UNIVERSIDAD

NACIONAL PEDRO RUIZ

GALLO
FACULTAD DE INGENERIA
QUIMICA E INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENERIA

QUIMICA

“FORMULACIÓN POR MEDIOS DE FERMENTACIÓN

MÉTODO DE LA COMPOSICIÓN DE BIOMASA”

ALUMNOS:

 Aguinaga Sánchez, Liz Alexandra

 Lluen Azabache, Diana Rosa

 Mendez Requejo, Aldhair Relmer

 Sánchez Requejo, Yuri Stefany

DOCENTE:
Msc. Ada Patricia Barturén Quispe

CURSO:
Biotecnología

CICLO: 2019-I
I. INTRODUCCION

La formulación cuidadosa de los medios de cultivo adecuado para el crecimiento del inóculo y
para la producción es un pre-requisito para el desarrollo exitoso de un bioproceso. Para su
formulación hay que cumplir con los requerimientos nutricionales de los microorganismos y
además tener en cuenta diversas restricciones técnico-económicas, ya que una correcta
formulación ayuda a maximizar el rendimiento de productos con un mínimo costo de medios.
Además, la elección de los medios afecta el Proceso de Pre-tratamiento como al Tratamiento de
los Productos, por lo cual hay que formularlos teniendo en cuenta la totalidad de proceso y no
solamente la Etapa de Biorreacción. Por ejemplo, si se utiliza una fuente pura de carbono como la
glucosa, en lugar de una fuente natural como la melaza, el proceso de pre-tratamiento y
purificación final es más sencillo y económico, pero se incrementa apreciablemente el costo de la
materia prima.

El medio formulado debe suministrar suficiente carbono, nitrógeno, minerales y otros nutrientes,
de manera que se pueda obtener la cantidad requerida de masa celular y productos. Los
requerimientos mínimos se estiman a partir de la estequiometria del crecimiento y formación de
productos y, en general, se debe cumplir que:

Fuente de Carbono + Fuente de Nitrógeno + minerales + nutrientes específicos (vitaminas,

hormonas) + 02 → masa celular + productos + C02 + H20.

Figura N°01. Principles of formation technology. P.F. Stanbury and A. Whitaker. Pergamon
Press, 1989.

En la práctica muchos nutrientes se suministran en cantidades muy por encima de los

requerimientos mínimos. Para determinar cuáles se suministran en exceso y en qué proporción, es
necesario conocer la bioquímica del proceso de formación del producto. Por ejemplo, en la
producción de penicilina, es fundamental conocer que se requiere la alimentación de un precursor.
 En otros casos la adición de trazas de algunos iones metálicos en el medio puede tener un alto
impacto, como ocurre en la producción de ácido cítrico por Aspergillus Níger.

Esos efectos que afectan o estimulan el rendimiento generalmente se relacionan con inhibición o
activación de acciones enzimáticas o por incrementar o suprimir la producción de enzimas
específicas, provocadas por los componentes del medio. En general, el conocimiento de las rutas
metabólicas de la formación de los productos determina en gran medida las prácticas industriales
de formulación de medios y en la mayoría de los casos.

II. OBJETIVOS

2.1 Objetivo general

 Determinar los requerimientos mínimos de Mg, N y S de un medio de cultivo

mínimo para producir biomasa de levadura.

2.2 Objetivo especifico

 Comprender la importancia que tiene la formulación de los medios de cultivo en

base del requerimiento para la generación de biomasa.
 Comprender la función de cada elemento de enriquecimiento de un medio de cultivo.

III. MARCO TEORICO

3.1 MEDIO DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo

de microorganismos. Los medios de cultivo para hacer crecer los microorganismos han
de tener todos los elementos necesarios en la forma y propiedades adecuadas para la
síntesis de material celular y la producción de metabolitos.

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su
desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
 En un laboratorio se pueden usar productos químicos, de composición conocida, para la
obtención de medios de cultivo, que son medios sintéticos, pero en las fermentaciones
industriales los medios han de ser lo más baratos posibles.

Figura N°02. Medios de cultivos

3.1.1 Medios de cultivo para fermentación a nivel industrial

Figura N°03. Formulación de medios de cultivo

 Un medio de cultivo a grande escala, debe utilizar fuentes de nutrientes baratos y
presentar los siguientes criterios:

 Producirá el máximo rendimiento de producto o biomasa por gramo de sustrato

usado.
 Producirá la máxima concentración de producto o biomasa.
 Permitirá el mayor índice de producto formado.
 Habrá un mínimo rendimiento de productos no deseados.
 Será barato, de calidad consistente y disponible a lo largo del año.
 Causará la menor cantidad de problemas en la aeración, agitación, extracción,
purificación.

Se debe recordar que:

 El medio seleccionado afectará el diseño del fermentador usado.

 El fermentador afecta la composición del medio.
 Un medio con una alta viscosidad requerirá de una agitación efectiva.
 El medio puede ocasionar variación de pH, formación de espuma, potencial redox
y en la morfología del organismo.

3.1.2 Clasificación de los medios de cultivo

a. Según su origen:
 Naturales:
Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como
extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.
 Sintéticos:
Son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
 Semi sintéticos:
Son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de
un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
b. Según su consistencia
 Líquidos:
Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
 Sólidos:
Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El agar
es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.
Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento
nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de
Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias.

 Semisólidos:
Contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las
especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.

Figura N°04. Clasificación de los medios de cultivo de acuerdo a su consistencia

c. Según su composición: a causa de los requerimientos químicos del mundo

microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.
 Comunes o universales:
 Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos poco
existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener colonias
microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.

 Enriquecidos:
Están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede
agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo:
sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen
grandes exigencias nutricionales.

 Selectivos:
Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas
del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo
de medio sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo
el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos).

 Diferenciales:
Son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios géneros y especies
de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha añadido un carbohidrato y un
indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se
produce una acidificación del medio con el consiguiente viraje de color del indicador
por el cambio de pH.

 De enriquecimiento:
Son medios líquidos que contienen un agente que inhibe las especies no deseadas pero
que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso.

 De transporte:
 Son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación
significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción hasta su
posterior estudio.

d. Según la naturaleza química de los componentes:

 medios sintéticos o medios químicamente definidos:
- Se formulan en base a compuestos puros, tales como la glucosa, sulfato de amonio,
metionina, fosfatos, etc.
- Su composición química es conocida y reproducible
- Permiten un control de las condiciones ambientales de crecimiento y producción.

Ejemplo de medios definidos

Figura 5: Medios de cultivo definidos

 Medios complejos:
Son formulados a partir de productos de desecho, subproductos y extractos naturales,
en cuya composición intervienen sustancias de origen animal o vegetal como
peptonas, extracto de levadura, macerado de maíz, harina de soja, etc. que aportan las
 sustancias fundamentales ya mencionadas, pero que son químicamente indefinidas y
de composición química compleja y variable.
Pueden requerir ser suplementados con compuestos que proporcionen cantidades
adicionales de algunos elementos como Mg, N y P.
Muy utilizados en microbiología básica, microbiología analítica, producción de
algas, alimentos, suelos y en fermentaciones industriales.

Componentes de medios complejos industriales

Figura 6: Componentes de medios complejos

3.2 CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por

una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo

al propio medio.

3.2.1 Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos

casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del

crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer

de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan

lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones

de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la 5 preparación

de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida

de los factores nutritivos lábiles. Actualmente, la forma más extendida de aportar

estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente

fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los

microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen

capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno

presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas

por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico,

etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como

las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del

crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica. Muy a menudo se añaden al

medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades

metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de

ciertos microorganismos.

3.2.2 Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en

estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran

inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a

temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen

la capacidad de licuarla. Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su

versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo

uso está ampliamente extendido en el laboratorio.

3.2.3 Presencia (o ausencia) de oxígeno

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno

normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos.

Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente

en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los

microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas

parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios

facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas

condiciones.

3.2.4 Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los

cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las

estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que

mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que

se deseque el medio.

3.2.5 Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los

microorganismos fotosintéticos.

3.2.6 pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH

neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe

olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el

crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos

metabólicos normales.

3.2.7 Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a

temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos

humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y

los saprofítos tienen rangos más amplios

3.2.8 Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la

aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el

crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos

medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que

utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).

Figura N°07. Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

3.3 FORMULACIÓN

La formulación tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios, es decir debe
establecer las concentraciones de cada componente a ser utilizadas. Una primera
aproximación con respecto a las cantidades a utilizar de las diversas fuentes los da el
conocimiento de la composición de biomasa del microorganismo a ser empleado. Una
composición elemental y típica de la biomasa es (en % de peso seco): Carbono, 46-48;
Nitrógeno, 7-12; Fósforo, 1-3; Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1%. Es decir, que si queremos
formular un medio para producir una determinada cantidad de biomasa debemos proveer
las distintas fuentes que aseguren como mínimo las cantidades de elementos que deben
ser suministrados.

Por el conocimiento de la estequiometria de crecimiento y de formación del producto, es

posible formular adecuadamente un medio.

Requerimientos de nutrientes comunes en la formulación

a. Macronutrientes o macro elementos

 Son captados por los microorganismos en cantidades relativamente grandes. Más del
95% del peso seco de la célula microbiana está constituido por C, O, H, N, S, P, K,
Ca, Mg y Fe.
 C, O, H, N, S y P son componentes de carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos
nucleicos. Son necesarios en cantidades de g/L de medio de cultivo.
 Carbono. Fuente de energía y/o compuestos para biosíntesis.
 Nitrógeno y azufre se encuentran en las células en forma reducida como grupos
amino y sulfhídrico; generalmente en forma reducida, aunque algunos
microorganismos los asimilan en forma oxidada. Sulfatos, nitratos, peptonas (N y S)
y cisteína.
 K, Ca, Mg y Fe: se encuentran en la célula en forma de cationes, desempeñando
varias funciones. Se utilizan en cantidades de mg.
 K+: necesario para actividad de enzimas, entre ellas algunas que participan en la
síntesis de proteínas.
 Ca2+: contribuye a la termo resistencia de endosporas.
 Mg2+: actúa como cofactor de muchas enzimas, forma complejos con el ATP y
estabiliza los ribosomas y las membranas celulares.
  Fe2+ y Fe3+: Forma parte de los citocromos y es cofactor de enzimas y de proteínas
transportadoras de electrones.

Requerimientos de N, P y S

Se deben incorporar en grandes cantidades. Aunque pueden adquirirse a partir de los

mismos nutrientes que aportan C, los microorganismos suelen emplear también fuentes
inorgánicas.

 N: necesario para sintetizar purinas, pirimidinas, algunos lípidos.

 P: presente en ácidos nucleicos, fosfolípidos, nucleótidos como ATP, varios
cofactores, algunas proteínas y otros componentes celulares.
 S: necesario para la síntesis de sustancias como cisteína y metionina, biotina y tiamina
b. Micronutrientes o microelementos (u oligoelementos)
 Se requieren en cantidades tan pequeñas, que los contaminantes presentes en agua, en
los recipientes para el cultivo y en los componentes habituales del medio son a
menudo suficientes.
 Normalmente son parte de enzimas y cofactores; facilitan la catálisis de reacciones y
mantenimiento de la estructura de proteínas.
 Los principales son el Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu, estos deben estar disponibles en
cantidades de g.
c. Factores de crecimiento
Son sustancias precursoras de ciertos constituyentes orgánicos de la célula que el
microorganismo es incapaz de sintetizar; generalmente se requieren en pequeñas
concentraciones. Existen tres clases principales:
 Aminoácidos: para síntesis de proteínas.
 Purinas y pirimidinas: para síntesis de ácidos nucleicos.
 Vitaminas: normalmente forman la totalidad o parte de los cofactores
enzimáticos; constituyen grupos prostéticos o centros activos de ciertas enzimas.

3.3.1 Fuentes de los principales requerimientos en un medio de cultivo

a. Fuentes de carbono

Las principales fuentes de carbono utilizadas para la formulación de medios de cultivo de

microorganismos son los carbohidratos, contenidos en las melazas, extractos de maltas y
jugos azucarados, aunque también se utilizan otras fuentes complementarias como los
aceites vegetales, etanol y alcanos. Las melazas, subproducto de la industria azucarera,
son una de las fuentes más baratas de carbohidratos y por ese motivo se utilizan muy
frecuentemente como aportadores de carbono. Además, las melazas contienen también
sustancias nitrogenadas, vitaminas y elementos traza. Un inconveniente de las melazas es
que su composición varía en función de la materia prima usada para la obtención del
azúcar, las condiciones climáticas, la localidad y el proceso usado en la industria
azucarera. Otra fuente de carbono muy utilizada es el extracto de malta, como se conoce
al extracto acuoso de la cebada malteada. Este es un sustrato excelente para muchos
hongos, levaduras y actinomicetos. Contiene entre un 90 y un 92 % de carbohidratos,
concretamente hexosas, que son glucosa y fructosa, disacáridos como la maltosa y la
sacarosa, e incluso trisacáridos como la maltotriosa. El extracto de malta contiene también
sustancias nitrogenadas entre las que se incluyen péptidos, proteínas, aminoácidos,
purinas, pirimidinas y vitaminas.

Otras fuentes de carbono son el almidón y dextrinas, los que pueden ser metabolizados
directamente por los organismos productores de amilasas. En particular el almidón ha
adquirido importancia en la producción de etanol. Se utilizan también los líquidos
sulfíticos de las papeleras. Se trata de productos residuales de la industria del papel que
contienen azúcar. Los líquidos sulfíticos de coníferas contienen entre el 2 y 3 % de
azúcares, de los cuales el 80 % son hexosas y el resto pentosas.

Otra fuente de carbono que está siendo cada vez más utilizada, debido a su gran
disponibilidad y bajo costo es la celulosa, que proviene de la paja, restos de mazorcas,
turba y papel. Sin embargo, a menudo este sustrato no puede ser utilizada directamente
como fuente de carbono, por lo que se deberá someter a hidrólisis previa, ya sea química
o enzimática, convirtiéndola en el jarabe de glucosa, que se usa en la producción de
etanol, butanol, acetona e isopropanol. También se utilizan los aceites vegetales, como
aceite de soja, de algodón o de palmera, aunque se utilizan principalmente como
ingredientes secundarios, cuando se usa ya una fuente de carbohidratos como principal
aporte de energía. De igual forma se utiliza el etanol, que es el producto de la fermentación
del almidón sacarificado o de la celulosa, aunque éste puede ser usado como única fuente
de carbono o como fuente complementaria para muchos organismos.
b. Fuentes de energía

La energía de crecimiento proviene de la oxidación de los componentes del medio o de

la luz. La mayor parte de las bacterias que se emplean en la industria son quimiotrofas.

Las fuentes más comunes de energía serán las fuentes de carbono, tales como los
carbohidratos, lípidos y proteínas.

c. Fuente de nitrógeno

El nitrógeno es utilizado para la biosíntesis de proteínas, ácidos nucleicos y polímeros

de la pared celular.

Las fuentes de nitrógeno más utilizadas son el amoníaco, la urea o las sales de amonio,
aunque en ocasiones existen necesidades específicas de nitrógeno orgánico y en esos
casos se usa la soya, carnes cocinadas, suero de leche y digeridos enzimáticos de
proteínas, entre otros. También hay que tener en cuenta que muchos aportadores de
carbono como las melazas, el extracto de malta y los sueros, también aportan compuestos
de nitrógeno. También se utiliza el líquido de maceración del maíz, que es un subproducto
de la producción de almidón a partir del maíz.

Otra fuente muy utilizada son las peptonas, que son hidrolizados de proteínas que
contienen aminoácidos y péptidos. Se pueden utilizar para el crecimiento de muchos
microorganismos, aunque son bastante caras para la producción industrial. No obstante,
su uso está muy extendido. Las peptonas pueden producirse tanto de proteínas animales
como caseína, gelatina, y queratina, como de proteínas vegetales, obtenidas a partir de
semillas de cacahuete, harina de soja, semillas de algodón y girasol. Las peptonas retienen
mucho nitrógeno a pesar de ser subproductos de otras industrias. La composición de
aminoácidos y de péptidos variará según el origen de la peptona. Por ejemplo, la gelatina
es rica en prolina e hidroxiprolina, pero casi no contiene aminoácidos con azufre, en
cambio los péptidos de la queratina tienen una elevada concentración en prolina y
cisteína, pero carecen de lisina. La composición del producto final está determinada
también por el tipo de hidrólisis a que se someta, que puede ser ácida o enzimática.

 Fuentes inorgánicas:
- Sales de amonio
- Nitratos
- Amoniaco
 Fuentes orgánicas:
- Aminoácidos
- Proteína
- Urea
d. Fuente de azufre:
Se adiciona como SO4-2, cisteina o metionina. En la célula se incorpora a aminoácidos
y diferentes coenzimas.

Figura N° 08. Formulación de un medio de cultivo.

IV. PROCEDIMIENTO

Tabla 1: Composición química de bacterias y levaduras

Elemento % peso seco celular Rendimiento celular

Bacterias Levaduras gr peso seco
celular.
gr elementos
Carbono 53 47 --
Nitrógeno 12 7.5 8 – 13
Fósforo 1 0.5 100 – 200
Azufre 1 1 100
Oxígeno 20 30 ---
Magnesio 0.5 0.5 200
Hidrógeno 7 6.5 ---
Cenizas (*) 7 8 ---

De la tabla N° 01: Preparar un medio de cultivo para obtener 30 gr/L de levaduras

determinando.

4.1 Formulación de Magnesio, Nitrógeno y Azufre:

Caso 1: Formulación de Magnesio

a. ¿Cuánto de Mg es necesario añadir al medio?

Usando la tabla 1 se requiere de 0.5% de magnesio para preparar un medio de

cultivo para obtener 30 gr/L de levaduras determinando:

30 gr 0.5
𝑥= ∗
1L 100

𝑥 = 0.5 𝑔𝑟 𝑑𝑒 𝑚𝑎𝑔𝑛𝑒𝑠𝑖𝑜
 b. Este requerimiento se puede satisfacer con Mg SO4 o MgSO4.7H2O, en que
cantidades?

b.1 En forma de MgSO4:

24.3 𝑔𝑟 − − − − − − − − − −120.3 𝑔𝑟

0.15 𝑔𝑟 − − − − − − − − − − 𝑥

𝑥 = 0.746 𝑔𝑟 𝑑𝑒 𝑀𝑔𝑆𝑂4

Para enriquecer el cultivo de magnesio se añade 0.78 gr de Sulfato de Magnesio,

agregando específicamente 0.5 gr de Magnesio como elemento.

b.2 En forma de MgSO4.7H2O:

24.3 𝑔𝑟 − − − − − − − − − − − 246.36 𝑔𝑟

0.15 𝑔𝑟 − − − − − − − − − − − 𝑥

𝑥 = 1.52037 𝑔𝑟 𝑑𝑒 𝑀𝑔𝑆𝑂4.7𝐻2𝑂

Para enriquecer el cultivo de magnesio se añade 1.52037 gr de Sulfato de

Magnesio, agregando específicamente 0.5 gr de Magnesio como elemento.

Caso 2: Formulación de Nitrógeno

a. ¿Cuánto de N se requiere?

Se requiere de 7.5% de nitrógeno para preparar un medio de cultivo para obtener

30 gr/L de levaduras determinando:

30𝑔𝑟 7.5
𝑥= ∗
1L 100

𝑥 = 2.25 𝑔𝑟 𝑑𝑒 𝑛𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜

b. Este requerimiento se puede satisfacer con (NH4)2SO4 ¿En qué cantidades?

El nitrógeno reacciona con el sustrato para la generación de biomasa entonces la

bioquímica de la base nitrogenada en este caso el sulfato de amonio nos
permitirá ver la cantidad que se añadira:
 (NH4)2SO4 CH1.8O0.5N0.2
PM= 132.1 gr/mL PM= 24.6 gr/mL
(8%) Cenizas= 24.6*0.08
PM= 26.568 gr (considerando las cenizas)
Base 1L:

1 𝑚𝑜𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
1L 30𝑔𝑟 ∗ 26.568 gr

1.1291779 mol de células

1 mol de células 0.2 mol de N

1.1291779 mol de células x

1 mol (NH4)2SO4
𝑥 = 0.22583558 mol N ∗
2 mol N

132.1 𝑔𝑟 𝑑𝑒 (NH4)2SO4
𝑥 = 0.11291779 𝑚𝑜𝑙 (NH4)2SO4 ∗
1 mol (NH4)2SO4

𝑥 = 14.9 𝑔𝑟 𝑑𝑒 (NH4)2SO4

Para enriquecer el cultivo de nitrógeno se añade 14.9 gr de Sulfato de Amonio,

agregando específicamente 2.25 gr de Nitrógeno como elemento.

Caso 3: Formulación de Azufre

a. ¿Cuánto de S se requiere?

Se requiere de 1% de azufre para preparar un medio de cultivo para obtener 30

gr/L de levaduras determinando:

30 gr 1
𝑥= ∗
1L 100

𝑥 = 0.3 𝑔𝑟 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑓𝑟𝑒
 b. Este requerimiento se puede satisfacer con (NH4)2SO4 ¿En qué cantidades?

b.1 En forma de (NH4)2SO4

32 𝑔𝑟 − − − − − − − − − − − − − −132.4 𝑔𝑟

0.3 𝑔𝑟 − − − − − − − − − − − − − −𝑥

𝑥 = 1.2388125 𝑔𝑟 𝑑𝑒 (𝑁𝐻4)2𝑆𝑂4

Para enriquecer el cultivo de azufre se añade 1.2388125 gr de Sulfato de Amonio,

agregando específicamente 0.3 gr de azufre como elemento.

V. RESULTADOS

Formulación Mg Formulación de N Formulación de S

Mg = 0.5 𝑔𝑟 N = 2.25 𝑔𝑟 S = 0.3 𝑔𝑟

MgSO4 = 0.746 𝑔𝑟 (NH4)2SO4 = 14.9 𝑔𝑟 (NH4)2SO4 = 1.2388125 𝑔𝑟

MGSO4.7H2O = 1.52037 𝑔𝑟

VI. CONCLUSIONES

 De acuerdo con lo realizado en la presente práctica se concluye que es de gran

importancia formular adecuadamente los medios de cultivo, añadiendo la cantidad de
elemento requerido por el microorganismo para la producción requerida de biomasa.

 Se logró determinar por medio de cálculos los requerimientos de Mg, N y S de un

medio de cultivo para producir biomasa a partir de una levadura.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Shuler M. and K. Fikret. 1995. Bioprocess Engineering. Basic Concepts. Edit. Prentice
Hall New Jersey. USA.

Doran, P. (1995) Principios de ingeniería de los bioprocesos. Zaragoza, España: Editorial

ACRIBIA, S.A
Biotecnología Vegetal (cultivo de tejidos, manual) González, Cruz, Camarillo, Silos.
2000. SEP. 133p.