TÍTULO DE LA UNIDAD BACTERIOLOGÍA: COCOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS

TEMA DE LA PRÁCTICA Identificación bacteriana. Genero Enterococcus

SUB-TEMA Cultivo e identificación de Enterococcus faecalis

RESULTADO DE APRENDIZAJE.
.- Reconocimiento e identificación bioquímica de una cepa de Enterococcus faecalis
OBJETIVO GENERAL .- Reconocer e identificar una cepa Enterococcus faecalis
- Conocer los diferentes medios de cultivos selectivos y
pruebas bioquímicas utilizadas para el reconocimiento e
Objetivo específico identificación de Enterococcus faecalis.
- Establecer las características diferenciales entre
Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium

FUNDAMENTO TEÓRICO:
Los Enterococos pertenecieron, clásicamente, a los Streptococcus grupo D de Lancefield;
sin embargo, a mediados de la década de 1980 fueron oficialmente clasificados en su propio
género.
Los enterococos, particularmente Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium, forman
parte de la flora normal del tracto gastrointestinal tanto humano como animal y del tracto
genitourinario femenino humano.

El género Enterococcus tiene ciertas características que les facilita la diseminación entre los
pacientes hospitalizados:
.- puede colonizar el tracto gastrointestinal de los trabajadores de la salud y de los pacientes,
proveyendo un reservorio continuo para la diseminación intrahospitalaria;
es resistente a varios antibacterianos de uso frecuente;
.- la resistencia antimicrobiana le permite su supervivencia en un medio ambiente con alto
uso de antibacterianos;
.- puede contaminar el medio ambiente hospitalario y sobrevivir en él por períodos
prolongados;
.- puede contaminar las manos de los trabajadores de la salud, permaneciendo por más
tiempo si los empleados no cumplen con las normas de lavado de manos.

Estos factores hicieron que los enterococos emergieran como uno de los patógenos
nosocomiales más importantes.

Importancia Clínica
En la última década, estos organismos han adquirido cada vez más importancia como
patógenos nosocomiales, a pesar de su baja virulencia.
Las especies de enterococos clínicamente importante son: E. faecalis, E. faecium,
E. durans, E. avium, E. gallinarum, E. casseliflavus, E. raffinosus, E. malodoratus, E. hirae,
E. mundtii, E. solitarius, E. pseudoavium.
E. faecalis es el patógeno humano más frecuente representando el 60% al 90% de los
aislamientos clínicos de enterococos. E faecium es la segunda especie aislada en
frecuencia, representando el 5% al 16% de los aislamientos clínicos.
Identificación
.- Aislamiento del microorganismo desde el sitio de infección
.- Los enterococos son cocos gram positivos,
.- Se encuentran aislados, de a pares, o formando cadenas cortas.
.- Son catalasa negativa,
.- Anaerobios facultativos,
.- Capaces de crecer en condiciones un tanto extremas.
.- La identificación de la producción de ß-lactamasa y resistencia a la vancomicina.

Las características bioquímicas sobresalientes incluyen:

.-la habilidad de crecer en presencia de NaCl al 6,5%,

.- temperaturas entre 10°C y 45°C, y hasta en un pH de 9,6.
.- Tienen la capacidad de hidrolizar la esculina,
.- crecer en presencia de bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60°C
.- hidrolizar la L-pirrolidonil ß-naftil-amida (PYR); esta habilidad ha sido usada como parte
de un test rápido para detección de enterococos en el laboratorio.
Las especies de enterococos clínicamente importante son: E. faecalis

Patogenicidad y virulencia
Los enterococos son parte de la flora normal endógena humana, y tienen poco potencial
patogénico en el huésped normal.
Sin embargo, en el anciano o en el paciente inmunocomprometido, se vuelven patógenos
oportunistas.
Las infecciones ocurren cuando las defensas del huésped descienden por una enfermedad y
por el uso de dispositivos invasivos.
Se conoce muy poco acerca de los factores de virulencia de los enterococos. La presencia
de hemolisinas o la agregación de sustancias fueron postuladas como factores de virulencia.
Adicionalmente, los carbohidratos de la pared celular o los sitios de unión de la fibronectina
que favorecen la adherencia a los tejidos del huésped, pueden incrementar la patogenicidad.
 Identificación de E. faecalis
1.- Tinción diferencial de Gram:
Los enterococos son cocos gram positivos, se encuentran aislados, a pares, o formando
cadenas cortas.

2.- Cultivo y aislamiento

Las colonias de Enterococcus faecalis, en agar sangre crecen a las 24h. Tienen un tamaño
entre 0.5 y 1 mm, a menudo opacas y blancas, que suelen ser α hemolíticas o no
hemolíticas, aunque en algunos casos aparecen como β hemolíticas.
Puede crecer a temperaturas entre 10 y 45ºC, aunque su temperatura óptima de crecimiento
es 35ºC.
3.- Crecimiento en Agar Manitol Salado

Enterococcus faecalis tiene la habilidad de crecer en presencia de NaCl al 6,5%.

 4.- Prueba de la Catalasa
Enterococcus faecalis ( catalasa negativa)

5.- Prueba de la Coagulasa

Enterococcus faecalis ( coagulasa negativa)
6.- Crecimiento en agar Bilis esculina
 7. Producción de Betalactamasa

. Pruebas bioquímicas diferenciales entre especies del género Enterococcus

Especie Arabinosa Bilis Movilidad Pigmento

Esculina
E. faecalis - + - -
E. faecium + - - -
E. casseliflavus + ± + +
E. gallinarum + - + -

MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos Materiales Reactivos
Infocus, computadora Gorro, mandil, mascarilla, guantes, Agar Sangre
Campana de Flujo lentes. Agar Manitol salado
Laminar Placas de Petri Agar TSI
Autoclave Asa de platino Agar Indol movilidad
H2O2
Mechero de Bunsen Aguja de Platino
Solución Salina
 Microscopios Portaobjetos Agua destilada
Estufa Palillos de madera
Material Biológico:
Cepa de Enterococcus faecalis
Plasma sanguíneo

RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

(Se refiere a lo ejecutado en la práctica)
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
DEBERES PARA LOS ESTUDIANTES
1.- Realizar un reporte contentivo de los resultados de todos y cada uno de los
procedimientos, tinciones, cultivos, aislamientos y pruebas bioquímicas realizadas para el
reconocimiento e identificación de Enterococcus faecalis.

RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFÍA
1.-Picazo, J.; Prieto,J. (2016). Compendio de Microbiología, 2.a edición.
2.-Ordoñez, S. (2014). Guías prácticas para los laboratorios de bacteriología clínica
3.-Prats,G.(2012). Microbiología y parasitología médicas.
4.-Bailey/Scott (1992) Diagnóstico Microbiológico, 7ª edición
5.- https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182007000400009
6.-http://ninive.uaslp.mx/jspui/bitstream/i/4419/1/Enterococcus%20faecalis%20Zayra.pdf

Dr. Patricio Vásconez Dr. Francisco J Ustáriz Fajardo Ing. Eliana De la Torre
DIRECTOR DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO