PRÁCTICA 4- BIOLOGÍA CELULAR

TINCIÓN GENERAL DE MATERIAL VEGETAL

-OBJETIVO: El objetivo de esta práctica es la tinción de pared celular para

poder contrastar y diferenciar estructuras que por lo general no poseen color
propio y observar sus resultados en el corte de una hoja de olivo.

-MÉTODO DE TINCIÓN:
1) Desparafinar cortes para que los colorantes puedan penetrar en los
tejidos, para ello los cortes se introducen en histolemon. Una vez
eliminada la parafina los cortes deben ser hidratados, para ello, primero
se introduce la cubeta en alcohol 100º, seguidamente en alcohol 90º,
después en alcohol 70º y finalmente en agua destilada. Cada uno de
estos baños deben realizarse con una duración de 5 minutos.
2) Mojar la muestra con ZnCl2 durante 1 minuto para fijar el tejido.
3) Lavar la muestra con agua corriente durante 5 segundos para eliminar el
zinc.
4) Mojar la muestra con safranina durante 5 minutos, colorante que tiñe de
rojo los núcleos y la lignina de las paredes celulares secundarias.
5) Lavar la muestra con agua corriente durante 5 segundos para eliminar
los restos de colorante.
6) Mojar la muestra con anaranjado G durante un minuto.
7) Lavar la muestra con agua corriente durante 5 segundos para eliminar
los restos de colorante.
8) Mojar la muestra con ácido tánico durante 5 minutos. El ácido tánico tiñe
principalmente los flagelos de las células procariotas.
9) Lavar la muestra con agua corriente durante 2 segundos.
10) Mojar la muestra con NH4Fe(SO4)2.12H2O durante 2 minutos. Este paso
da un color oscuro a la muestra lo que nos permitirá observar mejor los
contrastes.
11) Lavar la muestra con agua corriente durante 15 segundos para eliminar
los posibles restos de los productos utilizados anteriormente.
12) Después de la tinción se vuelve a deshidratar la muestra, para ello
rociamos la muestra primero con alcohol 70º, después con alcohol 90º,
seguidamente con alcohol 100º y finalmente con histolemon.
 13) Finalmente, colocamos medio de montaje sobre un cubreobjeto,
dejamos que se seque un poco mientras realizamos la deshidratación y
seguidamente colocamos en portaobjeto con nuestra muestra sobre el
cubreobjeto.
14) Nuestra muestra ya está preparada y podemos proceder a observar
nuestras preparaciones en el microscopio óptico.

-RESULTADOS:

Al observar nuestras preparaciones en el microscopio óptico podemos observar

los núcleos de las células de un color naranja intenso, las paredes celulares
lignificadas de aprecian de color rojo (por la acción del colorante safranina) y
las paredes celulares sin lignificar se aprecian de color negro. Dentro de las
células podemos apreciar unos gránulos de color marrón que son los
cloroplastos y unas esferas sin color que son las vacuolas. Observando nuestra
muestra podemos diferenciar el parénquima en empalizada y el lagunar, ya que
el parénquima en empalizada al ser más activo posee un mayor número de
cloroplastos y se deposita en el haz de la hoja, mientras que el parénquima
lagunar presenta diversos conductos y se localiza en el envés de la hoja. En la
parte central de la muestra podemos ver una gran acumulación de conductos
que constituyen el haz vascular (nervio medio) de la hoja, los conductos más
anchos son las tráqueas del xilema y los más estrechos son el floema. En la
superficie también se pueden apreciar tricomas.