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CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS


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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOLOGÍA

UNIDAD ACADEMICA: Biología


CURSO: Estructura celular
PRACTICA Nº 05: Estructura de células procariotas

1. OBJETIVOS
Clasificar las bacterias de acuerdo con la tinción de Gram
Relacionar el procedimiento de la tinción de Gram con la composición de la pares celular bacteriana
Comprender la función de la pared celular bacteriana
Reconocer las principales formas de crecimiento de las bacterias

2. CONSULTA PREVIA
Explique la función de cada uno de los colorantes usados en la tinción de Gram
¿Cuál es el tamaño promedio de las células procariotas?
¿Cuáles con las formas de crecimiento más comunes que asumen las bacterias?
¿Cuál es la composición del heteropolisacárido estructural implicado en la pared celular bacteriana?
De acuerdo con el porcentaje de mureína en la pared celular bacteriana, ¿Cómo se explica la clasificación de
las bacterias en las bacterias Gram + y Gram -¿
Defina antibiótico
¿Qué bacterias son más susceptibles a antibióticos como los betalactámicos cuyo blanco de acción es la pared
celular?

3. FUNDAMENTO TEORICO
Debido a su tamaño, la estructura interna de las células procariotas (pro que significa “antes” y Karyon que
significa “núcleo”), conocidas ampliamente como BACTERIAS, es decir de observar a través del microscopio
óptico. De hecho para identificar su forma y tamaño, se debe recurrir a un tipo especial de tinción (Coloración
Gram) que refleja de alguna manera, la recomposición química de su estructura externa.

Una bacteria es un microorganismo unicelular que a diferencia de las células eucariotas (vegetales, animales,
protistas y hongos) carece de órganos intracelulares recubiertos de membrana, como núcleo, aparato de Golgi,
retículo endoplásmico o mitocondrias. Esto significa, que las actividades fundamentales de tipo metabólico y
biosintético de la bacteria se efectúan dentro del citoplasma de la cubierta celular. Las bacterias difieren de las
células eucariotas en general por la estructura y composición de su envoltura celular y por sus actividades
metabólicas. Teniendo en cuanta que muchas bacterias son patógenas, estas diferencias entre células
procariotas y eucariotas son importantes porque permiten encontrar blancos únicos para la acción de antibiótico
y ellos aseguran que dichos antibióticos tengan toxicidad selectiva.

Las bacterias son de diversos tamaños y formas; van desde las espiroquetas que pueden tener hasta 250
micras de longitud hasta los micoplasmas esféricos que tienen 0.15 micras y difícilmente don observables con el
microscopio óptico. La mayor parte de las bacterias corresponden a bacilos (en forma de bastón), cocos
(esferas) y vibrios (en forma de comas). Cuando los bacilos o cocos forman cadena, se llaman estreptobacilos o
estreptococos (del griego streptos, que significa “cadena torcida”). Los grupos de cocos (en forma de racimos)
reciben el nombre estafilococos y los pares se conocen como diplococos. Algunas bacterias adoptan tamaños o
formas variables al envejecer o si el medio ambiente se modifica. Si una bacteria adopta diferentes formas se
dice que es pleomórfica. Algunas bacterias del género Actinomyces poseen apariencia superficial de hongos y

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forman colonias similares a mohos, otras, no tiene pared celular y se conocen como micoplasmas y fitoplasmas
y se considera que están más cerca de los virus que los procariotes.

La mayor parte de las bacterias se identifican en forma inicial haciéndolas crecer en cultivo puro en un medio de
cultivo determinado y después se examina la forma y el color de las mismas mediante la coloración de una
muestra del cultivo en un portaobjetos y su tinción. En casi todos los casos el procedimiento inicial clave es la
tinción de Gram. Este procedimiento se debe al patólogo danés Christian Gram en 1880 y permite diferenciar
los dos principales grupos de bacterias, cuyas paredes celulares son muy distintas entre sí.

Figura 1. Principales formas de crecimiento de bacterias.

Tinción de Gram

La coloración Gram es ampliamente utilizada para identificar bacterias, ya que el comportamiento de las
células bacterianas frente a este tipo de coloración refleja características típicas de la pared celular que a su
vez determina la diferente susceptibilidad para determinados antibióticos, pudiéndose decir que en general
son más susceptibles a la mayoría de estas drogas las bacterias Gram positivas que las Gram negativas.
Debido a la constitución química diferencial de su pared celular se clasifican en:
Gram positivas: se tiñen de color violeta, con reactivo de violeta de genciana, como estafilococos,
micrococos, neumococos, enterococos, bacilos de la difteria y bacilos del ántrax.
Gram negativas: se tiñen de color rojo o rosado con la reactiva fucsina, como gonococos, meningococos,
bacilos coliformes, shigela, salmonelas o vibriones del cólera.

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Figura 2. Esquema tinción de Gram

4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS


Se debe listar los equipos, materiales y reactivos requeridos para el desarrollo de la práctica.

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos


Biológico: Solución salina

Cultivo de bacterias Gram positivas (+) y Cristal violeta (Violeta de


Gram negativas (-) Genciana)

Mechero Solución Yodo (Lugol) de


Microscopio Pinza de madera Gram

Vidriería: Solución acetona: alcohol


(para decolorar)
Laminas Porta y Cubreobjetos
Aza bacteriológica Safranina (Fucsina)

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5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
Determinación de morfología, estructura y Gram (+ y -)

a) Tome una muestra preparada de bacterias (hay varias por lo que este proceso tiene que repetirlo) y
colóquela en el microscopio.
b) Observar a 4x, 10x, 40x y 100x (usar aceite inmersión).
c) Con base a sus observaciones de cada uno de los preparados determinar la morfología, estructura y
Gram (+ y -).

Tinción de Gram:

1) En una gota de solución salina puesta sobre un portaobjeto, realice un frotis con el asa bacteriológica
con la cual ha obtenido las bacterias de manera aséptica a partir del cultico de estas.
2) Deje secar el frotis y fíjelo a la llama con calor moderado (pase varias veces el portaobjeto sobre la
llama de manera rápida sin dejar ebullir la muestra)
3) Cubra el frotis con cristal violeta por 1 minuto
4) Descarte el exceso de colorante y lave con agua corriente (de la llave)
5) Aplique el Yodo de Gram/lugol por 1 minuto. Lave con agua de la llave
6) Agregue la solución decolorante (acetona: alcohol) con el portaobjetos inclinado. Tan pronto observe
que ya no se desprende más color, lave con agua corriente para la acción decolorante de la solución.
7) Paso final: cubra el frotis con safranina por 20 segundos. Lave el exceso de colorante con agua
corriente y deje secar al aire
8) Observe al microscopio. Las bacterias Gram + se observan de color azul o morado y las Gram – de
color rojizo o café.

NOTA: Para observar las bacterias debe usar el objetivo de inmersión (100X) así que por favor recuerde el
procedimiento para enfocar y el uso del aceite de inmersión. Frente a cualquier duda consulte con su
profesor o con el asistente de laboratorio.

6. BIBLIOGRAFIA
Alberts, B., Bray , D., Hopkin, K., & et all. (2006). INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGIA CELULAR (Segunda ed.).
España: Medica PanamericanaS.A.

Campbell, N., & Reece, J. (2007). BIOLOGIA (Septima ed.). Madrid, España: Medica Panamericana S.A.

Curtis, Barnes, Schnek, & Flores. (2006). INVITACIÓN A LA BIOLOGIA (Sexta ed.). Argentina: Medica
panamericana.

Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGIA (Novena ed.). Argentina.
Editorial: Medica Panamericana.

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