0

Clasificación de los cromosomas

A B

1 2 3 4 5

6 7 8 9 10 11 12

D E
13 14 15 16 17 18

Crs.
sexuales
19 20 21 22
X Y
F G

1
2
3
 PRACTICA 3
ESTUDIO GENEALOGICO EN GENETICA HUMANA

Objetivo y material
El objetivo de esta práctica es que el alumno aprenda a confeccionar y esquematizar
árboles genealógicos; a determinar, en la medida de los posible, el genotipo de los individuos que
lo componen, y a conocer la transmisión de algunos caracteres sencillos y de fácil observación.
El material biológico de esta práctica serán los propios alumnos y sus familiares para la
observación de algunos caracteres genéticos. Con sus datos se elaborarán las genealogías.

Introducción
El hombre presenta ciertas características especiales que lo califican como un material
difícil para el estudio genético. De hecho, estas características son:
1. Hay una gran diversidad genética de individuos, y también la estructura genética de las
poblaciones humanas varía continuamente debido a las migraciones, la mezcla de razas, etc.
2. Por motivos éticos y morales no se practican cruzamientos experimentales, de los que
por otra parte no se obtendría gran información, ya que:
a) de cada parto suele nacer un solo individuo
b) las gestaciones son largas
c) entre una generación y la siguiente transcurre mucho tiempo
d) el tamaño de las familias es pequeño.
En cambio, otros organismos que se utilizan frecuentemente en la investigación genética
presentan características mucho más ventajosas. Por ejemplo en los ratones, ocurre una
generación cada dos meses y los descendientes de cada pareja pueden contarse por decenas. En
Drosophila, la generación dura 20 días y se cuentan los descendientes por centenares.
Así, en estos organismos y otros de características similares, los cruzamientos
experimentales constituyen uno de los mejores métodos para el conocimiento de los caracteres
hereditarios.
Por lo tanto, la genética humana tiene que recurrir para su desarrollo a métodos indirectos
tales como el uso de pedigrís o árboles genealógicos, análisis de poblaciones, etc.
A pesar de todas estas dificultades, desde principios de siglo y mediante el uso de técnicas
genealógicas, se ha ido acumulando el conocimiento de nuevos caracteres determinados
genéticamente y de los genes que los controlan, hasta llegar a varios millares. Posteriormente, las
técnicas citogenéticas y moleculares han permitido identificar nuevos genes y determinar su
localización cromosómica.

Protocolo
La práctica en sí consiste, en primer lugar, en el reconocimiento de las variaciones
fenotípicas para cada uno de los caracteres monogénicos que se describen a continuación, de
donde el alumno deducirá su genotipo en cada caso. Los datos se tomarán en una hoja como la
que se indica al final de esta práctica. Se usará una hoja de datos para cada persona.

Descripción de los caracteres

4
1) Disposición del lóbulo de la oreja. Lóbulo separado de la mejilla o pegado lateralmente a la
mejilla.

2) Línea frontal del pelo. Puede ser continua o tener un saliente frontal en el centro denominado
"pico de viuda". Obviamente las personas calvas no se pueden contabilizar.

3) Capacidad de enrollar la lengua. Ser o no capaces de enrollar la lengua en forma de U fuera de

la boca.

4) Pigmentación del iris. Ojos azules frente a ojos más oscuros, sean éstos verdes o marrones. Lo
que se compara es la ausencia total o no de pigmentación en la superficie del ojo. En ausencia de
ésta, se observa la lámina interna azul del iris, y los ojos serán totalmente azules. La presencia de
pigmento en las capas superiores del iris enmascara en mayor o menor grado el color azul del
fondo. Otros genes determinan el color exacto y su intensidad para ojos verdes, marrones, etc.,
pero en esto no nos fijaremos.

8) Hoyuelos faciales a ambos lados de la boca. Presencia o ausencia de hoyuelos en las mejillas.

5
 Una vez realizada la observación, proceder de la siguiente manera:

1. Tomar los datos del fenotipo propio

2. Anotar todos los fenotipos en el lugar correspondiente de la hoja de datos.
3. Tomar los datos de tantos parientes (padres, hermanos, abuelos, tíos) como sea posible.
4. Anotar los datos de cada persona en una hoja de datos diferente.
5. Confeccionar el árbol genealógico indicando el fenotipo de cada persona para, al
menos, dos de los caracteres analizados.
6. Determinar si es posible el tipo de herencia de los caracteres analizados.
7. En base al tipo de herencia, nombrar los alelos adjudicados a cada carácter en la hoja de
datos, usando una letra distinta para cada carácter, en mayúsculas/minúsculas para
dominante/recesivo.
8. Por último, indicar cuando sea posible los genotipos de todos los miembros para cada
carácter.

Como ejemplo de árbol genealógico se seguirá un esquema como el que se indica a

continuación:

1 2 3 4

II

1 2 3 4 5 6 7 8 9

III

1 2 3 4 5

En la genealogía se indica el orden de las generaciones con número romano. La primera

generación (I) corresponde a la primera persona de la que se posean datos, por ejemplo la de los
abuelos del alumno; la segunda (II) correspondería a la de los padres y tíos, y la tercera (III), a la
generación del alumno.

Los varones se representan con cuadrados, las mujeres con círculos, y por rombos los
individuos de los que no se conocen los datos (II.9). Las parejas se unen por una línea horizontal.
Los descendientes se disponen bajo una línea horizontal desde la que parte una línea vertical por
individuo, excepto en el caso de mellizos (III.4 y 5) o gemelos fraternos (II.4 y 5), que se indican
por líneas convergentes (ver figura). Los individuos que muestran el fenotipo en estudio se
indican rellenando el símbolo.

6
HOJA DE DATOS 1
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido
Pico de viuda ..... presente .... ausente
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente
Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 2
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido
Pico de viuda ..... presente ....ausente
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente
Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 3
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido
Pico de viuda ..... presente .... ausente
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente
Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes

7
HOJA DE DATOS 4
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 5
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 6
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo

8
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 7
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 8
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 9
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
9
Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 10
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
_____________________________________________________________________________

HOJA DE DATOS 11
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo
10
HOJA DE DATOS 12
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________

Fenotipo Fenotipo
Lóbulo de la oreja ..... separado ..... unido Dedo autoestopista ..... presente..... ausente
Pico de viuda ..... presente .... ausente Longitud del índice ..... corto .....
largo
Lengua en U ..... capaz ..... incapaz Dedo meñique ..... curvado .....
recto
Pigmentación del iris .... presente ..... ausente Hoyuelos faciales .... presentes... ausentes
Pelo en 2ª falanges .... presente ..... ausente Dedo gordo del pie ..... corto .....
largo

ARBOLES GENEALOGICOS

11
 PRACTICA 4
ESTUDIO DE LA HERENCIA POLIGÉNICA
Recuento de las líneas de las huellas dactilares

Objetivo y material
1.- Recogida de un juego completo de huellas dactilares propias.
2.- Clasificar las huellas de acuerdo a su morfología.
3.- Determinar el recuento total de líneas (TRC) de un juego completo de huellas.
4.- Construír un histograma de la distribución de frecuencias con los datos obtenidos del grupo de
prácticas.
5.- Discutir las características de la herencia poligénica y el por qué de su difícil análisis.

Introducción
La herencia poligénica no se puede analizar empleando pedigríes ni estudiando los
cromosomas (de no ser que se estudie una aberración cromosómica en concreto). Un rasgo
poligénico es el fenotipo resultante de la acción de dos o más genes. Estos tienen unas
características comunes:
1.- los rasgos se cuantifican midiéndose,
2.-los rasgos son controlados por 2 o más genes resultando en un efecto aditivo,
3.- los rasgos son controlados por efecto de alelos múltiples,
4.- los fenotipos de los rasgos poligénicos y multifactoriales varían de expresión
por efecto de los factores ambientales.
Existen numerosos ejemplos de este tipo de herencia por ejemplo la estatura, el peso, la
inteligencia, el color de la piel, etc.
Demostrar y estudiar la herencia de los rasgos poligénicos no es fácil. El ejemplo que a
continuación te proponemos estudiar explorará cómo los rasgos de la herencia de las huellas
dactilares son modelos de herencia poligénicas. Recogeréis las huellas dactilares vuestras y
prepararéis un perfil de las mismas.
En 1890, Francis Galton sugirió que las huellas dactilares serían una buena manera de
identificación para humanos. Durante los últimos años de hecho, tanto los dibujos de las huellas
dactilares (de las manos y pies) y de las huellas de las palmas de las manos y pies han sido de gran
interés para numerosos estudios especializados. Un ejemplo de su utilidad es el estudio de la
huella del recién nacido para el diagnóstico precoz de anormalidades cromosómicas.
La herencia de las huellas dactilares, al igual que los demás caracteres de herencia
poligénica, también se ve influída por factores ambientales aunque, debido a la precocidad y
rapidez del desarrollo de éstas, el fenotipo no cambiará tras el nacimiento. Las huellas dactilares
se pueden detectar a partir de la 6ª semana de desarrollo fetal, llegando a su mayor desarrollo
hacia la semana 12-13. Posteriormente regresarán hasta adquirir la morfología final que ya no se
verá alterada durante el restante desarrollo prenatal y postnatal.

12
 ARCOS LAZOS ESPIRALES

Clasificación de las huellas

Los patrones de los dibujos de las huellas se pueden clasificas en tres grupos
principalmente: arcos, lazos y espirales. El arco es el patrón más simple y menos frecuente. En las
huellas donde aparecen lazos, las líneas aparecen en tres direcciones, encontrándose en un punto
intermedio (el trirradio) con ángulos de unos 120 grados. En el centro del punto de encuentro se
forma un triángulo. Los lazos pueden denominarse radiales o cubitales, dependiendo de hacia
dónde estén inclinados; por ejemplo, un dedo meñique presentará un lazo radial si su trirradio se
abre hacia el pulgar de su misma mano. Un lazo cubital será aquel que del pulgar se abra hacia el
meñique de la misma mano. El patrón espiral presenta dos trirradios (formándose dos triángulos).
Las frecuencias de estros tres patrones en la población son de 5,0% para el arco, 5,4% para el
lazo radial, 63,5% para el lazo cubital, y 26,1% para el espiral.

Estudio de las huellas dactilares: recuento de las líneas

El objetivo de este estudio será el estudio del total de las líneas de la huella (en inglés:
total ridge count o TRC). Holt en 1968 determinó que para varones la media es de 145 y para
mujeres de 126.
Las líneas se han de contar desde el triradio al centro de la huella (ver la línea blanca de las
imágenes de las huellas de arriba), es decir, las huellas que presentan el patrón del arco tienen un
recuento de cero (no hay triradio). En los espirales el recuento ha de efectuarse desde cada
triradio al centro de la huella. Una vez contadas todas las líneas de todas las huella por persona se
sumarán para obtener el TRC. A continuación se examinará cómo el TRC apoya el modelo de
herencia poligénica.

Características de algunos síndromes comunes:

- Trisomía 21: dedos con lazos cubitales generalmente, lazos radiales en dedos 4 y 5.
- Trisomía 18: líneas poco desarrolladas, gran frecuencia de arcos (media de 7-8 con al menos un
arco). En los pulgares sin arcos, con lazos radiales, recuentos TRC bajos.
- Síndrome de Turner (45,X): alto recuento TRC sin aumento de espirales.

Relación entre la media de TRC y el número de cromosomas X e Y

45, X 165 47, XYY 103

46, XY 145 48, XXYY 88
46, XX 126 48, XYYY 83
47, XXY 114 49, XXXXX 17

13
 Recogida de datos individuales
(pegar aquí la cinta adhesiva con las huellas en cada casilla)

pulgar derecho (I) índice derecho (II) corazón dcho (III) anular derecho (VI) meñique dcho(V)

pulgar izquierdo (I) índice izquierdo (II) corazón izdo (III) anular izdo (IV) meñique izdo (V)

mano derecha
pulgar índice corazón anular meñique

patrón
obtenido: ____________ ____________ ____________ ____________ ____________
recuento
parcial: ____________ ____________ ____________ ____________ ____________

recuento total = ____________

mano dcha _

mano izquierda
pulgar índice corazón anular meñique

patrón
obtenido: ____________ ____________ ____________ ____________ ____________
recuento
parcial: ____________ ____________ ____________ ____________ ____________

recuento total = ____________

mano izda _

Recuento total dos manos: TRC= ___________

14
 Recogida de datos del grupo de prácticas
sexo
estudiante V/M TRC lazos* espirales* arcos*
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24

% del total: ______ ______ ______

media del ________

TRC:
media TRC ________
mujeres:
media TRC ________
varones:

(*) poner el número de dedos

15
 Histograma de la distribución de
frecuencias
10

8
nº alumnos

valores del TRC

Preguntas de la práctica:
1.- ¿Cuál es la media TRC para la clase? ¿Existen diferencias en las TRC medias
para los varones y mujeres?
2.- ¿Cuál puede ser la causa de esta diferencia? Razona tu respuesta.
3.- Compara tu TRC con la media total y con la de tu sexo.
4.- Resume y razona los resultados obtenidos en el histograma.
5.- De haber recogido datos de una población mucho mayor ¿crees que el gráfico
presentaría otro aspecto? Razona tu respuesta.

Respuestas:

16
 PRACTICA 5
ESTUDIO DE POLIMORFISMOS
Análisis del grupo sanguíneo y de un VNTR

Objetivo y material

1.- Análisis de un polimorfismo fenotípico: determinación del grupo sanguíneo.

2.- Análisis de un polimorfismo silencioso de ADN tipo VNTR.
3.- Evaluar la utilidad de ambos para diversas aplicaciones médicas y legales.
En ambos casos, el material de partida será la sangre de los propios alumnos, y en su caso,
muestras de sangre de familiares de éstos, previamente recogidas.

Introducción
Los polimorfismos son el reflejo de la diversidad genética de la especie. Se dice que existe
un polimorfismo en un determinado locus cuando hay más de un alelo presente en la población
con una frecuencia superior al 1%. Aunque un individuo sólo puede presentar como máximo dos
alelos distintos para un locus, un estudio poblacional puede revelar la presencia de múltiples alelos
para ese locus, especialmente en ciertos loci que son altamente polimórficos.

Una pequeña proporción de los polimorfismos en el ADN dará lugar a diferencias a nivel
de los aminoácidos codificados, produciendo por tanto un polimorfismo de proteínas. Pero la
mayoría de los polimorfismos en las secuencias de ADN ocurren en ADN no codificante, y no
tienen por tanto efecto fenotípico (se denominan silenciosos). La causa de que la mayor parte de
polimorfismos sean silenciosos es, por una parte, que la gran mayoría del genoma humano
consiste en ADN no codificante; y por otra, que este ADN está sometido a menores presiones
selectivas.

El análisis de polimorfismos en el ADN se aplica a estudios poblacionales y al estudio de la

evolución del genoma humano. Otra aplicación que ha cobrado gran importancia consiste en
detectar polimorfismos asociados a ciertas patologías, lo que permite en muchos casos localizar el
gen responsable, y permite también a veces realizar el diagnóstico de la enfermedad. Por último,
el estudio de polimorfismos tiene un creciente interés en el ámbito de la Medicina Legal; el
análisis genético de la diversidad humana permite resolver ciertos problemas judiciales, utilizando
la "huella del ADN" a modo de huellas dactilares. El análisis conjunto de varios polimorfismos
(tanto fenotípicos como silenciosos) permite identificar individuos con unos márgenes de error
despreciables. Por otra parte, la ventaja sobre otros sistemas de identificación, como las huellas
dactilares, es que se trata de caracteres genéticos que se heredan de manera mendeliana. Esto
permite su uso en pruebas de paternidad.

En esta práctica abordaremos el estudio de polimorfismos humanos de dos maneras muy

distintas. En primer lugar se estudiará el polimorfismo del locus AB0 que determina el grupo
sanguíneo. Puesto que es éste un polimorfismo fenotípico, y además la penetrancia es del 100%,
el análisis se hará directamente sobre el producto génico. En segundo lugar estudiaremos un
polimorfismo de ADN silencioso. Para ello amplificaremos por PCR una región de ADN
genómico que incluye un VNTR. Finalmente analizaremos los datos obtenidos por todo el grupo.

17
Práctica 5a -Análisis de un polimorfismo fenotípico: el grupo sanguíneo AB0.
Objetivo y material
El objetivo de esta primera parte de la práctica es analizar un polimorfismo evidente
fenotípicamente, como es el de los grupos sanguíneos. Se pretende dar a conocer la base genética
de los grupos sanguíneos más importantes. Se determinarán los grupos sanguíneos de cada
alumno mediante la extracción de unas gotas de sangre por punción del cuarto dedo de una mano
con una lanceta estéril. La determinación del grupo sanguíneo se realizará mediante reacciones de
aglutinación con anticuerpos específicos. Estos datos se analizarán respecto a los fenotipos
parentales y se emplearán en estudios posteriores.
Introducción
La sangre de cada persona es tan característica que puede servir como medio de
identificación casi tan preciso como las huellas dactilares. Sólo los gemelos idénticos poseen
características sanguíneas iguales. Por otra parte, la herencia de los caracteres sanguíneos está tan
bien definida que puede seguirse con facilidad. Además, la expresión de estos caracteres, en
general, no está influída por el ambiente; por lo que puede decirse que su penetrancia es del
100%. Por todo ello, la fenotipación de individuos en base a la determinación de los grupos
sanguíneos es particularmente conveniente en los estudios genéticos en poblaciones humanas.
También existen importantes implicaciones en medicina, como: la práctica de las transfusiones
sanguíneas, la relativamente frecuente aparición de enfermedades hemolíticas en fetos y recién
nacidos, las aplicaciones médico-legales y su conexión con otros genes cuya repercusión más
inmediata puede estar en los transplantes de órganos.
Sistema AB0
El primer sistema descubierto, en 1900, fue el AB0, por ser la principal causa de la
incompatibilidad entre las sangres de distintos individuos en las transfusiones de sangre. Dicha
incompatibilidad se basa en una reacción de carácter inmunológico altamente específica,
consistente en la unión química de antígenos extraños contenidos en los eritrocitos del donante y
las aglutininas o anticuerpos específicos presentes en el plasma sanguíneo del receptor.
El grupo sanguíneo AB0 lo determina un locus situado en el extremo del brazo largo del
cromosoma 9. Constituye un caso de alelismo múltiple basado en la existencia de tres alelos:
IA que da lugar a la producción de antígenos A.
IB que da lugar a la producción de antígenos B.
i que determina no producción de antígenos.
Los alelos IA e IB son codominantes, y el alelo i es recesivo frente a ambos. Estas
características determinan la existencia de cuatro fenotipos. El sistema AB0 puede resumirse en el
siguiente cuadro:

Fenotipos Genotipos Antígenos en los eritrocitos Anticuerpos en

suero
A IAIA ó IAi A anti-B
B IBIB ó IBi B anti-A
0 ii ninguno anti-A y anti-B
AB IAIB Ay B ninguno
Las personas que poseen en sus eritrocitos un tipo de antígeno carecen del anticuerpo
respectivo, pero este último está presente en el suero de las personas que carecen de dicho

18
antígeno. Por lo tanto, en una transfusión se producirá reacción de aglutinación antígeno-
anticuerpo o no según los casos, tal como se indica en el siguiente cuadro:

Origen del suero (receptor)

A B AB 0
Origen de los eritrocitos (donante)

A - + - +
B + - - +
AB + + - +
0 - - - -

Sistema MN
En 1927 se descubrió el sistema MN, mediante experimentos con conejos. Los grupos
MN dependen de un par de alelos codominantes M y N, responsables de tres genotipos: MM,
MN y NN y sus respectivos fenotipos M, MN y N. Este sistema es de escasa importancia en la
transfusión sanguínea o en la incompatibilidad materno fetal. Su significación principal en la
genética médica deriva del hecho de que sus frecuencias relativas y su herencia codominante los
hacen especialmente útiles para resolver problemas de identificación, paternidad etc.
Sistema Rhesus
Un tercer sistema de antígenos de superficie de los eritrocitos es el sistema Rhesus
descubierto por Landsteiner, Wienes y Levine en 1940. En un primer análisis y para simplificar se
consideran dos grupos en este sistema:
- Rh+, individuos que poseen antígenos Rh.
- Rh-, indviduos que no poseen antígenos Rh.
Los anticuerpos anti-Rh no son anticuerpos ¨naturales¨, no existen normalmente en la
sangre, pero aparecen en individuos Rh- que han recibido antígenos Rh como consecuencia de
una transfusión de un donante Rh+ o después de un embarazo. La madre Rh- se sensibiliza por los
eritrocitos Rh+ del primer hijo, produciendo anticuerpos anti-Rh. El segundo embarazo de un
niño Rh+ produce un aumento masivo de anticuerpos, que pasan a través de la placenta y
aglutinan los glóbulos rojos del niño.
Este sistema reveló la explicación de una enfermedad hemolítica que se produce en el
recién nacido, la eritroblastosis fetal, además de las reacciones de aglutinación que ocurrían en
transfusiones de sangre entre personas del mismo tipo respecto al sistema AB0.
Las bases genéticas del sistema Rh son complejas, al estar constituido por un gran número
de antígenos eritrocitarios distintos. Este sistema está codificado por tres loci muy próximos entre
sí (C, D, E y sus recesivos respectivos c, d, y e) en el brazo corto del cromosoma 1. Cada uno de
los alelos produce un antígeno y los anticuerpos correspondientes aparecen para todos menos
para el d.
El alelo D, es de un interés primordial al ser el responsable de la codificación
del antígeno D que es muy antigénico y provoca la sensibilización. Es por
esto que para fines prácticos las personas se consideran Rh+ si poseen el
antígeno D y Rh- si carecen del antígeno D según la siguiente tabla:

19
 Genotipo Antígeno Rh
DD D +
Dd D +
dd - -

Posteriormente se han descrito otros grupos sanguíneos tales como los sistemas Kell,
Diego, Kidd, P de herencia autosómica y el Xg ligado al cromosoma X. Estos sistemas no son de
gran importancia en las reacciones de aglutinación postransfusión pero pueden ser utilizados
como marcadores genéticos útiles para la exclusión de posible paternidad, determinación del
grado de histocompatibilidad etc.

Protocolo

Sistema AB0
La determinación de grupos del sistema AB0 se efectúa enfrentando los hematíes
problema con antisueros de especificidad conocida: anti-A, anti-B y anti A,B (grupo 0). La
aglutinación o no aglutinación de los hematíes ensayados frente a cada uno de los antisueros es
indicativa de la presencia o ausencia de los correspondientes antígenos en los mismos.
1.- Dividir un porta en cuadrados. Rotular las divisiones: anti-A, anti-B y anti-AB.
2.- Con una lanceta estéril realizar una punción en el cuarto dedo de una mano.
3.- Depositar en cada cuadrado una gota muy pequeña de la sangre a ensayar.
4.- Añadir 1 gota de cada antisuero en su respectivo cuadrado.
5.- Mezclar bien la sangre con el reactivo empleando palillos distintos para cada ensayo.
6.- Mover la placa lentamente por rotación a temperatura ambiente. Examinar
macroscópicamente la aparición de aglutinación a los 2 minutos.

Sistema Rh (anti-D)
La presencia del antígeno D se determina enfrentando los hematíes problema, en un medio
proteico alto, con suero anti-D. La aglutinación o no aglutinación de los hematíes ensayados es
indicativa de la presencia o ausencia del correspondiente antígeno en los mismos.
1.- Depositar una gota de suero anti-D sobre un porta rotulado.
2.- Sobre otro porta depositar una gota de Autocontrol Rh-hr CROMATEST.
3.- Añadir a cada porta 2 gotas de sangre de un tamaño aproximado a la gota de suero en él
depositada.
4.- Con palillos distintos mezclar reactivo y sangre de forma que cubran una extensión de unos
2 cm cuadrados.
5.- Colocar los portas sobre la lámpara visualizadora precalentada (45º).
6.- Mover la lámpara lentamente con movimientos pendulares durante 2 minutos, observando
macroscópicamente la aparición de cualquier signo de aglutinación .

Lectura
Reacción negativa: ausencia de aglutinación al cabo de los 2 minutos.
Reacción positiva: aglutinación visible a los dos minutos y ausencia de aglutinación con el
autocontrol. La reacción positiva indicará cuál es el antígeno presente en los eritrocitos (por ej. si
sale aglutinación en la casilla “A” el grupo sanguíneo será A).

20
 Si los hematíes presentasen aglutinación en el Autocontrol, dar el resultado como no válido.

Preguntas:
1.- Anotar los resultados obtenidos y deducir el genotipo ó genotipos posibles.
2.- ¿Por qué se tiene en cuenta el grupo sanguíneo de las series AB0 y Rh en las
transfusiones y no la serie MN?
3.- ¿Por qué el antígeno D define básicamente al grupo Rh?
4.- ¿Por qué el análisis de los grupos sanguíneos sólo sirve en algunos casos
para excluír la paternidad y no para asignarla?
5.- ¿En qué casos la eritroblastosis fetal puede manifestarse en el primer
embarazo asumiendo incompatibilidad Rh?

Respuestas:

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Práctica 5b - Análisis de un polimorfismo de ADN silencioso tipo VNTR.
Objetivo y material
En esta segunda parte de la práctica analizaremos las variaciones existentes entre los
individuos a nivel de un locus genómico no codificante, es decir, un polimorfismo silencioso.
Partiendo de sangre de los propios alumnos (y de muestras recogidas previamente de parientes de
éstos, en su caso), amplificaremos por PCR la región de ADN a estudiar y compararemos los
resultados de cada individuo. De este modo se espera observar la utilidad de este tipo de
polimorfismos tanto para la identificación de individuos como para estudiar su transmisión, bien
con fines médicos o legales.

Introducción
El análisis de polimorfismos en el ADN se ha convertido en una técnica de enorme utilidad
en Medicina, por lo que el número de polimorfismos silenciosos que se conocen en el genoma
humano no deja de crecer. Los polimorfismos se determinan en base a su detección mediante
técnicas de biología molecular, bien porque las variaciones en la secuencia de ADN crean o
destruyen dianas para enzimas de restricción (los llamados RFLPs), o porque implican un cambio
en la longitud de ADN (inserciones o deleciones).
De especial interés en nuestro caso es el ADN repetitivo en tándem, como el ADN
minisatélite y microsatélite, consistente en un número variable de copias en tándem de una corta
secuencia de ADN (VNTR, "variable number of tandem repeats"). Los individuos nos
diferenciamos por el número de repeticiones que presentamos en cada locus, número además que
transmitiremos a la descendencia de manera mendeliana.
El polimorfismo que analizaremos en esta práctica es el que se localiza en el locus D1S80,
en el extremo distal del cromosoma 1p. Este locus contiene un VNTR. La secuencia que se repite
en tándem tiene una longitud de 16 bp, y el número de repeticiones en cada alelo varía entre 14 y
41. La región VNTR está flanqueada por secuencias de ADN muy conservadas, lo que permite
utilizar unos cebadores complementarios a dichas secuencias para realizar una reacción de PCR
que nos amplifique dicha región. El tamaño de la región amplificada dependerá del número de
repeticiones, de modo que cada alelo podrá distinguirse por su tamaño. Esto se observará
sometiendo el producto amplificado por PCR a una electroforesis en gel de agarosa y tiñendo el
ADN con bromuro de etidio.
Se han encontrado hasta la fecha 29 alelos distintos en este locus, lo que permite un poder
de discriminación de entre 0.95 y 0.98. Se trata pues de un polimorfismo que se incluye
habitualmente en los análisis con fines forenses. Sin embargo, para distinguir todos los alelos (que
se pueden diferenciar unos de otros en tan solo 16 bp de longitud) se requieren técnicas
sofisticadas de electroforesis. En la presente práctica realizaremos una electroforesis de menor
resolución, lo que no nos permitirá distinguir todos los alelos con exactitud, pero sí observar la
aparición de los dos alelos de cada individuo y la diversidad existente en la población.
El análisis se realizará sobre el ADN de los propios alumnos. El ADN será obtenido de una
mínima cantidad de sangre, para mostrar cómo pueden obtenerse muestras analizables a partir de
restos como una mancha de sangre en la escena de un crimen. A partir de esa muestra, se seguirá
un sencillo protocolo que básicamente rompe las células y utiliza una resina que elimina todo lo
que pudiera interferir con la amplificación posterior del ADN, que permanece en el sobrenadante.
A continuación, ese sobrenadante con el ADN se añade a una mezcla de reacción con los
elementos necesarios para amplificar por PCR la región genómica que queremos estudiar. Esto
pondrá de manifiesto la enorme fuerza de la técnica, que permite obtener cantidades de ADN
visibles en una electroforesis partiendo de pocos nanogramos de ADN total.
Al final de la práctica se analizarán los resultados conjuntos y se discutirán sus
aplicaciones.
Protocolo

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 Puesto que la técnica de PCR es muy sensible a la contaminación con cualquier otro ADN,
durante todo el proceso tendremos especial cuidado en tocar todo con pinzas o guantes y no
poner en contacto muestras distintas.

Día 1

a) obtención del ADN genómico total

1. - Utilizando un punzón estéril, pinchar el dedo anular hasta que sangre. Con una pipeta,
recoger cuidadosamente la sangre; con 5 l es suficiente, si sale más, mejor. Pasarla a un tubo
eppendorf.
2. - Añadir 1 ml de agua destilada. Mezclar bien, invirtiendo el tubo varias veces.
3. – Centrifugar 1 minuto en la microcentrífuga. Recoger el sobrenadante con una pipeta y
desechar. ATENCION: el precipitado apenas será visible. Hay que recoger con una pipeta de 1 ml
aproximadamente 960 l del sobrenadante, sin tocar ni remover el fondo del tubo.
4. – Añadir 100 l de resina “InstaGene”. La resina estará en agitación constante y
cogeremos el volumen indicado utilizando una punta de boca ancha (azul). Mezclar.
5. – Incubar a 56ºC 15 minutos.
6. – Agitar el tubo en vortex a máxima potencia durante 10 segundos.
7. – Incubar en baño hirviendo durante 8 minutos.
8. - Repetir la agitación en vortex otros 10 segundos.
9. – Centrifugar 2 minutos.
10.- Recoger 20 l del sobrenandate con cuidado de no coger la resina, que queda al
fondo del tubo. Los pasaremos a otro tubo eppendorf de 0.2 ml en hielo que contiene 30 l de la
mezcla de PCR.

b) amplificación de la región de ADN que contiene el polimorfismo

1. - Tendremos en un tubo en hielo: 20 l del sobrenadante con el ADN, y 30 l de
mezcla de PCR. La mezcla de PCR contiene todo lo necesario para la amplificación de la región
concreta del genoma que queremos estudiar, excepto el enzima:
- cebadores específicos que se unirán a ambos lados de la región VNTR.
- tampón, magnesio y sal adecuados para que funcione la polimerasa.
- deoxinucleótidos (dATP, dCTP, dGTP y dTTP), precursores del ADN de nueva síntesis.
2. - Añadir al tubo 0,5 l de la termopolimerasa, el enzima que llevará a cabo la síntesis del
ADN a partir de los cebadores y tomando como molde el ADN del alumno.
3. - Meter la muestra en el termociclador debidamente programado para realizar 29 ciclos
de desnaturalización del ADN (95ºC), renaturalización para que se unan los cebadores (65ºC), y
polimerización del nuevo ADN (72ºC).

Día 2

1. - Recoger los tubos con las muestras amplificadas.

2. - Preparar un gel de agarosa al 1.5% en tampón TBE con bromuro de etidio. NOTA: el
bromuro de etidio es un potente mutágeno. Manipular en todo momento con guantes.
3. - cargar en el gel 15-25 l de la muestra con 3-5 l de tampón de carga. Incluír en otros
pocillos del mismo gel los controles de tamaño adecuados.
4. - Realizar la electroforesis a 120V durante 90 minutos.
5. - Llevar el gel al transiluminador y obtener la imagen de los fragmentos de ADN.
6. - Analizar los datos obtenidos por todo el grupo.

Preguntas:
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 1. Analiza la imagen obtenida tras la electroforesis. ¿Qué refleja el distinto
tamaño de las bandas de ADN que se observan en cada muestra?
2. ¿Por qué se ven dos bandas? Si hay alguna muestra donde sólo se vea una,
explícalo.
3. En base a las diferencias observadas, comentar la utilidad de este
polimorfismo para la identificación de individuos, y sus aplicaciones médicas y
legales.

Respuestas:

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 PRACTICA 6
GENÉTICA DE POBLACIONES
Aplicación de la ley de Hardy-Weinberg en la genética de los
grupos sanguíneos (alelos múltiples)

Objetivo y material

1.- Calcular las frecuencias de los fenotipos de grupos sanguíneos obtenidos en la práctica.
2.- Calcular las frecuencias alélicas y genotípicas basándose en la ley de Hardy-Weinberg.
3.- Determinar si la población está o no en equilibrio, y por qué.
El material utilizado serán los resultados obtenidos en la práctica 5(a).

Introducción

G.H. Hardy y W. Weinberg definieron los principios básicos de la herencia poligénica y

demostraron que en poblaciones en equilibrio las frecuencias (p y q) de los diferentes alelos de
un gen (A y a respectivamente) permanecen constantes generación tras generación, siempre y
cuando no se produzcan fenómenos de mutación, selección, deriva genética, migración o deriva
meiótica. En el caso de dos alelos (A y a) si p es igual a la frecuencia del alelo A, y q la frecuencia
del alelo a; entonces:

p+q=1

(o lo que es lo mismo en porcentajes: el % p + el % q = 100%)

En poblaciones donde la fecundación ocurre de forma aleatoria, las frecuencias para los
distintos genotipos serán:

(espermatozoide) (espermatozoide)
p (A) q (a)
(óvulo) p (A) p2 (AA) pq (Aa)
(óvulo) q (a) qp (aA) q2 (aa)

Es decir, que la distribución de los genotipos de la generación será:

p2 + q2 + 2pq = 1

Esta fórmula también se puede usar para calcular las frecuencias de los alelos A o a en la
población. En el caso de los grupos sanguíneos AB0 existen 3 alelos del locus de la isoaglutinina
(I). En este sistema A y B son codominantes, y ambos son dominantes respectos a 0. Este sistema
tiene seis combinaciones genotípicas posibles: AA, A0, BB, B0, AB, 00.

Los individuos homocigóticos AA y heterocigóticos A0 son fenotípicamente iguales, lo

mismo que los individuos BB y B0. Esto dará lugar a 4 combinaciones fenotípicas conocidas

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 como A, B, AB y 0. La Ley de Hardy-Weinberg también se puede emplear en este caso para los
tres alelos:

p (A) + q (B) + r (0) = 1

y las combinaciones genotípicas pueden calcularse por la siguiente ecuación:

p2 (AA) + q2 (BB) + 2pq (AB) + 2qr (B0) + 2pr (A0) + r2 (00) = 1

La ley de Hardy-Weinberg se cumplirá sólo en poblaciones que se encuentren en

equilibrio. Uno de los requisitos para que esto ocurra es que el tamaño de la población sea
suficientemente grande. Nosotros vamos a considerar al grupo de prácticas como una población,
y partiendo de los datos fenotípicos que hemos recogido para el grupo sanguíneo AB0,
calcularemos las frecuencias alélicas suponiendo equilibrio Hardy-Weinberg. Sin embargo, lo más
probable es que el grupo de prácticas no represente una población en equilibrio, dado su limitado
tamaño. Tras calcular las frecuencias alélicas, estimaremos las frecuencias genotípicas y
fenotípicas esperadas y cotejaremos esos datos con los obtenidos. Si no concuerdan, se puede
deducir que la población “grupo de prácticas” no está en equilibrio Hardy-Weinberg. Se
comparará esta situación con otros datos provenientes de poblaciones de mayor tamaño que sí
estén en equilibrio.

Recogida de datos del grupo de prácticas (fenotipos sanguíneos)

fenotipo antígenos Anticuerpos genotipos nº de % del total del frecuencia fenotípica

sanguíneo presentes en presentados posibles estudiantes del grupo prácticas que representa
eritrocitos en la sangre tipo

A
B
AB
O

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Preguntas de la práctica:
1.- Calcular las frecuencias de los alelos A (p), B (q) y 0 (r) empleando la
Ley de Hardy-Weinberg.
2.- Calcular las frecuencias genotípicas y fenotípicas esperadas, y
compararlas con los datos obtenidos.
3.- Discutir si la población está o no en equilibrio H-W, y por qué.

Respuestas:

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