FILTRACIÓN POR MEMBRANA

WENDY LILIANA UMBARIBA MARULANDA

RICARDO MARTINEZ POBEDA

DANIEL MONDRAGON TOLOZA

BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE

PROGRAMA DE INGENIERIA BIOTECNOLOGICA

CUCUTA

2019
INTRODUCCION
La filtración por membrana es un método en el cual 100 ml de una muestra de agua se
hacen pasar por un filtro (membrana de nitrocelulosa) de 0.45 a 0.22 micras de poro,
quedando suspendidos así los microorganismos presentes en ella. La membrana filtrante
(filtro de nitrocelulosa) tiene como propósito seleccionar y diferenciar los microorganismos
presentes en la muestra de agua mediante la siembra del filtro en un medio selectivo o el
paso de un medio de cultivo a otro medio con nutrientes diferentes.
Después de terminar la filtración, la membrana se lleva a un medio específico llamado
Chromocult, se incuba durante 24 horas a 36 °C y al finalizar este tiempo se realiza el
respectivo recuento.
Esta técnica es utilizada como control de calidad en acueductos o industrias en las que se
requiere procesar un gran número de muestras con grandes volúmenes de agua ya sea de
bajo grado de contaminación, o muestras contaminadas a las cuales se les debe realizar una
previa dilución.
Según la organización panamericana de la salud, los organismos coliformes son los
indicadores con los que se mide comúnmente la calidad del agua, definiendo los
organismos coliformes totales como bacterias gram negativas que fermentan la lactosa a
una temperatura de 35 a 37oC, con producción de ácido, gas y aldehído dentro de 24-48
horas, citocromo-oxidasa negativos y no esporulados. Las bacterias coliformes fecales son
un subgrupo de las coliformes totales que tienen las mismas propiedades, excepto que
crecen a una mayor temperatura, 44-45 °C y producen indol a partir de triptófano, los
organismos con estas características son considerados como presuntos Escherichia coli.
Según Stanier (1992) la contaminación fecal del agua genera infecciones muy importantes,
como la fiebre tifoidea y el cólera, que azotaron periódicamente a todos los países del
mundo, hasta principios de siglo; por tanto, es de gran importancia desarrollar programas
de potabilización de agua, que garanticen la inocuidad de la misma y por ende una mejor
calidad de vida de la población servida.
Según la resolución 2115 del 2007, se dice que para la caracterización microbiológica del
agua potable se deben enmarcar dentro de los siguientes valores máximos aceptables, los
cuales son establecidos teniendo en cuenta los límites de confianza del 95% y para técnicas
con habilidad de detección desde 1 Unidad Formadora de Colonia (UFC) ó 1
microorganismo en 100 cm3 de muestra:
PREPARACION DEL MATERIAL
AGAR: Lavar con agua y jabón las cajas Petri pequeñas. Enjuague en solución de agua +
cloro durante 10 minutos, por último, con agua destilada, escurrir y secar. Envolver con
papel kraft, meter en una bolsa plástica y esterilizar en autoclave.
Preparación del medio chromocult: Se autoclava el agua destilada requerida en un
Erlenmeyer sellado con aluminio y cinta tirro. Después al agua que se autoclavó se le
adicionan los gramos de Chromocult según los cálculos realizados y se pone a calentar en
estufa hasta ebullición. Se deja reposar el medio y se sirve en las cajas dentro de una cabina
de flujo laminar. Envolver bien con envoplast cada caja, marcar con cinta tirro y guardar
hasta su uso en la nevera.
NOTA: Son 26.5 gr de medio Chromocult por cada litro de agua destilada.

FRASCO PARA TOMA DE MUESTRA MICROBIOLOGICA:

Lavar con agua y jabón el frasco, enjuague en solución de agua más cloro durante 10
minutos, por último con agua destilada, escurrir y secar. Rotular antes de envolver con
papel kraft. Esterilizar en el horno por 4 horas a 125 °C.
PIPETAS: Lavar en una solución jabonosa pipetas de 10 ml. Enjuague en solución de agua
más cloro durante 10 minutos, por último con agua destilada, escurrir y secar. Envolver con
papel kraft., unirlas con cinta tirro formando un solo paquete, marcarlas y esterilizar en el
horno durante 4 horas a 125 °
AGUA PEPTONA: Lavar con agua y jabón frascos de vidrio. Enjuague en solución de
agua más cloro durante 10 minutos, por último con agua destilada, escurrir y secar.
Preparación del agua peptona: En un Erlenmeyer adicionar 1 gr de peptona con 1000 ml de
agua destilada, homogenizar muy bien. Luego servir 225 ml de agua peptona a cada frasco
de vidrio, sellar con aluminio y cinta tirro.
Autoclavar y dejar reposar. Refrigerar hasta su uso. Marcar con cinta tirro los frascos.
AGUA DESTILADA ESTERIL: Lavar con agua y jabón 1 frasco de vidrio. Enjuague en
solución de agua + cloro durante 10 minutos, escurrir y secar. Adicionar 400 ml de agua
destilada, sellar con aluminio y cinta tirro. Autoclavar y dejar reposar. Refrigerar hasta su
uso. Marcar con cinta tirro el frasco indicando que es agua destilada estéril.
PAÑO ESTERIL: Envolver en papel kraft dos paños de limpieza, sellar con cinta tirro,
marcar y esterilizar en el horno por 4 horas a 125°C.

MATERIALES EN GENERAL
 Frascos de vidrio estériles
 Peptona
 Agua destilada
 Probeta de 250 ml
 Erlenmeyer de 2000 ml
 Cajas petri pequeñas
 Pipetas de 10 ml
 Agar Chromocult
 Estufa
 Autoclave
 Equipo de filtración por membrana
 Bomba de filtración
 Membrana de nitrocelulosa
 Pinzas
TOMA Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA
La muestra debe recogerse en frasco de vidrio previamente esterilizado en el horno por 3
horas. La muestra se debe analizar lo más rápido posible, en caso de demorarse varias horas
sin analizar conservarse a baja temperatura.

PROCEDIMIENTO
1. Una vez se tiene lista la muestra a analizar, se procede a entrar a cuarto de siembra y
realizar las respectivas diluciones en los frascos de agua peptona previamente preparada
con la ayuda de las pipetas de 10 ml estériles.
2. Luego de realizar las respectivas diluciones se procede a realizar la filtración:
Bajo condiciones de esterilidad con los mecheros encendidos, armar el equipo de filtración
y colocar un filtro de nitrocelulosa en la unidad de filtración. Verificar que la llave de salida
del aire se encuentre cerrada y la bomba de vacío apagada; para evitar el derrame de la
muestra antes de tiempo. Agregar al recipiente 100 ml de la muestra previamente preparada
en agua peptona. Cerrar el recipiente, encender la bomba de vacío y abrir la llave
correspondiente al lugar donde se ha depositado la muestra y posteriormente Filtrar.
Con una pinza estéril, sujetar el filtro de membrana por uno de los bordes y colocarlo sobre
la superficie de una caja petri con Agar chromocult (siembra en superficie). Fíjese que haga
contacto el agar con el filtro. Se debe cerrar la caja petri, rotularla y envolverla.
Incubar a 36oC por 24 horas.
Realizar conteo de colonias y reportar UFC/ 100 ml.
RESULTADOS Y DISCUCIONES

Caja 1. Solución pura Caja 2. Solución diluida al 10-2

Caja 1: 1 UFC
0 𝑈𝐹𝐶
= 0 𝑈𝐹𝐶
1𝑈𝐹𝐶
Caja 2: 0 UFC

0 UFC/100mL

Como se puede observar en las imágenes anteriores se obtuvo una colonia en la caja 1 y en
la caja 2 se obtuvieron cero colonias, se debe tener presente que se trabajó con agua de
botella y por eso su numero de coliformes totales y fecales es casi nula, sin embargo, según
la Resolución 2115 del 2015, se dice que para el consumo de agua potable se realizan
pruebas de filtración por membrana los deben ser de 0 UFC/100mL y E. coli, 0
UFC/100mL. De acuerdo con la resolución, se demuestra que el agua de botella de donde
fue tomada la muestra no es apta para el consumo humano. Estos resultados no son
totalmente confiables ya que se presentaron problemas a la hora de la lectura, ya que estas
cajas se dejaron más tiempo de lo debido en la incubadora, por lo que se recomienda tener
muy en cuenta los tiempos de incubación para evitar errores en las pruebas.
CONCLUSIONES

La importancia de esta técnica se ve reflejada en la rapidez en que se obtienen los resultados,

pues a comparación de otras como el método del NMP, en el cual se lleva más tiempo y más
desperdicios de material.
En la mayoría de las enfermedades agudas de transmisión hídrica, los criterios
microbiológicos juegan un papel muy importante. Sin embargo, es recomendable realizar
análisis fisicoquímicos para evaluar el riesgo de enfermedades crónicas, y así hacer una
interpretación sanitaria completa.

BIBLIOGRAFÍA

DETERMINACIÓN DE ESCHERICHIA COLI Y COLIFORMES TOTALES EN AGUA

POR EL MÈTODO DE FILTRACIÒN POR MEMBRANA EN AGAR CHROMOCULT
(2007). Recuperado de:
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+totales+y+E.+coli+en+
Agua+Filtraci%C3%B3n+por+Membrana.pdf/5414795c-370e-48ef-9818-ec54a0f01174