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CONTENIDO:
Palabras Previas
Procedimientos comunes y normas de seguridad En el Laboratorio de
Nutrición Animal
Sistema de Evaluación:
Unidad I.
1° Informe sobre Composición Química de los Alimentos (muestra
problema). Cinco por ciento (5%)
2° Informe sobre Valoración Nutricional de los Alimentos (muestra
problema).
Siete por ciento (7%)
Unidad II.
Primer Examen, sobre Composición y Valoración de Alimentos. Diecisiete por
ciento (17%)
Unidad III.
Segundo Examen, sobre Formulación de Mezclas y Raciones para
Animales. Quince por ciento (15 %)
3° Informe sobre problema de Programación Lineal. Cinco por ciento (5%)
Palabras Previas
El presente Manual de Prácticas de Laboratorio de Nutrición y Alimentación Animal
(NAA), representa una visión reorganizada de la forma de realizar las Prácticas de
la Asignatura, que pretende mejorar la comprensión de los contenidos
programáticos, favorecer su apropiación y generar resultados de mayor excelencia
en el desempeño global del Alumno que se inicia en la Ciencia y Arte de la NAA.
En el Manual se reúnen, en un solo tomo, todos los temas de Práctica (excepto el
tema 8 y 10 que serán manejados con Módulos Instruccionales). El manual
comienza con el establecimiento de las normas de seguridad y funcionamiento del
Laboratorio de NAA; seguido del conocimiento de los alimentos y aditivos de uso
más común en NNA, para ir a la par con la teoría donde al mismo tiempo se tratan
los nutrientes que contienen los alimentos. Se han revisado algunas técnicas de
laboratorio, eliminando la determinación de fibra cruda y dejando solo el método
van Soest, por ser el método con más reconocimiento internacional, tanto para
rumiantes como para no rumiantes. Se introdujeron nuevas técnicas para
determinar nitrógeno en alimentos (luego de un proceso de validación de dos años
en el laboratorio), así como de determinación de calcio, fósforo, taninos y
polifenoles. Se presenta una profusa cantidad de imágenes (todas las fotos son
del autor), con el fin de que el alumno tenga rápido acceso al equipo o material a
ser utilizado. Todas las técnicas descritas provienen de Manuales citados en la
Bibliografía anexa, luego de su traducción y adaptación a la realidad del
Laboratorio de NAA.
f) Comer y beber está prohibido en las áreas donde existan químicos peligrosos en
uso o almacenados, o cuando manipule sustancias corrosivas.
% FC)
Azúcares Azúcares
Sacarosa Totales Reductores
Jugo de caña deshidratado 90 75 25
Melaza A 68 60 40
Melaza B 57 50 50
Melaza final 47 40 60
Melaza de gran calidad 78 30 70
Azúcar bruto 99 98 1
B. Grasas y aceites
1. Ventajas del uso de grasas y aceites en alimentación: a) debido a su alta
densidad energética (aproximadamente 2,25 veces el valor de los carbohidratos),
Vitamina B12 (cianocobalamina) en las proteínas de origen animal, para ser luego
sintetizado e incorporado a las raciones, de importancia en el aprovechamiento y
deposición de proteínas en animales. Las fuentes de proteína de origen animal
son principalmente los desechos del sacrificio y procesamiento de carnes en salas
de matanzas y mataderos industriales. Son un camino importante para la
eliminación de desechos industriales de la carne, que proveen de proteínas de alto
valor biológico
II Harinas de carne y harinas de carne y hueso
Harinas de carne– contienen trozos de carcasa, carcasas decomisadas por
enfermedades y parásitos, hígados decomisados, asaduras incomestibles,
15 G. Nouel Borges, UCLA, Agronomía, 2003
tendones, ligamentos, trozos de cuero, cuernos, pelos, lana y sangre; posee
aproximadamente un 56% de PC
Harinas de carne y hueso– posee los mismos componentes de las harinas de
carne más huesos, tiene un 55 % de PC, calcio de 7 a 10 %. Fósforo de 3,8 a 5 %,
valores que cambian en función de la proporción de hueso presentes en las
harinas
La calidad de la proteína va a variar de acuerdo con las cantidades relativas de
colágeno y queratina presentes; la queratina posee muy bajo valor biológico;
ambos tipos de harinas son producidos por secado en calderas a temperaturas
entre 90 y 115 °C, el producto es cocido con vapor, eliminando la humedad, el
calor de esterilización es crítico para la eliminación de contaminación por
Salmonella. El procesamiento industrial de la fabricación de harina de carne y
huesos cambia en los años 1980, pasa del procesamiento de lotes (calor 8 h a 70
°C) con extracción de las grasas con solventes orgánicos (estos se eliminan con
vapor muy caliente 15 a 30 min) a procesamiento continuo a menor temperatura y
sin solventes, sin recobrar la grasa y con menor daño a la calidad de la proteína
(Maillard), esto se asocia directamente a la presencia o ausencia de la
enfermedad de las vacas locas en forma regional, ya que con el proceso anterior
no presentaba el síndrome en la zonas endémicas del Reino Unido y Europa,
mientras que con el nuevo procesamiento se produjo la epidemia de mediados de
los 1980.
El mal de las vacas locas y el scrapie en ovejas como consecuencia del uso
indiscriminado de harinas de carne y de carne y hueso: La incidencia en el Reino
Unido es veces mayor que en el resto del mundo. La incidencia del scrapie está
en relación 4:1 con relación al BSC. La incubación puede durar de 18 a 36 meses,
de modo que la incidencia se relaciona más con animales maduros que con los
jóvenes (los bovinos se sacrifican de 18 a 24 meses de edad y los ovinos de 6 a 9
meses de edad) las vacas lecheras viven de 5 a 7 años y los reproductores ovinos
de 3 a 5 años (Willesmith, 1998). Signos clínicos (Lavender y Mitchell. 2002;
Willesmith, 1998): Los iniciales son inespecíficos, aislamiento del rebaño; ruptura
del orden de entrada al ordeño; locomoción trastornada en el tren posterior. En la
16 G. Nouel Borges, UCLA, Agronomía, 2003
segunda etapa los cambios pueden ser asociados con enfermedades metabólicas,
como una hipomagnesemia (tetanía del pasto). Falta de atención, respuesta
violenta a estímulos auditivos o sobre los músculos; hipersensibilidad. Reducción
del ritmo cardiaco en un 50 %, reducción de la rumia y su cese. Temblor facial y
luego general, postración del tren posterior y total, perdida total del apetito y
muerte. Diagnóstico: Diagnosis histopatológico microscópica de la vacuolarización
del neuro parénquima de la médula oblonga. Presencia de micro fibrillas
asociadas al scrapie en homogenatos de tejido cerebral por microscopia
electrónica. Etiquetado inmunohistoquímico del PrP (PrPSc por Western
immunoblotting) permite separar las variantes del escrapie, BSE o CJD (Jeffrey et
al., 2001). El uso de esta técnica ha permitido observar la expresión del PrP en
distintas partes del tracto gastrointestinal, en la búsqueda de los sitios con mayor
posibilidad para el ingreso al cuerpo, consiguiendo que sobre el borde de cepillo
de la células epiteliales del intestino delgado y en las criptas del intestino grueso
se presenta la mayor posibilidad de ingreso, además de existir una predisposición
al ingreso cuando existen procesos inflamatorios en el intestino, como en el caso
de infecciones con Helicobacter pilori (Pammer et al., 2000; Ghosh, 2002). Ghosh,
S... 2002. Intestinal entry of prions. Z. Gastroenterol. 40:37-39
Jeffrey M, Martin S, González L et al. 2001. Differential diagnosis of infections with
the bovine spongiform encephalopathy (BSE) and scrapie agents in sheep.
J Comp Pathol. 125:271-284.
Lavender, A. and T. Mitchell. 2002.The Report Of The Chief Veterinary Officer
Animal Health 2001 Department For Environment, Food And Rural Affairs,
Scottish Executive Environment Rural Affairs Department, National
Assembly For Wales.
Pammer J, Cross HS, Frobert Y et al. 2000. The pattern of prion-related protein
expression in the gastrointestinal tract. Virchows Arch. 436:466-472.
Willesmith, J. 1998. Manual On Bovine Spongiform Encephalopathy. FAO Animal
Health Manual No. 2 Food And Agriculture Organization Of The United
Nations Rome
• Etiquetas.
• Marcador.
• Navajas, machetes, cuchillos o tijeras para poda.
• Guantes de carnaza o de neopreno.
• Cavas, contendedores de N2 o hieleras.
• Refrigerante (hielo, hielo seco, nitrógeno líquido).
Identificación de la Muestra
Se asignará a la muestra de laboratorio un código exclusivo que se añadirá al
registro de la muestra, junto con la fecha de recepción y el tamaño de la muestra.
La parte del producto que haya de analizarse, es decir la muestra analítica, se
separará lo antes posible.
Periodo de Almacenamiento de Muestras Frescas
Debido a que muchos componentes menores se degradan rápidamente, no es
recomendable almacenar muestras frescas (congeladas) por un período mayor de
7 a 15 días. Las muestras deshidratadas (en estufa o liofilizadas) se pueden
almacenar a temperatura fresca (10 a 20 °C) por períodos de tiempo de 45 a 180
días sin grandes cambios, pero teniendo en cuenta que las fluctuaciones de
humedad relativa y temperatura pueden modificar la composición de las mismas.
351,2 g
47 %
392,2 g
53 %
Albizia
MS = 743,4 g
351,2g
Bagazo 14%
392,2g Agua
16% 1753,48g
70%
Determinación de ceniza.
A. Materiales y Equipo
1. Mufla
2. Crisoles de porcelana (30 y 50 cc)
3. Desecadores
4. Balanza analítica
C. Cálculos
Peso de la ceniza
% de C = _________________________________________ x 100 =
Peso de la muestra "parcialmente seca"
% de Ceniza
% de C en BS = __________________ x 100 =
% de MS
b.i. Calcio
Determinación de Calcio (Ca)
Reactivos: Solución de oxido de lantano; agregue 58,65 g de La 2O3 a un balón
volumétrico de un litro, lentamente agregue 250 ml de HCl bajo la campana,
disuelva completamente y enrase el balón con agua desmineralizada y tape
firmemente.
Preparación de la muestra: como se describió previamente, por duplicado.
Coloque, con una jeringa Hamilton, un ml de solución patrón de Ca (1000 µl/ml)
dentro de un balón volumétrico de 100 ml y enrase el balón con agua
desmineralizada; esta es la solución de trabajo (10 µl/ml); proceda a colocar 0, 2,5,
5, 10, 20 y 30 ml de esta solución dentro de un balón volumétrico de 100 ml,
b.ii. Fósforo
Determinación de Fósforo
Método Colorimétrico .- AOAC 2.019, 2.095-7.098.-.
41 G. Nouel Borges, UCLA, Agronomía, 2003
Reactivos
1) Molibdovanadato .- disuelva 40 g de NH 4-molibdato ·4H2O en 400 ml de H2O
caliente y enfríe. Disuelva 2 g de NH 4- metavanadato en 250 ml de H 2O caliente,
enfríe, y agregue 250 ml de HCl0 4 al 70 %. De manera gradual, agregue la
solución de molibdato a la solución de vanadato que tiene dentro un agitador
magnético y al finalizar proceda a diluir a 2 litros.
2) Soluciones patrón de fósforo. - (1) Solución madre. - 2 mg P /ml. Disuelva 8,788
g de KH2PO4 en H2O desionizada y diluya a 1 litro. (2) Solución de trabajo. – 0,1
mg P / ml. Diluya 50 ml de la solución madres a 1 litro.
Preparación de la Curva Patrón: transfiera alícuotas de 2, 5, 8, 10, y 15 ml de la
solución patrón de trabajo a balones volumétricos de 100 ml, con el fin de alcanzar
0,2, 0,5, 0,8, 1, y 1,5 mg de P en 100 ml, donde la diferencia se completa con
agua desionizada.
Determinación
Asegúrese de que toda la vidriería ha sido enjuagada con una solución de ácido
diluido antes de ser usada. Coloque una alícuota de la muestra que contenga de
0,2 a 1,5 mg de P en un balón volumétrico de 100 ml, agregue 20 ml de la solución
de molibdovanadato y proceda a diluir hasta completar el volumen de 100 ml con
agua desionizada, mezcle bien y espere al menos durante 10 minutos y proceda a
leer en el espectrómetro UV visible a 400 nm, comience con el blanco y luego con
los patrones de la curva y determine el P de la muestra problema partiendo de la
curva patrón generada.
Calculando el contenido de fósforo de una muestra, los tres métodos siguientes
son empleados para calcular la concentración de P en muestras desconocidas.
Ahora, cómo se puede calcular el % de P en la muestra original de alimento?
1. Recordemos que nuestra alícuota fue de 10 ml, de un volumen original de 100
ml. Esta alícuota fue hecha de un volumen de 50 ml del balón volumétrico. La
concentración de P en este balón (50 ml) expresado en mg /100 ml fue de 0,54 y
0,50 mg / 100 ml para las réplicas 1 y 2 y calculadas por el método del patrón más
próximo.
Referencia:
Fritz, J. S., and G. H. Schenk. 1979. Quantitative Analytical Chemistry (4th Ed.).
Allyn and Bacon, Inc., Boston, MA.
c. Contenido de Nitrógeno y Proteínas
Determinación de Nitrógeno en
Raciones
Según el Método propuesto por Hevia y Cioccia (1988), Application of a
colorimetric method to the determination of nitrogen in nutritional studies with rats
and humans. Nutrition Reports International 38 (4):1129-1136 Reactivos.
Lumen
Contenido Celular:
Celulosa -Azúcares Pared Secundaria
(20 a 40%) -Proteínas
Pared Primaria
Pectina
(1 a 10%) Lamela media
Proteína
Lignina Hemicelulosa
(5 a 10 %) (10 a 40%)
Glucógeno (C6H12O6)n
Almidón
Proteína Hemicelulosa
insoluble
Material
soluble en N Lignina soluble en álcali
detergente lignificad
ácido o
Constituyen
tes de la Lignina Insoluble
pared
celular
(FIDN)
Lignocelulosa Celulosa Fibra cruda
(FIDA)
REACTIVOS:
La Solución del Detergente ácida:
Agregue * 27,84 ml H2SO4 (concentrado) y 20 g CH3(CH2)15N(CH3)3Br (cetrimida)
y lleve a 1L de volumen con H2O. *Agregue algo H2O primero (antes del ácido)
Acetona
54 G. Nouel Borges, UCLA, Agronomía, 2003
La digestión de Muestra
A. Transfiera 0,350 g de muestra seca al aire (60°C) los tubos Tylor.
B. Agregue 30 ml de la solución del detergente ácido.
C. Caliente hasta alcanzar el hervor (5 a 10 min), y hierva 60 min exactamente.
D. Filtre con succión de vacío ligera en crisoles previamente pesados.
E. Lave y filtre con el agua caliente 2 a 3 veces.
F. Lave completamente con la acetona hasta que ningún color esté presente.
Haga vacío hasta secar.
G. Seque en la estufa a 100 °C por 24 h.
H. Enfríe en el desecador. Pese y registre el valor.
Referencia: Goering and Van Soest (1970), as modified by Van Soest et al. (1991;
J. Dairy Sci. 74:3583).
Peso FND
% FND = ----------------------- x 100
Peso muestra
% FND
% FND en Base Seca = ------------------ x 100
% MS
Peso FAD
% FAD = ---------------------- x 100
Peso Muestra
% FAD
% FAD en Base Seca = ---------------- x 100
%MS
Peso del EE
% EE = ------------------------------ x 100 =
Peso de la muestra
% EE
% EE en BS = --------------- x 100 =
% MS
Fermentación en el Ciego
Cerdos y caballos
B: Secuencia de roedores y lagomorfos, cecótrofagos
Fermentación en el Ciego
y/o coprófago
Coprofagia
Van Soest (1994)
Fermentación
Ración: Gástrica Colónica
pregástrica
Heces
Canguros, hipopótamos, hámsteres, monos langur,
hoatzin y probablemente los dinosaurios
Alimento que
B: Digestión en rumiantes:
escapa del rumen
Fermentación
Ración: Tamizado
pregástrica en omaso Gástrica
Rumia
Fermentación
Colónica Heces
en ciego
VanSoest (1994)
Oxígeno y Prensa para hacer pellets a ser usados en las Bomba Calorimétrica
agregando ácido (HCl 0,2N ó H2SO4 0,1N) asegurando que el pH sea menos de 3
para en evitar la pérdida de nitrógeno (N). Pese a cada animal después de la
colección de excretas y antes de alimentar en el día 23.
Preparación de las muestras. Para el análisis químico de las muestras de Alimento
mezclar las muestras obtenidas diariamente y molerlas por una zaranda de 2 mm.
Sujeción del rumen a la piel Cosido del rumen con músculo y piel
ALIMENTO
Pérdida endógena de AA
Pérdida de N N Digestible AA Digestibles
Endógena Neto Netos
Proteína Ideal
N Proteína neta
en Exceso Digestible ideal
Balance de nutrientes
Consumo adecuado
Costo razonable
Cuadrado de Pearson:
Maíz 8.1 23.4 unidades maíz
18
• Soja=29.73x41.4/100 = 12.81 kg PC
Total = 18.00 kg PC/100kg
• Facilidades de Computación:
– Storm del MIT (Massachusetts Institute of Technology)
– Micro manager software
– MPS-PC 2.1 (1983) de G, Pfeiffer, Univ. Nebraska
• Especificaciones: Nutrimentos en función de las Tablas de Requerimientos
(PC, Energía, Ca, P)
• Composición de las materias primas
– Datos analíticos confiables
– Suficientes materias primas para poder escoger entre ellas
– Información compatible con exigencias del modelo de PL
• Precios Vigentes
– Lista de precios confiable
– el precio debe incluir procesamiento y fletes
– materias primas de fácil manejo en UP
Modelo Matemático
Sea el ejemplo siguiente:
Se requiere elaborar una alimento balanceado para gallinas ponedoras Leghorn
en la etapa de postura, cumpliendo con las siguientes especificaciones: 17.5 % de
PC, 2.75 Mcal/kg EM, 3.2 % Ca y 1.75 % fósforo. Los aminoácidos y micro
elementos esenciales se suministrarán en una premezcla (98 % MS) que ocupará
el 3% de la MS total. Se cuenta con torta de palma africana, de ajonjolí y de soja,
• Sujeta a:
(1) X 1+ X 2+ X 3+ X 4+ X 5+ X 6+ X 7+ X 8+ X 9 =100
(6) X9 = 3
(7) X1 <= 10
(8) X2 <= 25
(9) X6 <= 8
• Manejo de Datos
– Storm:
ANEXO #1
Instalación y notas sobre operación del
Espectrofotómetro Cecil 3041
ANEXO #2
Trabajando con los Porcentajes
ANEXO #3
Tabla de Equivalencias
> 7 8 9
GO TO
< 4 5 6
SET SAMPLE READOUT ZERO
v
MODE
1 2 3 - PROG SCAN
.
<
Temperatura Concentración
Centigrado (Celsius) = 5/9(Fahrenheit – 1 ppm (parte por millón) = 1 mg/kg = 1 µg/g
32) para convertir ppm a porcentaje (%), mueva
Fahrenheit = 9/5Centigrado + 32 el decimal cuatro (4) lugares hacia la
izquierda y vise versa.