I.

PRINCIPE :

La chromatographie permet de séparer et d'identifier les espèces chimiques d'un mélange.

Elle est basée sur leur différence d'affinité pour deux phases : la phase stationnaire, ou
phase fixe, et la phase mobile appelée éluant et constituée d'un mélange de solvants.

II. OBJECTIFS :
 séparer les constituants colorés d’un sirop
de menthe.
 Réaliser une chromatographie sur colonne.
 montrer l’intérêt de la chromatographie sur
colonne vis à vis de la chromatographie sur
couche mince.
III. PRESENTATION DE LA DEMARCHE :

Les chromatographies sur couche mince et sur

colonne sont des chromatographies d’adsorption où la
phase stationnaire est un solide, il s’agit par exemple de
silice ou d’alumine traitée et la phase mobile un liquide. La
séparation est basée sur l’adsorption sélective des espèces à la surface du solide. L’éluant
migre à travers la phase stationnaire par capillarité.

IV. CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE :

L'opération de remplissage de la colonne conditionne l'efficacité de la séparation :

1. Fixer verticalement la colonne à l'aide d'une pince.

2. Placer un petit morceau de coton dans le bas de la
colonne.
3. Déposer un peu de sable pour rendre la surface
plane.
4. Peser environ 2g de silice et délayer dans l'eau
salée pour en faire un gel.
5. Introduire la silice dans la colonne.
6. Tapoter la colonne afin d'obtenir une surface plane
de silice : rajouter un peu de sable pour aplanir.
7. Placer un bêcher sous la colonne.
8. Introduire doucement une quantité d'eau salée
suffisante pour être environ à 2 cm au dessus de la
surface plane de la silice.

Et maintenant :
 1. Déposer très doucement à l'aide d'une pipette, sans toucher les parois de la colonne,
5 gouttes de sirop de menthe.
2. Lorsque le sirop de menthe a pénétré la surface de la phase stationnaire, éluer avec
l'eau salée en remplissant la colonne doucement à la pipette plastique.
3. Lorsque le premier colorant arrive en bas de la colonne le récupérer dans un premier
erlenmeyer.
4. Éluer ensuite avec un autre éluant : éthanol.
5. Lorsque le second colorant parvient en bas de la colonne, le récupérer dans un
second erlenmeyer.
V. CARACTERISATION DES ESPECES PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE
1. Réaliser un dépôt de la solution obtenue
précédemment à l’aide d’un capillaire.
2. Réaliser l’élution : éthanol +eau salée.
3. Sortir la plaque, noter au crayon le front de
migration du solvant et laisser évaporer l'éluant sous
la hotte.
VI. Evaluation :
1. Les composés ont été élués dans : 1 heure et demi
pour le colorant jaune et 1 heure et 45 min pour le
colorant bleu.
2. L’éluant utilisé :

On utilise 5 ml pour les deux éluants (deux phases mobiles) qu’ils sont l’eau salée et
l’éthanol.

3. La polarité d’éluant :

L’éluant est un mélange d’un solvant polaire (l’éthanol) et d’un solvant peu polaire
(l’eau salée). L’éluant donc peu polaire (la phase stationnaire et polaire (silice) et l’éluant
peu polaire c'est-à-dire une chromatographie en phase normale).

4. La pureté de produit isolé :

Non, le produit n’est pas pur, on peut purifier le produit par la chromatographie sur
couche mince (CCM).

5. L’intérêt de la chromatographie sur colonne :

 La chromatographie sur couche mince (CCM) permet de séparer les
constituants d’un mélange et de les identifier (par comparaison avec des
substances connues qu’on fait migrer en même temps que l’échantillon à
analyser ou par mesure du rapport frontal et comparaison avec les RF de
substances connues). En revanche on ne peut pas récupérer les constituants
du mélange après séparation.
  La chromatographie sur colonne permet la séparation mais pas l’identification directe
des constituants du mélange. On peut en revanche recueillir des quantités non
négligeables des constituants afin de réaliser des analyses ensuite.

6. Le chromatogramme :
 sirop de menthe contient 2 pigments.
 On observe que les taches : la tache bleu
(apolaire), migre plus haut que la tache jaune
(polaires) La hauteur de migration d’une tâche
dépend de deux paramètres : l’affinité de la
molécule avec l’éluant, et l’affinité avec la phase
fixe.
7. Les rapports frontaux de chaque colorant :
𝑑𝑡𝑎𝑐ℎ𝑒
𝑅𝑓 =
𝑑𝑒𝑙𝑢𝑎𝑛𝑡

A .n : pour la tache bleu : Rf = 0.67

Et pour la tache jaune : Rf= 0. 85

8. Les colorants séparés sont :

Par la chromatographie sur colonne, on constate une séparation des colorants suivants :

 le colorant jaune qu’il est recueilli en premier car il est plus entraîné par l’eau
(grande affinité) et moins adsorbé par le gel de silice que le colorant bleu (le
deuxième colorant).
 les couleurs sont inversées par rapport à la chromatographie sur couche
mince.
 Quand on recueille les fractions en bas de colonne, c’est-à-dire quand
on rempli un petit tube lors du passage de chaque couleur, on peut en
théorie séparer les couleurs, la pratique dépendant de la longueur de
la colonne et du soin apporté par le manipulateur.

Conclusion :

 La technique de la chromatographie sur colonne permet la séparation des différents

constituants d'un mélange.
 Cette méthode sépare composés basés sur la polarité.
 En exploitant les différences dans la polarité des molécules, chromatographie sur
colonne peut séparer simpliste de composés par la vitesse à laquelle les composés
traversent la phase stationnaire de la colonne.