Los primeros esfuerzos para definir la naturaleza química del inductor neural no

tuvieron éxito. En los intentos iniciales de caracterización, Bautzman, Holtfreter,

Spemann y Mangold mostraron que el tejido organizador mantuvo su actividad
de inducción, incluso después de que las células habían muerto por el calor, el
frío, o el alcohol. Holtfreter informó posteriormente de que la actividad
neuralizadora(neuralizing) sobrevivió a la congelación, punto de ebullición, y el
tratamiento con ácido, sin embargo, la actividad se perdió a la Temperatura de
150 º. Varios embriólogos entonces se propusieron aislar el principio activo en el
labio dorsal del blastoporo Usando los siguientes tres enfoques: (1) extraer el
factor activo de las células blastoporo dorsal, (2) probar moléculas candidatas a
buscar actividades similares de inducción; y (3) pruebas de otros tejidos para las
actividades de inducción

Los primeros intentos de aislamiento directo de la actividad de inducción de las

células del labio del blastoporo resultaron en un fracaso, en gran medida, debido
a las pequeñas cantidades de tejido que se podrían obtener y los tipos limitados
de los análisis químicos disponibles en el momento. Desde el informe inicial en
1932 a finales de 1950, se realizaron más de un centenar de estudios tratando
de caracterizar la actividad nuera. La búsqueda del inductor neural fue una de
las mayores preocupaciones de los biólogos del desarrollo en ese
período. Considerando que un grupo informó de que el principio activo fue de
lípidos extraíbles, otro informo de que los residuos eran tanto más activos de los
extractos. Para obtener mayor cantidad de tejido para trabajar, varios
investigadores examinaron una variedad de tejidos adultos para actividades
similares de inducción, aunque algunos se encuentran un cierto grado de
especificidad, el hígado y el riñón son los inductores neurales más potentes,
otros encontraron que "fragmentos de prácticamente todos los órganos de tejido
de diversos anfibios, reptiles, aves y mamíferos, incluido el hombre, fueron
inductivos"(holtfreter, 1955). Tal vez lo más desconcertante a los investigadores
en el momento fueron los resultados del enfoque a la molécula
candidata. Algunos de los factores que se encuentran para tener actividad
neuralizadora (neuralizing) tenía cierto sentido: los esteroides hidrocarburos
policíclicos, por ejemplo, sin embargo, otros inductores putativos, como el azul
de metileno y triocyanato, muy probablemente tenían sus efectos a través de
cierta toxicidad o la contaminación.

En la década de 1980, una serie de investigadores comenzaron a aplicar

técnicas de biología molecular para estudiar las inducciones embrionarias. Los
primeros de estos estudios buscaron los factores que pondrían en marcha el
proceso de inducción del mesodermo en la rana, como se describió
anteriormente, el embrión de la rana está dividido en un medio animal y medio
vegetal; la mitad animal en última instancia da origen al tejido neural y tejidos
del ectodermo, mientras que la mitad de origen vegetal dará lugar
principalmente al endodermo. El mesodermo, que en última instancia
desarrollara a los músculos, los huesos y la sangre, surge en medio de estos dos
tejidos , de la célula alrededor del ecuador del embrión (ver figura 1.16). Se ha
sabido desde hace muchos años, basado en el trabajo de Peter Nieuwkoop, que
la formación de las células del mesodermo en la región ecuatorial requiere algún
tipo de interacción entre las mitades animal y vegetal del embrión. Si la mitad
animal o "tope" se aísla de la mitad del vegetal del embrión, no se desarrollaran
las células del mesodermo. Sin embargo, cuando Nieuwkoop (1973 - 1985)
recombinada la tapa animal con la mitad vegetal, se desarrollara un nuevo
“ecuador” mesodermico (figura 1.16). El postuló que una señal de la mitad
vegetal del embrión induce la formación del mesodermo en el cruce con la
mitad animal del embrión. La identificación de las bases moleculares de esta
inducción ha sido objeto de invetigation intensa, y el texto se hace referencia a
más libros de biología del desarrollo para el modelo actual de este proceso.

Al mismo tiempo que los estudios de los factores que inducen al mesodermo se
estaban produciendo, un número de investigadores se dio cuenta de que el
ensayo sobre la tapa(cap) animal también puede ser una muy buena manera de
identificar los inductores neurales. Separar la tapa (cap) animal no solo logran
impedir la producción de células mesodérmicas, sino que tampoco se desarrolla
tejido neuronal. Hay varios factores que agregados a la capa animal hizo que las
células se transforman en células neuronales, así como el tejido
mesodérmico. Sin embargo, desde el organizador en el borde dorsal del
blastoporo se hace del mesodermo, no estaba claro si el tejido nervioso que se
desarrolló en la tapa animal se indujo directamente por un factor exógeno, o,
alternativamente, si el primer factor inducida por el organizador
y, posteriormente, inducida por el tejido neural. (Figura 1.17). Por lo tanto, para
refinar el análisis en busca de la inducción neural directa, los estudios se
concentraron en identificar los factores que aumentan en la expresion de genes
neuronales, sin la inducción simultánea de la expresión de genes mesormo-
especificos.

EN el ensayo se utilizó la tapa animal para el aislamiento del primer candidato

inductor neural, Richard Harland y sus colegas (Lamb et al y otros, 1993;.. Smith
et al, 1993) utilizaron inteligentemente un sistema de expresión por clonación
para identificar un factor de inducción de los nervios (1,18 ). la clonación se
llevó a cabo aprovechando el hecho de que los embriones de la rana irradiados
con UV no llegan a desarrollar un eje dorsal ni el sistema nervioso, y en su lugar
se desarrollan sólo las estructuras ventrales. Sin embargo, el trasplante del lado
dorsal del blastoporo de un embrión diferente puede restaurar el eje normal del
cuerpo a la embion tratado con rayos UV, lo que indica que el embrión irradiado
por UV puede responder al factor(es) de inducción neural. Además, la inyección
de ARNm de un embrión hiperdorsalizado también puede restaurar el eje normal
del cuerpo. El grupo de Harland se aprovecho de este hecho y utilizar las
muestras (pool) DNA aislado de la región organizadora para rescatar los
embriones tratados con UV. Por division las muestras en secciones cada vez más
pequeñas, se aisló un cDNA que codifica para una unica proteína secretada, la
cual se le llamo Noggin. Cuando Noggin se purificó y se suministro a la capa
animal, fue capaz de inducir específicamente los genes neuronales, sin inducir
los genes mesodérmicos. ARNm Noggin se expresa en los embriones en la fase
de gastrulacion, por las células del lado dorsal del blastoporo, precisamente
donde se sabe que reside la actividad de organizadora, la inyección de Noggin
mRNA en embriones tratados con UV en la fase de cuatro células pueden
restaurar el eje del cuerpo e incluso hiperdorsalizar a los embriones para que
desarrollen cerebros más grandes de lo normal
Al mismo tiempo que los estudios sobre Noggin se estában haciendo. Otros
laboratorios utilizaban enfoques adicionales para identificar otras moléculas
inductoras neurales. DeRobertis estaba interesado en la identificación de genes
que se expresan en la región dorsal del blastoporo organizador. El logro aislar
una molécula que llamaro Chrodin. Tal como Noggin, esta es una proteína
secretada que se expresa en el organizador (organizar) durante el período en
que se produce la inducción neural (figura 1.19). Una sobreexpresión de Chrodin
en la parte ventral de los embriones causó un eje secundario, similar a
Goosecoid. Por lo tanto Chrodin, parece ser similar a Noggin como inductor
neural putativo.

Un tercer candidato como inductor neural fue identificado por Melton y sus
colegas, como ya se ha identificado la hormona reproductiva conocida como
folistatina (Hemmati-brivalnlou et al., 1994). En el sistema reproductivo,
folistatin Funciona como un factor de regulación mediante la unión y la
inhibición de la activina, miembro de la familia TGT-β de las proteínas que
controla la secreción de FSH de la glándula pituitaria. Durante una proyección de
los factores inductores del mesodermo, Melton encontro que la activina pudo
actuar como incitador del mesodermo. Para estudiar el mecanismo de acción de
la activina sobre el mesodermo, construyó un receptor de activina truncado, de
forma que cuando se expresa de forma errónea (mesexpressed(?)) en los
embriones podría interferir con la señalizacon normal de activina endógena
(Hemmati-brivanluo y Melton, 1994) (figura 1.20). Para sorpresa de estos
investigadores, interfiriendo con activin de señalización no sólo interrumpió el
desarrollo normal del mesodermo, sino también inducida por las células de la
capa animal para desarrollarse como neuronas sin ninguna molecula adicional
neural. Propusieron que la activina—o algo parecido—normalmente inhibe el
tejido neural de diferenciación en el ectodermo. También sugirieron que la
inducción quizá los nervios producido por la inhibición de este inhibidor neural,
en otras palabras, que el organizador Spemann secreta factores que
antagonizan un inhibidor neural, estos resultados llevaron a la idea de que el
tejido neural es en algun modo el estado por defecto del ectodermo y que debe
ser activamente inhibida por las proteínas como la activina de la familia TGF-
β. La idea de que el ectodermo se inhiben de manera activa se convierta en
tejido nervioso tiene algún tipo de apoyo adicional. En 1989, dos grupos
(godsave y holgura, 1989; GRUNZ y Tacke, 1989) informó de que la disociación
de las células de la capa animal antes de la inducción neural como resultado en
la mayoría de las células diferenciadas como neuronas (figura 1.21). Teniendo
estas líneas de evidencia, se puso de manifiesto que las moléculas que pueden
inhibir la señalización de activina harían buenos inductores neurales. Desde que
la folistatina ya era conocida para inhibir el TGF-β de señalización de los
estudios de estos factores en el sistema reproductivo Melton y sus colegas
probaron si folistatina podría actuar como inductor neural, encontraron que,
efectivamente, podría folistatina causa de un eje secundario cuando
misexpressed y folistatina recombinante podría inducir tejido neural de tapas
anuimal. Folistatina se expresa también en la región de organizar el embrión en
el tiempo de inducción neural, al igual que Noggin y Chordin.

Aún más fascinante que la identificación de tres candidatos neuronales

inducidas por factores en un período relativamente corto de tiempo es que estos
tres factores actúan maya voy por un mecanismo relacionado y que este
mecanismo parece ser al menos parcialmente conservada entre vertebrados e
invertebrados (figura 1.22 ).análisis de la secuencia de chrodin revelated en
homologu interesante con un gen de Drosophila llamado gastrulación corto o
sogsog se expresa en la cara ventral del embrión de la mosca, y las mutaciones
en este gen en el resultado drosopgila en patterting defectuosos dorsal-ventral
del embrión. En los mutantes nulos de sog, la epidermis se expande y el
neurogénico se reduce. Y, al igual que cordina, la microinyección de sog en la
región nonneurogenic del embrión provoca la formación de tejido neural
ectópico. Por lo tanto, sog parece ser el homólogo funcional de cordina. En este
punto las ventajas de la genética gli eran importantes. A partir del análisis de los
mutantes drosopgila otros, de haber podido demostrar que sog directamente
antagonizan entre sí en drosoplgila. Las mutaciones en dpp tienen phenoitype
opuesto sog mutaciones, en los mutantes dpp la región neurogénica se expande
a expensas de la epidermis, y la expresión ectópica de dpp causa una reducción
en el tejido nervioso. Estos estudios Drosophila motivado el estudio de la
mustrubution del BMP en las primeras etapas de desarrollo del Xenopus, y un
patrón smiliar ha surgido, BMP4 se expresa throughoutt la mayor parte de la
gástrula, pero a niveles reducidos en el organizar y tapa anmal
neurogénica. Como era de esperar, BMP4 recombinante puede suprimir la
inducción neural cordina, el homólogo de vertebrados de la SOG.

1.15 -
inducción neural plana puede ser contrastada de la inducción neural vertical por
Keller sandwishes. La región del organizador, incluyendo las células IMZ, junto
con algunos de los tejidos circundantes ectodérmica., Pueden ser cultivados en
el aislamiento y noy se involuta cuando dos regiones IMZ se colocan espalda con
espalda. el tejido se somete a cambios morfológicos imilar a los que ocurren
durante la gastrulación, excepto el tejido se extiende más que involuciona. Sin
embargo, el tejido neuronal (rojo) se induce en el ectodermo adjunta, indicando
que las señales para la inducción neural se pueden pasar a través de la pequeña
región que conecta las células del mesodermo y las células ectodérmicas.

1.16-
interacciones entre los animales y células vegetales del embrión de anfibios son
necesarios para la inducción del mesodermo º, A, las regiones de los embriones
anfibios que dan lugar a células de la epidermis y tssue neural, el polo vegetal
da lugar a los derivados endodérmico, como el intestino, mientras que el
mesodermo (azul) se origina en la zona ecuatorial, B. si la tapa de los animales y
vegetales gemispheres están aislados unos de otros, mesodermo no se
desarrolla. C. si la zona ecuatorial, se quita de un embrión y el aislamiento de los
animales y las tapas de vegetales se recombinan un mesodermo forma una
nueva zona ecuatorial
1.17.
inducción indirecta neural en comparación con la inducción neural direcy. los
experimentos de trasplante de organizador de la feria que el mesodermo
involución tiene la capacidad de hospedaje para inducir tejido neural en las
células del ectodermo tapa de los animales, cuando assating para el mesodermo
factor rom libertad que es responsable de esta actividad, es importante
distinguir entre la direcy e indirectos inducción de las tapas del tejido neural
whe animales fueron tratados con un factor de candidatos. el ejemplo de puño
(izquierda), bu mesodermo (azul) es el factor indeced y, a continuación del
tejido neural (rojo) es inducido por el mesodermo, presente, tanto mesodermo y
Henes neuronales se activan en las tapas de los animales. Sin embargo, en el
caso de un inductor neural directa (a la derecha), los genes neuronales se
activan (rojo), pero los genes específicos de mesodermo no se expresan

1.18-
la identificación de noggin como nducer neuronales utilizan una expresión
declinantes strategu en embriones de Xenopus. A. normal developmentof un
embrión xenppus. B. traetment la luz UV del embrión temprano inhibe el
desarrollo de las estructuras dorsales al interrumpir el reordenamiento
componentes del citoesqueleto que el patrón de la inducong dorsal moelcules
antes de la gastrulación (ventralized). C. El tratamiento de litio del embrión
temprano rthe tiene el efecto contrario, el embrión se desarrolla más que el
tejido dorsal normal (es decir hyperdorsalized). D. si el ARN mensajero se extrae
del embrión hyperdorsalized y se inyecta en un embrión de rayos ultravioletas,
los mensajes codificados en el ARNm puede "rescatar" el embrión con
tratamiento UV y se desarrolla con relativa normalidad. . E igualmente, cDNA de
la región del organizador de un embrión normal puede rescatar a un embrión
con tratamiento UV. el gen de la bocha fue aislado como un cDNA de la región
del organizador que podía rescatar a los embriones tratados con UV cuando se
inyecta en el embrión, y posteriormente, la proteína recombant se hizo de las
tapas de los animales aislados, sin ningún tipo de inducción de genes
mesodérmicos, tssue neuronales se muestra en la rojo en todos los paneles.

1.19-
chordin expression in a frog embryo. the arrow point to the organizer region ay
the dorsal lip of the blastopore , and the blue label shows the cells of the pre-
gsatrula that express the gene chrodin (from sasai et al. 1994)

1.20-
expresión de un receptor truncado activina bloques normales de señalización a
través del receptor e induce tejido neural. A. el receptor de activina normal
transmitir una señal a la célula cuando actibin se une al receptor y se forma un
dímero. el receptor de activina truncado todavía vinds la activina (o relacionadas
con el TGF-b), pero ahora las formas normales del receptor de dímeros con el
receptor truncado. carece del dominio intracelular de la señal, transducción de
los bloques del receptor truncado señal normal a través de este receptor, B.
oucytes inyectados con el receptor de activina developto trunca la fase de
blástula, y cuando las tapas de los animales fueron disecados de estos embruos,
Theu se convirtió en el tejido nervioso sinaddituin de un inductor neural, este
resultado indica que la inhibición de la señalización pathwat podría ser cómo
inductores neurales función

1.21-
la disociación de las células de la tapa de los animales antes de gatrulation
causa la mayoría de ellos se diferencien en neuronas en cultivo. tapas de los
animales puede ser caultured intacta (izquierda) o disocia en células
individuales bu quitar el Ca 2 iones del medio (en el centro y derecha), si las
tapas intactas se ponen en la cultura, se desarrollan en la epidermis (la
izquierda). si las células animales dissociatred tapa se cultivan, se desarrollan en
las neuronas (rojo, centro). Este resultado apoya la hipótesis de que el destino
neural es catively suprimido bu asociaciones celulares en el ectodermo. si las
células se disocian y BMP se agrega a la placa de cultivo, las células no se
conviertan en neuronas, sino que actúan como si no se disocian y se desarrollan
como la epidermis (la derecha)