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Facultad de Farmacia, Universidad de Yeungnam, Gyeongsan, 712-749, Corea, División de las preparaciones de hierbas Medicina, Departamento de Medicina
Herbal evaluación, Corea Food and Drug Administration, Seúl, 122-704, Corea, y la Facultad de Farmacia de la Universidad Católica de Daegu , Gyeongsan,
712-702, Corea ha recibido 2 de abril de, de 2003
Otros estudios sobre las semillas de Annona cherimolia han conducido al aislamiento de dos pares de acetogeninas Annonaceous, una mezcla de
epímeros de annomolon A ( 1) y 34- epi- annomolon A ( 1 '), y una mezcla de epímeros de annomolon B ( 2) y 34- epi- annomolon B ( 2 '), que contiene un raro γ-
hidroximetil- γ- resto lactona y un grupo carbonilo. Sus estructuras fueron aclarados sobre la base de métodos espectroscópicos y químicas, y su
estereoquímica absoluta se resolvió mediante la preparación de sus respectivos derivados de éster per-Mosher. Estos acetogeninas mostraron
citotoxicidad sustancial, comparable a la de adriamicina, contra una línea celular de tumor pancreático humano (MIA PaCa-2).
Las acetogeninas Annonaceous son una clase creciente de derivados de ácidos Resultados y discusión
grasos de cadena larga potentes que se encuentran sólo en ciertas especies de la
Las semillas de A. cherimolia se extrajeron con 95% de EtOH, y el residuo se
Annonaceae. El interés en estos compuestos se ha generalizado, como el
extrajo, F001, se repartió por un régimen de extracción estándar (véase ción
conocimiento de su potente antitumoral y actividades pesticidas se comprende
Experimental Sec-). El residuo acuoso MeOH (F005), que era la fracción más
mejor. 1 Annona cherimolia Molino. es la única especie de su género que se cultivan
bioactivo en la prueba de letalidad camarón de salmuera (BST), 11,12 se sometió a
en Europa y se cultiva principalmente en el sur de España, entre Almuo`ecar y La
cromatografía en columna y HPLC de fase inversa.
Herradura (Granada costa). 2 En investigaciones anteriores de Cortés et al., Ocho
nuevos acetogeninas, cherimolin, cherimolin dihidro-, 3 molvizarin, motrilin, 4 itrabin,
jetein, 5 cheri- Molin-2, y almunequin, 6 fueron aisladas de A. cherimolia
Una mezcla de epímeros de 1 y 1 ', [ R] 23D - 5,0 ° ( C 0,02,
CH 2 Cl De 2), se obtuvo como un polvo blanco. El HRFABMS dio un [M + H] + ion en m /
z 595.4574 (calculado 595,4580) correspondiente a la fórmula C 35 H 63 O 7. los 13 espectro
C RMN reveló una duplicación de varias señales que aparecieron en δ 105,2 / 105,3,
semillas. Hemos informado el aislamiento de 10 acetogeninas de las semillas de
132,0 / 132,3, 149,6 / 150,5, y
esta planta. 7-10 En este trabajo, se presenta la identificación de dos pares de
acetogeninas Annonaceous, una mezcla de epímeros de annomolon A ( 1) y 34- epi-
172,0 / 172,6, lo que sugiere la presencia de dos compuestos epiméricos. 13,14 En el 1 H
espectro de RMN, no hay señal H-34 era evidente. Los H-35 protones exhibieron un
annomolon A ( 1 '), y una mezcla de epímeros de annomolon B ( 2) y 34- epi- annomolon
singlete a δ
B ( 2 '). Sus estructuras, caracterizadas por la presencia de un inusual γ- hidroxi-metil- γ-
lactona, fueron aclarados mediante análisis espectroscópico y derivatización 1,64, mientras que en el 13 espectro de RMN de C la señal de C-34 apareció en δ 105.2
química. / 105.3. Estos datos indicaron que para la mezcla de epímeros de 1 y 1 ', H-34 fue
sustituido por un grupo hidroxilo.
253, 323, y 305 (Figura 1), que puede ser explicado por una escisión C-11 / C-12 en
la mezcla de epímeros de 1 y 1 '. 7
1 y 1 ', con dos grupos OH en los carbonos adyacentes del anillo, se dedujo por el 1 RMN
resonancias a δ 3.80 (H-16 / H-19) y 3.40 (H-15 / H-20) y la 13 picos C RMN a δ 74,1
* A quién debe dirigirse la correspondencia. Tel: 82-053-850-3620. Fax: 82-053-850-3602. E-mail: (C-15), 82,3 (C-16), 82,7 (C-19), y 74,3 (C-20), que son característicos de
woomh@cu.ac.kr. acetogeninas mono-THF que tenía dos grupos OH adyacentes a un anillo
† Universidad Yeungnam.
10.1021 / np0301487 CCC US $ 25,00 © 2003 American Chemical Society y la Sociedad Americana de Farmacognosia
Publicado el 10/09/2003 Web
1370 Journal of Natural Products, 2003, vol. 66, No. 10 Son et al.
Figura 1. picos de diagnóstico (EIMS m / z ratios) de la mezcla de 1 y 1 ' y la tri-TMSi ( 1a y 1 ' una) derivado (intensidades se indican entre paréntesis). una H 2 O. si TMSiOH.
Figura 2. picos de diagnóstico (EIMS m / z ratios) de la mezcla de 2 y 2 ' y el tetra-TMSi ( 2a y 2 ' una) derivado (intensidades se indican entre paréntesis). una H 2 O. si TMSiOH. * Los iones no observado.
estereoquímicas relativas de C-15/16 y C-19/20 fueron ambos definidos como treo mediante mezcla de 2 y 2 '. El fragmento en m / z 271 fue la más intensa e indicó importante
la comparación de la 1 H RMN señales de la mezcla de epímeros de 1 y 1 ' para H-15, escisión entre C-19 y C-20 (Figura 2). Ayuda adicional fue dada por el fragmento en m
H-16, H-19 y H-20 con los de compuestos modelo de estereoquímica relativa / z 557, lo que indica una escisión entre C-15 y C-16. El stereocheimisty relativo del
conocida. 18 La mezcla de epímeros de 1 y 1 ' anillo mono-THF con dos grupos hidroxilo que flanquean en la mezcla de epímeros
de
mostró 1 señales de RMN en δ 1.97 (H-17a y 18a) y 1.67 (H-17b y 18b), que son
señales de metileno de protones típicos para una trans- anillo de THF. La mezcla de 2 y 2 ' fue asignado como treo / trans / treo, como en la mezcla de epímeros de 1 y 1 '. Así,
epímeros de 1 la nueva epímeros 2
y 1 ' son C-35 acetogeninas mono-THF con novela γ- hi- droxymethyl- γ- Los restos de y 2 ' fueron nombrados annomolon B ( 2) y 34- epi- annomolon B ( 2 ').
lactona y han sido nombrados annomolon A ( 1) y 34- epi- annomolon A ( 1 ').
Para determinar la estereoquímica absoluta de los centros de carbinol en C-15 y
La mezcla de epímeros de 2 y 2 ', [ R] 23D + 6,0 ° ( C 0,02, C-20 en la mezcla de epímeros de 1
CH 2 Cl De 2), se obtuvo como un polvo blanco. El HRFABMS dio una [M + Na] + de y 1 ', y en C-4, C-15 y C-20 en la mezcla de epímeros de 2 y 2 ', tri- ( R) - y tri- ( S) - de
iones a m / z 633.4359 (calculado 633,4342), correspondiente a la fórmula C 35 H 62 O 8 N ácido fenilacético (MTPA) ésteres methoxytrifluoromethyl (ésteres de Mosher) en la
/ A. los 13 espectro C RMN reveló una duplicación de varias señales que aparecieron mezcla de 1 y 1 ' y tetra- ( R) - y tetra- ( S) - MTPA ésteres en la mezcla de 2 y 2 ' estaban
en δ 171,6 / 172,7, 146,9 / 147,2, 134,4 / 134,6, y preparados. 19-21 los
110.0, lo que sugiere la presencia de dos compuestos epiméricos. El H-3a y H-3b 1 H 1 H RMN datos de desplazamiento químico de 2S / 2 ' s y 2r / 2 ' r mostraron que la
RMN señales de la mezcla de epímeros de 2 y 2 ' se observaron en δ 2,26 y 2,55, configuración absoluta en C-4 de la mezcla de epímeros de 2 y 2 ' es R. Este
respectivamente, en correlación con el 1 H RMN señal en δ 3.90 (H-4). Varias resultado era idéntica a todas las acetogeninas examinados hasta ahora, que
características espectrales en el resto lactona terminal del 2 y 2 ' eran idénticos a los poseen un grupo OH en C-4. Del mismo modo, los datos de éster de Mosher
permitió que las asignaciones estereoquímicas absolutas del carbinol centros
de las acetogeninas lactol mencionados anteriormente, annomolon A ( 1) y 34- epi- annomolon
A ( 1 '). adyacentes al anillo mono-THF como C-15 R y C-20 R en la mezcla de epímeros de 1
y 1 ' y la mezcla de epímeros de 2 y
La colocación de la unidad de anillo de THF y sus hidroxilos flanqueantes de 2 '. datos de bioactividad obtenidos con la mezcla de epímeros de 1 y 1 ' y la mezcla
C-15 a C-20 fue confirmada por el patrón de fragmentación EIMS del derivado TMSi
de la de epímeros de 2 y 2 ' son
Dos nuevas acetogeninas de Annona Semillas Journal of Natural Products, 2003, vol. 66, No. 10 1371
Tabla 1. Característica 1 H RMN de datos de los ésteres de Mosher de 1s y 1 ' s, 1r y 1 ' R, 2S y 2 ' s, y 2r y 2 ' r
Tabla 2. Camarón de salmuera letalidad y la citotoxicidad en líneas celulares tumorales humanas sólida para 1 y 1 ' y 2 y 2 '
compuesto BST una LC 50 ( μ g / ml) A-549 si MCF-7 C HT-29 re A-498 mi PC-3 F MIA PaCa-2 sol
1y1' 3.75 × 10- 1 1.26 3.03 × 10- 1 1.93 × 10- 1 9.30 × 10- 1 × 10- 1 3.12 × 10- 3
2y2' 7.00 × 10- 2 1.37 4.70 × 10- 2 7.19 × 10- 2 3.77 × 10- 1 5.53 × 10- 2 7.48 × 10- 3
adriamicina h Nuevo Testamento yo 1.13 × 10- 3 1.82 × 10- 2 1.28 × 10- 2 2.26 × 10- 3 5.02 × 10- 2 2.62 × 10- 3
una prueba de camarón de salmuera. si carcinoma de pulmón humano. C carcinoma de mama humano. re adenocarcinoma de colon humano. mi carcinoma de riñón humano.
F adenocarcinoma de próstata humano. sol El carcinoma de páncreas humano. h estándar de control positivo. yo ND: no determinado.
resumen en la Tabla 2. La mezcla de 1 y 1 ' y la mezcla de 2 y 2 ' citotoxicidad carcinoma), 28 y MIA PaCa-2 (noma carci- pancreático humano), 29 con adriamicina
comparable a adriamicina contra la línea celular de tumor pancreático humano (MIA como un control positivo.
PaCa-2) mostró. La introducción de un grupo hidroxilo en C-4 en la mezcla de 2 y 2 ' parece Extracción y aislamiento. Las semillas secas de A. cherimolia
dar cuenta de un orden de magnitud más potencia que la mezcla de 1 y 1 ' (8 kg) se percola repetidamente con EtOH al 95% para dar 700 g de un extracto
(F001), en la eliminación del disolvente. F001 se repartió entre CH 2 Cl 2 y H 2 O (1: 1)
para dar el H 2 fracción soluble O- (F002, 300 g) y el CH 2 Cl 2- fracción soluble (F003,
400 g). entonces F003 se repartió entre 90% MeOH acuoso y hexano (1: 1) para dar
en contra de mama (MCF-7), colon (HT-29) y de próstata (PC-
una fracción soluble en hexano (F006, 150 g) y una fracción acuosa MeOH-soluble
3) las líneas celulares. El mecanismo de acción de las acetogeninas ha sido
(F005, 250 g). Todas las fracciones se sometieron a la BST, siendo la fracción más
determinada, y que son potentes inhibidores del complejo I en los sistemas de
transporte de electrones mitocondrial. 22-24 activa F005 (BST LC 50) 1.13 × 10- 2 μ g / ml). Una alícuota de F005 (250 g) se sometió
a cromatografía en columna abierta sobre gel de Si (2,8 kg) eluyendo con
hexano-CHCl 3
seccion experimental
146,9 / 147,2 (d, C-33), 134,4 / 134,6 (s, C-2), 110,0 (s, C-34), 82,7 (d, C-16), 82,4 32, 1475-1482.
(7) Woo, MH; Kim, DH; Fotopoulos, SS; McLaughlin. JL J. Nat. Pinchar. 1999, 62, 1250-1255.
(d, C-19), 74,4 (d, C-15), 74,0 (d, C-20), 69,0 (d, C-4), 42,5 (t, C-10), 42,3 (t, C-12),
33,0 (t, C- 3), 28,9 (t, C-17, C-18), 24,7 (q, C-35), 14,1 (q, C-32); EM-FAB m / z 633
(8) Kim, DH; Ma, ES; Suk, KD; Hijo, JK; Lee, JS; Woo, MH
[M + Na] +, 615 [M + Na - H 2 O] +, 597 [M + Na - 2H 2 O] +, 579 [M J. Nat. Pinchar. 2001, 64, 502-506. (9) Kim, DH; Woo, MH Yakhak Hoeji 1999, 43, 584-590. (10) Woo, MH;
Chung, SO; Kim, DH Arco. Pharm. Res. 1999, 22,
+ Na - 3H 2 O] +, 561 [M + Na - 4H 2 O] +; EIMS m / z 269 [C 14 H 22 O 5] +, 341 [C 21 H 41 O 3] +, 323
[C 21 H 41 O 3 - H 2 O] +, 305 [C 21 H 41 O 3 - 2H 2 O] +; HRFABMS m / z [ M + Na] + 633.4359 para 524-528. (11) McLaughlin, JL En Methods in Plant Bioquímica; Hostettmann,
C 35 H 62 O 8 Na (calculado 633,4342).
K., Ed .; Academic Press: Londres, 1991; Vol. 6, pp 1-35.
(12) Meyer, BN; Ferrigni, NR; Putnam, JE; Jacobsen, LB; Nichols,
Mezcla de epímeros de Annomolon B (2) y 34- epi- DELAWARE; McLaughlin, JL Planta Med. mil novecientos ochenta y dos, 45, 31-34. (13) Chen, Y .;
Annomolon B (2 ') y Tetra-TMSi Derivativo (2a y 2 ' una). Aproximadamente 10 μ g Chen, RR; Jiang, Z .; Yu, DQ Planta Med. 1998, 64,
de la mezcla de epímeros de 2 y 242-245. (14) Jiang Z .; Yu. DQ J. Nat. Pinchar. 1997, 60, 122-125. (15) Gallardo, T .; Saez, J .;
2 ' se trató con 0,2 μ L de piridina y 2 μ L de NO- bis- (trimetilsilil) acetamida para 5 h Granados, H .; Tormo, JR; Vélez, ID; Brun,