UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PANAMÁ

FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL

LIC. INGENIERÍA AMBIENTAL

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

EXPERIENCIA DE LABORATORIO #9

TÉCNICAS DE CONTEO DE PLACAS

NOMBRE:

COOK, JEIZNAYANAH 3-740-1799

MORA, KAREN 4-788-1493

PALACIOS, MELISSA 8-942-774

FACILITADORA:

DANNA VILLARREAL

GRUPO

1IB131 –A

FECHA DE ENTREGA:

17 de junio de 2019
 ÍNDICE

Contenido Página

Introducción……………………………………………………………… 1

Objetivo...……………………………………………………………… 2

Marco teórico…………………………………………………………… 2

Materiales …….…………………………………………………… 2

Procedimiento…………………………………………………………… 2

Análisis de Resultado………………………………………………… 3

Conclusiones y Recomendación……………………………………… 5

Anexo ………………………………………………………………… 6

Bibliografía……………………………………………………………… 8
INTRODUCCIÓN

La técnica se basa en contar las “unidades formadoras de colonias” o UFC

presentes en un mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla
en el medio de cultivo de elección después de un cierto tiempo de incubación a la
temperatura adecuada proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos,
de la muestra bajo estudio; Esos microorganismos son capaces de formar la colonia,
es decir una UFC. Para que Las colonias puedan contarse de manera confiable, se
hacen las diluciones decimales necesarias de la muestra, antes de ponerla en el
medio de cultivo.

1
Objetivo

• Que el estudiante maneje las técnicas de conteo en placas.

Marco teórico

Uno de los procedimientos de rutina para determinar el contenido bacteriano de la

leche, agua, alimentos y muchos otros tipos de productos es la técnica de conteo
de placa. Este procedimiento se basa en el concepto que cada célula desarrolle una
colonia y de esta manera el número de colonias en la placa revela el número de
organismos presentes en la muestra y que tiene capacidad de crecer bajo las
condiciones de incubación escogida.
Muchas de las experiencias a desarrollar en este curso incluyen conteo de placa
por la técnica aprendida en esta experiencia sirve para pruebas futuras.
El material de muestra generalmente se diluye en agua salina estéril, con la finalidad
de obtener entre 30 y 300 colonias, cantidad esta que puede ser evaluada con
buena aproximación de la población microbiana existente. Debido a que no se
conoce con anterioridad el número preciso de microorganismos presentes en la
muestra se recomienda realizar diluciones para un mejor resultado que concuerde
con el ámbito de 30 y 300 colonias.
Materiales
✓ Suspensión bacteriana de Echerichia Coli.
✓ Frasco agua de disolución.
✓ Placas Estériles
✓ Agar nutritivo
✓ Pipetas estériles de 1 ml, 5ml y 10 ml.
✓ Baño de agua caliente aprox. 45°C.

Procedimiento
1. Realice las siguientes disoluciones de la suspensión bacterial: 1/10; 1/100;
1/1000 utilizando.
2. Rotule platos Petri para cada disolución preparadas, indicando además el
tiempo, la temperatura de incubación.

2
 3. Haga por duplicado la siembra de 1 ml cada disolución y adicione las placas
Petri como lo indica el profesor.
4. Permita que el medio solidifique. Incube por 24 horas 37°C en posición
invertida.
5. Bajo una lupa iluminada realice el conteo y realice el promedio de las dos
siembras correspondientes a cada dilución.

Resultados

Dilución Números de Colonias en Promedio Ilustración

el Plato
Control Cantidad de colonias 11 incontables
aprox.
Observación: Presenta
contaminación por hongos

10-1 Cantidad Incontables incontables

Presenta contaminación
por hongos

10-5 Cantidad de colonias: Incontables

incontables
Presenta contaminación
por hongos

10-7 Cantidad de colonias 100

aproximadamente.
Presenta contaminación X=
por hongos 100
𝑋 100=16.66
6

3
 10-9 20 colonias observadas.
Y se muestra
contaminación por hongos. 20
𝑋= 𝑋100
6
= 333.33

10-11 15 colonias.
Contaminación por hongos
15
𝑋= 𝑋100 = 250
6

• Para el cálculo de bacterias/ml escoja la dilución que de entre 30 y 300

colonias.
• Exprese el resultado como bacterias/ml multiplicando el promedio obtenido
por la dilución utilizada. Utilice cifras significativas.

Obtención del UFC:

𝑈𝐹𝐶 # 𝐶𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠
= 𝑥100
100𝑀𝐿 𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

Dilución 𝑈𝐹𝐶 # 𝐶𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠

= 𝑥100
100𝑀𝐿 𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

Control 𝐼𝑛𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
10-1 𝑖𝑛𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
10-5 𝑖𝑛𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
10-7 𝑈𝐹𝐶 100
= 𝑥100 = 0.001
100𝑀𝐿 10000000
10-9 𝑈𝐹𝐶 20
= 𝑥100 = 0.000002
100𝑀𝐿 1000000000
10-11 𝑈𝐹𝐶 15
= 𝑥100 = 0.000000015
100𝑀𝐿 100000000000

4
Conclusión
Mediante la experiencia llevada a cabo en este laboratorio pudimos obtener los
siguientes conocimientos:
• La técnica de conteo en placa es muy utilizada cuando se necesita
determinar el tamaño de la población bacteriana de una muestra.

• Debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a su

composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un
microorganismo o de cientos de ellos.

• En los métodos o técnicas de conteo de microorganismos vivos, son

inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras
pequeñas, es posible cometer grandes errores.

• Cuando se realiza el conteo en placas es importante que solo crezca un

número limitado de colonias en la placa

• Cuando hay demasiadas colonias en las placas (más de 300 colonias) se

considera que estas son incontables

Recomendaciones

✓ Mantener abierta la placa Petri por un mínimo de tiempo cuando se va a

sembrar para evitar que haya contaminación del cultivo.
✓ Utilizar guantes al momento de realizar la experiencia.
✓ Asegurarse de la esterilización de todos los materiales que se utilicen para
los medios de cultivos.
✓ Realizar correctamente la limpieza y desinfección del lugar donde se vayan
a colocar las muestras.
✓ Cambiar en cada muestra la pipeta.

5
 Anexos

Muestras para examinar

Agua residual obtenida para la experiencia

Preparación del agar

Extracción del agua residual 6

 Agar en el baño maría
Vertimiento del agar en la placa Petri

Muestra de las diferentes diluciones

Agua destilada

Proceso de delusión 7
Bibliografía

1. Standart Methods for the wáter and wastewater. AWWA-APHA. Edition 1980.

2. Microbiología. Pelczar/reid/Chan. Cuarta edición 1982. Burdon/Williams:

Microbiología. Primera Edición.