“CUANTIFICACION DE LA ACTIVIDAD DE AMILASAS,

EVALUACION DEL EFECTO DE LA CONCENTRACION DE

ENZIMAS”
Hernández Soza Rocío del Carmen; Tapia Poveda María José.

Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos,

Modulo de Ingeniería de las Enzimas

Resumen

Las enzimas llevan a cabo un papel primordial dentro del metabolismo celular, la velocidad
con la que se dan las reacciones catalizadas por las ellas puede variar con respecto a diferentes
factores entre ellos la concentración de enzima. Para poder comprobar el planteamiento
anterior en este ensayo se ha trabajado con soluciones de enzima -amilasa diluida a
concentraciones de 1/50, 1/100 y 1/200. Para cada dilución de enzima se numero 6 tubos
microbiológicos colocando 0,25 ml de solución de enzima y a intervalos de 30 segundo 0,25 ml
de solución de sustrato de almidón al 1%, dejando que se lleve a cabo la reacción por unos
minutos y deteniéndola con 0,5 ml de solución DNS. Las velocidades de reacción de la enzima
obtenidas para la dilución 1/50 fue de 0,733 (mgMal/ml*min), para dilución 1/100 fue de
0,489 (mgMal/ml*min) y para la dilución 1/200 de 0,193 (mgMal/ml*min), y con Actividad
Enzimática promedio de 2225,883 U/g.

Palabras clave: Actividad enzimática, maltosa, velocidad de reacción, -amilasa.

Abstract allowing it to carry out the reaction for a

few minutes and stopping with 0,5 ml of
Enzymes perform a key role in cellular
DNS solution. The reaction rates of the
metabolism, the rate at which reactions
enzyme obtained for 1/50 dilution was
catalyzed by the enzymes may vary on
0.733 (mgMal/ml* min) to 1/100 dilution
several factors including the concentration
was 0,489 (mgMal/ml*min) and for
thereof are given. To check the above
dilution 1/200 of 0,193 (mgMal/ml* min),
approach in this paper we have worked
and average enzyme activity 2500.987
with dilute solutions of -amylase enzyme
U/g.
at concentrations of 1/50, 1/100 and 1/200.
For each enzyme dilution tubes 6 Keywords: Enzyme activity, maltose, reaction
microbiological number placing 0,25 ml of rate, - amylase.
enzyme solution at intervals of 30 seconds
0.25ml starch substrate solution 1%,
 I. INTRODUCCIÓN en la velocidad de reacción de la enzima
sometida a cualquiera de estos factores
Todas las reacciones químicas que
(González, 2004). Dado esta aclaración se
configuran el metabolismo celular son
ha planteado como objetivo de la práctica,
catalizadas por enzimas. Estos
la cuantificación de la actividad enzimática
biocatalizadores son específicos y activos
de la -amilasa y el efecto de la
en condiciones moderadas para cada
concentración de enzima.
enzima, lo que les confiere un gran
potencial de uso como catalizadores de II. MATERIALES Y METODOS
procesos. Son de naturaleza proteica y su a.) Materiales
capacidad catalítica reside en el sitio activo
(González, 2004). Reactivos Materiales

Las amilasas constituyen una clase de - Ácido acético glacial - Medidor de pH o papel para
enzimas industriales correspondiente al - Acetato de sodio medir pH
- Almidón soluble - Pipetas serológicas de 1, 5 y
25% de las enzimas del mercado. Estas - Ácido 3, 5 dinitrosalicílico 10 ml
enzimas hidrolizan moléculas de almidón, - Tartrato de sodio y - Pipeta automática de 1 ml
para obtener diversos productos como la potasio - Gradillas
- Hidróxido de sodio - Tubos de ensayo resistentes
dextrina, y progresivamente polímeros - Maltosa al calor
más pequeños compuestos por unidades - β-amilasa de soya (sólida) - Estufa a 60°C
de glucosa (Rubiano, 2006). Entre las - Agua destilada - Desecador
- Balanza analítica
amilasas conocidas se encuentra la beta- - Espectrofotómetro de visible
amilasa (E. C. 3. 2.1.2), presente en plantas b.) Método
y bacterias. Su función es actuar en la
reacción de hidrólisis de los enlaces alfa- Método (Bernfeld, 1959)

1,4-glucosidicos del almidón con inversión

Este método se basa en la cuantificación de
en la configuración del carbono 1
los oligosacáridos reductores liberados a
pasándolo de la configuración alfa a la
partir de almidón los cuales se miden
beta; así como de remover las unidades de
mediante la reducción del ácido 3,5-
maltosa continuas presentes en los
dinitrosalicílico.
terminales no-reductores de la cadena
polisacárida (Durango, et.al, 2008). Unidad de actividad
Sabiendo que las enzimas son aceleradoras
Una unidad libera una micromol de
de reacciones y son dependientes de
grupos reductores calculados como
factores como pH, temperatura, fuerza
maltosa por minuto a partir del almidón, a
iónica, concentración de sustrato, presencia
25°C y pH 4,5 bajo las condiciones
de inhibidores, etc., se puede estimar la
especificadas.
capacidad catalítica de la enzima, basada
Tampón acetato de sodio 0,02M de pH 4,5
(100 ml).
Se preparó 50 ml de las soluciones de
acetato de sodio y de ácido acético. Se
mezcló las soluciones anteriores hasta
obtener el pH deseado.
Solución de ácido 3,5-dinitrosalicílico (50
ml)
Se pesó 0,5 g del ácido 3,5-dinitrosalicílico
y se disolvió en 20 ml de agua destilada
(con agitación magnética). Se añadió 10 ml
de hidróxido de sodio 2 M, se mezcló bien.
Se agregó lentamente 15 g de tartrato de
sodio y potasio y se aforo a 50 ml con agua
destilada.
Se mantuvo el reactivo protegido del
dióxido de carbono en un frasco opaco
bien cerrado.
Solución de almidón al 1% (25 ml)
Se preparó este sustrato suspendiendo 0,25
g de almidón soluble en 25 ml de la
solución tampón. Se calentó hasta
ebullición para disolver el almidón. Se
enfrío y llevo a volumen con agua
destilada. Para el ensayo se incubo el
almidón a 25°C al menos por 5 minutos (el
tiempo dependerá del volumen de sustrato
que se termostatice).
Solución madre de maltosa
Se calentó la maltosa por 4 h a 60°C en una
caja petri. A continuación se tapó la caja y
se enfrío en un desecador. Se pesó la
cantidad necesaria para obtener una
solución que contenga 2 mg/ml.
Enzima
Se preparó 10 ml de una suspensión al 10%
de β-amilasa de soya en tampón de
actividad. Se mantuvo la suspensión en
agitación suave durante 1 h para extraer la
enzima. A continuación se centrifugo la
suspensión a la máxima velocidad
disponible en la centrífuga (5950 rpm) por
10 min y se retiró cuidadosamente el
sobrenadante. Se mantuvo en refrigeración
la solución de enzima que se utilizó en la
práctica y el resto se congelo.
Se realizó varias diluciones de la β-amilasa:
1/50, 1/100 y 1/200 con el tampón de
actividad.
Curva estándar de maltosa
Se ajustó el espectrofotómetro a 540 nm.
Con la solución madre de maltosa se
preparó la curva estándar de la siguiente
manera:
Se numero 6 tubos lavados y secos. Se
colocó en cada uno la solución madre de
maltosa con cantidades de (0.0, 0.10, 0.20,
0.30, 0.40. 0.50) respectivamente, se registró
los pesos de cada alícuota. Se añadió agua
destilada para completar 0,5 ml. Se registró
el peso de la mezcla estándar-agua. Se
calculó con estos datos la concentración de
maltosa de cada estándar. Se añadió a cada
tubo 0,5 ml de solución de DNS y se
incubo en un baño de agua hirviente por 5
min exactos, se enfrió a temperatura
ambiente (20C). Se añadió 5 ml de agua
destilada y se mezcló bien. Se leyó la III. RESULTADOS
absorbancia frente a un blanco preparado
Tabla 1: Datos de la solución estándar de
con 0,5 ml de agua destilada. Se elaboró
Maltosa
una curva graficando Absorbancia vs
concentración (mg/ml) de maltosa.
Peso total de Maltosa seca a 0,9952
Determinación de la actividad utilizar (g)
Peso Maltosa (g) 0,0505
Se pipeteo 0.25 ml de cada dilución de Peso maltosa +agua (g) 24,2146
enzima en una serie de 6 tubos numerados. Vol. (ml) 0,242146
Se incubo los tubos así como el sustrato a FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
FCIAL- 2014
25C hasta llegar a la temperatura de ELABORADO POR: Hernández, Tapia
ensayo. A intervalos de 30 s, se añadió 0.25
ml de sustrato y a los tiempos previstos
(0.5, 1, 2, 3, 6 y 12 min para la dilución Concentración del estándar de maltosa
1/50 y a los 1, 2, 4, 8 y 12 min para la 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑎𝑙𝑡𝑜𝑠𝑎 (𝑔) ∗ 1000
[𝑴𝑨𝑳𝑻𝑶𝑺𝑨] =
dilución 1/100; y a los 2, 4, 8, 12 y 16 min 𝑉𝑜𝑙 (𝑚𝑙)
para la dilución 1/200) se agregó 0.5 ml de 0,0505 (𝑔) ∗ 1000
solución de DNS para detener la reacción. [𝑴𝑨𝑳𝑻𝑶𝑺𝑨] =
24,2146 (𝑚𝑙)
Se incubo los tubos en un baño de agua 𝒈
hirviente por 5 min EXACTOS, enfriarlos, [𝑴𝑨𝑳𝑻𝑶𝑺𝑨] = 𝟐, 𝟎𝟖𝟓
𝒎𝒍
se añadió 5 ml de agua destilada, se
mezcló bien y se leyó la absorbancia a 540
nm vs el blanco preparado de idéntica Tabla 2: Datos para la obtención de la
manera pero invirtiendo el orden de curva estándar de Maltosa
mezcla de los reactivos, esto es 1° Enzima,
luego DNS y finalmente sustrato. Se Vol
Peso
Vol Peso [𝑴𝒂𝒍𝒕𝒐𝒔𝒂]
(𝑷𝒆𝒔𝒐 (𝒈) ∗ [𝑴𝑨𝑳𝑻𝑶𝑺𝑨])
Tubo Malt. agua T. Abs. =
𝑷𝒆𝒔𝒐 𝑻 (𝒈)
determinó la cantidad de maltosa liberada (g) (mg/ml)
(ml) (ml) (g)
a partir de la curva estándar.
Blanco 0,00 0,00 0,50 0,58 0,000 0,0000
Std. 1 0,10 0,184 0,40 0,66 0,262 0,5810
Std. 2 0,20 0,2845 0,30 0,66 0,426 0,8941
Std. 3 0,30 0,3847 0,20 0,67 0,573 1,2014
Std. 4 0,40 0,4866 0,10 0,67 0,703 1,5146
Std. 5 0,50 0,583 0,00 0,58 0,886 2,0855
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
 GRAFICO 1: Curva estandar de Maltosa GRAFICO 2: Curva de Dilución 1/50
1.000
1.000 y = 0.4337x + 0.0213

[Maltosa] (mg/ml)
R² = 0.9921 0.800
0.800
Abs. (540nm)

0.600 0.600
0.400 0.400
CURVA ESTANDAR Series1
0.200 DE MALTOSA y = 0.7332x + 0.1183
0.200 R² = 0.9035
0.000
0.0000 1.0000 2.0000 3.0000 0.000
[Maltosa] (mg/ml) 0.0 0.5 1.0 1.5
Tiempo de reación (min)
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
FCIAL- 2014 FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
ELABORADO POR: Hernández, Tapia FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
Ecuación obtenida a partir de la curva estándar
de Maltosa: Tabla 4: Valores para la el cálculo de
actividad de la -amilasa, dilución 1/100
𝒚 = 0,4337𝑥 − 0,0213 Ec. 1
1 0,0213 Tiempo [𝑴𝒂𝒍]
𝐴𝑏𝑠 = ( ) ∗ [𝑀𝑎𝑙] − ( ) N° = 2,305 ∗ 𝐴𝑏𝑠
0,4337 0,4337 Rx Absorbancia + 0,0491
tubo (min)
[𝑴𝒂𝒍] = 2,305 ∗ 𝐴𝑏𝑠 + 0,0491 (mg/ml)
1 0,0 0,000 0,0491
Determinación de la Concentración de 2 1,0 0,209 0,531
3 2,0 0,424 1,027
Maltosa para las diferentes diluciones
4 4,0 0,548 1,313
[𝑴𝒂𝒍] = 2,305 ∗ 𝐴𝑏𝑠 + 0,0491
5 8,0 0,717 1,702
[𝑴𝒂𝒍] = 2,305 ∗ (0) + 0,0491 6 12,0 0,702 1,668
[𝑴𝒂𝒍] = 0,0491 FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
Tabla 3: Valores para la el cálculo de
GRAFICO 3: Curva de Dilución 1/100
actividad de la -amilasa, dilución 1/50
1.200
[Maltosa] (mg/ml)

y = 0.4888x + 0.0468
Tiempo 1.000
N° [𝑴𝒂𝒍] = 2,305 ∗ 𝐴𝑏𝑠 + 0,0491 R² = 0.9999
Rx Absorbancia (mg/ml) 0.800
tubo
(min) 0.600
1 0,0 0,000 0,0491 0.400 Series1
2 0,5 0,249 0,623 0.200
3 1,0 0,318 0,782 0.000
4 2,0 0,496 1,193 0.0 1.0 2.0 3.0
5 3,0 0,651 1,550
Tiempo de reación (min)
6 6,0 0,687 1,633
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
7 12,0 0,865 2,044 FCIAL- 2014
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
 Estimación de la velocidad de formación
de maltosa
Tabla 5: Valores para la el cálculo de
actividad de la -amilasa, dilución 1/200 Dilución 1/50
𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙
Tiempo 𝒗𝒆𝒏𝒛 = 0,7332
N° [𝑴𝒂𝒍] = 2,305 ∗ 𝐴𝑏𝑠 + 0,0491 𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
Rx Absorbancia (mg/ml)
tubo
(min)
Dilución 1/100
1 0,0 0,000 0,0491
2 2,0 0,216 0,547 𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙
𝒗𝒆𝒏𝒛 = 0,4888
3 4,0 0,409 0,992 𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
4 8,0 0,671 1,596 Dilución 1/200
5 12,0 0,759 1,799
6 16,0 0,742 1,760 𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙
𝒗𝒆𝒏𝒛 = 0,1911
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la 𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia GRAFICO 6: Velocidades de la enzima para
las diluciones 1/50, 1/100 y 1/200
GRAFICO 4: Curva de Dilución 1/200 0.6
2.000 V (mgMal/ml*min)
0.5
y = 0.1911x + 0.1275 y = 0.2444x - 0.2622
0.4
[Maltosa] (mg/ml)

1.500 R² = 0.9837 R² = 0.9844 Velocidad

0.3
(mg
1.000 0.2
Mal/ml*min)
Series1 0.1
0.500 0
-0.1 0 1 2 3 4
0.000
Dilución de la enzima
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
Tiempo de reación (min)
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la FCIAL- 2014
FCIAL- 2014 ELABORADO POR: Hernández, Tapia
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
Calculo de la actividad enzimática de la -
GRAFICA 5: Curvas de las Diluciones 1/50, 1/100
amilasa
2.500 y 1/200
Peso de enzima por ml de volumen de tampón de
2.000
[Maltosa] (mg/ml)

Dilución 1/100 actividad

1.500 Dilución 1/200
0,9952 g
1.000 Dilución 1/50 𝐏 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦𝐚 =
Poly. (Dilución 1/100) 10 ml
0.500 Poly. (Dilución 1/200) 𝐏 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦𝐚 = 0,09952 g/ml
0.000 Poly. (Dilución 1/50)
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 Actividad enzimática de la β-amilasa
Tiempo (min)
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la 𝐔 𝒗𝒆𝒏𝒛 (𝒎𝒈
𝑴𝒂𝒍
) ∗ 𝟏𝟎𝟑 ∗ 𝑽𝑻𝒓𝒆𝒂𝒄𝒄𝒊ó𝒏
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) = 𝒎𝒍 ∗ 𝒎𝒊𝒏 ∗ 𝑭𝑫
FCIAL-2014 𝐠 𝐏𝐌𝑴𝒂𝒍 ∗ 𝑷𝑬𝒏𝒛 ∗ 𝑽𝑬𝒏𝒛 (𝒔𝒐𝒍.𝒎𝒂𝒅𝒓𝒆)
ELABORADO POR: Hernández, Tapia
 Dilución 1/50 IV. DISCUSION
𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙
𝐔 0,733 (
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
) ∗ 103 ∗ 0,5 ml La velocidad de reacción de una enzima
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) = 50
𝐠 342 mg ∗ 0,09952𝑔 ∗ 0,2421 𝑚𝑙
depende de varios factores, uno de ellos es
𝐔
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) = 𝟐𝟐𝟐𝟑, 𝟖𝟖𝟕
𝐔 la concentración de enzima, puesto que un
𝐠 𝐠
mayor concentración de enzima permite la
Dilución 1/100 transformación de una mayor cantidad de
𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙 sustrato, en menor tiempo (Durango, et.al,
𝐔 0,488 ( ) ∗ 103 ∗ 0,5 ml
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) =
𝐠 342 mg ∗ 0,09952𝑔 ∗ 0,2421 𝑚𝑙
∗ 100 2008).

𝐔
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) = 𝟐𝟗𝟔𝟏, 𝟏𝟑𝟕
𝐔 En la presente practica se llevó a cabo la
𝐠 𝐠
reacción de sustrato de almidón al 1%, en
Dilución 1/200 diferentes diluciones de enzima,
𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙 comprobando que velocidad catalítica
𝐔 0,191 ( ) ∗ 103 ∗ 0,5 ml
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) =
𝐠 342 mg ∗ 0,09952𝑔 ∗ 0,2421 𝑚𝑙
∗ 200 depende la concentración de enzima, los
valores de velocidad se presentan en la
𝐔 𝐔
𝐀𝐜𝐭𝐢𝐯𝐢𝐝𝐚𝐝 ( ) = 𝟐𝟑𝟏𝟕, 𝟗𝟑𝟗
𝐠 𝐠 tabla 6 de resultados, en donde se muestra
que para la dilución de menor
Tabla 6: Resumen de los valores de
concentración de enzima 1/50 tiene una
concentración de glucosa, velocidades de
velocidad de 0,733 (mgMal/ml*min),
reacción y actividad enzimática
siendo superior a las otras dos velocidades
obtenidos.
reportadas.

Concentración del La concentración de maltosa obtenida para

𝒈
estándar de Maltosa [𝑴𝑨𝑳𝑻𝑶𝑺𝑨] = 𝟐, 𝟎𝟖𝟓
𝒎𝒍 cada dilución se obtuvo a partir de la
ecuación linealizada (Ec. 1) de la curva
estándar de maltosa presentada en el
Dilución Dilución Dilución
Grafico 1 de resultados. Todos los datos de
1/50 1/100 1/200 concentración de maltosa para las
Velocidade diluciones se presentan en las tablas 3, 4 y
𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙 𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙 𝑚𝑔𝑀𝑎𝑙
s de 0,733
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
0,488
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛
0,191
𝑚𝑙 ∗ 𝑚𝑖𝑛 5 y a cada tabla le corresponden los
reacción
Actividad
2223,887
U
2961,137
U
2317,939
U gráficos 2, 3 y 4 de resultados. A partir de
enzimática g g g
estos gráficos se obtuvo la velocidad de
U
Promedio de la actividad
2500,98 reacción de la enzima para cada dilución,
enzimática g
graficando solamente la parte lineal de los
FUENTE: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas de la
datos. Se presenta en la gráfica 6 la
FCIAL- 2014
ELABORADO POR: Hernández, Tapia variación de velocidades con respecto a la
concentración de glucosa. Obteniendo
como velocidad media 0,2444 carbohidratos (monosacáridos,
(mgMl/ml*min). disacáridos y polisacáridos).
Disponible en
Se calculó también la actividad enzimática
http://webdelprofesor.ula.ve/farm
para cada dilución, los datos de actividad
acia/gmendez/manuales%20PDF/
se presentan en la tabla 6 de resultados,
EXPERIMENTO%204%20IDENT%2
aquí se puede observar que la mayor
0CARB%2006-05.pdf. 10/05/14.
actividad 2961,137 U/g, es para la
- Durango, E., Batista, A., Cepeda, I. y
dilución 1/100, estimando así que la
Tobón, H. 2008. Producción de
actividad enzimática no depende tanto de
enzimas amilasa microbiana,
la concentración de enzima con la que se
mediante fermentación en estado
trabaje sino más bien al tiempo de reacción
líquido. Universidad Pontificia
o a algún factor exógeno que no se ha
Bolivariana. Centro de
podido establecer en la práctica. Además
Investigaciones. Monteria –
se reporta la actividad media para las tres
Cordoba. 6-9 pp.
diluciones siendo esta de 2500,987 U/g. - González, C. 2004. Evaluación de la
V. CONCLUSIONES actividad amilásica como indicador
del grado de biotransformación de
Se realizó cuantificación de la actividad residuos organicos procedentes de
enzimática de la -amilasa a diferentes la Industrialización de papa
concentraciones de enzima, reaccionando congelada. Proyecto de Grado para
sobre sustrato de almidón al 1% en optar al Título de Ingeniero de
diferentes tiempos, obteniendo una Producción Agroindustrial.
actividad mayor de 2931,137 U/g para la Universidad Politécnica de
dilución de 1/100, y como actividad media Valencia. 6-9 pp.
entre las tres diluciones (1/50, 1/100 y - Rubiano, C. 200oyaca). 6.
1/200) de 2225,883 U/g. Además se Aislamiento y caracterización de
determinó el efecto de la concentración de microrganismos Termófilos
enzima sobre la velocidad de reacción en el anaerobios lipolíticos y amilolíticos
sustrato de almidon obteniendo la mayor de manantiales termominerales de
cantidad de miligramos de maltosa por ml Paipa Iza (Boyacá). Trabajo de
y por tiempo (0,733), en comparación con Grado como requisito parcial para
las demás diluciones. optar por el Titulo de Microbióloga
Industrial. 22-24 pp.
VI. REFERENCIAS
- Wikipedia. 2013. Diastasa.
Disponible en
- Corao, G. 2004. Métodos cualitativos
http://es.wikipedia.org/wiki/Diast
para la identificación de
asa. 10/05/14.
 VII. ANEXO

ANEXO 1: CUESTIONARIO

1. Presente las características más relevantes de β-amilasa de soya y sus

aplicaciones

Enzima presente en la malta que se activa durante la fase de degradación de

almidón y proteínas en la etapa de maceración. Origen de β -amilasa: cereales, soya
y camote. La β-amilasa se la conoce con el nombre de enzima sacarogénica, pues
actúa sobre la amilosa, rompiendo unidades 1,4, dando maltosa. Sobre la
amilopectina actúa en las uniones alfa-1,4 de la cadena recta, y detiene su acción a
distancia de 2 unidades de glucosa antes de atacar las uniones alfa-1,6. Se trata de
una exo-amilasa, ya que actúa sobre el terminal de la molécula; mientras la amilosa
es transformada totalmente en maltosa, la cadena ramificada de la amilopectina se
conserva en un 40-45% sin hidrolizar.

La β-amilasa no necesita de activador para actuar, pero es menos estable al calor,

inactivándose a 70 °C por 15 min. El pH óptimo de la beta-amilasa es de 4,5
(Wikipedia, 2013).

2. ¿Cuál debería ser la concentración de enzima a utilizar si cambiamos la

relación de la mezcla enzima: sustrato de 1:1 (utilizada en la práctica) a 1:5
para obtener valores de velocidad de reacción equivalentes?.

La solución madre corresponde a la dilución 1/10, si se quiere obtener una relación

1:5 se debe aumentar la concentración de la solución madre 5 veces para obtener
valores de reacción equivalentes.

c) ¿En qué consiste el método para cuantificar específicamente maltosa?.

Prueba Procedimiento Volumen (ml)

Sustancia problema 1
Reactivo de Barfoed.
Acetato de cobre
cristalizado 13,3 g en 200 2,5
B ml de H2O destilada.
A Filtrar si es necesario.
R Añadir 1.8 ml de ácido
F acético glacial
O (CH3COOH).
E Mezclar y calentar en
D baño de agua hirviente,
contando los minutos y
sacar del baño cada tubo
inmediatamente después
que haya aparecido el
precipitado rojo ladrillo
de Cu2O. Anotar el
tiempo que corresponda a
cada carbohidrato. La
aparición de un
precipitado rojo, antes de
los 6 min indica la
presencia de un
monosacárido. La
aparición de un escaso
precipitado rojo, entre 9 y
12 min indica la presencia
de Lactosa o Maltosa.
(Carao, 2004).