Published: 21 January 2019

γδ TCR ligands: the quest to solve a 500-million-year-old mystery

As células T γδ (gama delta) representam um sub-grupo de células T que
possuem um receptor de células T (TCR, do inglês T cell receptor) distinto à
sua superfície. A maioria das células T têm um TCR composto por duas
cadeias glicoproteicas chamadas cadeias do TCR α- e β-. Nas células T γδ o
TCR é formado não por estas cadeias mas por outras, a cadeia γ- e a δ-.

Definição
As células T gama-delta constituem uma pequena população de células T que
expressam proteínas receptoras antigênicas que se assemelham àquelas das
células T CD4+ e CD8+, mas que não são idênticas. (ABBAS, LITCHMAN,
PILLAI, 2012)
Esses linfócitos do tipo T são capazes de reconhecer antígenos não proteicos
sem a participação do MHC (complexo principal de histocompatibilidade) de
classe I ou de classeII. Elas são populações que representam exceções à regra
segundo a qual células T só podem conhecer peptídeos associados ao MHC.
As células T gama-delta reconhecem tipos diferentes de antígenos, incluindo
algumas proteínas e lipídeos, bem como pequenas moléculas fosforiladas e
alquil aminas. Esses antígenos não são apresentados por moléculas do MHC,
e as células T gama-deltanão são restritas ao MHC. (ABBAS, LITCHMAN,
PILLAI, 2012)
Os receptores dos antígenos de muitas células gama-delta têm diversidade
limitada sugerindo que esse tipo de célula pode ter evoluído para reconhecer
um pequeno grupo de micro-organismos. Em razão dessa característica, essas
células T estão muitas vezes nos cruzamentos da imunidade adaptativa e
inata. Além disso, esses tipos de células são abundantes nos tecidos epiteliais,
como no trato gastrintestinal. (ABBAS, LITCHMAN, PILLAI, 2012)
A formação dessas células se dá por diferenciação das células-tronco
hematopoiéticas(CTH) pluripotentes e, no caso das células T gama-delta, que
são a maior parte derivadas das CTH do fígado fetal.(ABBAS, LITCHMAN,
PILLAI, 2012)
Na diferenciação, o Timo constitui o principal local de maturação das células T.
Os precursores que são progenitores que entram pelo timo pela corrente
sanguínea e as células T em desenvolvimento no timo são denominados
timócitos. Os timócitos mais imaturos são encontrados no seio subcapsular e
na região cortical externa do timo. Desses locais, os timócitos migram para o
córtex e através dele, onde ocorre a maioria dos eventos subsequentes da
maturação. É no córtex que os timócitos expressam, pela primeira vez, os TCR
gama-delta. Nos humanos, a expressão do TCR gama-delta começa em torno
de 9 semanas de gestação.(ABBAS, LITCHMAN, PILLAI, 2012)

As diferentes populações de células T gama-delta podem desenvolver em

momentos distintos, durante a ontogenia, contêm regiões variáveis diferentes,
residem nos diferentes tecidos e têm uma capacidade limitada para recircular
entre esses tecidos[u1] .(ABBAS, LITCHMAN, PILLAI, 2012)
Publicados: 21 de janeiro de 2019
Ligantes TCR γδ: a busca para resolver um mistério de 500 milhões de
anos,Benjamin E. Willcox &Carrie R. Willcox Nature Immunology volume
de 20 ,

Abstrato
As células T γδ foram retidas como uma linhagem durante a maior parte da
evolução dos vertebrados, são capazes de responder a desafios imunológicos
de maneiras únicas e têm crescente interesse terapêutico. No entanto, um
mistério central persiste: a identidade dos ligantes reconhecidos pelo receptor
de antígeno das células T γδ. Aqui discutimos os desafios inerentes à resposta
a essa pergunta, as novas oportunidades oferecidas por estudos recentes e os
critérios pelos quais o campo pode julgar o sucesso.
a Principal
"Seria tão bom se algo fizesse sentido para uma mudança."
Lewis Carroll, Alice no país das maravilhas
As células T γδ co-evoluíram ao lado de células T αβ e células B por
aproximadamente 400 a 500 milhões de anos de evolução dos
vertebrados 1 , 2 . Notavelmente, estudos com humanos, primatas e roedores
sugerem seu envolvimento em respostas a diversos desafios imunológicos,
tanto de natureza microbiana quanto não microbiana 3 . Isso inclui respostas
mediadas por células T V γ 9 + V δ 2 + a infecções bacterianas ou
micobacterianas in vitro e in vivo 4 através da detecção de antígenos
microbianos fosforilados (p-Ags). Além disso, as células V δ 2 - T humanas têm
sido associadas à resposta à infecção pelo citomegalovírus (CMV) 5, e estudos
de camundongos paralelos indicaram que as células T γδ podem exercer
proteção in vivo tão potente quanto a provocada pelas células T αβ ou células
B 6 , 7 . Além disso, as células T V δ 1 + humanas reconhecem diversas linhas
de células tumorais in vitro 8 , 9 ; além disso, análises de tumores humanos
indicaram que uma maior abundância de células T γδ está associada a um
prognóstico favorável 10 e, em camundongos, vários modelos de tumores
ligaram as células T γδ à imunovigilância 11 .
No entanto, apesar dessa biologia cada vez mais atraente, o reconhecimento
do antígeno pelas células T γδ é pouco compreendido em nível molecular. Há
ampla evidência de que as células T γδ podem ser estimuladas de maneira
dependente do receptor de antígeno das células T (TCR), embora isso seja
paralelo a algumas evidências da importância da estimulação extrínseca ao
TCR . Além disso, o reconhecimento mediado por γδ TCR parece ser
fundamentalmente diferente do reconhecimento pelas células T αβ, pois é um
complexo principal de histocompatibilidade (MHC) irrestrito, consistente com a
ausência frequente dos co-receptores MHC CD4 ou CD8 16 nos subconjuntos
de células T γδ e a presença de células T γδ em camundongos com deficiência
de MHC 17. Além disso, análises iniciais destacaram uma variedade de
comprimentos da região determinante da complementaridade CDR3δ que é
mais análoga a um repertório de anticorpos 18 . No entanto, sem dúvida o
'Santo Graal' da biologia das células T γδ - compreensão coerente dos alvos
antigênicos reconhecidos pelo TCR γδ que define o compartimento -
permaneceu indescritível.
O interesse crescente em explorar células T γδ terapeuticamente forneceu um
impulso adicional para abordar essa questão fundamental. Vários aspectos de
sua imunobiologia tornam as células T γδ um foco atraente para o
desenvolvimento terapêutico 19 . Isso inclui suas potentes habilidades efetoras,
a localização preferencial de alguns subconjuntos de células T γδ 3 , o fato de
que algumas células T γδ podem ser manipuladas farmacologicamente (como
V γ 9 + V δ 2 +Células T, que são ativadas por fármacos aminobisfosfonatos), e
seu reconhecimento irrestrito do MHC das células alvo, o que em princípio
permitiria a aplicação terapêutica em uma ampla gama de pacientes. Esse
interesse foi acentuado pelos dramáticos avanços clínicos na imunoterapia
contra o câncer nos últimos anos, incluindo bloqueio de pontos de verificação e
imunoterapias quiméricas para receptores de antígenos. Contudo,
notavelmente, esses esforços são sustentados por uma sólida compreensão do
reconhecimento do antígeno pelos TCRs αβ e receptores de células B.
Numerosos estudos tentaram identificar os ligantes 39 , 40. Apesar de
fornecerem informações importantes sobre a biologia das células T γδ, juntos
esses estudos destacam uma variedade eclética de ligantes candidatos que
exibem homologia, biologia e estrutura diversas e contribuem coletivamente
para uma paisagem confusa (Fig. 1) No entanto, aqui discutimos avanços em
duas áreas da biologia das células T γδ - mecanismos imunológicos
adaptativos e o papel de moléculas semelhantes ao ligante B7 do receptor co-
estimulador CD28 - que podem ajudar na navegação dessa paisagem
desconhecida. Esses desenvolvimentos destacam novas direções para a
identificação de ligantes e informam como a validade e a relevância fisiológica
dos ligantes candidatos são avaliadas, deixando o campo preparado para um
progresso substancial nessas questões mais desafiadoras. A apreciação das
dificuldades inerentes à identificação de ligantes γδ TCR é um importante ponto
de partida nesta análise.
Fig. 1: Ligantes candidatos selecionados para o TCR γδ.

Os candidatos aqui foram selecionados principalmente com base no

alinhamento com as três principais abordagens de identificação de ligantes
descritas no texto, embora, principalmente, as sintetases de RNAt tenham sido
selecionadas com base no alinhamento com o paradigma adaptativo
descrito. Outros ligandos candidatos que não puderam ser incluídos são os
seguintes: cadeia pesada livre MHC classe I 22 ; HLA-
B5802 34 ; IE k (ref. 30 ); MSH2 (homólogo de MutS 2) e HSP60 (proteína de
choque térmico 60) 24 ; ULBP4 (proteína 4 de ligação a UL16) 27 ; MICA 41 ; a
glicoproteína HSVgI 33 do vírus do herpes simplex ; ATPase-apolipoproteína-
AI 39 ; e insulina B: antígeno peptídico 9-2340 . PB, sangue periférico.
Uma perspectiva sobre os métodos atuais de identificação de ligantes
As tentativas de identificar os ligantes do TCR γδ são desafiadoras, pois
geralmente consomem tempo e são caras e geralmente são de alto risco. Além
disso, a maioria das abordagens introduz viés e pode ser difícil estabelecer a
relevância fisiológica de qualquer ligante candidato, particularmente nos
sistemas humanos. Portanto, embora a compreensão dos ligantes γδ TCR seja
universalmente reconhecida como crítica para o campo, a identificação dos
ligandos γδ TCR como uma atividade é naturalmente desincentivada e muitas
vezes é despriorizada por grupos de pesquisa compreensivelmente focados no
esforço de maximizar mensuráveis e mais confiáveis, resultados de pesquisa.
Apesar dessas advertências, vários estudos relataram ligantes candidatos do
TCR γδ . Embora vários métodos tenham sido usados nisso, três abordagens
comumente empregadas são particularmente dignas de atenção (Fig. 2) Vale a
pena considerar as vantagens e limitações de cada um.
Fig. 2: Várias abordagens para a identificação de ligantes candidatos para
o TCR γδ.

a , Uma abordagem centrada no TCR com base na transdução do TCR. Os

TCRs de interesse podem ser identificados a partir de clones de células T ou
estudos de repertório de TCR. b , Uma abordagem focada no ligante candidato
com base no uso de reagentes de coloração multímeros. Tet, tetrâmero; c ,
Mapeamento genético e abordagens baseadas em homologia. Os mapas
cromossômicos são baseados nos da ref. 43 . WT, tipo selvagem; Ig,
imunoglobulina.
Uma abordagem envolve a transfecção de genes que codificam TCR γδ
específicos em linhas repórter, que são usadas para rastrear reatividade celular
dependente de TCR a um painel de linhas de células alvo; este procedimento
foi utilizado para identificar EPCR (receptor da proteína C endotelial) 36 ,
anexina A2 29 , EphA2 (receptor 2 da efrina tipo A) 34 e cadeias pesadas livres
MHC classe I 22 como ligantes candidatos (Fig. 2a ). Essa estratégia é
relativamente imparcial, pois pode relatar reatividade dependente de TCR
mesmo para interações TCR – ligante de baixa afinidade 36. No entanto,
assume a reatividade do TCR γδ a ligantes hospedeiros ou em cenários de
infecção que podem ser modelados in vitro. Além disso, fatores extrínsecos ao
TCR, como a densidade de moléculas de adesão ou ligantes, podem
potencialmente impedir a reatividade às células alvo positivas para
ligantes 36 . Isso restringiu as abordagens de identificação a jusante da
geração de anticorpos monoclonais bloqueadores que inibem a ativação celular
de maneira restrita ao TCR γδ 22 , 29 , 34 , 36 - uma tarefa desafiadora. Numa
abordagem alternativa baseada no isolamento de clones derivados de linfócitos
intra-epiteliais 8 , as proteínas MICA e MICB relacionadas ao MHC foram
propostas como ligantes em potencial para V δ 1+ TCRs, uma proposta apoiada
pelo uso de linhas celulares que expressam V δ 1 + TCRs para coloração com
tetrâmero MICA e pelo reconhecimento de linhas celulares alvo MICA + ou
MICB + 41 e por estudos de ressonância plasmônica de superfície 37 . Uma
consideração crucial dessas abordagens é que é provável que a relevância
fisiológica das reatividades identificadas seja altamente dependente da
natureza dos TCRs estudados. Uma fonte potencial de viés usando essa ou
mesmo qualquer abordagem baseada em clones de células T envolve a
seleção de clonótipos de TCR gerados por expansão in vitro na presença de
células-alvo. De relevância, V δ 1 + reativo a MICA e MICBAs células T foram
obtidas após a expansão in vitro na presença de células linfoides humanas
C1R expressando MICA ou MICB 8 .
Uma segunda abordagem, previamente aplicada a moléculas apresentadoras
de antígenos CD1 e a fitoeritrina 20 , 28 , 32 , 35 , 38 , envolve uma seleção a
priori de um ligante candidato ao TCR γδ, seguido de coloração de populações
de células T γδ com ligante recombinante multimerizado (Fig. 2b ). Essa
abordagem é relativamente rápida e barata e, embora esteja restrita à detecção
de interações TCR-ligante forte o suficiente para suportar a coloração
multimérica, notavelmente, permitiu a detecção de interações diretas γδ TCR-
ligante que foram confirmadas tanto pela ressonância plasmônica de superfície
e pelas estruturas γδ TCR – ligante 28 , 35. No entanto, embora o uso de
tetrâmeros do MHC tenha revolucionado o estudo da biologia das células T αβ,
isso foi baseado em uma sólida base de evidências para a restrição de células
T αβ-MHC. Dada a incerteza sobre os ligantes de TCR γδ, o método sem
dúvida sofre forte viés de seleção na predeterminação do ligante candidato
para as células T γδ. Portanto, a relevância fisiológica das populações de
células T γδ específicas para CD1 e ficeritrina detectadas por essa abordagem,
que são relativamente baixas em frequência (Fig. 1 ), permanece uma questão
em aberto. No entanto, moléculas codificadas no hospedeiro, como CD1c e
CD1d (ou, por extensão, T10 e T22) podem realmente representar ligantes
fisiológicos reais, respostas às quais podem ser aprimoradas em várias
configurações infecciosas ou tumorais ou em tecidos periféricos. De relevância,
CD1 +as células T killer naturais são relativamente baixas em frequência no
sangue periférico, mas o fígado mostra enriquecimento considerável para
essas células 42 .
Uma terceira via envolvendo abordagens genéticas ou baseadas em homologia
(Fig. 2c ) também se mostrou proveitosa. Experimentos com mapeamento
genético e camundongos knockout identificaram moléculas essenciais para a
seleção ou localização de subconjuntos de células T γδ de camundongos
específicos (identificando inicialmente Skint-1, necessário para a seleção de
células T epidérmicas dendríticas (DETCs) 21 ) e que representam ligandos
candidatos do TCR y. Focada apenas na identificação de fatores hospedeiros,
essa abordagem destacou vários ligantes candidatos do tipo B7 ou Skint para
TCRs γδ, alguns dos quais estão ausentes em humanos (Skint-1) 21 e outros
presentes em humanos e camundongos (membros das famílias butirofilina
(BTN) ou butirofilina (BTNL), que são homólogos do Skint-1)31 , 43 , 44 . Dentro
desse último grupo, estão as moléculas humanas de BTN3A 26 que foram
identificadas como sendo críticas para o reconhecimento mediado por p-Ag
pelascélulasV γ 9 + V δ 2 + T. Embora essa abordagem tenha sido bem-sucedida
na identificação de moléculas com efeitos potentes na seleção ou ativação de
células T γδ, uma advertência importante para esses ligantes candidatos é a
atual ausência de evidência publicada inequívoca de ligação direta ao TCR
γδ. Até que tais dados sejam obtidos, permanece a possibilidade de que essas
moléculas do tipo B7 possam atuar como acompanhantes de ligantes de TCR
γδ diretos ainda não identificados ou, alternativamente, como moléculas co-
estimuladoras específicas de subconjuntos.
Em resumo, além de seus desafios inerentes, todas as abordagens de
identificação de ligantes apresentam viés e, como resultado, a questão de
como avaliar a validade dos ligantes candidatos é crítica.
Critérios fundamentais para a avaliação dos ligandos γδ TCR candidatos
Com base no entendimento atual da imunobiologia das células T γδ e da
imunobiologia das células T αβ, propomos vários fatores como dignos de
investigação para ligantes candidatos emergentes, sendo a demonstração mais
óbvia e crítica da interação direta entre TCR e ligante. Notavelmente, não
pretendemos que as linhas adicionais de investigação descritas nas cinco
seções abaixo sejam interpretadas como etapas obrigatórias para validação de
ligantes; no entanto, acreditamos que eles serão úteis para ajudar os
pesquisadores a avaliar a relevância fisiológica dos ligantes propostos.
Interação direta entre TCR e ligante candidato
A demonstração da interação direta do TCR deve ser um requisito estrito para
a validação formal de um ligante candidato ao TCR, e isso foi fornecido para
vários ligantes até o momento . Notavelmente, a faixa de afinidades para a
interação γδ TCR – ligante é desconhecida, mas já inclui valores constantes de
dissociação de ~ 100 μM (ref. 36), que é substancialmente menor que o das
interações αβ TCR – peptídeo-MHC. A alta sensibilidade necessária para a
detecção de interações de baixa afinidade significa que os controles
experimentais são primordiais, e uma interação já relatada entre TCR e
BTN3A1 foi contestada 45 , 46 . É concebível que algumas interações TCR-
ligante possam ter afinidades muito baixas para serem detectadas em solução,
mas, no entanto, podem ser fisiologicamente relevantes. De relevância, a
interação ectodomínio CD4-MHC classe II está na faixa milimolar, mas é
considerada importante para o aprimoramento das respostas das
+
células T CD4 47 . Essa interação foi indetectável em solução, mas uma
afinidade bidimensional foi medida em bicamadas lipídicas suportadas
funcionalizadas47 , uma abordagem que pode ser útil para algumas interações
γδ TCR – ligante de baixa afinidade. Por outro lado, a demonstração da
interação direta do TCR não deve ser assumida para indicar relevância
fisiológica.
Natureza do modo de ligação da interação TCR-ligante candidato
O conjunto limitado de regiões variáveis da cadeia γδ TCR γ e da cadeia δ
(V γ e V δ , respectivamente) e sua expressão nas populações de células T γδ
em locais anatômicos distintos no mouse é discutivelmente consistente com um
conjunto limitado de códigos codificados pelo hospedeiro
ligantes 48 . Conforme descrito abaixo, as moléculas BTN e BTNL atualmente
fornecem os candidatos mais convincentes para esses auto
,
ligantes 21 31 . Notavelmente, eles têm efeitos poderosos na seleção de
algumas dessas populações 21 , 49 e são críticos para o reconhecimento de
células alvo s por V γ 9 + V δ 2 + do tipo humano inatoCélulas T 26 e um
subconjunto de células T γ 4 + T do cólon humano 31 . Potencialmente, esses
eventos de reconhecimento podem ser conduzidos substancialmente por CDR1
e / ou CDR2 ou regiões de estrutura dos domínios variáveis TCR específicos
envolvidos, embora algumas populações respondentes exibam regiões CDR3
altamente restritas, como nos DETCs 50 e no TCRγ CDR3 de
V γ 9 + V δ 2 + células T 51 . Por outro lado, estudos publicados de populações
de células T do tipo adaptativo humano que inicialmente expressam regiões
CDR3 altamente diversas (Fig. 3a) são consistentes com a proposta de que os
eventos de reconhecimento de ligantes acionados por CDR3 têm um papel
fundamental em sua biologia 52 , 53 , 54 (Fig. 3b, c ). Nesse contexto, a
compreensão do modo de ligação das interações γδ TCR – ligante e, em
particular, o papel das alças codificadas pela linha germinativa (CDR1 e CDR2)
versus a das alças recombinadas (CDR3) no reconhecimento de ligantes, é,
portanto, altamente relevante.
Fig. 3: Engajamento do ligante no contexto da função adaptativa das
células T γδ.

a , Características fundamentais das células T γδ humanas adaptativas. Isso se

aplica tanto às células T V δ 1 + (mais geralmente V δ 2 - ) quanto às células
T γ 9 - V δ 2 + . O subconjunto de células ingênuas γδ T expressa marcadores
homing sugestivos da capacidade de recircular entre sangue e linfa. Após a
exposição a um estímulo de stress relevante (por exemplo, infecção, viral),
seleccione clonotipos dentro do TCR-diversificada γδ T ingénuos compartimento
da célula estão previstas como passando por activação de TCR-dependente e
subsequente expansão clonal ao lado de diferenciação concomitante em um
T efectoraestado celular caracterizado por uma rápida cinética da resposta ao
TCR, potencial de produção citotóxica e citocina aumentada, e melhora do
retorno aos tecidos periféricos. Perf, perforina; GzmA, granzima A; GzmB,
granzima B. b , TCR desencadeando em células T ingênuas , provavelmente
iniciadas por interações do TCR com ligantes cognatos nas células-alvo,
promove expansão clonal e diferenciação completa no estado da
célula T efetiva . Dadas semelhanças fenotípicas com células T CD8 + ingênuas , é
concebível que a sinalização co-estimulatória seja importante no início da
ativação. c , efetor de Tas células migram para o endotélio e tecidos e contribuem
para a vigilância tecidual quanto a sinais de estresse, infecção ou
tumorigênese, com o potencial de montar potentes citocinas e respostas
citotóxicas. NKR, receptor natural killer; LFA-1, integrina α L β 2 .

Fenótipo e frequência de populações de células T reativas a ligantes

O fenótipo das células T e sua frequência no pool de linfócitos estão
intimamente ligados às suas habilidades funcionais, incluindo status de
ativação e diferenciação, propriedades de tráfego e capacidade
efetiva. Portanto, caracterizar o fenótipo e a frequência das populações de
células T reativas ao ligando-TCR provavelmente será crítico na avaliação do
contexto imunobiológico do reconhecimento do ligante. Embora seja de
relevância geral, essa é provavelmente uma consideração particularmente
premente para populações de células T γδ humanas adaptativas 52 , 53 , 54 , 55,
para os quais foi relatada uma transição de um fenótipo ingênuo para um
fenótipo efetor ao lado da expansão clonotípica, iniciada por estímulos de
estresse relevantes, e para os quais essa transição pode estar intimamente
ligada à capacidade de abrigar tecidos periféricos 56 . Como um exemplo, os
estudos publicados de V ô 1 + células T 54 evidenciaram importantes
semelhanças fenotípicas entre V δ 1 + (T ingénuos células
+
T ingénuas subconjuntos de células) e células CD8 T ingénuos subconjuntos de
células (CCR7 + CD62L + CD28 + CX3CR1 -, e granzima-negativa e perforina-
negativa), e entre V δ 1 + células T efetoras (células T efetoras ) e subconjuntos de
células T CD8 + com memória efetiva que reexpressam o marcador de células
ingênuas CD45RA após estimulação antigênica (CCR7 - CD62L - CD28 -
CX3CR1 + e positivo para granzima e positivo para perforina). Apesar dessas
semelhanças, as estratégias de bloqueio da citometria de fluxo comumente
usadas para o delineamento de subconjuntos de células T αβ podem não ser
diretamente aplicáveis às células T γδ, e estratégias modificadas têm se
mostrado altamente informativas 54 .
Considerações baseadas em repertório
Compreender como os clonótipos γδ TCR que reconhecem um determinado
ligante candidato se alinham ao repertório γδ TCR como um todo é uma
consideração fundamental na avaliação da função fisiológica potencial. Essas
informações têm implicações para se (dependendo dos requisitos moleculares
da interação) é provável que o evento de reconhecimento seja recapitulado
entre populações de células T γδ pré-expandidas de tipo inato ou com
portadores de clonótipos públicos ou se reflete populações adaptativas que
possam ser dependentes em especificidades privadas. A crescente base de
conhecimento do repertório γδ TCR já começou a lançar luz sobre essas
possibilidades. Em particular, o repertório de TCR de V γ 9 + V δ 2 + humanoAs
células T parecem ser prototípicas de uma biologia do tipo inata, pois são semi-
invariantes, envolvem comprimentos restritos para CDR3γ e CDR3δ em
relação às de outros subconjuntos, e apresentam uma alta (~ 80% ou mais)
proporção de público Clonótipos V γ 9 evidentes desde o
nascimento 51 , 53 . Consistente com uma biologia do tipo inato, as células
T γ 9 + V δ 2 + apresentam reatividade universal mediada por TCR ao p-Ag. Em
contraste, o repertório de TCR de ambas as células V δ 1 + T 54 , 57 e V γ 9 -
V δ 2 +As células T 53 são altamente privadas, mesmo na avaliação de
clonótipos expandidos, e apresentam diversos comprimentos e sequências de
regiões CDR3, especialmente para TCRδ; esses recursos podem fornecer um
modelo viável para esses subconjuntos de células T γδ com uma imunobiologia
adaptativa fundamentalmente diferente.
Expressão do ligante candidato
Compreender o padrão de expressão tecidual de um determinado ligante
candidato, bem como como ele é regulado ou modificado após a exposição a
estímulos relevantes ao estresse, também são considerações cruciais em
consideração ao contexto fisiológico no qual o reconhecimento pelas células T
γδ ocorre.

Uma perspectiva adaptativa emergente em ligantes antigênicos γδ TCR

Embora o compartimento das células T γδ tenha fornecido um paradigma
chave para as células T inatas 58 , os dados publicados forneceram fortes
evidências de uma biologia adaptativa nas células T γδ humanas V δ 1 + (mais
geralmente nas células V δ 2 - T) e V γ 9 - V δ 2 + células T humanas
γδ 53 , 54 , 57 . Isso já foi revisado 52 , 55 , portanto será resumido apenas
brevemente aqui (Fig. 3a ). Em essência, ambos os subconjuntos adotam
inicialmente um repertório de TCR altamente diversificado e privado 53, 54 , ao
lado de um fenótipo naive consistente com recirculação entre o sangue e
compartimentos linfáticos. No entanto, eles exibem o potencial de expansão
clonotípica profunda, que ocorre ao lado da diferenciação em um fenótipo de
células efetoras T 52 , 53 , 54 (Fig. 3a ). A expansão clonal resulta em populações
de células efetoras T de vida longa, altamente focadas no TCR, com produção
substancial de citocinas e potencial citotóxico e capacidade aprimorada de
hospedar o tecido periférico 53 , 54 (Fig. 3c ). Os estímulos capazes de obter
tais respostas incluem, entre outros, infecções por CMV53 , 57 . Evidências
crescentes sugerem que as células T γδ de camundongo também podem
montar respostas adaptativas à infecção pelo CMV 6 , 7 e à malária 59 , e
esses modelos fornecerão oportunidades para abordar aspectos fundamentais
dos paradigmas imunobiológicos adaptativos que são inviáveis no ambiente
humano.
Uma implicação importante dos resultados observados acima é que, como
previsto por Burnet para as células B 60 e estendidas para as células T αβ, as
expansões clonais adaptativas das células T γδ são dirigidas pela 'ocupação do
receptor'; isto é, pelo acoplamento γδ TCR – ligante. Se isso se provar correto,
segue-se que a capacidade de clonótipos TCR γδ individuais de reconhecer
ligantes fisiologicamente relevantes provavelmente governa diversos aspectos
da biologia de tais subconjuntos (como respostas homing, capacidade efetor e
recall) e está subjacente a uma nova forma de MHC- reconhecimento irrestrito
de antígenos de células T adaptativas (Fig. 3c ).
Quais são as implicações dessa imunobiologia adaptativa para o
reconhecimento de ligantes pelo TCR γδ? Primeiro, enfatiza a relevância do
fenótipo celular e a frequência do (s) clonótipo (s) reativo (s) a
ligantes. Notavelmente, vários ligantes para células V δ 2 - T, incluindo
CD1d 20 , 35 , CD1c 32 e fitoeritrina 38 , refletem populações de células T de
frequência extremamente baixa que, embora sejam detectadas na maioria das
pessoas, podem representar T ingênuoclonótipos celulares. Embora seja
improvável encontrar fisiologicamente a proteína algial da proteína algeritrina, a
reatividade à fitoeritrina pode refletir um potencial para o reconhecimento de
antígenos estranhos no diverso repertório de TCR γδ. Estudos adicionais de
vários tecidos antes e após o tratamento com estímulos diversos podem ser
necessários para estabelecer a relevância fisiológica das respostas dirigidas a
CD1c ou CD1d, e claramente a natureza do lipídeo ligado a CD1 pode
influenciar essas reatividades 28 , 35 . Relacionado a uma resposta de
frequência consideravelmente mais alta, está o EPCR, que foi reconhecido por
um clonótipo que se expandiu para 25% do total de células T após infecção por
CMV em um único paciente e adotou um fenótipo de superfície celular
consistente com o status das células efetoras T36 . Segundo, o atual conjunto de
dados prevê que ligantes antigênicos para subconjuntos adaptativos de células
T γδ serão reconhecidos de maneira dependente de CDR3 (Fig. 3b ), e estudos
de vários ligantes confirmados são consistentes com essa
, , , , ,
hipótese 20 28 32 35 36 38 . De relevância para futuros esforços de
identificação, estudos publicados identificaram conjuntos de TCRs γδ humanos
com regiões CDR3 distintas, cuja emergência norepertório de
células efetoras Testá ligada a um estímulo infeccioso específico 53 , 57. Terceiro,
o padrão de expressão, regulação ou modificação do ligante é provavelmente
crítico para o modo como as células T γδ 'detectam' infecção ou desregulação
celular. É importante notar que o EPCR não foi induzido pela infecção por
CMV, mas sua expressão constitutiva nas células endoteliais permitiu o
reconhecimento dependente de TCR de células-alvo infectadas por CMV por
meio de uma 'assinatura de estresse' multimolecular independente de
TCR 36 que incluiu um aumento induzido por vírus na expressão de o ligando
da integrina ICAM-1. Essa detecção também pode integrar sinais do receptor
natural de células assassinas e alterações relacionadas ao estresse na
expressão de ligantes para esses receptores 61 (Fig. 3c ).
Notavelmente, existem várias perguntas não respondidas sobre o paradigma
adaptativo descrito acima. Parece não favorecer inerentemente os ligantes γδ
TCR hospedeiros ou estranhos, e ambas as categorias de ligantes foram
propostas para células V δ 2 - T. Além disso, o intervalo de ligandos γδ TCR
reconhecidos não é claro; no entanto, estudos de células T V δ 1 + e V γ 9 -
V δ 2 + destacaram sequências CDR3 extremamente distintas no pool de
células efetoras T 53 , 54, o que aumenta a forte possibilidade de que, quanto ao
receptor de células B, possa existir uma gama diversificada de
ligantes. Finalmente, embora o conjunto de dados atual sugira a necessidade
de mecanismos que estabeleçam tolerância a subconjuntos adaptativos, não
está claro o que eles envolvem. Notavelmente, os subconjuntos de células T do
timo pediátrico humano são dominados pelas células T V δ 1 + γδ 62 . Embora
exista pouca evidência de tolerância a deleção, a persistência de células V δ 2 -
expressando TCRs específicos para os ligantes sugere que provavelmente
outros mecanismos de tolerância operem (como limiares de ativação alterados
para clonótipos auto-reativos). Estudos das células V γ 9 - V δ 2 + subjacentes à
polimiosite e sugerem o reconhecimento de autoantígenos propostos para essa
condição 23 também destacam a possibilidade de que, como nos
compartimentos de linfócitos adaptativos convencionais, tais mecanismos de
tolerância possam quebrar, com consequências para doença humana 63 , 64 .
Finalmente, a existência de populações de células efetoras T prolongadas e
altamente focadas em TCR, que surgem entre essas populações adaptáveis de
células T γδ, sugere fortemente uma contribuição contínua para a memória
imunológica, apoiada por estudos de camundongos infectados com CMV 6 , 7 ,
que potencialmente envolve encontro de antígeno recorrente ou
persistente. Nesse contexto, o conjunto de dados atual destaca um caso
convincente para estudos de identificação de ligantes alinhados ao repertório
de TCR e sugere que várias especificidades podem ser necessárias para
revelar os princípios subjacentes. Além disso, essa comparação destaca a
necessidade de entender em que medida as características adaptativas do
V δ 2 humano - e V γ 9- As células V δ 2 + se aplicam às células T γδ de
camundongo. Claramente, o estabelecimento da existência de uma biologia
adaptativa paralela de células T γδ em camundongos permitiria que aspectos
fundamentais do paradigma fossem abordados e que não podem ser viáveis
em humanos. De relevância, estudos publicados em camundongos
demonstraram que as células T γδ compartilham propriedades migratórias
semelhantes às das células T αβ CD8 + 65 .
Moléculas do tipo B7 como ligantes candidatos do TCR γδ
Foi demonstrado que moléculas do tipo B7, incluindo moléculas Skint-1, BTNs
e BTNL, exercem profunda influência na biologia de certas populações de
células T γδ em camundongos e seres humanos e emergiram como candidatos
intrigantes aos ligantes do TCR γδ candido (fig. 4 ). O Skint-1 é crítico para a
seleção tímica e para o retorno dos DETCs 21 , um subconjunto de
camundongo residente na pele semi-invariante (Fig. 4a ). A expressão de
BTN3A1 nas células alvo é crítica para a detecção mediada por p-Ag pelas
células V γ 9 + V δ 2 + T humanas 26 (Fig. 4b), que parecem adotar uma
imunobiologia do tipo inata 51 , 53 . Demonstrou-se que o emparelhamento
BTNL1-BTNL6 medeia a seleção extra-tímica de células T Vγ7 + γδ no intestino
do mouse, e o BTNL3-BTNL8 pode ter um papel semelhante nas células
T V γ 4 + γδ em humanos 31 (Fig. 4c )
Fig. 4: Moléculas BTN e BTNL na seleção e ativação de células T γδ.

a , Papel potencial do Skint-1 na seleção e ativação dos DETCs. mTEC, célula

epitelial tímica medular; Egr3, fator de transcrição; CD45RB, marcador
celular; Tbet, fator de transcrição; PALPs, agregados ricos em tirosina
fosforilados, localizados em projeções; UV, ultravioleta. b , Papel potencial do
BTN3A1 na detecção de p-Ag pelas células V γ 9V δ 2 + T. c , Papel potencial
das moléculas de BTNL como ligantes diretos para o TCR γδ em linfócitos
intra-epiteliais intestinais (IEL).
Se essas moléculas do tipo B7 representam ligantes diretos do TCR γδ é uma
questão importante. Embora Skint-1 seja expresso no timo e nos queratinócitos
da pele 66 , consistente com um papel na estimulação direta mediada por TCR
in situ 67 , nenhum estudo relatou sua ligação direta ao TCR, embora os
anticorpos para Skint-1 inibam a maturação dos progenitores do DETC na
cultura de órgãos tímicos fetais 68 . Por outro lado, outro estudo relatou tanto a
interação direta do ectodomínio BTN3A1 com um
V γ 9 + V δ 2 + TCR responsivo a p-Ag quanto a apresentação direta de p-Ag
pelo domínio V da imunoglobulina BTN3A1 46. No entanto, ambas as
conclusões foram contestadas 45 , 69 , e dados convincentes indicam que o p-
Ag se liga ao domínio B30.2 intracelular do BTN3A1 45 (Fig. 4b ), o que sugere
que o papel do BTN3A1 é um sensor de p-Ag . Embora os eventos moleculares
que seguem a ligação do p-Ag sejam incertos, uma possibilidade é que isso
resulte em uma alteração conformacional no ectodoma de
BTN3A1 70 . Alternativamente, após a ligação do p-Ag, o BTN3A1 pode facilitar
o recrutamento de um ligante direto do V γ 9 + V δ 2 + TCR ('fator X')
(Fig. 4b) Essa hipótese é consistente com estudos genéticos que destacaram
genes adicionais nas moléculas codificadoras do cromossomo 6 que permitem
a detecção de p-Ag mediada por BTN3A1 em células-alvo não
humanas 71 . Os achados de que BTN, BTNL e possivelmente moléculas
semelhantes a Skint podem ser dímeros obrigatórios e podem heterodimerizar
também são uma consideração importante para futuras tentativas de
identificação de ligantes 44 , 72 . De relevância, um estudo publicado de
heterodímeros BTNL incluiu abordagens de transdução que fornecem
indiscutivelmente a evidência mais convincente de que essas moléculas podem
interagir diretamente com o γδ TCR 31 (Fig. 4c ), e isso justifica uma
investigação mais aprofundada.
Relevante à validação de moléculas do tipo B7 como ligantes diretos das
observações baseadas em TCR γδ, molecular, celular e no repertório de TCR
sobre as respectivas populações de células T, estabeleceu restrições sobre as
características de potenciais ligantes, incluindo seus modos de ligação ao
TCR. Para células T V γ 9 + V δ 2 + , sua resposta universal mediada por
BTN3A1 aos p-Ags sugere que os ligantes candidatos provavelmente se
ligariam a uma ampla gama de clonótipos de TC γ 9 + V δ 2 + TCR e com base
na mutagênese Como resultado, essa interação provavelmente envolveria
vários loops de CDR do TCR 73 . Em contraste, os TCRs do
V γ intestinalAs populações 7 + (camundongo) e populações V γ 4 + (humana)
têm a hipótese de interagir diretamente com os heterodímeros BTNL1 – BTNL6
e os heterodímeros BTNL3 – BTNL8, respectivamente, via regiões codificadas
pela linha germinativa da cadeia V γ 31 (Fig. 4c ) e , consistente com isso, os
camundongos knockout BTNL1- e BTNL6 exibem uma redução drástica nas
células V γ 7 + T intestinais 49 . Finalmente, a perda de Skint-1 em
camundongos leva a uma completa ausência de DETCs residentes na pele
canônica 66 . Embora isso seja consistente com a interação direta do DETC
semi-invariante V γ 5 + V δ1 + TCR com a molécula Skint-1, a possibilidade
Skint-1 pode atuar como uma molécula co-estimulatória específica de um
subconjunto de células T γδ ou, alternativamente, como acompanhante de um
ligante direto de TCR 49 .
Embora evidências convincentes agora apóiem a proposta de um papel
importante para moléculas do tipo B7 na seleção, retorno e ativação de certos
subconjuntos de células T γδ, os mecanismos envolvidos não são claros. Os
focos atuais de investigação incluem as hipóteses opostas de que, após uma
alteração conformacional desencadeada por p-Ag em seu domínio B30.2, o
BTN3A1 atua como um ligante direto do TCR V γ 9 + V δ 2 + ou recruta um
ligante TCR direto independente 69 , 70. Embora o papel das moléculas BTNL
ou Skint-1 na regulação das populações de células T γδ associadas ao tecido
seja pouco compreendido, dados sobre BTNL3 e BTNL8 humanos e BTNL1 e
BTNL6 de camundongos indicam estimulação mediada por TCR de células T
γδ mediadas por V γas regiões de maneira não-clonotípica são
impressionantes, e o modo de ligação da linha germinativa proposto é uma
reminiscência do reconhecimento de TCR-superantígeno. Assim como a
necessidade remanescente de confirmação biofísica da ligação ao TCR γδ, as
consequências funcionais de tais interações propostas não são claras, mas
podem incluir um papel homeostático na manutenção de células T associadas
a tecidos. Isso pode envolver a transmissão de sinais de normalidade para
células T epiteliais γδ, particularmente se a expressão de moléculas Skint-1 ou
BTNL for alterada pelo estresse celular. De relevância, a expressão de várias
moléculas de BTN e BTNL foi relatada como alterada na inflamação intestinal e
no câncer de cólon em camundongos e humanos 74. Não está claro se
estímulos de estresse, como inflamação ou carcinogênese, podem também
regular positivamente diferentes ligantes de TCR γδ antigênicos reconhecidos
de maneira dependente de CDR3 e, nesse caso, se estes podem ser
reconhecidos independentemente das moléculas relevantes de tipo B7 ou por
co-envolvimento . 4 ). Ainda não está claro se o envolvimento crítico de
moléculas do tipo B7 na função de subconjuntos de células T γδ associadas a
tecidos se aplica a outros tecidos que não a pele ou o intestino. Também não
está claro se esse envolvimento implica necessariamente uma biologia de tipo
inato ou, alternativamente, pode se sobrepor a uma biologia adaptativa (como
exemplificado pelas células V δ 1 + T humanas 52)) Claramente, para BTNL3 e
BTNL8, o modo de reconhecimento independente de CDR3 proposto não
explica as dramáticas expansões clonais observadas para as células
T V δ 1 + T como um todo 52 .
Sumário
Descobertas focadas nos processos adaptativos e na biologia das moléculas
da superfamília B7 da BTNL sugeriram novos caminhos a serem explorados na
busca de resolver um dos mistérios mais duradouros da imunologia de
vertebrados: a natureza dos ligantes reconhecidos pelas células T γδ. Embora
as rotas adiante continuem desafiadoras e possam exigir diferentes
abordagens experimentais, novos paradigmas de reconhecimento de células T
provavelmente surgirão, assim como, finalmente, novos caminhos para a
exploração terapêutica.