Facultad de Ciencias Ambientales y Agrícolas

Curso: Bioquímica
Sección: 01
Sede Escuintla

Informe de la Práctica de Laboratorio

“Reacciones en Carbohidratos y Proteínas”

Integrantes.
Fernández Hernández Gustavo Adolfo –
Gordillo García Yendy Patricia –
López Cruz Luis Fernando –
Nájera González Gesly Paola - 2219518
 Introducción
Dentro del curso de Bioquímica la práctica de laboratorio siempre ha sido un
elemento fundamental para elevar los conocimientos que dentro del salón de
clases se adquieren.

Tal es el caso a presentar, como alumnos del 4to ciclo de agronomía el presente
informe, elaborado el día sábado 12 de octubre del presente año con fin de poner
en práctica la Reacción de Molisch y Reacciones Coloreadas de las Proteínas.

La reacción de Molisch es una reacción que tiñe cualquier carbohidrato presente

en una disolución; es llamada así en honor del botánico austríaco Hans Molisch.

El reconocimiento de proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas forman

con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar formaciones
de coágulos al ser calentados a temperaturas superiores, o al ser tratadas con
soluciones salinas.

La reacción de Millon es específica para grupos fenólicos, por lo tanto, dan

positivo todas las sustancias que poseen esta estructura, por ejemplo, la tirosina.

La reacción de Biuret esta reacción se basa en la formación de un compuesto de

color violeta dando positivo la prueba que se desee obtener.

En la practica de laboratorio se elaboró acompañado de las medidas necesarias

estas reacciones las cuales, mediante este informe presentaremos, los
procedimientos, los materiales utilizados, las sustancias, los resultados y
conclusiones de cada una de las reacciones. Para esclarecer y fortalecer los
métodos y conocimientos que se repasan dentro del salón de la clase de
Bioquímica.
Objetivos

Generales.

- Determinar mediante la reacción de Molisch la presencia de carbohidratos.

- Para las proteínas, mediante sus diversas reacciones determinar la
identificación de las mismas utilizando los tres métodos que la guía de la
práctica indica.

Específicos.

- Para la reacción de Molisch, comprobar mediante la prueba de coloración

de Molish, la presencia de carbohidratos, sean estos reductores o no
reductores, en las diferentes muestras.
- Para las proteínas identificar su presencia, con la identificación y la
configuración de los reactivos indicados de la guía.
Marco Teórico

La reacción de Molish

Es una reacción que presenta la propiedad de teñir cualquier carbohidrato

presente en una disolución, el nombre de esta reacción se deriva en honor del
botánico austríaco Hans Molish.

Forma parte de la composición del reactivo de Molish el α-naftol el mismo que se

lo utiliza al 5 % en etanol de 96° por ello a temperatura ambiente en un tubo de
ensayo se debe colocar la muestra o solución problema más el reactivo de Molish
posteriormente se adiciona ácido sulfúrico (H2SO4) e inmediatamente aparece la
formación de un anillo color violeta en la interfase.

Es una reacción cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glúcidos en

la solución original. La reacción entre el ácido sulfúrico y el α-Naftol forma un anillo
de color verde claramente visible, cuando no hay Glúcidos. Cuando la
concentración de glúcidos es alta, se forma un precipitado rojo que al disolverse,
colorea la solución. La reacción de Molisch-Udransky es considerada como una
prueba general para identificación de Glúcidos y un resultado negativo excluye la
presencia de estos. La presencia de Glúcidos se pone de manifiesto por la
formación de un anillo de color púrpura-violeta en la interfase.

Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la

muestra. Todos los azúcares por acción del ácido sulfúrico concentrado se
deshidratan formando compuestos furfúricos.

Proteínas.

Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas lineales de

aminoácidos.

Por sus propiedades fisicoquímicas, las proteínas se pueden clasificar en

proteínas simples (holoproteidos), formadas solo por aminoácidos o sus derivados;
proteínas conjugadas (heteroproteidos), formadas por aminoácidos acompañados
de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por
desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Están constituidas por
unidades estructurales llamados polímeros.

Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida. Representan

alrededor del 50 % del peso seco de los tejidos. Son las biomoléculas más
versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo y
realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

 Estructural. Esta es la función más importante de una proteína (Ej.:

colágeno)
 Contráctil (actina y miosina)
 Enzimática (Ej.: sacarasa y pepsina)
 Homeostática: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actúan como
un tampón químico)
 Inmunológica (anticuerpos)
 Producción de costras (Ej.: fibrina)
 Protectora o defensiva (Ej.: trombina y fibrinógeno)
 Transducción de señales (Ej.: rodopsina).

Carbohidratos.
Los carbohidratos son unas biomoléculas que también toman los nombres de
hidratos de carbono, glúcidos, azúcares o sacáridos; aunque los dos primeros
nombres, los más comunes y empleados, no son del todo precisos, ya que no se
tratan estrictamente de átomos de carbono hidratados, pero los intentos por
sustituir estos términos por otros más precisos no han tenido éxito. Estas
moléculas están formadas por tres elementos fundamentales: el carbono, el
hidrógeno y el oxígeno, este último en una proporción algo más baja. Su principal
función en el organismo de los seres vivos es la de contribuir en el
almacenamiento y en la obtención de energía de forma inmediata, sobre todo al
cerebro y al sistema nervioso.
Esto se cumple gracias a una enzima, la amilasa, que ayuda a descomponer esta
molécula en glucosa o azúcar en sangre, que hace posible que el cuerpo utilice la
energía para realizar sus funciones

Función de los carbohidratos.

Aunque su función principal es la energética, también hay ciertos hidratos de
carbono cuya función está relacionada con la estructura de las células o aparatos
del organismo, sobre todo en el caso de los polisacáridos. Estos pueden dar lugar
a estructuras esqueléticas muy resistentes y también pueden formar parte de la
estructura propia de otras biomoléculas como proteínas, grasas y ácidos
nucleicos. Gracias a su resistencia, es posible sintetizarlos en el exterior del
cuerpo y utilizarlos para fabricar diversos tejidos, plásticos y otros productos
artificiales.

Reacción de Millon (para aminoácidos fenólicos)

Es específica para grupos fenólicos, por lo tanto dan positivo todas las sustancias
que poseen esta estructura, por ejemplo, la tirosina. En una primera instancia se
procede a la nitración del anillo fenólico con el ácido nítrico del reactivo. La tirosina
nitrada forma complejos con los iones mercurio Hg (I) y Hg (II) del reactivo
produciendo un precipitado rojo o una solución roja, ambos resultados positivos (a
veces se observa un precipitado blanco, que debe calentarse para que vire a la
coloración roja).

Reacción de Biuret

El Biuret es un reactivo que se emplea para la determinación de proteínas de

cadena larga y de cadena corta. Es especialmente utilizado en el área de química
analítica y uroanálisis para investigar la concentración de proteínas totales en
suero, plasma y orina.
La prueba de Biuret se fundamenta en detectar los enlaces peptídicos. La prueba
se da en medio alcalino. La muestra debe contener al menos dos enlaces
peptídicos para que se pueda formar un complejo de color violeta-púrpura. El
complejo se forma por la unión de los enlaces y el ión de cobre.

Las sustancias que reaccionan con las proteínas es el sulfato cúprico, mientras
que el tartrato de sodio tiene como función no permitir la formación de hidróxido de
cobre, el cual tiende a precipitar e interfiere en la reacción.

Una reacción se interpreta como positiva cuando la solución se torna de color

violeta. El color se produce por la formación de un complejo entre al menos dos
enlaces peptídicos que poseen el grupo CO-NH y los cationes cúpricos.

Esta reacción puede variar en intensidad y en el color dependiendo del tipo de

proteína.

La prueba se puede realizar de forma cualitativa o cuantitativa. En la forma

cualitativa se reporta como positivo o negativo. Mientras que en la forma
cuantitativa se puede medir la concentración por el método espectrofotométrico.

Triptófano.

Es un aminoácido esencial en la nutrición humana. Es uno de los 20 aminoácidos

incluidos en el código genético (codón UGG). Se clasifica entre los aminoácidos
apolares, también llamados hidrófobos. Se caracteriza por una cadena lateral con
el grupo indol. Es esencial para promover la liberación del neurotransmisor
serotonina, involucrado en la regulación del sueño y el placer. Su punto
isoeléctrico se ubica a pH=5.89. La falta de triptófano puede contribuir
negativamente a cuadros de ansiedad, insomnio y estrés.

Propiedades del Triptófano.

 Como aminoácido esencial ayuda a que el organismo elabore sus propias

proteínas.
 El triptófano es esencial para que la glándula pineal segregue la
melatonina, que es una hormona cerebral.
  Favorece el sueño, ya que la serotonina es precursora de la hormona
melatonina, vital para regular el ciclo diario de sueño-vigilia.

Tirosina.

La tirosina es un aminoácido no esencial, forma parte de las proteínas y se

considera un aminoácido aromático. Su síntesis se produce a partir de la
hidroxilación de la fenilalanina siempre y cuando la contenga un aporte adecuado
de este aminoácido.

El nombre tirosina (tyros) significa queso en griego y este aminoácido debe su

nombre a que fue descubierto por primera vez en la proteína del queso, la
caseína. La cadena lateral de la tirosina es un grupo fenólico y se conocen tres
isómeros distintos del aminoácido tirosina: para-tirosina, meta-tirosina y orto-
tirosina. Aunque la forma más conocida y estudiada es la para-tirosina o también
llamada L-tirosina.

La suplementación con tirosina busca mantener los niveles adecuados de este

aminoácido y preservar la salud del sistema nervioso como en casos de
depresión, déficit de atención, hiperactividad, narcolepsia, estrés e insomnio o
mejorar el estado de ánimo.

Asimismo, la tirosina se emplea para favorecer el control del apetito, ya que las
catecolaminas regulan la saciedad entre comidas, también contribuyen a la
reducción de la grasa corporal porque favorecen la síntesis de hormonas como la
tiroxina o las catecolaminas. Estas hormonas estimulan la lipólisis por aumento del
AMPc, que activa la lipasa para producir ácidos grasos a partir de los triglicéridos
almacenados.
Material y Equipo.

Pipetas de 5ml. Solución de glucosa al 1% en agua

(100 ml).
Tubos de ensayo Solución de Timol al 1% en alcohol al
88%
Beaker de 500 ml. Ácido Sulfúrico al 75%
Mechero Bunsen Algodón, Papel filtro, pedazos de
madera, agar.
Laminas con asbesto Solución de clara de huevo al 1%
Gradillas Sulfato ácido de mercurio al 1%
Trípodes Nitrito de sodio al 1%
Hidróxido sódico al 25%
Urea sólida
Agua destilada

Sulfato de cobre al 1%
Hidróxido sódico al 10%

Procedimiento.

Experimento No.1 Reacción de Molisch.

Paso 1: Agregar 3 cc (60 gotas) de ácido sulfúrico frío al 75% a un tubo de ensayo.

Paso 2: Agregar al mismo tubo de ensayo 5 gotas de solución de glucosa al 1%.

Paso 3: Añadir 5 gotas de solución alcohólica de timol al 1% y mezclar bien.

Paso 4: Colocar un beaker sobre el mechero bunsen por 5 minutos, luego colocar
el tubo de ensayo y observar el cambio del contenido de este.

Paso 5: Repetir el experimento con otros 5 tubos de ensayos diferentes e

identificarlos respectivamente con el número que les corresponden.

Paso 6: Añadir al segundo tubo de ensayo en lugar de la solución de glucosa,

algodón, al tercer tubo añadir papel filtro, al cuarto tubo de ensayo añadir madera,
al quinto tubo añadir agar y al sexto tubo añadir 2 cc de saliva.
Experimento No.2 Reacciones coloreadas de las proteínas.

A) Reacción de Millon.

Paso 1: Colocar 1 cc (20 gotas) de clara de huevo al 1% previamente filtrada

sobre grasa en un tubo de ensayo.

Paso 2: Agregar 1 cc (20 gotas) de sulfato ácido de mercurio al 1%, luego colocar
el tubo de ensayo dentro de un beaker con agua hirviendo por 30 segundos.

Paso 3: Enfriar el tubo de ensayo sobre el agua de chorro.

Paso 4: Agregar solamente una gota de solución de nitrito de sodio al 1%.

Paso 5: Calentar nuevamente con cuidado el tubo de ensayo.

B) Reacción aldehídica para el triptófano.

Paso 1: Colocar 5 cc (100 gotas) de clara de huevo al 1% dentro de un tubo de

ensayo.

Paso 2: Agregar cuidadosamente 1 cc (20 gotas) de ácido nítrico concentrado.

Paso 3: Calentar el tubo de ensayo en un beaker con agua caliente y luego

enfriarlo.

Paso 4: Enfriar el tubo de ensayo con agua del chorro y agregar cuidadosamente
3 gotas de solución de hidróxido sódico al 25%.

C) Reacción de Biuret.

Paso 1: Identificar del 1 al 3, 3 tubos de ensayos.

Paso 2: Agregar al primer tubo de ensayo 1 gr. de urea sólida, al segundo tubo
agregarle solamente unos cristales de urea sólida y al tercer tubo agregar 3 cc (60
gotas) de solución de clara de huevo al 1%.

Paso 3: Fundir cuidadosamente los cristales del segundo tubo de ensayo (sin
sobrecalentarlo), colocándolo sobre la llama del mechero.

Paso 4: Enfriar el tubo y disolver el contenido en 3 cc (60 gotas) de agua destilada.

Paso 5: Agregar 3 cc (60 gotas) de hidróxido sódico al 10% a los 3 tubos de

ensayo, mezclar bien.

Paso 6: Agregar a cada uno de los 3 tubos, mínimo 5 gotas de solución de sulfato
de cobre al 1% hasta que se proporcione un color violeta o púrpura.

Paso 7: Agitar el tubo después de agregar cada gota de solución de sulfato de

cobre.

Resultados y Discusión.

Reacción de Molisch. Los resultados obtenidos en los 6 tubos de ensayos

utilizados en esta prueba, fueron compuestos de condensación coloreados
(algunos claros y otros oscuros).

El tubo de ensayo que contiene glucosa nos dio como resultado un precipitado
naranja oscuro, debido a la acción del ácido sulfúrico concentrado, lo cual indica
que reaccionó positivamente con el reactivo de Molish e indicando que se trata de
un carbohidrato.

El sexto tubo de ensayo, el cual contenía saliva arrojó un precipitado naranja claro
debido a la presencia de numerosos carbohidratos.

Esta reacción permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una

muestra y se basa en la acción hidrolizante y deshidratante que ejerce el ácido
sulfúrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los ácidos concentrados
originan una deshidratación de los azúcares para rendir furfurales, que son
derivados aldehídicos del furano. Los furfurales se condensan con los fenoles para
dar productos coloreados característicos, empleados frecuentemente en el análisis
colorimétrico.

Sin embargo, debemos de saber que, no todos los compuestos que reaccionan
con Molish son carbohidratos, como en el caso de los tubos que contienen
algodón, madera y papel filtro.

Reacción de Millon. Millon es específica para el grupo fenólico por lo tanto, la dan
positiva todas las sustancias que poseen esta función, como la Tirosina y todas las
proteínas que la contengan. La Tirosina nitrada forma complejos con los iones Hg
(I) y Hg (II) mercurioso y mercúrico del reactivo produciendo un precipitado rojo
siendo el resultado positivo.

Algunas proteínas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio, mientras que
otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar para dar el color
rojo indicativo de la presencia de Tirosina.

Lastimosamente la proteína utilizada en nuestra reacción no contenía Tirosina, por

lo tanto, no se obtuvo el resultado que se esperaba (precipitado rojo), por el
contrario arrojó un precipitado solamente transparente.

Reacción Aldehídica para el Triptófano. Algunos aminoácidos como

Fenilalanina, Tirosina y Triptófano, tienen anillos aromáticos derivados del
benceno y por ello tiene las propiedades químicas del benceno y sus
derivados. Una de estas propiedades es la reacción de nitración del
anillo bencénico con ácido Nítrico concentrado. Los anillos del Benceno de
Tirosina y Triptófano están activados y reaccionan fácilmente, mientras que el
benceno de la Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y
reacciona con más dificultad.

Es por eso que el resultado obtenido en esta reacción fue positivo, con una
condensación blanca con coágulos amarillo suave.

Reacción de Biuret. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de

proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos
en sustancias de composición desconocida.
Un color violeta resulta cuando los iones cúpricos en medio alcalino se complejan
con los electrones no saturados de los átomos de nitrógeno y oxígeno de los
enlaces de todas las proteínas. La cantidad de color producido es proporcional a la
concentración de proteínas.

El complejo violeta se puede formar de dos maneras: una es por la pérdida de

protones de los grupos amidas que se unen al metal (despronotación), y la otra
por la unión de los electrones de oxígeno y nitrógeno que se encuentren libres y
se unen con el cobre.

En nuestro análisis cualitativo en los 3 tubos llevados a cabo nos arrojaron los
siguientes resultados:

En el primer tubo de ensayo el precipitado fue un violeta muy suave en la parte

inferior y un azul en la parte superior. El segundo tubo de ensayo nos dio un
precipitado violeta más notable en la parte inferior y un azul en la parte superior, y
en el tercer y último tubo nos proporcionó un precipitado un violeta en la parte
inferior y un morado en la parte superior. Llegando a la conclusión de que el color
violeta depende de la concentración de proteínas en cada tubo.

Conclusiones.
En esta práctica de laboratorio se llevaron a cabo análisis cualitativos, el cual tuvo
como objetivo establecer la presencia de algún elemento, compuesto, o fase en
una muestra.

Concluimos en que la mejor reacción para detectar carbohidratos es la de Molisch,

ya que los azúcares, en medio ácido fuerte se deshidratan formando furfurales,
estos furfurales al reaccionar con el timol o el α-naftol originan complejos de
intenso color.

En cambio, reacciones para detectar a las proteínas, las hay de 3 tipos, reacción
de millon en la cual podemos observar características de los coloides, debidas a la
naturaleza coloidal de las proteínas, reacción aldehídica que implica la acidez o
alcalinidad de la molécula proteica y la que más llamó nuestra atención, la
reacción de Biuret la cual se utiliza para saber si una sustancia desconocida, es
una proteína, siendo esta una, dará siempre como resultado positivo cuando la
precipitación se torne a un color violeta-morado.

Mediante las experiencias logramos identificar de manera cualitativa los

comportamientos y condensaciones coloreadas de todas las reacciones llevadas a
cabo en el laboratorio. Haciendo énfasis en que las actividades de laboratorio
constituyen una parte importante del aprendizaje de la bioquímica y complementan
las actividades de la materia impartidas en el aula.

Recomendaciones.
 1. Para la preparación de las soluciones, siempre es adecuado trabajar con
los materiales volumétricos adecuados para tal fin.
2. Los productos químicos se recogerán en recipientes o contenedores
especiales destinados a tales fines. No hay que verter directamente en
lugares inadecuados productos que reaccionen con el agua, inflamables, o
difícilmente biodegradable.
3. Utilizar siempre la vestimenta adecuada para realizar las prácticas de
laboratorio.
4. Sentirse seguros al momento de trabajar con los materiales de laboratorios.
5. Tomar en cuenta las normas higiénicas.
6. No inhalar, probar u oler los productos químicos en ningún caso.
7. No se debe hacer nunca un experimento no autorizado por el encargado.

E – grafía.

https://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna
https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/carbohidratos.html

https://www.lifeder.com/biuret/

Anexos.
Reacción de Molisch. Reacción de Millon.

Reacción Aldehídica para el Triptófano. Reacción de Biuret.