Cromatografía liquida (HPLC)

Introducción
La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es una técnica de separación de mezclas de
productos poco o nada volátiles. La muestra se introduce en el puerto de inyección donde es
arrastrada por una mezcla de disolventes (fase móvil) hacía una columna cromatográfica. La
diferente interacción de los analitos con la fase móvil y el relleno de la columna permiten la
separación de los componentes de la mezcla para una posterior detección, y/o caracterización, y/o
cuantificación utilizando diversos detectores.
La posibilidad de utilizar diversos procesos de interacción entre analitos y distintas columnas
cromatografías , junto con la opción de seleccionar diferentes detectores (algunos de ellos en serie),
hace que sea posible la extracción de un gran volumen de de información permitiendo abordar una
amplio abanico de necesidades analíticas. La aparición en los últimos años de la Cromatografía
Líquida de Ultra Alta Resolución (UHPLC) ha aportado una mejor resolución cromatografíca
disminuyendo los tiempos de análisis.

Fundamento
La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una
mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria
es sílica que se ha tratado con RMe2SiCl . La fase móvil actúa de portador de la muestra.

La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de

acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna. Estas interacciones
químicas, determinan la separación de los contenidos en la muestra.

La utilización de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza de los compuestos a

determinar.

Aplicaciones
Campos de Aplicación de HPLC
 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos
 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
 Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores,
colorantes
 Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
 Separación y purificación de metabolitos
 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina
 Purificación y separación de enantiómeros
 Purificación de compuestos naturales
  Purificación y caracterización de enzimas y proteínas

Equipos
HPLC analítico 1200 Series de Agilent Technologies
 Bomba cuaternaria G1311
 Detector de longitud de onda variable G1314B
 Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D
 Detector de índice de refracción G1362A
 Detector de fluorescencia G1321A
HPLC preparativo 1200 Series de Agilent Technologies
 Dos Bombas preparativas G1361A
 Detector de diodo y de longitud de onda variable G1315D
 Muestreador automático G1329A
 Colector de fracciones G1364B

Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC)

Cromatografía de alta eficiencia