UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. DECANA DE AMÉRICA.

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Química Básica y Aplicada

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE
ALTA PERFORMANCE (HPLC)
MSc. Celia Vargas
Docente Auxiliar
Separación y purificación
Separación y purificación
Cromatografía de papel Ascendente APC
(PC) Descendente DPC
Circular CPC
Preparativa PPC
Cromatografía de capa fina (TLC) Analítica TLC
Preparativa PTLC
Bidimensional BTLC
Cromatografía líquida-líquida (de Adsorción ---
columna: CC) Partición ---
Exclusión SEC
Flash FC
Al vacío VLC
Intercambio Iónico IEC
Alto rendimiento HPLC
Medio y bajo rendimiento MPLC, LPLC
Ultra Rendimiento [F(Presión)] UHPLC
Cromatografía en contracorriente A la gota DCCC
(CCC o CPC) Alta velocidad HSCCC
Rotación locular RLCCC
Cromatografía Gas-Líquido
(GLC)

Lock, O.R, 2016, Investigación Fitoquímica, Lima – Perú, K&J Soluciones Graficas.
Caracterización utilizando Tecnologías
Avanzadas
❑ Espectrometría de absorción ultravioleta-visible.

❑ Espectrometría de absorción en el infrarrojo cercano y medio.

❑ Cromatografía de gases.

❑ Cromatografía de líquidos.

❑ Espectrometría de Masas.

❑ Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear.

 La Cromatografía
Mijaíl Tswett (1903) su trabajo de llenar un tubo con
inulina y un extracto de éter de petróleo con clorofilas,
donde las clorofilas a y b se separan dio inicios a la
cromatografía
Chromos y Graphos

La cromatografía desde sus orígenes es una técnica de

separación que se transformó en técnica de análisis
gracias a la suma de dispositivos de detección para las
especies que se separaban.

Es así como la Cromatografía se ha convertido en una

técnica analítica de primer orden para separar, identificar
y cuantificar compuestos presentes en una muestra
Imágenes autorizadas por RPA Perú,
distribuidor de Thermo Scientific
 Columna empacada de
separación

Extracto de ideal de
dos compuestos

Finalmente se obtienen los dos

compuestos separados
 Términos Aplicados en la Cromatografía
1. Cromatograma

2. Picos de Elución: Campana de Gauss

3. Asimetría de Picos

4. Platos Teóricos

5. Coeficiente de Partición (K)

6. Eficiencia de Columna:

5.1. Eficiencia Teórica (Número de Platos Teóricos)

5.2. Números de Platos Específicos (Eficiencia Real)

5.3. Altura Equivalente de P.T (HETP)

6. Parámetros de Retención:

6.1. Tiempo de Retención

6.2. Volumen de Retención

6.3. Volumen Muerto

6.4. Factor de Retención (F. Capacidad, k)

7. Factor de Separación (Selectividad)

8. Factor de Resolución (Rs)

9. Teoría de Separación: Ecuación Van Deemter

Cromatograma
Expresión física del proceso de separación.
Traduce en la pantalla la evolución, en función del tiempo, de todos los
analitos presentes en la muestra.
La Línea Base corresponde al trazo ausente de compuestos eluídos.
Representa todos los picos detectables que hayan en la mezcla de
análisis.
Picos Gaussianos
Un pico ideal en un cromatograma: Función de la ley de distribución
normal de los errores aleatorios (curva de Gauss).
1 𝑥−𝜇 2
𝑦= ∗ 𝑒𝑥𝑝 −
𝜎 2𝜋 2𝜎 2

Donde:
y : la señal en función del tiempo x
σ : desviación estándar
σ2: Varianza σL

µ : tiempo de retención
Asimetría
• Los Cromatogramas reales presentan deformación de los picos
gaussianos.

• Factor de asimetría (Fa) y Factor Cola (Fc) se miden al 10% de la

altura del pico cromatográfico.

𝑏
• 𝐹𝑎 =
𝑎

𝑎+𝑏
• 𝐹𝑐 =
2𝑎
Teoría de Platos Teóricos
Teoría estocástica También llamado Modelo de Platos de Craig
Es la mas conocida y antigua, se basa en enfoques estáticos y describía de forma
practica y simple la migración en la columna (Actualmente esta en desuso).
Describe de forma sencilla la separación, considerando desplazamiento
progresivo del soluto, en una serie de etapas distintas de adsorción/desorción.
AEPT o H (Altura equivalente aun plato teórico)
N (numero total de platos contenidos en una columna de longitud L)

𝐿
H=
𝑁
Platos Teóricos

La teoría de platos proviene de un enfoque previo el de Martin y Synge (Premios Nobel en

química, 1952), quienes describieron la cromatografía por analogía con destilación
Coeficiente de Partición (K)
También llamado Coeficiente de Distribución (K)
Cuantifica la relación de concentración de cada compuesto
entre las dos fases presentes
𝐶𝑆 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑆𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝐹𝐸
K= =
𝐶𝑀 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑆𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝐹𝑀

Los valores de K son muy variables, son elevados cuando la

fase móvil es un gas y reducido cuando las dos fases están
en estado condensado.
 Eficiencia de Columna
EFICIENCIA TEORICA:
Viene a ser representada por el número de platos teóricos

σ2 : Varianza temporal
H : Altura de platos
N : Número de platos

𝐿 𝐿2 𝑡2𝐿
H= N= o N=
𝑁 𝜎2 𝐿 𝜎2 𝐿

W = 4σ
W1/2= 2.35σ
 Eficiencia de columna
EFICIENCIA REAL:
Se debe tener en cuenta el Tiempo de Retención Ajustado (t’R)
t’R = tR – tM

ALTURA EQUIVALENTE DE PLATO:

La altura equivalente de un plato teórico H, se calcula para los compuestos de
referencia con el fin de permitir una comparación de columnas de diferentes
longitudes.
Parámetros de Separación
Tiempo de retención

Tiempo de Retención Corregido:

t’R = tR – tM

Volumen muerto: Es el tiempo necesario para eluir una sustancia no

retenida desde el inyector, pasando por la columna hasta el detector.

Volumen de Retención: El volumen de retención VR de un analito

representa el volumen de fase móvil necesario para permitir su
migración a lo largo de la columna desde el momento de la entrada
hasta el momento en que sale.
Parámetros de Separación
Factor de retención “k” (antes llamado: factor de capacidad)

Factor de Separación (selectividad) “α” : donde α > 1;

Parámetros de Separación
Resolución: Rs,

Una simulación de picos cromatográficos utilizando dos curvas

Gaussianas idénticas, que se separan lentamente. Los valores de R
mostrados en los diagramas. A partir de un valor de R = 1.5, los
picos se pueden considerar como una línea de base resuelta, el
valle entre ellos es alrededor del 2 por ciento.
Factor de Separación (Selectividad)
El factor de capacidad α de una columna, es un término que define que
tan selectiva es una columna para separar dos picos.
La selectividad de una columna para dos especies A y B se define como:
 Ecuación Van Deemter
A: Término de Empaque (Difusión turbulenta)
B: Término de Difusión Longitudinal
C: Término de Transferencia de masa
•HETP = una medida del poder de
resolución de la columna [m]
•A = parámetro de difusión
turbulenta, relacionado con la
canalización a través de un embalaje
no ideal [m]
•B = coeficiente de difusión de las
partículas que eluyen en la dirección
longitudinal, lo que resulta en
la dispersión [m2 s-1 ]
•C = Resistencia al coeficiente de
transferencia de masa del analito
entre la fase móvil y la estacionaria
[s]
•u = Velocidad lineal [ms−1]
 Cromatografía Líquida de Alta Performance
(HPLC)
La cromatografía Liquida de Alta Performance HPLC
(Por sus siglas en inglés, High Performance Liquid
Chromatography) deriva de la Cromatografía
Preparativa en Columna. Su campo de aplicación
sobrepasa el ámbito de la cromatografía de gases
(GC) a la que se añade el correspondiente al análisis
de compuestos termoestables o aquellos con masas
moleculares muy grandes o incluso polares.

Cuando se procura mejorar la eficacia de separación

e incrementar resolución, se disminuye el tamaño de
partícula, a la vez esto trajo un problema:
◦ Contrapresión mas alta.
◦ En este ámbito nace la tecnología UHPLC
Cromatógrafo Líquido de Alta
Performance ultra rápido (UHPLC)
modelo UltiMate 3000RS de la marca
Thermo Scientific
 Fase Reversa y Fase Normal
Fase Reversa: Se combinan una fase móvil polar, normalmente una
mezcla de agua o solución tampón con eluyentes polares como el metanol,
el acetonitrilo o el tetrahidofurano, y una fase estacionaria no polar como
hidrocarburos de cadena larga unidos a un soporte de sílice o híbrido.

Fase Normal: Se basa en la interacción de los analitos con grupos

funcionales polares de la superficie de la fase estacionaria, que alcanza su
potencia máxima cuando se utilizan eluyentes no polares como fase móvil.

Naturaleza de Columna Fase Móvil

Fase Normal Polar No Polar

Fase Reversa No Polar Polar

Partes de un HPLC

Bandeja donde se coloca la FM

Bomba que suministra los líquidos de la FM a través de un

sistema de doble pistón reciprocante.

Muestreador donde se coloca los viales con muestras a

inyectar y son muy precisos y miden volúmenes muy
pequeños desde los Nanolitros hasta Mililitros

Horno de columnas que mantiene la temperatura estable

durante toda la corrida de la muestra.

Permite detectar “ver” las moléculas según sea la

naturaleza de estas.
Fases estacionarias
Insoluble con la FM
Se generan muchas asociaciones particulares de tres constituyentes [FM
/ COMPUESTO / FE] con analitos en la muestra.
Existen varios tipos de fases estacionarias:

❑GEL DE SILICE (Materia básica de las fases actuales)

❑SILICES MODIFICADAS

❑OTRAS FASES DE POLARIDAD VARIABLE

GEL DE SILICE
Solido amorfo cuya formula genérica es SiO2(H2O)n (Con n muy próximo a
cero)
Se utiliza casi en un 80% de aplicaciones
Microesferas porosas y no porosas con diámetros variables regulares (um)
Cuando se fabrican su concentración se suele medir utilizando RMN de
29Si
Gel de Sílice
SILICES MODIFICADAS
EXISTEN DOS TIPOS:

❑Fases Monoméricas:
Resultan de la reacción de un MONOCLOROSILANO en presencia de una
base de silanoles de superficie. Se puede obtener las siguientes
fases:
◦ RP-8 (agrupamientos dimetiloctilsilano)
◦ RP-18 u ODS (agrupamientos dimetiloctadecilsilano)

❑Fases Poliméricas:
En vez se usar un di- o triclorosilano en presencia de vapor de agua y se
obtiene una capa polimerica reticulada, es difícil conocer el
entrecruzamiento de esta red de revestimiento.
Llevan funciones como aminopropilo, cianopropilo, benzilo o fases mixtas,
estos confieren cierta polaridad al material.
Resisten pH de 2 a 10 aproximadamente.
Sílice Modificada
OTRAS FASES DE POLARIDAD VARIABLE

El Gel de sílice pierde el papel

principal como FE.

Para aplicaciones particulares

podemos elegir columnas sin
sílice a base de polímeros como
el estireno/divinilbenceno o
hidroximetilestireno. El Zn y el
Oxido de zirconio (ZrO2) sirven
también como esqueleto para
los depósitos reticulares a base
de polibutadieno.

Estas FE presentan buena

estabilidad en medios Ácidos y
Básicos.
CROMATOGRAFIA QUIRAL: Columnas quirales
CROMATOGRAFIA QUIRAL: Columnas quirales
Determinar enantiómeros R ó S.
Utiliza resinas ópticamente activas o geles de sílice en las que se han
enlazado CICLODEXTRINAS (cadenas cíclicas de 5 a 7 moléculas de
glucosa) unidas mediante un “puente” de algunos átomos de carbono.
La moléculas de forma cilíndrica posee una cavidad hidrofóbica y una
pared externa hidrófila.
Se puede calcular la pureza óptica de una molécula.

Donde:
AR y SS designan las áreas de los picos de los enantiomeros en el
cromatograma.
Fases Móviles
Estas influyen directamente en los tiempos de retención
Si cambia la polaridad de la fase móvil se actúa directamente
sobre K (Cs/Cm).
Con un Eluyente Polar un Compuesto Polar migra mas
rápidamente que uno menos polar

¿Si la FM es Polar cual de

los analitos según el
cromatograma, posee
mayor polaridad?

1 2 3 4 5 6 7 8
Disminuye la Polaridad
Ajustes de pH para modificar la
selectividad
Ecuación de Henderson-Hasselbalch, para preparación de
soluciones tampón en el laboratorio.

Si la relación entre el pH y el pK es de 1 la relación entre las

concentraciones del ácido y su sal conjugada es 0.1
Ajustes de pH para modificar la selectividad
Notamos esta elución de estos tres compuestos:
base

A: Acetato de Amonio 10mM pH

4.8
B: Acetonitrilo

Amitriptilina pKa 9.4

A: Fosfato de potasio 20mM pH

7.0 Acido
B: Acetonitrilo

A: 0.1% Ác. Fórmico en agua pH

2.7
B: 0.1% Ác. Fórmico en pKa 4.0
Acetonitrilo

Neutro

A: Bicarbonato de amonio 10mM

pH 10.5 Tolueno
B: Acetonitrilo
Ajustes de pH para modificar la
selectividad
Efecto del pH de la FM sobre los ácidos

Abajo del pKa

pH Bajo
ACIDOS

En el pKa

pH Alto
Arriba del pKa
Ajustes de pH para modificar la
selectividad
Efecto del pH de la FM sobre las bases

Abajo del pKa

pH Bajo
BASES

En el pKa

pH Alto
Arriba del pKa
Fuerza de la Fase Móvil (FM)

Fuerza de los disolventes utilizados como FM. Mezclando varios disolventes.

Hay que tener en cuenta la viscosidad ya que la presión al principio de la
columna varía según la composición de la FM.
Detectores en HPLC
❑ UV-Visible (Uv-Vis)
❑ Arreglo de Diodos (DAD)
❑ Fluorescencia (FLD)
❑ Índice de Refracción (RID)
❑ Electroquímico (ECD)
❑ Aerosol Cargado (CAD)
❑ Dispersión de Luz Evaporativa (ELSD)
❑ Espectrómetro de Masas
Los detectores empleados en HPLC se han
diseñado, adaptado y perfeccionado con el fin
de incorporar celdas de flujo que
permitan medir las bajas concentraciones de
analito que hay en el líquido. Los distintos
detectores se clasifican según se encarguen
de medir una propiedad del soluto o de la
disolución.
Detector Uv-Visible

El flujo de líquido que sale de la columna pasa a

través de una pequeña celda, de pequeño
volumen (entre 1 a 10 μL), para minimizar el
ensanchamiento de banda. La medida de la
absorbancia del líquido que la atraviesa en
función del tiempo constituye el
cromatograma. Su límite de detección oscila
entre 0’1 y 1 ng y puede emplearse en
cromatografía de elución en gradiente.

A medida que aumenta la concentración del compuesto, también

aumentará la intensidad de los picos que representan en el compuesto.

Esto es descrito por la ley de Beer – Lambert.

A=*b*c
 Grupos Cromóforos

Se denominan así a los grupos funcionales de compuestos

orgánicos, que son los responsables de la absorción en la región
del UV-Visible.

Nombre Cromóforo λmax (nm) max (L.mol-1.cm-1)

Amina -NH2 195 3000
Oxima =NOH 190 5000
Nitro -NO2 210 3000
Nitrito -ONO 230 1500
Nitrato -ONO2 270 12
Nitroso -N=O 300 100
Detector de Arreglo de Diodos

Debido a su rapidez, son capaces de registrar la

totalidad del espectro proporcionando un
cromatograma tridimensional que muestra la
absorbancia en función de la longitud de
onda cada pequeños intervalos de tiempo.

permite realizar el análisis seleccionando una o

varias longitudes de onda en la región de
interés.

Celda DAD
Detector de Fluorescencia

Se basan en la capacidad de algunos

solutos capaces de emitir fluorescencia, o
de aquellos que no lo son pero pueden
hacerlo tras un tratamiento adecuado
(derivatización).
Los más sencillos emplean una fuente de
excitación de mercurio y uno o más
filtros para aislar la radiación fluorescente.
Los instrumentos más sofisticados
consisten en una fuente de radiación de
xenón y emplean un monocromador de
red para aislar la radiación fluorescente.
Son muy sensibles, siendo su límite de
detección de 0’001-0’01 ng y también se
pueden utilizar en elución con gradiente.

Los compuestos poseen ciertos grupos funcionales que tienen la particularidad

de excitarse con ciertas longitudes de onda y emitir energía con otras longitudes
de onda mas largas (de menor energía)
 Detector de Índice de Refracción
RI es un detector de índice de
refracción de tipo deflexión o Snell.
La ley de Snell establece que un haz Imágenes autorizadas por RPA Perú,
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de luz paralelo, al pasar a través de
una interfaz dieléctrica que separa dos
medios de diferentes índices de
refracción en un ángulo de incidencia
mayor que cero, se refractará en
función de la magnitud de la diferencia
de los índices de refracción de los dos
medios.
Detector de Índice de Refracción
En este caso miden una propiedad de la disolución, como es la variación
en su índice de refracción como consecuencia de la presencia de un
soluto.
Este tipo de detectores constan de una cubeta con dos compartimentos
separados por una placa de vidrio, por uno de los cuales solamente
pasa fase móvil, como referencia, y por el otro pasa el eluato que
abandona la columna y que contiene la muestra. Sobre la cubeta se
irradia un haz de luz que se desvía cuando la muestra aparece en el
líquido eluido de la columna.
Son detectores universales y no dependen del caudal de fase móvil. Sin
embargo, no pueden emplearse en elución con gradiente, sus medidas
se ven afectadas por los cambios de temperatura y no son tan
sensibles. Su límite de detección se sitúa entre 100 y 1.000 ng.
Detector electroquímico: Reacciones de
Oxidación – Reducción
Un Detector electroquímico trabaja por Oxidación o Reducción de un analito en una celda.
Las condiciones (Potencial aplicado) para llevar a cabo esta reacción son controladas por el
detector.

El detector mide el flujo de electrones que esta asociado al proceso REDOX del analito en la
superficie de un electrodo de la celda (electrodo de Trabajo)

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distribuidor de Thermo Scientific
Detector electroquímico: Reacciones
de Oxidación – Reducción
Este tipo de detectores responden a analitos susceptibles de reducirse u
oxidarse, como fenoles, aminas aromáticas, peróxidos, cetonas, aldehídos,
compuestos halogenados, nitroderivados…
En este electrodo se mantiene el potencial a un valor seleccionado,
respecto a un electrodo de referencia (Ag/AgCl) y se mide la corriente que
pasa entre el electrodo de trabajo y un electrodo auxiliar, de acero
inoxidable, en función del tiempo. Para solutos oxidables, son comunes los
electrodos de cobre o de carbón vitrificado. Para solutos reducibles, un
buen electrodo de trabajo es el de gotas de mercurio
La corriente es proporcional a la concentración del soluto en un intervalo
de seis órdenes de magnitud. Con este detector se debe trabajar
en rigurosa ausencia de oxígeno y con disoluciones acuosas, o de
disolventes polares, que contengan electrolitos. Presentan una gran
sensibilidad, con un límite de detección entre 0’01 y 1 ng. Sin embargo, no
pueden ser empleados en elución con gradiente, y dependen de la
temperatura y del caudal.
POTENCIAL REDOX Y ESTRUCTURA QUIMICA
La selectividad se consigue mediante la selección del potencial apropiado. Esto está
relacionado con la estructura del química (analito)
 Estructura y Actividad Electroquímica
Muchas estructuras son electroactivas por naturaleza, las cuales pueden ser
detectadas utilizando diversas técnicas.

Aromático 1) OXIDATION ON CARBON WORKING

ELECTRODE. DC MODE

Alifático O 2) REDUCTION ON CARBON

WORKING ELECTRODE. DC MODE
Aromático
OMe N
NH2 NH 3) OXIDATION ON CARBON WORKING
HO O HO ELECTRODE FOLLOWING
DERIVATIZATION
O
N N
O NH2 4) OXIDATION ON MERCURY OR
MERCURY/GOLD AMALGAM. DC
H H MODE

HO 5) OXIDATION ON GOLD
H WORKING ELECTRODE. PAD
O O OH MODE
OH OH
O
H H
Carbohidratos
.
H
SH H.
Alifático OH OH
Charged Aerosol Detector
Universal (no selectivo): detecta todos los compuestos no volátiles

Respuesta independiente de la estructura química.

Rango dinámico en cuatro órdenes de magnitud dentro de una inyección (pg

a µg en la columna)

RSD <2% también en el rango de picogramos

Detector de masa dependiente (no depende de la concentración)

Totalmente compatible con gradiente

El detector Corona mide la carga que esta asociada a las partículas de analitos. La
carga esta en directa proporción a la cantidad de analitos en su muestra. La carga
de la medicion es exacta y consistente, sin importar el componente. El resultado es
que el detector Corona ultra RS puede "ver" cualquier analito no-volátil, incluyendo
aquellos sin cromóforos.

PASO UNO
El proceso de detección de aerosol cargado comienza con la conversión del analito
en partículas. El tamaño de las partículas se incrementa con la cantidad de
analitos.

PASO DOS
Una corriente de gas cargado positivamente colisiona con las partículas de
analitos. La carga es trasnferida a las partículas--mientras mas largas las
partículas, mas grande la carga.

Paso TRES
Las partículas son transferidas a un colector donde la carga es medida por un
electrómetro altamente sensitivo. Esto genera una señal en proporción directa a la
cantidad de analitos presentes.
The Principle of Charged Aerosol Detection
 Aplicaciones de la detección por
aerosol cargado

La detección por aerosol con carga (CAD) puede ser utilizada para el
análisis de grandes y pequeñas moléculas, biomoléculas, additivos,
suplementos, quimicos especializados y polimeros.
La tecnología de Detección por aerosol cargado es ampliamente
utilizada en :
•Biotecnología/Biofarmaceutica
•Química
•Alimentos/Bebidas
•Farmaceutica
•Bioinvestigación
•Ambiental
•Productos Naturales
Espectrómetro de Masas

La Espectrometría de Masas
es una valiosa técnica de
microanálisis que, ligada a la
cromatografía se utiliza en la
identificación de compuestos
desconocidos, también se usa
en la cuantificación de
compuestos conocidos, y en la
elucidación de estructura y
propiedades químicas de
moléculas
Espectro MS: Relative Abundance vs m/z
Detector Espectrómetro de Masas: ORBITRAP
El Orbitrap es un analizador de masas con trampa de iones que consta de dos electrodos
externos y un electrodo central, que le permiten actuar como analizador y detector. Los iones que
ingresan al Orbitrap se capturan mediante "compresión electrodinámica", después de lo cual
oscilan alrededor del electrodo central y entre los dos electrodos externos. Diferentes iones
oscilan en diferentes frecuencias, resultando en su separación. Al medir las frecuencias de
oscilación inducidas por los iones en los electrodos externos, los espectros de masas de los iones
se adquieren utilizando la detección de corriente de imagen. Debido a su configuración, el
analizador de masas Orbitrap es en realidad un analizador de masas por transformada de Fourier
analógico de la tecnología de resonancia ciclotrón de ion FT (ICR), pero con un tamaño de
instrumento más pequeño y un funcionamiento más sencillo del instrumento.
https://www.youtube.com/watch?v=StFtEkgeuGE
http://planetorbitrap.com/
 DETECTOR DE DISPERSIÓN DE LUZ
La dispersión se produce por la interacción
de la radiación electromagnética con la
materia. El eluato que abandona la
columna se nebuliza mediante un flujo de
nitrógeno o de aire y se vaporiza la fase
móvil, quedando únicamente unas finas
gotitas de soluto sin evaporar. La nube de
partículas de analito pasa a través de
un haz de láser y la dispersión producida
es detectada por un fotodiodo de silicio.
Este detector responde a todos los solutos
menos volátiles que la fase móvil y su
límite de detección se encuentra entre 0’1
y 1 ng.
Detector de dispersión de luz dispersada (ELSD) Light Scattering