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Demostración de la Presencia de Microorganismos en Diferentes Ambientes

Rodrigo E. Peña (1732159); Karen N. Benavides (1725180); Yeniffer A. Barona (1425973)

Departamento de Ingeniería, Escuela de Ingeniería de Alimentos, Universidad del Valle.

Resumen
En esta práctica de laboratorio se demostró la presencia de microorganismos en diferentes
ambientes, además de familiarizarse con los métodos de obtención, cultivo y tratamiento de
muestras de éstos mediante su cultivo en diversos medios como agar nutritivo, agar inclinado y
caldo nutritivo. Se logró observar la formación y posterior caracterización morfológica de las
colonias obtenidas. Se tomaron muestras provenientes de una brocha para maquillaje, un celular,
la lengua humana y una superficie cutánea (dedo índice), para desarrollar un cultivo en agar
nutritivo en cajas de Petri. Además, se suministró la bacteria Klebsiella pneumoniae para el
cultivo en agar inclinado y caldo nutritivo. Se obtuvo que todas las muestras presentaron
formación de colonias de diversos microorganismos, y para el cultivo de la bacteria
suministrada, se obtuvo un crecimiento de colonias en ambos medios, permitiendo discutir sobre
su fisiología, comportamiento, entre otros.

Palabras clave: Medio de cultivo, microbiota, caldo de cultivo, morfología,

fisiología,

Introducción Esta sustancia, es el medio de cultivo, y el

Los microorganismos son seres invisibles a
la vista humana, son organismos dotados de
individualidad que presentan, a diferencia de
las plantas y los animales, una organización
biológica elemental. En su mayoría son
unicelulares, aunque en algunos casos se
trate de organismos cenóticos, esto es,
organismos compuestos por células
multinucleadas, o incluso multicelulares.
Dentro de los microorganismos se
encuentran organismos unicelulares
Procariotas, como las Bacterias y algunos
hongos (levaduras), o bien eucariotas, como
la mayoría de los parásitos, una parte de las
Algas, los Hongos, e incluso los organismos
de tamaño ultramicroscópico, como los
Virus. La microbiología, se encarga del
estudio de éstos, los cuales están presentes
en diversos ambientes. Para su
identificación, uno de los principales
métodos usados para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento
en sustancias preparadas en el laboratorio.
crecimiento de los microorganismos es el
cultivo. Para que las bacterias crezcan
adecuadamente el medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como
son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un
grado correcto de acidez o alcalinidad, entre
otros, variando según la especificidad y
complejidad del microorganismo bajo
estudio. En los diferentes medios de cultivo
se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono,
suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de carbono se adicionan por dos
motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar
reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa
se añaden para promover el crecimiento de
los microorganismos menos resistentes.
En esta práctica se apreciaron algunos de los
diferentes tipos de microorganismos que

conviven en el ambiente mediante el estudio
de objetos comunes en el día a día, como lo
es el maquillaje para las mujeres, o una
moneda; y otros no tan comunes como
dilataciones entre adoquines, e incluso los
mesones limpios de un laboratorio.
Para ello, se utilizó un agar nutritivo, un
medio de cultivo que permite evidenciar el
crecimiento microbiano.
Como se sabe los microorganismos están
presentes tanto exterior como interiormente,
siendo
El cuerpo humano uno de los medios más
propenso a la proliferación bacteriana,
vírica, fúngica y parasitaria, pues presenta
en su microbiota normal (presencia
microbiológica natural del cuerpo) agentes
microbiológicos bien sea patógenos o no,
habitando dentro del organismo y en la piel.
Dentro de esta práctica se pudo reconocer
algunos de los muchos organismos
unicelulares que
Habitan en el entorno identificando de ellos
su morfología más relevante.
Materiales y Métodos
Aparatos, instrumentos y equipos
utilizados:
• Cajas de Petri con agar nutritivo # 4
• Aplicadores # 3
• Mechero
• Goteros
• Alcohol
• Toallas de papel
• Cinta vinilpel para sellar cajas
• Tubo agua destilada 10 ml
• Asas de inoculación
• Tubo de caldo nutritivo por 5 ml
• Tubo de agar inclinado aproximadamente 8
ml
• Caja con bacterias.
Procedimiento de la Práctica:
En el laboratorio de microbiología, se llevó
a cabo la práctica de demostración de
presencia de microorganismos en diferentes
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ambientes. Se utilizó un estereoscopio, 4
cajas de Petri con un agar nutritivo, 4
hisopos, 1 mechero, 1 asa circular para
sembrar, un tubo con agar inclinado, un tubo
con caldo nutritivo y una caja Petri con
cultivo de bacterias Klebsiella pneumoniae
proporcionado por el laboratorio. Se
tomaron 4 muestras para el cultivo de la
siguiente manera:
 Celular: Se utilizó un hisopo para
frotar las superficies de un celular,
continuando con su frotación en el
agar nutritivo preparado en las cajas
de Petri.
 Dedo índice: Se procedió a esparcir
de forma pendulante el dedo en una
caja de Petri con agar nutritivo.
 Brocha de maquillaje: Con un hisopo
se tomó la muestra de las superficies
de contacto con la piel de una brocha
de maquillaje, y se procedió a
sembrarlas en el Agar de la caja de
Petri de forma ondulante.
 Lengua: Directamente, se posó la
lengua directamente en el Agar
nutritivo de la caja de Petri.
Todas las muestras fueron debidamente
rotuladas con el nombre y el número del
grupo, asegurándonos de sellarlas con papel
film después de ser sembradas, para
finalizar, se llevaron a una incubadora a
37°C para su buen aclimatación ambiental..
Posteriormente se llevó a cabo la siembra
del Klebsiella pneumoniae en el agar
inclinado ya preparado y en el caldo
nutritivo. Se dejó calentar inicialmente el asa
circular a fuego directo de un mechero hasta
tornarse rojo, con el fin de eliminar residuos
de microorganismos ambientales, y
esterilizar el asa, luego se extrajo un poco
del microorganismo, e introdujo en el tubo
con Agar inclinado, se dispersó de forma de
zig zag desde el fondo del agar inclinado en
el tubo de ensayo, hasta el inicio.
Para terminar, se efectuó la siembra de la
bacteria en el caldo nutritivo, para ello se
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volvió a esterilizar el asa, poniéndola al rojo Figura 1. Muestra N°1 en la cual se pueden
vivo mediante la exposición de la llama apreciar las colonias.
directamente, se extrajo un poco más de
muestra de K. pneumoniae, se introdujo en
el tubo de ensayo de caldo nutritivo, a un
nivel intermedio desde el cóndilo, hasta el
fondo del tubo de ensayo, se giró el asa,
hasta observar que restos de la colonia
extraída de la muestra de la bacteria, estaban
depositados en ella. Se terminó con una
última flameación del asa, para dejarla libre
de restos de K. pneumoniae.
Muestra Nº2. Dedo índice
Las muestras de agar en caja de Petri se
Número de colonias: 41.
dejaron incubar en un horno a 37°C por 48
Forma: eran o circulares o de forma
horas. Luego del tiempo de incubación, para
ondulada.
determinar qué microorganismo se estaba
Borde: entero.
estudiando, se observó la morfología de las
Elevación: elevadas.
colonias a simple vista y luego con un
Superficie: lisas o rugosas.
estereoscopio, terminando con un dictamen
Coloración: amarillas, blanca o translúcida.
físico sobre cada bacteria que se tuvo como
objeto de estudio.
Figura 2. Colonias de la muestra Nº 2
Datos y Cálculos
Primera parte.
Se usaron 4 muestras en caja Petri con un
agar nutritivo.

Muestra Nº1. Celular

Número de colonias: 5.
Forma: 4 colonias presentaban forma
circular y 1 rizoide.
Borde: 3 colonias eran con borde entero y 2
con borde ondulado.
Elevación: 3 colonias presentaron elevación
plana, 1 elevación convexa y 1 elevación
acuminada.
Superficie: tres colonias tenían superficie
brillante y lisa, 1 mate y otra rugosa y
cremosa.
Coloración: 2 colonias eran de coloración
blanca, 2 amarillas pálido y 1 era translúcida
con un centro amarillo.
Muestra Nº3. Brocha de maquillaje
Número de colonias: difícil de realizar
conteo. Había colonias y levaduras.
Forma: irregular.
Borde: lobulado.
Elevación: crateriforme y acuminada.
Superficie: invasiva, secas algunas rugosas
generalmente mates.
Coloración: blanca y unas pocas
tenuemente amarillas.
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Figura 3. Colonias y levaduras de la muestra Figura 5. Muestra de Klebsiella pneumoniae

Nº 3. sembrada en agar inclinado.

Caldo de cultivo.
Muestra Nº4. Lengua
Número de colonias: 14. Tipo de crecimiento: sub-superficial
Turbia, facultativo anaerobio con presencia
Forma: puntiformes, circular e irregular.
de anillo blanco en forma de aro en el fondo.
Borde: 1 colonia lobulada y las otras
Figura 6. Muestra de Klebsiella pneumoniae
onduladas.
en caldo de cultivo.
Elevación: acuminada y semi convexa.
Superficie: invasiva, algunas rugosas otras
lisas.
Coloración: blanca y otras amarillas.
Figura 4. Colonias muestra N º 4

Resultados y discusión

Muestra Nº 1. Celular
Se observó 5 colonias diferentes como se
Segunda parte. puede apreciar en la figura 1, una de
En un agar inclinado y en un caldo ellas tenía tamaño grande con respecto a las
de cultivo se sembró las bacterias Klebsiella demás, 3 medianas y una era más pequeña
pneumoniae. que las otras.
La colonia más pequeña y una de las
Agar inclinado. colonias medianas tenían características
Tipo de crecimiento: filiforme similares en cuanto a su coloración, forma
circular, borde entero, y superficie brillante
y lisa. Difieren en su tamaño y su elevación
una era plana mientras la otra presentaba una
elevación semi convexa. Se puede decir que

ambas pertenecían al mismo tipo de
microorganismo.
La siguiente colonia era de tamaño mediano
muy similar a las dos anteriores difería en su
borde ondulado y su coloración que era
translúcida a los bordes y con un centro
amarillo muy parecida a un huevo crudo con
apariencia de cromogénesis amarilla.
La última de las colonias medianas era
coloración blanca mate con superficie plana
borde entero y forma circular muy diferente
de todas las demás, por lo cual se puede
deducir que es de otro tipo diferente de
microorganismo.
La colonia más grande en tamaño era
evidente que pertenecía a una especie de
microorganismo diferente debido a que sus
características eran muy diferentes de las
demás presentaba un borde ondulado de una
forma rizoide elevación acuminada y era
rugosa y cremosa.
De lo cual se deduce que se tenía entre 2 o 3
especies diferentes de microorganismos
diferente en el celular y de una manera
general no estaba tan contaminado.
Muestra Nº 2. Dedo índice
Se puede decir que existían muchas más
colonias que en la muestra N° 1 en nuestro
objeto de observación el cual era el dedo
índice y tenía cierto tipo de contaminación
más grande pero que eran de dos
microorganismos similares más no iguales
debido a que presentaban pequeñas
diferencias sutiles en cuanto a sus aspectos
más comunes pero ambos tenían la forma de
cocos el mismo borde y elevación.
Muestra Nº 3. Brocha de maquillaje
Su conteo específico no se realizó porque
presentaba muchas colonias unas
superpuestas entre otras y además tenía
presencia de levaduras en gran cantidad lo
que provocaba que se extendieron casi que
por todo el agar y que entre las bacterias y
las levaduras se invadieran el espacio.
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Esta muestra tenía un alto índice de
contaminación entre ella tenía levaduras lo
que indica presencia de hongos aparte de las
bacterias presentes en la brocha de
maquillaje y de lo cual podemos concluir
que este objeto que es muy propenso a la
contaminación y está en contacto con otros
productos que involucran la piel también los
ha contaminado debido a su contacto directo
se recomienda hacer limpieza del producto o
reemplazarlo y en la medida de lo posible
eliminar los otros objetos con los que tuvo
contacto porque puede llegar a tener
consecuencias graves en la salud.
Muestra Nº 4. Lengua
había presencia de 3 tipos de
microorganismos uno era un extendido
puntiforme en el cual crecieron encima otras
colonias dentro de este, otros eran de forma
irregular con coloración amarilla, superficie
lisa y el otro era de forma ondulada con
coloración blanca superficie lisa y elevación
semi convexa.
A modo de comparación con las otras tres
muestras no estaba tan contaminada.
Agar inclinado.
Se encontró sobre la superficie en la que se
sembró el crecimiento uniforme de toda la
bacteria Klebsiella pneumoniae por tanto se
deduce que el crecimiento es filiforme, las
colonias presentaron una superficie cremosa
típica de lo consultado en la literatura, que
indica que posee un fácil desarrollo en
muchos medios de cultivo agar tanto
líquidos como solidos con un aspecto
mucoide.
Caldo de cultivo.
Esta muestra presentó unas características en
las cuales se veía turbia, tenía una presencia
de anillo blanco en forma de aro en el fondo
lo cual nos da una idea de que es un
microorganismo anaerobio y la turbidez que
presenta indica que es facultativo

anaerobio y su crecimiento sub-superficial,
según lo consultado en la literatura es
justamente el comportamiento de la
Klebsiella pneumoniae, en este tipo de
medios.
Cuestionario:
1. ¿Por qué se dice que existen
microorganismos que cumplen
funciones beneficiosas o 2.
perjudiciales?, nombre dos en
cada categoría y ejemplifique.
Se afirma esto, porque existen en el mundo
microorganismos que al encontrar un medio
adecuado para su proliferación, aparte de
aumentar su biomasa y su cantidad, también
pueden generar o no agentes tóxicos
patógenos o no patógenos que alteran la
fisiología del cuerpo humano, o del
organismo en general, pues, también
coexisten microorganismos que afecten de
forma negativa a organismos de una especie
y a otros no. Así, debido a las variaciones
entre especie y especie, tanto de organismo
residente, como de organismo infectante,
puede o no actuar como perjudicial o
benéfico.
Ejemplos de microorganismos benéficos son
la Cándida albicans y Gardnerella
vaginalis, que ayudan a mantener el aparato
genitourinario femenino libre de infecciones,
y apto para el embarazo. Otras bacterias
como el Streptococcus termophilus y
Lactobacillus bulgaricus, son importantes
en la industria láctea, pues son los
responsables de la producción de yogurt, a
nivel industrial, ambas son sinérgicas una
con la otra, pues permiten la potenciación
enzimática y reproducción acelerada una a la
otra.
Por otro lado, los microorganismos
patógenos, o perjudiciales, son aquellos que
generan alteraciones en la fisiología del
organismo, acompañado con malestar y
molestias. Estos pueden ser producidas por
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la intoxicación debida a la ingesta del
organismo, o por una infección mediada por
algún producto principal o secundario propio
de la fisiología del agente patógeno, algunos
son la Listeria monocytogenes y el
Clostridium botullinum; ambos son agentes
patógenos que contaminan alimentos y
generan infecciones e intoxicaciones en el
organismo.
¿Qué es una colonia bacteriana?
¿De qué factores depende el tipo de
crecimiento de una colonia?
Una colonia bacteriana es una aglomeración
de bacterias que son descendientes una o
unas
Pocas bacterias progenitoras. (Pírez, 2000).
En las cuales, todas son genéticamente
idénticas y
Dependiendo de las características de las
mismas, se generan diversas estructuras
visuales, que dan una amplia gama de
morfologías de colonias bacterianas
Las poblaciones microbianas raramente
mantienen un crecimiento exponencial
prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo
la tierra estaría tapada de una masa
microbiana mayor que la de la tierra misma.
El crecimiento está normalmente limitado
por el agotamiento de nutrientes o por la
acumulación de productos del mismo
metabolismo microbiano, que les son
tóxicos a la población. La consecuencia es
que el crecimiento al cabo de un cierto
tiempo llega a disminuir hasta detenerse.
3. ¿Podría usted observar colonias
bacterianas en un medio líquido?,
Justifique su respuesta.
Es posible observar colonias bacterianas en
medios de cultivo líquidos, pero no
precisamente en cualquier medio líquido.
Estos medios de cultivo deben tener la
condición óptima para el crecimiento de
bacterias, las cuales aprovechan la libertad
de movimiento por todo el medio para
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difundirse, con lo cual pueden encontrar su
componente nutritivo con mayor facilidad y
ubicarse según su capacidad aerobia a cierto
nivel del medio.
Siguiendo este orden, se pueden clasificar en
anaerobias obligadas, facultativas,
microaerófilas y aerobias; siendo
determinante su ubicación en el medio de
crecimiento. Sin embargo, es importante
tener en cuenta que el crecimiento de
bacterias en un medio líquido, no garantiza
que todas puedan ser visibles a simple vista.
4. ¿Qué es un medio de cultivo? ¿En
qué casos se utilizan medios sólidos y en
qué otros medios líquidos? Explique.
El Medio de Cultivo es el material
alimenticio en el que crecen los
microorganismos, Para que las bacterias
crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presión de oxígeno adecuado,
así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento
de todo microorganismo contaminante.
se usan medios líquidos cuando se desea
favorecer el desarrollo bacteriano de células
estresadas y medios sólidos cuando lo que se
quiere obtener son bacterias aisladas por la
formación colonias sobre la superficie y
también sirve cuando se requiere estudiar la
morfología de las colonias lo cual un medio
líquido no lo permite.
5. Escoja un tipo de ambiente o
material (alimentos, baño, cocina, boca,
celular, etc.) e investigue de qué tipo y
cuáles (mínimo 5) son los
microorganismos más comunes en dicho
ambiente.
En la esponja de la cocina se pueden
encontrar principalmente Campylobacter,
Enterobacter cloacae, Escherichia coli,
Klebsiella Proteus, Salmonella y
Staphylococcus.
A pesar de ser un utensilio para la limpieza
posee el segundo lugar de proliferación de e.
coli en la casa después de los desagües que
poseen el lugar número 1.

Conclusiones
 Los microorganismos tienen el don de la ubicuidad, pues su presencia en todas las
superficies, cavidades, etc. mediante técnicas adecuadas es fácil detectar su presencia.
 Algunos microorganismos son específicos a la hora de seleccionar su medio de cultivo,
pues tienen requerimientos fisiológicos diferentes.
 Independientemente el medio, y el estado en el que se encuentre el medio, los
microorganismos pueden proliferar de una u otra manera.
 Se pudo observar que las colonias bacterianas presentan una morfología diversa según el
tipo de bacteria que conforme la colonia.
 se obtuvo experiencia en el manejo de materiales y técnicas básicas desarrolladas en la
práctica.
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Referencias
 Pírez, M., Mota, M. Morfología y estructura bacteriana. (2000).
 Pascual Anderson, M. & Calderón y Pascual, V. (2000). Microbiología alimentaria.
Madrid: Ediciones Díaz de Santo
 De la Rosa, M., Osso, M., & Llán, C. (2002). El aire: hábitat y medio de transmisión de
microorganismos (pp. 375 a 376).
 Tortora, Gerard J., Funke, Berdell R., Gase, Christine L. Introducción a la microbiología.
(2004) (2nd ed.). Costa Rica: Editorial Médica Panamericana.
 México U. microbitos blog. [Online].; 2019 cited 2019 junio 24. recuperado de:
http://microbitosblog.com/2015/04/20/klebsiella_medio_cultivo_infeccion_gram/.
 microbiologia/medios de cultivo. wikilibros. Esta página se editó por última vez el 26 feb
2019 a las 16:52. consultado 2019 junio 24. recuperado de:
https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/Medios_de_cultivo.