RESUMEN

El objetivo de la práctica fue cuantificar la cantidad de cafeína presente en una botella de bebida
energizante Volt de 300 mL, cuya concentración era de 76.8 mg / 240 mL, mediante la cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC). Al inyectar los patrones se obtuvieron los valores de las áreas de los
picos, y con estos se graficó la curva de calibración, obteniéndose una línea recta de ecuación: A = 18011
Ccaf – 20331. Luego se determinó la concentración de cafeína y se encontró que dicha concentración en
la bebida energética fue de 70.2816 mg / 240 mL con un % de error de 8.49 %.
INTRODUCCIÓN
La importancia de la práctica radica en verificar la concentración de cafeína en una botella de bebida
energizante que consumen millones de personas alrededor del mundo, con el fin de determinar si la
concentración real es la indicada y adecuada, ya que el valor máximo admisible de cafeína en energizantes
es de 300 mg, pasada esta cantidad, se puede producir una intoxicación [Anexo 1]. Por otro lado, si dicha
bebida energética posee un valor mínimo de 75 mg, esta propicia el aumento de rendimiento cognitivo y
mental (relacionado con procesos de aprendizaje, concentración, memoria, razonamiento, así como
resistencia al estrés) [Anexo 1]. Así como el consumo estas bebidas presentan consecuencias positivas,
también tienen consecuencias negativas cuando se beben en exceso, pues al consumir más de un
producto en un solo día, es posible excederse y presentar efectos no deseados, sobre todo en personas
con alta sensibilidad, además, la NOM 218-SSA1-2011 establece que en ningún caso la ingesta de cafeína
debe exceder de 165 mg al día. [Anexo 2]. Existe un estudio en donde también se determinó el nivel de
cafeína en bebidas energéticas por cromatografía HPLC, pero empleando una matriz de fotodiodos (PDA),
y se obtuvo una concentración de cafeína igual a 78.36 mg / 240 mL con una desviación estándar relativa
de 0.12 %, siendo el valor declarado por el productor 76.8 mg / 240 mL [1]. También se cuantificó cafeína
por otros métodos, como por ejemplo, se desarrolló un nuevo método de espectrometría de masas por
cromatografía de capa delgada / ionización por electropulverización de alto rendimiento (HPTLC / ESI ‐
MS) para la cuantificación de cafeína en bebidas energéticas utilizando análisis de dilución de isótopos
estables (SIDA). La precisión del método se evaluó comparando los resultados obtenidos por HPTLC /
SIDA ‐ ESI ‐ MS con los del método validado HPTLC / UV. Los resultados fueron 81.1416 mg / 240 mL
por HPTLC / SIDA ‐ ESI ‐ MS y 80.3664 mg / 240 mL por HPTLC / UV. De acuerdo con la prueba F
(homogeneidad de varianzas) y la prueba t (comparación de medias), los dos métodos no muestran
diferencias significativas [2]. Se determinó cafeína en bebidas energéticas disponibles en Yenagoa,
Nigeria mediante espectrofotometría ultravioleta utilizando tetracloruro de carbono como disolvente de
extracción. Los resultados mostraron que en las bebidas energéticas la concentración de cafeína varió de
11.41 mg / 240 mL a 14 mg / 240 mL con una concentración media de 12.54 mg / 240 mL. El contenido
de cafeína en todas las muestras de bebidas analizadas en este estudio están muy por debajo de los
límites máximos permitidos establecidos por la Administración de Drogas y Alimentos de EE. UU. [3].
También se pudo determinar cafeína en fase sólida FT-Raman en bebidas energéticas, en donde se
obtuvo una repetitividad del 3%, como desviación estándar relativa de cinco análisis de una concentración
de 48 mg / 240 mL , y un límite de detección de 4.32 mg / 240 mL. El procedimiento SP-FT-Raman
proporciona una frecuencia de muestreo de 13.3 h−1, mayor que la de la cromatografía líquida (LC), que
fue de 7.0 h−1 [4]. Se determinó cuantitativamente cafeína en bebidas energéticas por fluorescencia de
superficie sólida usando un paso de pre-concentración en nanotubos de carbono de paredes múltiples y
Rhodamine B. En condiciones experimentales óptimas, el sistema de pre-concentración dio límites de
detección y cuantificación de 7.2 x 10-8 mg / 240 mL y 2.64 x 10-7 mg / 240 mL, respectivamente. Se logró
un amplio rango lineal que varía de concentraciones de 2.64 x 10-7 mg / 240 mL a 2.328 × 103 mg / 240
mL (R2 = 0.999) [5].
PROCEDIMIENTO
Para llevar a cabo esta práctica, se empleó un cromatógrafo Shimadzu a las condiciones experimentales
que se muestran en el Cuadro 1.
 Detector UV
Temperatura 25 ºC
Longitud de onda 254 nm
Columna RP18 (150 mm x 4.6 mm ID x 5um)
Fase estacionaria No polar (ReMe2SiCl)
Volumen de inyección 10-25 uL
Flujo 1 mL / 1 min
Tiempo de corrida 15 minutos

En la parte experimental se prepararon distintos patrones a diferentes concentraciones (20, 40 y 60 ppm)

de cafeína y luego se realizaron las inyecciones para obtener la curva de calibración. Se tomaron 5 mL de
la muestra, se llevaron a una fiola de 50 mL y se enrazó con fase móvil, que actúa de portador de la
muestra, compuesta por metanol / agua (35:65).Posteriormente, se inyectaron los patrones y las muestras
en el equipo HPLC una por una.
RESULTADOS Y DISCUSIONES
A) ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO DE LOS PATRONES

Se inyectó el patrón 1 y con el cromatógrafo se procedió al inicio del análisis cromatográfico que se
evidenció en el papel (Figura 1). De la misma manera se realizó el análisis para los patrones 2 y 3
(Figura 2 y Figura 3, respectivamente).

Figura 1
Figura 2
Figura 3

DISCUSIÓN: En el patrón 1 se registró un tiempo de retención de la cafeína igual a 6.092 minutos. En

el patrón 2, 6.148 minutos, y en el patrón 3, 6.157 minutos. Estos valores indican que la concentración
de cafeína y el tiempo de retención de esta se encuentran en una relación directa.

B) CONSTRUCCIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

Los datos de las áreas registradas se muestran en la Tabla 1. Con estos datos de la Tabla 1 se
construyó la Figura 4, que representa la curva de calibración.

Tabla 1. Concentración y área del pico de los patrones

Concentración (ppm) Área del pico
PATRÓN 1 20 337042
PATRÓN 2 40 705820
PATRÓN 3 60 1057491

Figura 4

DISCUSIÓN: La Figura 4 está regida por una ecuación lineal, pues R2 tiene un valor muy alto de
0.9998.
R: coeficiente de correlación lineal

Área = 18011 Ccaf - 20331

C) CONCENTRACIÓN DE CAFEÍNA EN LA MUESTRA

Con el cromatógrafo se realizó la lectura del área del pico de la muestra (Figura 4), y empleando la
Figura 4 se determinó la concentración para la muestra. En la Figura 5 se observa cómo se halló el
dato de la concentración (ppm) de cafeína.
 Figura 5

Luego, se aplicó el factor de dilución:

50 𝑚𝐿 292.840 𝑚𝑔
29.2840 𝑝𝑝𝑚 𝑥 = 292.840 𝑝𝑝𝑚 =
5 𝑚𝐿 1000 𝑚𝐿

292.840 mg 1000 mL  En la bebida:

X mg 240 mL Ccaf = 70.2816 mg / 240 mL

*PORCENTAJE DE ERROR:

76.8 mg 70.2816 mg
− 240 mL
% error = 240 mL x100 %
76.8 mg
240 mL

% error = 8.49 %

DISCUSIÓN: El valor que presenta la etiqueta en la botella de bebida energética Volt es de 76.8 mg /
240 mL, y al compararlo con el resultado, se constató que este dato es correcto y se registró un
porcentaje de error aceptable. El error obtenido es por defecto, lo que quiere decir que se registró una
cantidad menor a la indicada. Este error pudo deberse a algunos errores en la preparación de patrones
o de la muestra, debido a estos errores, es recomendable realizar varias inyecciones de las muestras.
Esta concentración (70.2816 mg / 240 mL) indica que si se bebe la botella de energizante Volt que se
analizó (300 mL), se registrará un aumento del rendimiento cognitivo y mental. Por otro lado, al beber
la botella no se generará ningún tipo de intoxicación ni sobredosis; se necesitaría consumir más de 3
botellas para llegar a una intoxicación. Los niveles de cafeína en otras marcas de bebidas energizantes
han sido analizados y se presentan en el informe a modo de comparación [Anexo 3].

CONCLUSIÓN
Se concluye que al analizar la muestra de bebida energizante empleando el cromatógrafo se obtuvo una
concentración de cafeína igual a 70.2816 mg / 240 mL con un porcentaje de error por defecto tolerable.
Esta concentración indica que la bebida energizante Volt de 300 mL no genera ningún perjuicio a la salud
humana, pues no excede los 300 mg de cafeína; es más, promueve un aumento de rendimiento cognitivo
y mental, ya que supera el valor mínimo de 75 mg de cafeína.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] A. Gliszczyńska-Świgło and I. Rybicka: Simultaneous Determination of Caffeine and Water-Soluble
Vitamins in Energy Drinks by HPLC with Photodiode Array and Fluorescence Detection. Food Analytical
Methods. Vol. 8 (2015), pp. 139-146
[2] M. Aranda and G. Morlock: New method for caffeine quantification by planar chromatography coupled
with electropray ionization mass spectrometry using stable isotope dilution analysis. Rapid
Communications in Mass Spectrometry. Vol. 21 (2007), pp. 1297-1303
[3] Amos-Tautua, W. Bamidele Martin and E.R.E. Diepreye: Ultra-violet Spectrophotometric Determination
of Caffeine in Soft and Energy Drinks Available in Yenagoa, Nigeria. Advance Journal of Food Science and
Technology. Vol. 6 (2014), pp. 155-158
[4] S. Armenta, S. Garrigues and M. De la Guardia: Solid-phase FT-Raman determination of caffeine in
energy drinks. Analytica Chimica Acta. Vol. 547 (2005), pp. 197-203
[5] M. Talio, M. Acosta, M. Alesso, M. Luconi and L. Fernández: Quantification of caffeine in dietary
supplements and energy drinks by solid-surface fluorescence using a pre-concentration step on multi-
walled carbon nanotubes and Rhodamine B. Food Additives & Contaminants: Part A. Vol. 31 (2014), pp.
1367-1374
ANEXOS
[Anexo 1] European Food Safety Authority (EFSA) http://www.efsa.europa.eu/
[Anexo 2] La Procuraduría Federal del Consumidor (PROFECO) y la Comisión Federal para la Protección
contra Riesgos Sanitarios (COFEPRI) del Gobierno de México https://www.gob.mx/cofepris/
[Anexo 3] Defensoría del Consumidor del Gobierno de El Salvador https://www.defensoria.gob.sv/