NEFELOMETRIA

Así como la turbidimetría es análoga a la espectrometría de absorción

molecular. La nefelometría lo es a la espectrometría de fluorescencia. La
diferencia consiste en que la longitud de onda incidente y la recogida por el
sistema de lectura es la misma mientras que en la espectrometría de
fluorescencia no lo es.

La nefelometría consiste en medir el efecto de la dispersión de la radiación

por partículas en disolución o en suspensión midiéndose la potencia radiante
de la radiación dispersada en un ángulo fi diferente del de la dirección de la
radiación incidente El detector se sitúa en un ángulo igual o menor a 90°
respecto al eje horizontal

La nefelometría Requiere una instrumentación especial. aunque existen

analizadores que permiten efectuar medidas nefelometricas en un ángulo de
20°. Esquemáticamente el diseño de un nefelómetro no difiere del de un
espectrómetro. Las mayores diferencias entre los espectrómetros se refieren
a la fuente de radiación a la situación y orientación de la de reacción
respecto a la fuente de luz y el tipo de detector todo ello comporta que
cualquier sistema Nefelométrico, sea ventajas o limitaciones respecto a la
potencia radiante de la radiación emitida y dispersada al volumen de muestra
requerido para la medición a la mitad de automatización del método y el
costo de mantenimiento del instrumento.

INSTRUMENTACION

Fuentes de radiación existen diferentes tipos

- lámparas de xenón y de vapor de mercurio. En nefelometría se utilizan

en emisiones de una longitud de onda cercana a 340 nanómetros
- lámpara halógena de wolframio. Emite entre 400. y 500 nanómetros
- diodo fotoemisor emite longitudes de onda entre 650 y 840
nanometros
- tubos láser con mezcla de helio, neón o helio cadmio que emiten a
632,8 y 441,6 nanómetros respectivamente
En nefelometría es importante disponer de una fuente de radiación de gran
potencia día radiante esta es la razón de la incorporación de las fuentes de
radiación láser en la instrumentación nefelométrica la radiación láser posee
las siguientes características.

- Tiene una elevada potencia radiante. lo que propicia que incida

mucha más radiación en un espacio de la cubeta de reacción
extremadamente pequeño de 0508 nanómetros de diámetro
aproximadamente es una radiación monocromática.

En la misma dirección tiene la misma longitud de onda y están. En la misma

fase todo ello permite medir la radiación en ángulos más próximos al eje de
grado cero ángulos en los que la potencia radiante detectada es mayor. Por
el contrario el empleo de los tubos de radiación láser posee una serie de
inconvenientes emiten a longitudes de onda largas y la radiación es
altamente polarizada, lo cual va en detrimento de la potencia radiante de
dispersión detectada

Las longitudes de onda son fijas e inamovibles, lo cual es un inconveniente

importante cuando se trabaja en reacciones de inmunoprecipitacion en las
que el tamaño de la partícula cambia durante el curso de la reacción.

Sistema monocromador

En nefelometría al ser la radiación incidente de igual longitud de onda que la

detectada. Solo es necesario que el nefelómetro, o sea, un único sistema
monocromador, aunque la mayoría tiene dos.

Si el monocromador se sitúa entre la fuente de radiación y la cubeta se evita

la incidencia sobre la cubeta de radiaciones de diferente longitud de onda. A
la deseada. Que pueden provocar efectos de calentamiento reacciones
fotoquímicas o de fluorescencia en la solución o suspensión.

Si se coloca entre la cubeta y el detector se reducen los errores provocados

por la fluorescencia de moléculas inespecíficas de la región
Cubetas de lectura

Pueden tener diferentes formas y tamaños generalmente son prismáticas o

cilíndricas el principal inconveniente de las primeras es que solo permiten la
detección de la radiación en determinados ángulos. Y en el caso de la
segunda que la superficie curva actúa como lente desviando el radiante que
las atraviesa.

Detector la mayoría de los nefelómetro utiliza tubos fotomultiplicadores el

detector debe estar situado muy cerca de la cubeta de reacción. Que la
potencia radiante de la radiación dispersada es inversamente proporcional a
la segunda potencia de la distancia al detector. Algunos nefelómetro tienen el
detector de potencia de la distancia situado a un ángulo de 90 grados
respecto a la dirección de la radiación incidente pero actualmente los
modernos nefelómetro tienden a situar el detector. en ángulos entre 30° y 70°
algunos incluso logran situarlo entre 13° y 24°.

El sistema láser es el que permite ángulo de medición menores entre 5° y

12° la calidad metodológica de los resultados depende de la inexistencia de
fluctuaciones de la radiación emitida y de la ausencia de ruidos o corrientes
ópticas que afectan al receptor La sensibilidad meteorológica de un
nefelómetro puede incrementarse aumentando la señal detectada por medio
de un sistema amplificador siempre y cuando no existan otras sustancias
diferente ya que se podría estar amplificando el error de lectura, otras
características a tener en cuenta al escoger un sistema nefelometrico, son la
posibilidad de lectura a un solo punto y de forma continua

La existencia de un sistema refrigerador y de un controlador de la

temperatura la dispensación y dilución automática de muestras y reactivos la
incorporación de un ordenador que permite al usuario el seguimiento de las
reacciones