UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

Facultad de Ciencias Químicas

Ingeniería Química

Microbiología y Laboratorio

Dr. Luis H. Álvarez Valencia

Reporte de práctica 3:
Técnicas de siembra en medio de cultivo y aislamiento
de bacterias y levaduras.

Cervantes Rodríguez Aldo Daniel 1581648

Cortez Bernal Eliut Guadalupe 1684665
Miranda De la Garza Madeleine 1593653
Objetivo
Aprender las diferentes técnicas de siembra y aislamiento de microorganismos, así como
comprobar la utilidad de medios de uso general, diferenciales y selectivos.

Introducción
La inoculación de medios para cultivo e identificación de microorganismos son procedimientos
fundamentales e importantes en toda investigación microbiológica; por tal razón, se deben tener
los cuidados necesarios con el fin de evitar la contaminación de los cultivos.
Los microorganismos inmediatamente comienzan a colonizar nuestros cuerpos, así como los
objetos. Un estudio adecuado de microorganismos requiere técnicas que permitan conocer y
ordenar la compleja población mixto (cultivo mixto) separándole en sus distintas especies como
cultivos puros (axénicos).
Un cultivo puro consta de una población de células derivadas, todas ellas de una célula parental,
para obtenerlo es necesario recurrir a las anteriores técnicas de aislamiento. El material que se
inocula sobre el medio se denomina inóculo mediante alguna técnica (siembra por estría en placa
o siembra en mesa en placa).
Una colonia es visible a simple vista y presumiblemente un cultivo puro de una clase de
microorganismo. Se puede demostrar que cada colonia procede de una sola célula, por ello lo
más correcto es hablar de unidades formadoras de colonias (UFC). Por lo tanto, las bacterias de
una colonia son genéticamente iguales y constituyen un clon.

Resultados

Conclusiones

Cuestionario
1. ¿Por qué se considera que un cultivo puro supone condiciones no
naturales? ¿Qué reflexiones haría sobre los resultados obtenidos en
laboratorio con este tipo de cultivo?

Se considera así al cultivo axénico debido a que los microorganismos pueden ser examinados
para encontrar las siguientes características: iguales en forma, tamaño y color, no existen formas
inhibidas, ser bioquímicamente y fisiológicamente iguales, presentar un aspecto común, pero lo
más importante de todo, que los microorganismos de una colonia pertenezcan a una misma
especie, en cambio un cultivo mixto, que se encuentran siempre en la naturaleza, tienen distintas
especies en forma conjunta presentando diferentes características.

2. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la técnica de estría cruzada?

Proponga otras técnicas de aislamiento en medios sólidos que se aplican
en microbiología.

Ventajas
Es el método más fácil y usado en la
obtención de cultivos axénicos.
En cajas Petri, incubadas en un lugar
adecuado, permiten a las células aisladas
experimentar un número suficiente de
divisiones para formar colonias visibles.
Desventajas
No se puede asegurar que una colonia
represente un clon derivado de una sola
célula, puede haberse originado una colonia
mixta.
Volver a repetir el procedimiento de una
colonia bien aislada para asegurar la
obtención de un buen cultivo axénico.

Método de vertido en placa: Las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su

siembra en placa, para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1ml de la suspensión
bacteriana a 9ml (de medio estéril o solución salina). Se agita para diluir las células y el proceso
se repite cuantas veces sea necesario. Las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se
vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la
superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes.

Método de extensión en placa: Las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie

de la placa de agar, extendiéndolas con ayuda de un asa de Dirlasky de cristal estéril. La
suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie.

En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias.

3. ¿Para qué se inocularon tubos con medios líquidos y tubos con medios
sólidos por estría?

Los cultivos líquidos sirven para identificar microorganismos por sus características presenciales
en dichos medios de cultivos (pH, cambio de coloración en agar, producción de gases, turbidez
del medio líquido) además de conseguir colonias separadas que pueden ser cuantificadas con
mayor facilidad.

4. Investigue la composición química de los medios AN, AEM y ADP. Explique

qué tipo de medios son con base en composición y uso.

AN: Compuesto de extracto de carne, pluripeptona, cloruro de sodio y agar. Se usa como medio
de cultivo para el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos
nutricionales.

AEM: Peptona, lactosa, sacarosa, fosfato dipotásico, agar, eosina y azul de metileno. Se utiliza
para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas
exigencias nutricionales.

ADP: Extracto de patata, dextrosa y agar. Se utiliza para cultivo y recuento de hongos y
levaduras en productos lácteos, bebidas embotelladas y alimentos.

Referencias
http://www.britanialab.com/productos/B02122%20REV%2001-
NUTRITIVO%20AGAR.pdf
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm
http://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-
dextrosa-y-papa/