрализовали и разбавляли для последующей ВЭЖХ очистки. Значимым
изменением в синтезе было применение смеси ацетонитрил/соляная кислота на стадии
гидролиза, что позволило стабилизировать выход на этой стадии.

80
 Очистка проводилась на полупрепаративной колонке Cosmosil 5C18-AR-2 column (20-mm
ID_250-mm, Nacalai Tesque, Kyoto, Japan) с элюентом ацетонитрил/вода/этанол (30:40:30)
при скорости потока 6 мл/мин. Полученная фракция целевого продукта собиралась в
круглодонную колбу, содержащую 0,1 мл раствора аскорбата натрия (250 мг/мл) с целью
дальнейшей стабилизации продукта. Все органические растворители упаривались в вакууме,
затем добавляли 10 мл 0,9% NaCl и пропускали готовый раствор [18F]ФЭС через
стерилизующий фильтр. Выход готового продукта был равен 42,4±3,2% (с поправкой на
распад), время синтеза, включая очистку и перевод РФП в инъекционную форму, равнялось
88,2±6,4 мин. Радиохимическая и химическая чистота [18F]ФЭС была >95% и >99%,
соответственно. Удельная активность готового [18F]ФЭС была более 111 ГБк/мкмоль (3
Ки/мкмоль).
При выполнении препаративной очистки [18F]ФЭС с элюентом вода/этанол возможно
избежать необходимости упаривания готового продукта в вакууме. Этанол разрешен к
внутривенному введению в малых концентрациях. Очищенный РФП можно просто
разбавить до приемлемой концентрации, после чего пропустить через стерильный фильтр
[Scott, 2011].
Следующее сообщение о синтезе [18F]ФЭС на модуле TRACERlab MXFDG появилось год
спустя, в 2007 г [Oh, 2007]. Исследователи подвергли изменению стадию перевода
конечного продукта в инъекционный раствор, применив вместо упаривания в вакууме метод
твердофазной экстракции на картридже C18 Sep Pak plus или Oasis HLB. Это позволило им
сократить время синтеза до 75,8±3,2 мин и чуть улучшить общий выход РФП – 45,2±3,8%.
Удельная активность была равна 57,7±3,8 ГБк/мкмоль (1,5 Ки/мкмоль) при количестве
предшественника 2 мг.
В 2011 г синтез [18F]ФЭС на TRACERlab MXFDG был оптимизирован путем выполнения
очистки конечного продукта методом твердофазной экстракции (ТФЭ) на комбинации
одноразовых картриджей [Knott, 2011], тем самым избегнув стадии очистки на
препаративной ВЭЖХ. Было внесено несколько изменений в состав реагентов на каждой
стадии, но предшественник остался тем же. Для синтеза применялось 1,5 мг прекурсора,
реакция фторирования (химическое превращение (I) на Рис. 5) выполнялась с [18F]TBAF
вместо криптофикса К2.2.2., а для гидролиза (химическое превращение (II) на Рис. 5)
использовали смесь 2,5% серной кислоты с этиловым спиртом. После гидролиза
реакционная смесь сильно разбавлялась водой и пропускалась через три картриджа,
установленных в линию – Oasis WAX, Sep Pak C18, Oasis HLB. Картриджи промывались
40% этанолом для удаления прекурсора и нежелательных примесей, после чего продукт
смывался раствором 95% этанола. Раствор подвергался нагреванию для удаления части
81
этанола, затем еще одной очистке на картридже SepPak Alumina N. К раствору добавлялось
15 мл воды, что позволяло снизить концентрацию этанола до 10%, и затем фильтровался
через стерилизующий фильтр. Общее время синтеза было 75 мин, выход продукта 20±5%
(без поправки на распад). Радиохимическая и химическая чистота [18F]ФЭС была >95% и
>99%, соответственно.
В 2014 году группа американских исследователей предложила использовать
микроволновой нагрев вместо обычного нагрева как на стадии фторирования, так и при
гидролизе [Shi, 2014]. Синтез выполнялся в неавтоматическом режиме с применением
специализированного микроволнового реактора. Авторы показали преимущество
микроволнового нагрева перед обычным тепловым процессом. Выход выделенного
конечного продукта [18F]ФЭС были очень высокими - 55,0±5,5% при очистке методом
ВЭЖХ и 62,5±6,4 при очистке методом ТФЭ, выходы без поправки на распад. Такое отличие
обусловлено также и существенным сокращением времени синтеза до 38 мин (ВЭЖХ
очистка) и 30 мин (ТФЭ очистка) за счет быстрых реакций при микроволновом нагреве. Все
параметры контроля качества [18F]ФЭС при микроволновом синтезе соответствовали
нормам, принятым для обычного синтеза. Вывод, который был сделан исследователями,
гласит, что для высокопродуктивного синтеза [18F]ФЭС необходимо сделать автоматический
модуль с микроволновым нагревом. В настоящее время такой модуль на мировом рынке
отсутствует.

Методы контроля качества. Требования к параметрам контроля качества

[18F]ФЭС.
Следует подчеркнуть, что [18F]ФЭС – достаточно липофильное соединение, для
выделения которого необходим органический растворитель. Все описанные способы очистки
[18F]ФЭС позволяют получить конечный продукт в водном растворе с содержанием этанола
от 10 до 50%. Для получения раствора для инъекции можно разбавлять полученный продукт
до допустимой концентрации этанола [Romer, 1999; Scott, 2011] или упаривать органический
растворитель [Mori, 2006]. Конечное содержание этанола зависит от выбранного способа
очистки РФП, должно быть задано в зависимости от требований конкретного ПЭТ-центра и
быть описано в разделе «Состав» нормативной документации.

Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Визуальное Чистый, Визуальный осмотр

82
 соответствие бесцветный
раствор
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фторэстрадиола
Подлинность Соответствие
Или радиоВЭЖХ, условия **,
(идентичность) стандарту
Время удерживания Rt [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта
фторэстрадиола
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
>99%
чистота, % полураспада
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фторэстрадиола
Радиохимическая
>95% Или радиоВЭЖХ, условия **,
чистота, %
Время удерживания Rt [18F]ФЭС должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта
фторэстрадиола
Достаточная для
проведения ПЭТ-
исследования и
Объемная Измерение объема шприцом или по весу,
соответствия
активность, Ки/мл измерение активности в изотопном калибраторе
необходимой
удельной
активности
Удельная
Как правило, >0,4
активность, радиоВЭЖХ, условия **
Ки/мкмоль
Ки/мкмоль
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии со статьей «Остаточные
растворители,
не более 0,30 растворители»
мг/мл
Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Химические Содержание ВЭЖХ, условия **

83
 примеси, мкг/дозу эстрадиола <3,6;
Содержание
фторэстрадиола
<3,6 [Scott]
рН 5,0 - 7,5 Потенциометрия
Изотоничность, Раствор должен
Осмометрия
мОсм быть изотоничным
Раствор должен Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
быть стерильным питательных средах
Уровень
<175 на общий
бактериальных LAL-тест
объем препарата
эндотоксинов, EU

Условия *, пример радиоТСХ [Scott 2011]:

ТСХ пластинки (Whatman slica gel, 7,5 x 2,5 cm), элюент CHCl3 / MeOH (8/1, v/v), Rf
[18F]фторида = 0,15; Rf [18F]ФЭС=0,65
Условия **, пример радиоВЭЖХ [Knott 2011]:
Колонка Nucleodur C18 (5 мкм, 250 х 4,6 мм), элюент ацетонитрил/вода, градиент от
10% до 90% ацетонитрила, скорость потока 1 мл/мин, детектор УФ-254 нм и детектор по
радиоактивности, Rt [18F]ФЭС=15,5 мин.
Условия ***, пример ТСХ:
ТСХ пластинки (Whatman slica gel, 7,5 x 2,5 cm), элюент 30% NH4OH / MeOH (1/9, v/v),
затем ТСХ пластинка помещается в йодную камеру. Интенсивность цветового пятна
испытуемого раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта
криптофикса, нанесенного на ту же пластинку.

Главные параметры, влияющие на то, сколько именно [18F]ФЭС реально получить на

конечном этапе.
Основными определяющими параметрами для возможности получения большой
активности РФП являются время синтеза и радиохимический выход готового РФП. Данные
для описанных автоматизированных синтезов [18F]ФЭС приведены в таблице.
Время Радиохим.
Удельная
Метод Метод синтеза выход, % Литер.
N активность,
автоматизации очистки (включая (EOB или источник
Ки/мкмоль
очистку) EOS)

84
 Модуль для
синтеза 50 мин + 20 Romer,
1 ВЭЖХ 10-48% EOB 2,1-4,8
[ F]ФДГ, тип не
18
мин очистка 1999
указан
ВЭЖХ +
TRACERlab
2 упаривание 88 мин 42% EOB >3 Mori, 2006
MXFDG
в вакууме
TRACERlab ВЭЖХ
3 75 мин 45% EOB 1,5 Oh, 2007
MXFDG +ТФЭ

TRACERlab 20% EOS Нет

4 ТФЭ 75 мин Knott, 2011
MXFDG (32% EOB) данных

Из приведенных данных можно заключить, что самым результативным является синтез

3 [Oh, 2007], выход синтеза равен 45% с поправкой на распад при времени синтеза 75 мин.
Время необходимое для контроля качества, как правило, не превышает 20-30 мин и
определяется временем, необходимым для проведения ТСХ или ВЭЖХ хроматографии.
Остальные анализы занимают меньше времени и делаются параллельно.

Расчетная активность конечного продукта, исходя из максимальной

производительности [18F]фторной мишени циклотрона.
При максимальной производительности [18F]фторной мишени циклотрона 12 Ки
возможно произвести 3,4 Ки готового [18F]ФЭС, исходя из расчета максимального
радиохимического выхода 45% (EOB), время синтеза 75 мин. По истечении 30 мин (контроль
качества) останется 2,85 Ки [18F]ФЭС.

Возможность и перспективность доставки [18F]ФЭС в удаленные ПЭТ-центры.

[18F]ФЭС возможно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае
необходимости перевозки РФП в течение 4 часов (около двух периодов полураспада), из 3,4
Ки останется 850 мКи [18F]ФЭС, что более чем достаточно для проведения диагностики на
20 пациентах в течение рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния контроль
качества РФП возможно выполнять из отобранного образца уже после отгрузки РФП для
доставки, т.е. время на контроль качества не тратится.

Трудности в синтезе и контроле качества [18F]ФЭС. Анализ возможных рисков

Синтез должен быть хорошо отработан перед началом рутинного производства РФП.
Трудности в синтезе – это необходимость соблюдать условия особой сухости при реакции
фторирования (химическое превращение (I) на Рис.5) и следить за соотношением
85
HCl/ацетонитрил при гидролизе (химическое превращение (II) на Рис 5). Все заданные
температурные и временные режимы должны соблюдаться. Особое внимание необходимо
уделить исследованию стабильности готового продукта, что важно при потребности
длительной транспортировки. Некоторые литературные источники говорят о необходимости
стабилизации препарата путем добавления аскорбата натрия [Mori, 2006], в то время как
остальные заявляют о неизменной стабильности [18F]ФЭС просто в растворе, содержащем
этанол. При разработке синтеза конечный продукт должен быть проверен на предмет
химической и радиохимической деградации в течение установленного срока годности.
Должна быть разработана процедура разбавления РФП из раствора, содержащего этанол, до
концентрации, разрешенной к внутривенному введению.

Список использованных источников к разделу [18F]ФЭС.

Ahmed N., Langlois R., Rodrigue S., Benard F., van Lier J.E. Automated synthesis of 11β-
methoxy-4,16α-[16α-18F]difluoroestradiol (4F-M[18F]FES) for estrogen receptor imaging by
positron emission tomography. Nucl Med and Biol, 2007, 34:459-464.

Dehdashti F., Flanagan F.L., Mortimer J.E., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J., Siegel .BA.
Positron emission tomographic assessment of “metabolic flare” to predict response of metastatic
breast cancer to antiestrogen therapy. Eur J Nucl Med, 1999, 26:51–56.

Gemignani M.L., Patil S., Seshan V.E., et al. Feasibility and predictability of perioperative PET
and estrogen receptor ligand in patients with invasive breast cancer. J Nucl Med. 2013, 54:1697–
1702.

He S.M., Wang M.W., Yang Z.Y., Zhang J.P., Zhang Y.P., Luo J.M., Zhang Y.J. Comparison
of 18F-FES, 18F-FDG and 18F-FMISO PET Imaging Probes for Early Prediction and Monitoring to
Response to Endocrine Therapy in a Mouse Xenograft Model of ER-Positive Breast Cancer. PLOS
ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0159916 July 28, 2016

Katzenellenbogen J.A., Mathias C.J., VanBrocklin H.F., Brodack J.W., Welch M.J. Titration of
In Vivo Uptake of 16α-[18F]Fluoroestradiol by Target Tissues in the Rat: Competition by
Tamoxifen, and Implications for Quantitating Estrogen Receptors In Vivo and the Use of Animal
Models in Receptor-binding Radiopharmaceutical Development. Nucl Med Biol, 1993, 20(6):735-
745.

Kiesewetter D. O., Katzenellenbogen J. A., Kilboum M. R.and Welch M. J. Fluorine-18-labeled

estrogen: stereochemical and radiochemical considerations in the preparation of fluorine- 18 labeled
16-fluoro estrogens by fluoride ion displacement reactions. J Org Chem, 1984, 49:4900-4905.
86
 Kiesewetter D. O., Kilbourn M.R., Landwatter S.W., Heiman D.F., Katzenellenbogen J. A.and
Welch M. J. Preparation of Four Fluorine-18 Labeled Estrogens and Their Selective Uptakes in
Target Tissues of Immature Rats. J Nucl Med, 1984, 25:1212-1221.

Knott K.E., Gratz D., Hubner S., Juttler S., Zankl C., Muller M. Simplified and automatic one-
pot synthesis of 16α-[18F]fluoroestradiol without high-performance liquid chromatography
purification. J Label Compd Radiopharm, 2011, 54:749-753.

van Kruchten M., de Vries E.F., Arts H.J., et al. Assessment of estrogen receptor expression in
epithelial ovarian cancer patients using 16alpha-18F-fluoro-17betaestradiol PET/CT. J Nucl Med,
2015, 56:50–55.
18
Liao G.J., Clark A.S., Schubert E.K., Mankoff D.A. F-Fluoroestradiol PET: Current status
and Potential Future Clinical Applications. J Nucl Med, 2016, 57:1269-1275.

Lim J. L., Berridge M. S. and Tewson T. J. Preparation of [18F]16α-fluoro-17β-estradiol by

selective nucleophilic substitution. J Lab Comp Radiopharm, 1994, 35:176.

Mankoff D.A., Peterson L.M., Tewson T.J., Link J.M., Gralow J.R., Graham M.M., Krohn K.A.
[18F]Fluoroestradiol Radiation dosimetry in Human PET Studies. J Nucl Med, 2001, 42:679-684.

Mintun M.A., Welch M.J., Siegel B.A. Breast cancer: PET imaging of estrogen receptors.
Radiology. 1988, 169:45–48.

Mori T., Kasamatsu S., Mosdzianowski C., Welch M.J., Yonekura Y., Fujibayashi Y.
Automatic synthesis of 16α-[18F]fluoro-17β-estradiol using a cassette-type [18F]fluorodeoxyglucose
synthesizer. Nuc Med and Biol, 2006, 33:281-286.

Mortimer J.E, Dehdashti F., Siegel B.A., Trinkaus K., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J.
Metabolic flare: indicator of hormone responsiveness in advanced breast cancer. J Clin Oncol,
2001, 19:2797–2803.

Oh S.J., Chi D.Y., Mosdzianowski C., Kil H.S., Ryu J.S., Moon D.H. The automatic production
of 16α-[18F]fluoroestradiol using a conventional [18F]FDG module with a disposable cassette
system. Appl Rad Isot, 2007, 65:676-681.

Peterson L.M., Mankoff D.A., Lawton T., et al. Quantitative imaging of estrogen receptor
expression in breast cancer with PET and 18F-fluoroestradiol. J Nucl Med. 2008;49:367–374.

Romer J., Steinbach J., Kasch H. Studies on the Synthesis of 16α-[18F]fluoroestradiol. Appl Rad
Isot, 1996, 47(4):395-399.

87
 Romer J., Fuchtner F., Steinbach J., Johannsen B. Automated Production of 16α-
[18F]fluoroestradiol for Breast Cancer Imaging. Nucl Med Biol, 1999, 26:473-479.

Scott, Peter J. H., and Hockley, Brian G., eds. Wiley Series on Radiochemical Syntheses :
Radiochemical Syntheses, Volume 1 : Radiopharmaceuticals for Positron Emission Tomography
(1). Hoboken, US: Wiley, 2011.

Seimbille Y., Rousseau J., Benard F., et al: 18F-labeled difluoroestradiols: Preparation and
preclinical evaluation as estrogen receptor-binding radiopharmaceuticals. Steroids, 2002, 67:765-
775.

Shi J., Afari G., Bhattacharyya S. Rapid synthesis of [18F]fluoroestradiol: remarkable

advantage of microwaving over conventional heating. J Label Compd Radiopharm, 2014, 57:730-
736.

Spataro V., Price K., Goldhirsch A., et al: Sequential estrogen receptor determinations from
primary breast cancer and at relapse: Prognostic and therapeutic relevance. The International Breast
Cancer Study Group (formerly Ludwig Group). Ann Oncol, 1992, 3:733-740.
18
Sundararajan L., Linden H.M., Link J.M., Krohn K.A., Mankoff D.A. F-Fluoroestradiol.
Semin Nucl Med, 2007, 37:470-476.

Tonkin K., Joy A., Basi S., et al. The potential of using discordance of estrogen PET (FES-PET)
and glucose PET (FDG-PET) scans and pathologic characteristics including HER2 and Ki67 to
predict for hormone insensitivity in women with metastatic breast cancer. Cancer Res, 2010,
70:PD05-04.

Tsujikawa T, Yoshida Y, Kiyono Y, et al. Functional oestrogen receptor alpha imaging in

endometrial carcinoma using 16alpha-[18F]fluoro-17beta-oestradiol PET. Eur J Nucl Med Mol
Imaging. 2011, 38: 37–45.

VanBrocklin H.F., Pomper M.G., Carlson K.E., et al. Preparation and evaluation of 17-ethynyl-
substituted 16 alpha-[18F]fluoroestradiols: Selective receptor-based PET imaging agents. Int J Rad
Appl Instrum B, 1992, 19:363-374.

VanBrocklin H.F., Rocque P.A., Lee H.V., Carlson K.E., Katzenellenbogen J.A., Welch M.J.
16β-[18F]fluoromoxestrol: a potent, metabolically stable positron emission tomography imaging
agent for estrogen receptor positive human breast tumors. Life Sceinces, 1993, 53:811-819.

Волченко Н.Н., Франк Г.А. Комплекс морфологических и прогностических факторов при

раке молочной железы: Пособие для врачей. - М., 2000.

88
 3’-дезокси-3’-[18F]фтортимидин ([18F]ФЛТ)

Введение, история создания РФП

Тимидин – это нуклеозид, состоящий из пиримидинового основания тимина и углевода

дезоксирибозы. Он содержится в составе ДНК и тимидин-фосфорных кислот (Рис. 1).

Рис. 1. Нуклеозид тимидин

В настоящее время тимидин широко используется для синтеза антиретровирусного

препарата азидотимидина (АЗТ). Интересным фактом является то, что фторированный
(нерадиоактивным фтором) аналог тимидина был впервые применен как потенциальный
противовирусный агент для ВИЧ-1 и ВИЧ-2 инфицированных пациентов [Kong, 1992].

Впервые [18F]ФЛТ был синтезирован в 1991 г [Wilson, 1991], из предшественника,

воспроизводящего структуру тимидина, но с защищенными гидрокси-группами и Ms-
уходящей группой. Выход конечного продукта был очень небольшим. Это был метод
синтеза, основанный на реакции прямого нуклеофильного радиофторирования с
последующим снятием защиты с гидроксильных групп. Синтез такого типа легко
осуществляется в стандартном модуле для производства [18F]ФДГ. Это, несомненно, явилось
одним из важнейших факторов, определяющих быстрое внедрение [ 18F]ФЛТ в клиническую
практику. В первые годы применения этого препарата радиохимический выход в синтезе
[18F]ФЛТ не был оптимизирован. Появилось множество работ, представляющих синтез
данного РФП из предшественника с различными защитными и уходящими группами. Целью
этих публикаций было увеличение выхода при производстве [18F]ФЛТ. Общая схема синтеза
представлена на Рис. 2.

89
 O O
R3 H
N N
1) [18F]фторирование
R1 O N O HO N O
O O
2) Гидролиз +
OR2 удаление защ.групп
18
F

Рис. 2. Схема синтеза 3’-дезокси-3’-[18F]фтортимидина ([18F]ФЛТ) методом

нуклеофильного 18
F-фторирования. R1, R3 – различные защитные группы, R2 – различные
уходящие группы.

В 2002 г была продемонстрирована возможность применения следующих защитных и

уходящих групп [Martin, 2002]:

5’-O-позиция (R1) – тритил (Tr) и 4,4’-диметокситритил (DMTr)

3’-O – позиция (R2) –мезил (Ms) , тозил (Ts) и или нозил (Ns)

3-N – позиция (R3) – трет-бутоксикарбонил (Boc)

Наилучший результат был достигнут при использовании предшественника Boc-DMTr-

Ns, в этом случае радиохимический выход был равен 19,8% (с поправкой на распад) при
времени синтеза 85 мин.
Позднее, в 2006 г, группа немецких ученых [Reischl, 2006] описала синтез [18F]ФЛТ с
использованием ангидро-предшественника 5’-O-бензоил-2,3’-ангидротимидина, но
результаты не были существенно улучшены. Выход реакции фторирования достиг 45%, но
общий радиохимический выход синтеза равнялся 18% (EOS). Работы ученых в этом
направлении были продолжены. В 2008 г была опубликована очень интересная с химической
точки зрения работа по синтезу четырех разных предшественников [ 18F]ФЛТ [Windhorst,
2008]. Были синтезированы и описаны различные 3’- сульфониловые эфиры 2,5’ – ангидро-
1-(2-деокси-β-D-трео-пентофуранозил)тимина, общая структура соединения показана на Рис.
3.
O

N
O
O N

RO

90
 Рис. 3 Химическая структура ряда предшественников для синтеза [ 18F]ФЛТ [Windhorst,
2008], где R – четыре разных уходящих группы (мезил, тозил, нозил и трезил).

К сожалению, такой интересный химический подход к синтезу предшественника не

увенчался получением радиоактивного соединения. Все четыре прекурсора оказались
неудачными для введения метки фтора-18 и получению желаемого [18F]ФЛТ.
Все последующие попытки улучшения радиохимического выхода синтеза в основном
базируются на двух типах химических структур прекурсоров (Рис 4):
1. Структура, аналогичная тимидину, с добавленными защитными и уходящей группой:
- Boc-DMTr-Ns (3-N-Boc-5'-O-диметокситритил-3'-O-нозил-тимидин) – структура (I) на Рис.
4
- Boc-Boc-Ns (3-N-Boc-5'-O-Boc-3'-O-нозил-тимидин) – структура (II) на Рис.4.
Оба соединения коммерчески доступны, производятся компанией ABX advanced
biochemical compounds (Германия).
2. Структура ангидро-тимидина с защитной группой в положении 5’-O и метильной
группой в положении 3-N:
- 5’-O-бензоил-2,3’-ангидро-тимидин (Б-АТ) - структура (III) на Рис.4
-5’-O-диметокситритил-2,3’-ангидро-тимидин (ДМТ-АТ) - структура (IV) на Рис.4

Рис. 4. Основные типы предшественников, используемых для синтеза [18F]ФЛТ.

Виды заболеваний, для диагностики которых используется [18F]ФЛТ

[18F]ФЛТ – это радиофармпрепарат, имеющий большую клиническую значимость для

онкологии, причем область его диагностического применения отличается от [18F]ФДГ. Как
уже было сказано ранее, использование [18F]ФДГ имеет ряд ограничений, поскольку этот
РФП не является специфическим туморотропным агентом, а утилизируется различными

91
типами клеток. Это особенно важно в диагностике опухолей мозга, где глюкоза является
основным физиологическим субстратом, и опухоли с низкой скоростью гликолиза не
визуализируются. Высокое накопление [18F]ФДГ в макрофагах и абсцессах, образующихся в
результате радиотерапии или пост хирургического лечения, является основной причиной
ложно-положительных заключений [Strauss, 1996]. С другой стороны, такие опухоли, как
рак простаты, рак печени и нейроэндокринные опухоли, часто не визуализируются при ПЭТ-
исследовании с [18F]ФДГ [Bertagna, 2013]. В связи с этим в ПЭТ-индустрии активно ведутся
работы по созданию и внедрению в клиническую практику других РФП на основе фтора-18,
более специфичных, чем аналог глюкозы.
Поскольку тимидин участвует непосредственно в синтезе ДНК, в первых ПЭТ
исследованиях с [18F]ФЛТ рассматривалась возможность количественной оценки скорости
синтеза ДНК [Shields, 1998]. Однако, как оказалось, лишь небольшой процент меченого
тимидина инкорпорируется в ДНК. Тем не менее [ 18F]ФЛТ является эффективным маркером
для визуализации пролиферации клеток и входит в число наиболее перспективных РФП для
ПЭТ онкологии [Buck, 2009]. Его использование в ПЭТ основано на том, что [18F]ФЛТ
участвует лишь в первой стадии метаболизма - фософорилирования тимидин киназой 1.
Таким образом, [18F]ФЛТ удерживается в пролиферирующих клетках в результате
«блокированного метаболизма». Схема метаболизма тимидина и ФЛТ представлена на Рис.5.
Уменьшение его накопления в тканях после радио- или химиотерапии свидетельствует о
снижении скорости пролиферации клеток, что позволяет оценить эффективность лечения.

Тимидин
Киназа 1 Тимидин Репликация
Тимидин монофосфат и восстановление
5’(3’)-деоксирибо-
ДНК
нуклеотидаза Тимидилат
синтаза

Деоксиуридин
монофосфат

Тимидин
Киназа 1 [18F]ФЛТ Репликация
[18F]ФЛТ монофосфат и восстановление
5’(3’)-деоксирибо- ДНК
нуклеотидаза

Рис.5. Схема метаболизма тимидина и [18F]ФЛТ по работе [Jensen, 2015]

92
 В ПЭТ исследованиях животных было показано, что [ 18F]ФЛТ является
перспективным агентом для дифференциации опухоли и очага воспаления, поскольку, в
отличие от [18F]ФДГ он практически не накапливается макрофагами [van Waarde, 2004].
Изучение данного вопроса на лабораторных животных было продолжено, следующая
публикация на эту тему посвящена сравнению трех РФП - [18F]ФДГ, [18F]ФЛТ и [18F]ФЭТ
при необходимости различия воспалительного очага от новообразования [Lee, 2009].
Упоминаний об исследованиях воспаления на человеке не было найдено.
В онкодиагностике человека применение [18F]ФЛТ очень обширно и разнообразно.
Этот РФП используется для постановки диагноза, выяснения стадии заболевания или ответа
на терапию в таких видах заболеваний, как рак легкого [Szyszko, 2016], опухоли мозга
[Hatakeyama 2008], новообразований в области головы и шеи [Shaefferkoetter, 2015],
лимфопролиферативных заболеваний [Costantini, 2016], рака груди [Glendenning, 2015], рака
яичников [Reyners, 2016].

Описание синтеза [18F]ФЛТ.

Химическая реакция для производства [18F]ФЛТ представлена на Рис. 6. Рассмотрим

этот процесс на примере предшественника Boc-Boc-Ns (Соединение (II) на Рис.4), хотя
возможно использование любого прекурсора из приведенных на Рис.4. Химические
превращения очень похожи для всех этих соединений, различаются только условия для
проведения реакции фторирования и снятия защитных групп.

O
boc
N
O
Boc-O N O H
O N

O HO N O
+ O
N O 1) [K+/2.2.2.] 18F-, AcN, 1350C
O S O 2) 1M HCl, 1050C
18
O F

Рис. 6. Схема синтеза [18F]ФЛТ с использованием предшественника Boc-Boc-Ns [Shao,

2011].

Синтез включает в себя следующие стадии:

93
  доставка [18F]фторида из облученной мишени;
 выделение фтора-18 из облучаемого сырья - воды, обогащенной кислородом-18;
 получение реакционно-способного комплекса [18F]фторида с криптофиксом К2.2.2;
 реакция нуклеофильного замещения нозильной группы в молекуле предшественника;
 гидролиз/снятие защитных групп;
 нейтрализация и подготовка к очистке;
 on-line очистка ФЛТ методом полупрепаративной ВЭЖХ
 получение стерильной инъекционной формы РФП.
Радионуклид фтор-18 (T1/2=110 мин) в форме [18F]фторида получают по ядерной
реакции 18
O(p,n)18F, реализуемой при облучении воды-18О (H2O18, 95% обогащения по
кислороду-18) протонами энергией 17 МэВ в водной мишени циклотрона. Для выделения
фтора-18 [18F]фторид адсорбируют на анионообменной смоле Macherey-Nagel PS-HCO3
Chromafix. Радионуклид смывают раствором карбоната калия (3 мг в 0,4 мл воды) в
реакционный сосуд из кварцевого стекла. Затем туда добавляют раствор криптофикса К2.2.2.
(20 мг в 1 мл ацетонитрила) и упаривают в токе азота при 100С в течение 4-6 мин
практически досуха, что дает в результате осушенный фторирующий комплекс [К/2.2.2.]+18F-.
В реакционный сосуд вводят предшественник Boc-Ns-Boc (формула представлена
на Рис.4) в количестве 15-18 мг, растворенный в 0,8-1 мл безводного ацетонитрила. В этот
момент реакционная смесь имеет температуру 70оС, и затем она подвергается нагреванию до
135 оС, что занимает примерно 2 мин, после чего проводят реакцию фторирования в течение
3 мин. Затем смесь охлаждают до 55 оС, при этом почти весь ацетонитрил испаряется. После
того, как в реакционном сосуде выравнивается давление, добавляют 0,8-0,9 мл 1 N раствора
HCl, затем вновь нагревают до 105 оС на 4 мин, при этом происходит снятие защитных Boc-
групп. После охлаждения до 40оС реакционную смесь частично нейтрализуют путем
добавления 0,4-0,6 мл водного раствора 2 М ацетата натрия для подготовки раствора к
введению в ВЭЖХ для проведения очистки. Смесь перемешивается, она готова к
дозированию в петлю крана-дозатора.
Для препаративной ВЭЖХ очистки используют колонку Phenomenex Synergi Hydro-
RP (250 x 10 мм), подвижная фаза: 21 мM фосфатный буфер (pH 6)/ EtOH (92/8, v/v),
скорость потока 5,5 мл/мин, детектирование производится с помощью двух детекторов: УФ,
длина волны 254 нм и по радиоактивности. Фракция, содержащая целевой продукт -
[18F]ФЛТ, собирается между 14 и 17 мин, затем пропускается через активированный
картридж Alumina N Sep-Pak Light для удаления возможных примесей [18F]фторида. Для
стерилизации продукта используется стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм,

94
раствор передавливают через фильтр в стерильный пузырек. Перед введением пациенту
препарат разбавляют стерильным раствором салина.
По данным [Shao, 2011], получение [18F]ФЛТ данным методом дает следующие
результаты:
 радиохимический выход 23% без поправки на распад;
 точное время синтеза не приведено авторами, но можно рассчитать, что оно равно 60-
70 мин
 полученная объемная активность продукта 30-45 мКи/мл (1-1,6 ГБк/мл) позволяет
выполнить 3-5 ПЭТ исследований пациентов.

Автоматизация синтеза [18F]ФЛТ. Методы очистки и выделения конечного продукта.

Синтез [18F]ФЛТ был успешно автоматизирован, и, как правило, выполнялся на

модулях для синтеза [18F]ФДГ. Первыми это сделали корейские ученые на коммерческом
ФДГ-модуле Coincidence (GE Medical System) в 2004 г [Oh, 2004]. Был применен
предшественник Boc-DMTr-Ns ((I) на Рис.4). Автоматизированный подход
продемонстрировал некоторое увеличение радиохимического выхода – 50% с поправкой на
распад при времени синтеза около 60 мин (включая очистку ВЭЖХ).
Синтез на модуле Tracerlab FXFN был опубликован в 2011 году [Shao, 2011], причем
использовались два разных предшественника – один традиционный Boc-Boc-Ns ((II) на
Рис.4), второй 2,3’-ангидроциклической структуры (схожие с теми, что были исследованы в
работе [Windhorst, 2008]). В первом случае был достигнут очень неплохой радиохимический
выход 23% (без поправки на распад), при использовании циклического предшественника
выход не поднимался выше 4%. В 2012 году [18F]ФЛТ был успешно внедрен к производству
на модуле Explora FDG4 с выходом 60% c поправкой на распад (время синтеза 70 мин с
ВЭЖХ очисткой) [Niedermoser, 2012]. В этой работе был применен предшественник Boc-
DMTr-Ns ((I) на Рис.4).
Такая же структура предшественника была использована в двух современной работах
по синтезу [18F]ФЛТ с использованием микрореакторных технологий [Chen, 2012; Javed,
2014]. Выход реакции фторирования в микрореакторе очень высок и достигает 81%, выход
готового продукта 61% (с поправкой на распад) при времени синтеза 63 мин. Но эти
технологии еще не отработаны в достаточной степени и не могут быть использованы в
рутинном синтезе РФП.
До недавнего времени единственно возможным методом очистки [18F]ФЛТ считалась
очистка методом препаративной ВЭЖХ. Только в последние годы стали выходить
95
публикации, где синтез выполняется с выделением конечного продукта методом
твердофазной экстракции (ТФЭ) на одноразовых картриджах. В 2009 г была опубликована
работа [Nandy, 2009], где очистка [18F]ФЛТ выполнялась на самодельной колонке,
заполненной 7,7 г нейтрального оксида алюминия (Alumina N). Колонка устанавливалась в
модуль синтеза, производство было полностью автоматизировано. В синтезе использовался
предшественник ангидро-структуры DMT-AT ((IV) на Рис.4). Выход конечного продукта не
превышал 9% (без поправки на распад), время синтеза 75 мин. Публикация 2012 года
посвящена разработке очень сложной, комплексной очистки [18F]ФЛТ на комбинации
одноразовых картриджей [Pascali, 2012]. Данный синтез выполнялся на модуле Modular-Lab
(Eckert & Ziegler) с самым распространенным прекурсором Boc-DMTr-Ns ((I) на Рис.4). Для
очистки реакционную смесь после гидролиза пропускали через маленький катионообменный
картридж MaxiClean IC-H, затем через обращенно-фазный картридж tC18 Sep Pak plus.
Картриджи промывались водой, а затем продукт смывался дополнительным объемом воды
через Sep Pak Alumnina N Light и подвергался on-line стерилизации. Радиохимический выход
продукта был равен 37% с поправкой на распад, но преимуществами этого метода являлись
малое время синтеза – всего 39 мин, а также получение конечного продукта [18F]ФЛТ без
этанола.
Практически все недостатки предшествующих синтезов были исправлены в работе
2016 года [Marchand, 2016]. Схема синтеза [18F]ФЛТ из этой публикации приведена на Рис.7.

Рис. 7. Условия синтеза [18F]ФЛТ и возможный путь образования нерадиоактивной примеси

ставудин, по работе [Marchand, 2016].

Был применен коммерчески доступный и часто используемый прекурсор Boc-DMTr-Ns,

но в меньшем количестве 5-20 мг (обычно использовалось 40 мг). Добавление редко
96
используемого протонного растворителя 3-метил-3-пентан-ола к ацетонитрилу на стадии
фторирования позволило довести эффективность этой стадии до 94%. Уменьшение
количества основания на той же стадии позволило полностью избавиться от образования
ставудина (нерадиоактивная химическая примесь, которая возникает при отщеплении
нозильной уходящей группы в щелочных условиях). Синтез был автоматизирован на модуле
SynChrom R&D (Raytest). Препаративная ВЭЖХ очистка была выполнена в условиях,
которые позволяли получить конечный продукт в растворе 0,9% NaCl+8% этанола. Таким
образом, для инъекции раствор [18F]ФЛТ после очистки надо было только разбавить салином
и пропустить через стерилизующий фильтр. Радиохимический выход синтеза был равен 54%
с поправкой на распад при времени синтеза 52 мин.

Методы контроля качества [18F]ФЛТ. Требования к параметрам контроля

качества

Следует подчеркнуть, что [18F]ФЛТ – достаточно липофильное соединение, для

выделения которого необходим органический растворитель. Почти все описанные способы
очистки [18F]ФЛТ позволяют получить конечный продукт в водном растворе с содержанием
этанола до 10%, исключением является работа [Pascali, 2012]. Для получения раствора для
инъекции можно разбавлять полученный продукт до допустимой концентрации этанола или
упаривать органический растворитель. Конечное содержание этанола зависит от выбранного
способа очистки РФП, должно быть задано в зависимости от требований конкретного ПЭТ-
центра и быть описано в разделе «Состав» нормативной документации.

Основная химическая примесь, которая может образовываться при синтезе [18F]ФЛТ –

ставудин (дигидрокситимидин). Он образуется в щелочных условиях путем отщепления
уходящей группы от предшественника. Это вещество не токсично, применяется в качестве
лекарства при вирусе иммунодефицита человека. Помимо этого, возможно образование
других побочных продуктов [Pascali, 2012], они представлены на Рис. 8.

97
 Рис. 8. Возможные побочные продукты в синтезе [18F]ФЛТ из предшественника Boc-
DMTr-Ns [Pascali, 2012].
Возникновение этих примесей зависит от количества предшественника, условий
реакций и типа очистки готового продукта. При отработке синтеза надо уделить внимание
проверке возможности появления нерадиоактивных побочных продуктов, и, в случае
необходимости ввести метод определения и предельно допустимое количество данной
химической примеси в нормативную документацию.

Контролируемый Критерий
Метод определения
параметр допустимости
Чистый,
Визуальное
бесцветный Визуальный осмотр
соответствие
раствор
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЛТ должен быть в
Подлинность Соответствие рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фтортимидина
(идентичность) стандарту Или радиоВЭЖХ, условия **,
Время удерживания Rt [18F]ФЛТ должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фтортимидина
Радионуклидная Оценка гамма-спектра или измерение периода
>99%
чистота, % полураспада
радиоТСХ, условия*,
Фактор удерживания Rf [18F]ФЛТ должен быть в
Радиохимическая рамках ±0,05 Rf нерад. стандарта фтортимидина
>95%
чистота, % Или радиоВЭЖХ, условия **,
Время удерживания Rt [18F]ФЛТ должен быть в
рамках ±5% от Rt нерад. стандарта фтортимидина
Достаточная для
проведения ПЭТ-
исследования и
Объемная Измерение объема шприцом или по весу,
соответствия
активность, Ки/мл измерение активности в изотопном калибраторе
необходимой
удельной
активности

98
 Остаточное
содержание Не более 0,2 мг/мл ТСХ, условия***
К2.2.2., мг/мл
Остаточные
Ацетонитрил ГЖХ, в соответствии с ОФС «Остаточные
растворители,
не более 0,30 растворители»
мг/мл
Определение
ставудина и
Химические
др.примесей ВЭЖХ с УФ детектором, условия **
примеси, мкг/дозу
(Рис.8), в случае их
возникновения

рН 5,0 - 7,5 Потенциометрия

Изотоничность, Раствор должен

Осмометрия
мОсм быть изотоничным
Раствор должен Отсутствие роста микроорганизмов в
Стерильность
быть стерильным питательных средах
Уровень
<175 на общий
бактериальных LAL-тест
объем препарата
эндотоксинов, EU

*)
ТСХ пластинки (Merck slica gel, 7,5 x 2,5 cm), элюент CH3CN / H2O (9/1, v/v), Rf
[18F]фторида = 0,1; Rf [18F]ФЛТ=0,6 [Nandy, 2009].
**)
Колонка LIChroCART C18 (5 мкм, 250 х 4,0 мм), элюент этанол/вода (7,5/92,5),
скорость потока 0,5 мл/мин, детектор УФ-254 нм и детектор по радиоактивности, Rt
[18F]ФЛТ=5,1 мин [Nandy, 2009].
***)
ТСХ пластинка c тонким слоем силикагеля ("Kieselgel 60 F254") размером 15 х 100
мм, элюент МеОН/NH4OH 30% (90/10 v/v); интенсивность цветового пятна испытуемого
раствора не должна превышать интенсивности окрашивания стандарта, нанесенного на ту же
пластинку;

Главные параметры, влияющие на то, сколько именно [18F]ФЛТ реально получить

на конечном этапе.

99
 Основными определяющими параметрами для возможности получения большой
активности РФП являются время синтеза и радиохимический выход готового РФП. Методы
синтеза [18F]ФЛТ, описанные выше, кратко сформулированы в Табл.1.

Таблица 1. Результаты автоматизированных синтезов [18F]ФЛТ с применением

различных предшественников.

Время
Предшествен Выход
синтеза,
ник (номер Способ синтеза, %, Литер.
Модуль включая
структуры на очистки EOB или источник
очистку,
Рис.4) EOS
мин

FDG Coincidence ВЭЖХ 50 (EOB) 60 Oh, 2004

Niedermoser,
Explora FDG4 ВЭЖХ 60 (EOB) 70
2012
Boc-DMTr-Ns Модуль с
ВЭЖХ 61 (EOB) 63 Javed, 2014
микрореактором
(I)
Modular-Lab
ТФЭ 37 (EOB) 39 Pascali, 2012
(Eckert & Ziegler)
SynChrom R&D Marchand,
ВЭЖХ 54 (EOB) 52
(Raytest) 2016
Boc-Boc-Ns Нет
Tracerlab FXFN ВЭЖХ+ТФЭ 23 (EOS) Shao, 2011
(II) данных

Б-АТ NINA Нет

ВЭЖХ 18 (EOS) Reischl, 2006
(III) GE Helthcare данных

Модуль для
ДМТ-АТ
производства ТФЭ 8,5 (EOS) 75 Nandy, 2009
(IV)
ФДГ

Наибольший интерес с точки зрения производительности представляют три метода:

[Shao, 2011], [Pascali, 2012] и [Marchand, 2016]. Необходимо определить конечную
активность [18F]ФЛТ для каждого способа синтеза.

100
 Расчетная активность конечного продукта [18F]ФЛТ, исходя из максимальной
производительности [18F]фторной мишени циклотрона.

Таблица 2. Расчет активности РФП [18F]ФЛТ, которую возможно получить на разных

синтетических модулях.

Выход Количество [18F]ФЛТ, Количество

Время
Модуль, синтеза, %, которое возможно [18F]ФЛТ, кот. ост.
синтеза,
литер.источник EOB или получить из 12 Ки через 30 мин
мин
EOS [18F]фторида, Ки (после QC), Ки
Modular-Lab
(Eckert & Ziegler), 37 (EOB) 39 3,5 2,9
[Pascali, 2012]
SynChrom R&D
(Raytest), 54 (EOB) 52 4,7 3,9
[Marchand, 2016]
Tracerlab FXFN Нет
23 (EOS) 2,7 2,3
[Shao, 2011] данных

Из расчетных данных можно заключить, что самым результативным является синтез по

методу [Marchand, 2016], возможно производство 4,7 Ки [18F]ФЛТ, из которого останется 3,9
Ки после контроля качества (через 30 мин).

Возможность и перспективность доставки РФП в удаленные ПЭТ-центры.

[18F]ФЛТ возможно доставлять в удаленные ПЭТ-центры. Даже в случае

необходимости перевозки РФП в течение 4 часов (около двух периодов полураспада), из 4,7
Ки останется 1,1 Ки [18F]ФЛТ, что более чем достаточно для проведения диагностики на
двух ПЭТ-камерах в течение рабочего дня. В случае доставки на дальние расстояния
контроль качества РФП возможно выполнять из отобранного образца уже после отгрузки
РФП для доставки, т.е. время на контроль качества не тратится.

Трудности в синтезе и контроле качества [18F]ФЛТ. Анализ возможных рисков

Синтез должен быть хорошо отработан перед началом рутинного производства РФП.
Все заданные температурные и временные режимы должны соблюдаться. Лучше выбирать

101
способ синтеза с возможно меньшим количеством предшественника, т.к. это приводит к
уменьшению количества нерадиоактивных побочных продуктов. Особое внимание
необходимо уделить проверке выходов радиохимических реакций на каждой стадии синтеза.
Конечный продукт должен быть проверен на предмет химической и радиохимической
деградации в течение установленного срока годности. При разработке процедуры контроля
качества необходимо отследить, какие именно химические примеси образуются при
выбранном способе производства, и ввести в нормативную документацию способы контроля
их количества. Должна быть разработана процедура разбавления РФП из раствора,
содержащего этанол, до концентрации, разрешенной к внутривенному введению.

Список использованных источников к разделу [18F]ФЛТ.

Bertagna F., Biasiotto G., Guibbini R. The role of F-18-fluorothymidine PET in oncology. Clin
Trans Imaging 2013, 1:77-97.

Buck AK, Herrmann K, Shen C, Dechow T, Schwaiger M, Wester H-J. Molecular imaging of
proliferation in vivo: Positron emission tomography with [18F]fluorothymidine. Methods. 2009;
48:205-251.

Chen S., Javed R., Kim H.-K., Flores G., van Dam R.M., Keng P.Y., Kim C.-J. Synthesis of
diverse tracers on EWOD microdevice for positron emission tomography (PET). Solid-State
Sensors, Actuators, and Microsystems Workshop Hilton Head Island, South Carolina, June 3-7,
2012, P.189-192.

Costantini D.L., Vali R., McQuatti S., Chan J., Punnett A., Weitzman S., Shammas A.,
Charron M. A Pilot Study of 18F-FLT PET/CT in Pediatric Lymphoma. Int J Mol Imaging, 2016,
http://dx.doi.org/10.1155/2016/6045894.

Glendenning J.L., Barrngton S., Tovey H., Parikh J., Dunn J., Tutt A. Repeatability evaluation
of PET/CT imaging using [18F]fluorothymidine (FLT) and [18F]fluorodeoxyglucose (FDG) in
primary triple negative breast cancer (TNBS). Ann Oncology 2015, 26(3):ii27-ii28.

Hatakeyama T., Kawai N., Nishiyama Y., Yamamoto Y., Sasakawa Y., Ichikawa T., Tamiya
11 18
T. C-methionine (MET) and F-fluorothymidine (FLT) PET in patients with new diagnosed
glioma. Eur J Nucl Med Mol Imaging, 2008, 35:2009-2017.

Javed M.R., Chen S., Kim H.-K., Wei L., Czernin J., Kim C.-J., van Dam R.M., Keng P.Y.
Efficient Radiosynthesis of 39-Deoxy-39-18F-Fluorothymidine Using Electrowetting-on-Dielectric
Digital Microfluidic Chip. J Nucl Med 2014, 55:321-328.
102
 Jensen M.M., Kjaer A. Monitoring of anti-cancer treatment with 18F-FDG and 18F-FLT PET: a
comprehensive review of pre-clinical studies. Am J Nucl Med Mol Imaging 2015, 5(5):431-456.

Kong X.B., Zhu O.Y., Vidal P.M., Watanabe K.A., Polsky B., Armstrong D., Ostrander M,
Lang Jr S.A., Muchmore E., and Chou T.C. Comparisons of anti-human immunodeficiency virus
activities, cellular transport, and plasma and intracellular pharmacokinetics of 3'-fluoro-3'-
deoxythymidine and 3'-azido-3'-deoxythymidine. Antimicrob. Agents Chemother. April 1992
36:808-818.

Lee T.S., Ahn S.H., Moon B.S., Chun K.S., Kang J.H., Cheon G.J., Choi C.W., Lim S.M.
Comparison of 18F-FDG, 18F-FET and 18F-FLT for differentiation between tumor and inflammation
in rats. Nucl Med Biol, 2009, 36:681-686.

Marchand P., Ouadi A., Pellicioli M., Schuler J., Laquerriere P., Boisson F., Brasse D.
Automated and efficient radiosynthesis of [18F]FLT using a low amount of precursor. Nucl Med
Biol 2016, 43:520-527.

Martin S.J., Eisenbarth J.A., Wagner-Utermann U., Mier W., Henze M., Pritzkow H.,
Haberkorn U., Eisenhut M. A new precursor for the radiosynthesis of [18F]FLT. Nucl Med Biol.,
2002; 29:263-273.

Niedermoser S., Pape M., Gildehaus F.J.,Wangler C., Hartenbach M., Schirrmacher R.,
Bartenstein P., Wangler B. Evaluation of an automated double-synthesis module: efficiency and
reliability of subsequent radiosyntheses of FHBG and FLT. Nucl Med Biol. 2012, 39(4):586-592.

Oh S.J., Mosdzianowski C., Chi D.Y., Kim J.Y., Kang S.H., Ryu J.S., Yeo J.S., Moon D.H.
Fully automated synthesis system of 3-deoxy-3-[18F]fluorothymidine. Nucl Med Biol. 2004,
31:803-809.

Pascali, C.; Bogni, A.; Fugazza, L.; Cucchi, C.; Crispu, O.; Laera, L.; Iwata, R.; Maiocchi, G.;
Crippa, F.; Bombardieri, E. Simple preparation and purification of ethanol-free solutions of 3'-
deoxy-3'-[18F]fluorothymidine by means of disposable solid-phase extraction cartridges. Nucl Med
Biol., 2012, 39:540-550.

Reischl G., Blocher A., Rongqing Wei, Ehrlichmann W., Kuntzsch M., Solbach Ch., Dohmen
B. M. and Machulla H.-J. Simplified, automated synthesis of 3-[18F]fluoro-3-deoxy-thymidine
([18F]FLT) and simple method for metabolite analysis in plasma. Radiochim. Acta. 2006; 94:447-
451.

103
 Reyners A.K.L., Broekman K.E., Glaudemans A.W.J.M., Brouwers A.H., Arts H.J.G., van der
Zee A.G.J., de Vrie E.G.E., Jalving M. Molecular imaging in ovarian cancer. Ann Oncology 2016,
27(1):i23-i29.

Schaefferkoetter J.D., Carlson E.R., Heidel R.E. Can 3’-Deoxy-3’-(18F)Fluorothymidine Out

Perform 2-Deoxy-2-(18F)Fluoro-D-Glucose Positron Emission Tomography / Computed
Tomography in the DiagNsis of Cervical Limphadenopathy in Patients With Oral/Head and Neck
Cancer? J Oral Maxillofac Surg 2015, 73:1420-1428.

Strauss L.G.. Fluorine-18 deoxyglucose and false-positive results: a major problem in the
diagNstics of oncological patients. Eur. J. Nucl. Med. 1996; 23:1409-1415.

Shao X., Hoareau R., Hockley B.G., Tluczek L.J.M., Henderson B.D., Padgett H.C., Scott
P.J.H. Highlighting the versatility of the tracerlab synthesis modules. Part 1: fully automated
production of [18F]labelled radiopharmaceuticals using a Tracerlab FXFN. J Labelled Comp
Radiopharm. 2011, 54: 292-307.

Shields AF, Grierson JR, Dohmen BM, Machulla HJ, Stayanoff JC, Lawhorn-Crews JM,
Obradovich JE, Muzik O, Mangner TJ. Imaging proliferation in vivo with [F-18]FLT and positron
emission tomography. Nature Med. 1998, 4: 1334-6.

Szyszko T.A., Yip C., Szlosarek P., Goh V., Cook G.J.R. The role of new PET tracers for lung
cancer. Lung Cancer, 2016, 94:7-14.

van Waarde A, Cobben DC, Suurmeijer AJ, Maas B, Vaalburg W, de Vries EF, Jager PL,
18 18
Hoekstra HJ, Elsinga PH. Selectivity of F-FLT and F-FDG for differentiating tumor from
inflammation in a rodent model. J Nucl Med. 2004, 45:695-700

Wilson I.K., Chatterjee S., Wolf W. Synthesis of 3′-fluoro-3′-deoxythymidine and studies of its
18
F-radiolabelling, as a tracer for the noninvasive monitoring of the biodistribution of drugs against
AIDS. J Fluorine Chem 1991; 55:283–9.

Windhorst A.D., Klein P.J., Eisenbarth J., Oeser T, Kruijer P.S., Eisenhut M.. 3′-Sulfonylesters
of 2,5′-anhydro-1-(2-deoxy-β-D-threo-pentofuraNsyl)thymine as precursors for the synthesis of
[18F]FLT: syntheses and radiofluorination trials. Nucl.Med Biol. 2008, 35:413-423.

104
 [18F]фторированные аналоги PSMA

ПСМА-специфичные РФП на основе малых молекул, меченных фтором-18:

методы получения и перспективы применения в ПЭТ диагностике рака
предстательной железы (обзор литературы)

В последние годы огромное внимание уделяется созданию ПЭТ агентов, специфичным

к простат-специфическому мембранному антигену (ПСМА) (prostate specific membrane
antigen, PSMA), интегрированному мембранному протеину, состоящему из 750 аминокислот
(100–120 kDa) с интрацеллюлярным, интрамембранным и экстрацеллюлярным доменами. В
качестве ПЭТ изотопа чаще всего используется галлий-68, доступный из изотопного
генератора. Несмотря на название, ПСМА не является антигеном, специфичным для РПЖ,
он детектируется и в нормальных клетках других эндокринных желез, а также
экспрессируется не только опухолью предстательной железы (ПЖ), но и другими
карциномами (рак прямой кишки, карцинома почек и др.). Однако большинство работ
посвящено ПСМА-специфичным радиотрейсерам для диагностики РПЖ, где, как показано,
высокая экспрессия этого антигена обнаруживается при кастрат-резистентных и
метастазирующих формах рака. Наиболее успешным и уже достаточно хорошо изученным в
ПЭТ исследованиях пациентов является 68
Ga-Glu-urea-Lys(Ahx)-HBED-CC (68Ga-PSMA-11
или 68
Ga-DKFZ-11), разработанный немецкими учеными из Хайдельберга [Afshar-Oromieh,
2013].
Несмотря на широко известные преимущества «генераторного» галлия-68, его
использование имеет ряд ограничений, одним из которых является малая активность
изотопа, получаемая при однократном элюировании дорогостоящего 68Ge/68Ga генератора. В
среднем активность составляет 1850 МБк (максимум 4 элюирования в сутки), что дает
возможность получения 1-3 доз РФП. В результате стоимость одной клинической дозы с
учетом вклада дорогостоящих PSMA-прекурсоров для синтеза РФП остается очень высокой.
Окупаемость галлиевого генератора возможна лишь при большом потоке пациентов и
высокой стоимости самого ПЭТ исследования.
ПЭТ центры, оборудованные собственным циклотроном и уже инвестировавшие в
дорогостоящее оборудование заинтересованы в разработке и использовании ПСМА-
радиотрейсеров с туморотропными характеристиками, близкими к 68
Ga-PSMA-11, но
содержащими в качестве радиоактивной метки фтор-18, а также их поставке в сателлитные
ПЭТ центры. Для этой цели лучше подходит фтор-18 с периодом полураспада 110 мин (T1/2

105
68
Ga составляет 68 мин). Кроме того, фтор-18, у которого доля эмиссии позитронов
составляет 97%, а пробег в ткани всего 2,4 мм (против 9,6 мм в случае галлия-68)
обеспечивает более высокую контрастность ПЭТ изображений.
Работы по созданию ПСМА агентов, меченных фтором-18, как нового класса РФП
были начаты сравнительно недавно, они кратко рассмотрены в обзоре [Pillai, 2016]. В 2008
группой американских ученых из университета Джона Хопкинса, Балтимор, США [Mease,
2008] был впервые синтезирован аналог аминокислоты цистеина сложной структуры, N-[N-
[(S)-1,3-дикарбоксипропил]карбамоил]-4-[18F]фторбензил-L-цистеин, [18F]DCFBC (Рис. 1, a).
Синтез основан на реакции алкилирования предшественика на основе фармакофора Lys-urea-
Glu (лизин-мочевина-глутаминовая кислота) содержащего ароматическое кольцо для
введеняи метки реакией фторбензилирования с использованием 4-[18F]фторбензилбромида.
Нуклеофильный трех стадийный метод получения лишь этого агента представляется крайне
сложным для автоматизации, что усугубляется и использованием на ключевой стадии
алкилирования в качестве растворителя метанола, насыщенного аммиаком.
Радиохимический выход без поправки на радиоактивный распад (EOS) составлял 3.5% при
времени синтеза 123 мин. Авторами разработаны достаточно сложные методы синтеза
прекурсора и стандарта для идентификации, [19F]DCFBC. В дальнейшем РХВ удалось
увеличить до 9.5% (EOS) за счет использования микроволнового нагрева в самодельном
полуавтоматическом модуле [Holt, 2011; Cho, 2012]. Говорить о перспективности внедрения
этого сложного и низко производительного метода в рутинное производство нового РФП на
данном этапе преждевременно. Предварительные ПЭТ исследования 5 пациентов [Holt,
2011; Cho, 2012] и более поздняя работа [Rowe, 2015] с исследованием 17 пациентов
подтвердили высокую чувствительность ПЭТ в диагностике метастазирующего рака РПЖ.
Однако в следующей работе той же группы [Rowe, 2016] было показано, что [18F]DCFBC
имеет высокую концентрацию в пуле крови, что не позволяет с достаточной точностью
выявлять метастазы в лимфатические узлы.

106
 Рис. 1. Перспективные ПСМА-агенты, меченные фтором-18

В связи с этим той же группой ученых из университета Джона Хопкинса были

предложен 18
F-ПСМА агент второго поколения на основе того же фармакофора, но
содержащий пиридиновый фрагмент для введения метки фтор-18 (структура b, рис.1) -
[18F]DCFPyL [Szabo, 2015; Rowe, 2016 (2), Che, 2011]. Преимуществом нового РФП является
высокая аффинность к ПСМА (Ki 1.1 нм) [Chen, 2011] по сравнению с [18F]DCFBC, также
быстрое выведение (clearance) из крови (отношение опухоль кровь 10:1). В итоге, ПЭТ с
[18F]DCFPyL позволяет эффективно выявлять метастазы РПЖ в лимфатические узлы, и даже
те, которые находятся в непосредственной близости от кровеносных сосудов в области
малого таза [Szabo, 2015]. В настоящее время этот радиотрейсер рассматривается как
наиболее перспективный ПСМА агент для ПЭТ-КТ диагнсотики РПЖ на основе фтора-18.
Синтез этого соединения также является достаточно сложным для использования в рутинном
производстве на стандартных модулях. Радиохимический выход согласно методу,
описанному в работе [Szabo, 2015], составил всего 2.8 ±1.2 % (EOS). В работе немецких
ученых с [18F]DCFPyL был получен этим же методом, но с несколько большим РХВ – 8-12%.
В 2016 г. был разработан новый прекурсор для получения [18F]DCFPyL методом прямого
нуклеофильного радиофторирования (Рис.2) [Bouvet, 2016]. С его использованием синтез
был автоматизирован на модуле GE TRACERlabTM FX (GE Healthcare) и обеспечил
получение [18F]DCFPyL с более высоким РХВ 23 ± 5 % (n = 10, с поправкой на
радиоактивный распад - EOB) при времени синтеза 55 мин, включая очистку методом
полупрепаративной ВЭЖХ.
.
107
Рис. 2. Синтез [18F]DCFPyL методом прямого нуклеофильного радиофторирования [Bouvet,
2016].

Радиотрейсеры [18F]DCFPyL и [18F]DCFBC защищены американским патентом

(Университет Джона Хопкинса). Можно ожидать достаточно быстрое внедрение
[18F]DCFPyL в клиническую практику ПЭТ В США и других стран в качестве альтернативы
широко применяемому в Европейских центрах 68
Ga-PSMA-11. Недавнее сравнительное
исследование двух РФП группы пациентов с биохимическим рецидивом РПЖ (ПСА от 0.17
до 50 нг/мл) показало, что с помощью [18F]DCFPyL удалось выявить все метастазы (lesions),
тогда как при исследовании с 68
Ga-PSMA-11 у трех пациентов они были пропущены
[Dietlein, 2015].
За последние годы были предложены еще несколько ПСМА агентов на основе фтора-18,
которые находятся на стадии доклинических испытаний [Fan, 2015; Malik, 2011; Malik, 2015;
Ley, 2015; Lesche, 2014], и о перспективности их использования в ПЭТ исследованиях
человека говорить пока преждевременно.

Список использованных источников к разделу [18F]фторированные аналоги

PSMA.

Afshar-Oromieh A.M., Eder M., Eisenhut M., Linhart H.B., Hadaschik T., Holland-Letz F.,
Giesel C., Kratochwil S., Haufe U., Haberkorn C., Zechmann C. PET imaging with a
[68Ga]gallium-labelled PSMA ligand for the diagnosis of prostate cancer: biodistribution in humans
and first evaluation of tumour lesions. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2013; 40: 486-495.

108
 Bouvet V., Wuest M., Jans H-S., Janzen N., Genady A.R., Valliant J.F., Francois Benard F.,
Wuest F. Automated synthesis of [18F]DCFPyL via direct radiofluorination and validation in
preclinical prostate cancer models. Eur J Nucl Med Mol Imaging Res. 2016; 6:40.
http://dx.doi.org/10.1186/s13550-016-0195-6.

Chen Y., Pullambhatla M., Foss C.A., Byun Y., Nimmagadda S., Senthamizhchelvan S.,et al.
2(3-{1-Carboxy-5[{[6-18F]fluoro-pyridine-2-carbonyl}amino]-pentyl}-ureido)-pentanedioic acid,
18
F-DCPyl, a PSMA-based PET imaging agent for prostate cancer. Clin Cancer Res. 2011; 17:
7645-53.

Cho S.Y., Gage K.L., Mease R.C., Senthamizhchelvan S., Holt D.P., Jeffrey-Kwanisai A., et
18
al. Biosdistribution, tumor detection, and radiation dosimetry of F-DCFBC, a low molecular
weight inhibitor of prostate-specific membrane antigen, in patients with metastatic prostate cancer. J
Nucl Med. 2012; 53: 1883-91.

Dietlein M., Kobe C., Kuhnert G., Stockter S., Fischer T., Schomäcker K., Schmidt M.,
Dietlein F., Zlatopolskiy B.D., Krapf P., Richarz R., Stephan Neubauer S., Drzezga A., Neumaier
D. Comparison of [18F]DCFPyL and [68Ga]Ga-PSMA-HBED-CC for PSMA-PET imaging in
patients with relapsed prostate cancer. Mol Imaging Biol. 2015; 17: 575-584.

Fan W., Zhang Z., Zhu Z., Yang D., Chen X., Wang J. Synthesis and positron emission
18
tomography evaluation of F-Glu-urea-Lys, a prostate-specific membrane antigen-based imaging
agent for prostate cancer. Oncol Lett. 2015; 10: 2299-302.

Holt D.P., Ravert H.T., MathewsW.B., Horti A., Mease R., Dannals R.F. A semi-automated
microwave chemistry system for complete radiosynthesis, purification, and formulation of F-18
radiotracers [abstract]. J Labelled Comp Radiopharm. 2011;54: S426.

.Lesche R., Kettschau G., Gromov A.V., Böhnke N., Borkowski S., Mönning U., Hegele-
Hartung C., Döhr O., Dinkelborg L.M., Graham K. Preclinical evaluation of BAY 1075553, a novel
18
F-labelled inhibitor of prostatespecific membrane antigen for PET imaging of prostate cancer. Eur
J Nucl Med Mol Imaging. 2014; 41:89-101.

Ley C.R., Beattie N.R., Dannoon S., Regan M., VanBrocklin H., Berkman C.E. Synthesis and
evaluation of constrained phosphoramidate inhibitors of prostate-specific membrane antigen.
Bioorg Med Chem Lett. 2015;25:2536–9.

Malik N., Baur B., Winter G., Reske S.N., Beer A.J., Solbach C. Radiofluorination of PSMA
HBED via Al18F(2+) chelation and biological evaluations in vitro. Mol Imaging Biol. 2015; 17:
777-85.

109
 Malik N., Machulla H.J., Solbach C.,Winter G., Reske S.N., Zlatopolskiy B. Radiosynthesis of
a new PSMA targeting ligand ([18F]FPy-DUPA-pep). Appl Radiat Isot. 2011; 69: 1014–8.

Mease R.C., Dusich C.L., Foss C.A., Ravert H.T., Dannals R.F., Seidel J., et al. N-[N-[(S)-1,3-
Dicarboxypropyl]carbamoyl]-4-[18F]fluorobenzyl-L-cysteine, [18F]DCFBC: a new imaging probe
for prostate cancer. Clin Cancer Res 2008;14: 3036-43.

Pillai M.R., Nanabala R., Joy A., Sasikumar A., Russ Knapp F.F.. Radiolabeled enzyme
inhibitors and binding agents targeting PSMA: Effective theranostic tools for imaging and therapy
of prostate cancer. Nucl Med Biol. 2016; 43: 692-720.

Rowe S.P., Gage K.L., Farai S.F., Macura K.J., Cornish T.C., Gonzalez-Roibon N. 18FDCFBC
PET/CT for PSMA-based detection and characterization of primary prostate cancer. J Nucl Med.
2015; 56:1003–10.

Rowe S.P., Macura K.J., Ciarallo A., Mena E., Blackford A., Nadal R. et al. Comparison of
prostate-specific membrane antigen-based 18F-DCFBC PET/CT to conventional imaging modalities
for detection of hormone-naive and castration-resistant metastatic prostate cancer. J Nucl Med.
2016; 57: 46-53.

Rowe S.P., Mana-Ay. M, Javad M.S, Szabo Z., Leal J.P., Pomper M.G., et al. PSMA-based
detection of prostate cancer bone lesionswith 18F-DCFPyL PET/CT: a sensitive alternative to
99m
Tc-MDP bone scan and 18F PET/CT. Clin Genitourin Cancer. 2016;14: 115-8.

Szabo Z., Mena E., Rowe S.P. Initial evaluation of [18F]DCFPyL for prostate- specific
membrane antigen (PSMA)-targeted PET imaging of prostate cancer. Mol Imaging Biol. 2015; 17:
565-574.

110