“Universidad De Las Fuerzas Armadas ESPE”

Departamento De Ciencias De La Vida Y De La Agricultura

Carrera De Ingeniería Agropecuaria I.A.S.A 1
Informe De Laboratorio De Análisis e Investigación Microbiológica N° 6
Tema: Coloración Gram

Nombre: Karent Tapia Grupo: 1

Nivel: Tercero “A” Fecha: 2019/12/05
Objetivos:
1. Definir que es la tinción Gram y sus funciones.
2. Diferenciar las bacterias Gram positivas y Gram negativas a partir de la tinción obtenida.
Observaciones:
La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de laboratorio que
se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por Christian
Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que
fuera posible diferenciar los grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba
resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las
bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el
antibiótico más adecuado para tratarla.

Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las
bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de
las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana
celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida
por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química
y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas
explica y determina las características tintoriales.
La tinción de Gram se basa en lo siguiente:
1. Colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano
de la pared bacteriana.
2. Se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la
formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de
la pared bacteriana.
3. Se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los
poros de la misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas
debido a que ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol-
 acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano,
retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden
retener por tener menos cantidad de peptidoglicano.
4. Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo.
Hay un tipo de tinción Gram llamada tinción Gram variable secundaria en la cual las bacterias de un
mismo género que pueden observarse en la misma muestra como Gram positivas y como Gram
negativas.
Hay que tomar en cuenta que no todas las bacterias se pueden teñir por esta técnica, ya que carecen
de pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una composición química diferente
(micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de ácidos micólicos).

Las funciones de la tinción Gram son:

 Puede proporcionar información rápida para diagnósticos de infecciones.
 Puede revelar los agentes causales incluso con una toma de muestra no adecuada.
 Hace posible distinguir entre contaminación de la muestra y una verdadera infección.
 Puede ayudar al clínico a seguir o cambiar un tratamiento antibiótico inicial antes de los
resultados del cultivo, y en algunos casos, es capaz de mostrar la necesidad de una atención
médica urgente.
 Actualmente la tinción de Gram sigue siendo un método eficaz e importante en el laboratorio,
además de que es rápido y económico, por lo que se debe estandarizar para evitar errores
técnicos o de interpretación.
Gráficos

Grafico1: Bacterias Gram positivas Grafico2: Bacterias Gram negativas

(mastitis)
Conclusiones
1. Se definió la coloración Gram como un método que clasifica a las bacterias en dos grupos
Gram positivo y Gram negativo mediante una tinción diferencial eficaz y rápida que su
principal función es proporcionar información rápida para diagnósticos de infecciones.
2. Al terminar la tinción se pueden diferenciar dos colores azul-violeta y rojo-rosado las cuales
representan a las bacterias Gram positivas y Gram negativas respectivamente, la diferencia de
colores de debe a las características que tienen sus paredes celulares.
Bibliografía
Mora, X. (2012). Diferenciando bacterias Gram positivas y Gram negativas. Selecciones avícolas.
Rodríguez, P., & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Ciudad de México:
Medigraphic.
 “Universidad De Las Fuerzas Armadas ESPE”
Departamento De Ciencias De La Vida Y De La Agricultura
Carrera De Ingeniería Agropecuaria I.A.S.A 1
Informe De Laboratorio De Análisis e Investigación Microbiológica N° 6
Tema: Coloración Gram
Nombre: Karent Tapia Grupo: 4
Nivel: Tercero “A” Fecha: 2019/12/05
Cuestionario #4
1. Diferencias químicas entre bacterias Gram negativas y Gram positiva
Gram Positivas Gram negativas

No tienen membrana celular exterior, así que
contienen una gruesa capa de peptidoglicano.
Tiene dos clases de ácidos teicoicos: anclado en
la cara interna de la pared celular y unido a la
membrana plasmática, se encuentra el ácido
lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido
teicoico que está anclado solamente en el
peptidoglicano la gruesa capa de peptidoglicano
es responsable de que la coloración violeta se
mantenga.
Poseer una pared celular más resistente y con
mayor proporción de peptidoglicanos, no son
susceptibles a la acción de solventes orgánicos,
sino que este actúa deshidratando los poros,
cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse
el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo
la coloración azul-violeta.
Son no patógenas, es decir, que no causan
enfermedades;
incluso forman parte de los microbiomas
comensales humanos que se encuentran en la
boca, la
piel, el intestino y el tracto respiratorio.
Tienen una membrana celular exterior, la capa de
peptidoglucano de las bacterias Gram negativas
es delgada, y se encuentra unida a una segunda
membrana plasmática exterior (de composición
distinta a la interna) por medio de lipoproteínas.
La capa de peptidoglucano que posee es
demasiado delgada como para poder retener el
complejo de cristal violeta/yodo que se formó
previamente, y por lo tanto este complejo se
escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea.
La membrana exterior está hecha de proteína,
fosfolípido y lipopolisacárido, la membrana
externa de las bacterias Gram negativas es
soluble en solventes orgánicos.
un 90-95% de las bacterias Gram negativas son
patógenas para los humanos, además, por lo
general son más resistentes a antibióticos o
desarrollan resistencia a estos de manera más
rápida que las Gram positivas.

2. ¿Afecta la edad del cultivo a la reacción de tinción Gram?, ¿por qué?

La edad si afecta, ya que mientras envejecen los cultivos con bacterias Gram positivas pierden capas
de peptidoglicanos y teñirse de rojo-rosado aparentando ser bacterias Gram negativos.
 3. ¿En qué consiste el test de KOH y para qué se utiliza?
La prueba de KOH (o preparación de KOH) se utiliza para averiguar si se tiene una infección
por hongos. Este tipo de infección puede suceder en varias partes del cuerpo, como en la piel,
las uñas, la boca o la vagina.
Pasos para realizar el test de KOH
1. Recolección: muestras de piel, uñas o cabello son colectadas del área infectada del paciente.
 Muestra de piel: con un escalpelo se raspar suavemente células epiteliales del área
infectada.
 Muestras de cabello: Con un fórceps se remueven los tallos y folículos de cabello del sitio
infectado.
2. Las raspaduras se colocada en una placa donde son cubiertas con hidróxido al 10 o 20%.
3. Se deja reposar la placa hasta que este transparente, esto sucede luego de 10 a 15 minutos en
este tiempo se disuelven las células epiteliales y cabello.
4. Si se desea mejorar la transparencia se puede añadir dimetilsulfóxido al portaobjetos,
5. para que lo hongos se hagan fácilmente reconocibles se puede añadir lactofenol azul de
algodón.
6. Calentar ligeramente el portaobjetos para acelerar la acción del KOH.
7. Añadir blanco calco flúor a la placa para que el hongo se vuelva fluorescente haciéndolos más
fáciles de identificar bajo un microscopio fluorescente.
8. Se coloca la placa bajo el microscopio para analizar.
Cuando una prueba de KOH es negativa no muestra a ningún tipo de hongo, dermatofitos ni levaduras.
Si se observan dermatofitos o levaduras indica que la persona tiene una infección micótica. Pruebas
posteriores suelen ser innecesarias.

Bibliografía
Fischbach, F., & Dunning, M. (2009). A manual of laboratory and diagnostic tests. Lippincott
Williams & Wilkins.
López, L., Hernández, M., Colín, C., Ortega, S., Cerón, G., & Franco, R. (2015). Las tinciones básicas
en el laboratorio de microbiología. Ciudad de México: Medigraphic.