TRATAMIENTO DE SUELO CONTAMINADO POR CROMO USANDO BIORREMEDIACIÓN.

Ipung Fitri Purwanti, Tesya Paramita, and Setyo Budi Kurniawan.

RESUMEN.
La contaminación por cromo en el suelo ocurre debido a la eliminación de aguas residuales
industriales de cromo y lodos que exceden el estándar de calidad. La concentración de cromo en el
suelo oscila entre 1 y 300 mg / kg, mientras que él estándar de salud máximo es de 2.5 mg/kg. La
biorremediación es una de las tecnologías que podrían usarse para remediar la contaminación por
metales pesados en suelo. Una especie de bacteria que es capaz de eliminar el cromo del suelo es
Bacillus subtilis. El objetivo de esta investigación fue conocer el porcentaje de eliminación de cromo
en el suelo contaminado gracias a Bacillus subtilis. Se usó suelo artificial contaminado con cromo
mezclando arena de 425 gramos y solución de tricloruro de cromo. La concentración de cromo
añadido en el suelo enriquecido fue de 50, 75 y 100 mg / L. Durante 14 días, se analizaron el pH, la
temperatura del suelo y la humedad del suelo. El resultado mostró que el mayor porcentaje de
eliminación de cromo fue del 11% a una concentración de cromo de 75 mg / L.
INTRODUCCIÓN
En un país agrario como Indonesia, el suelo es un requisito importante y debe ser mantenido en alta
calidad, esta condición de calidad es inversamente proporcional al rápido crecimiento de las
industrias. La contaminación por cromo en la naturaleza se le atribuye a las formas de Cr3+ y Cr6+,
sin embargo la solubilidad y toxicidad de Cr6+ es mayor que en Cr3+, pero ambos iones pueden
inducir una condición de intoxicación crónica. El Cr6+ puede formarse a partir de la oxidación de
Cr+ cuando entra al suelo durante el periodo de humedad causando contaminación de aguas
subterráneas.
Indonesia tiene muchas industrias que contribuyen potencialmente a la contaminación por cromo
tanto en el agua como el suelo. Sutono, S & Kurnia U (n.d) informaron que el campo de arroz en
Surakarte Jawa Tengah en Indonesia, está contaminado por cromo de hasta 4 mg/kg. En Bandung,
Jawa, Barat, Indonesia, S, Notodarmojo informó que el campo local también estaba contaminado por
cromo de hasta 13 mg/kg. H, Hardiani et al. Indicaron que el suelo en área de galvanoplastia ubicada
en Pati, Jawa, Tengah, Indonesia está contaminado por cromo de hasta 30 mg/kg. El limite permisible
de la concentración de cromo en el suelo, según AMG – USA (Ambient Multimedia Enviromental
Goals) es de 10 mg/kg.
La contaminación por cromo puede tratarse mediante tratamiento fisicoquímico o biológico. El
tratamiento biológico es relativamente más respetuoso con el ambiente porque no se generan residuos,
como es el caso del tratamiento fisicoquímico. La biorremediación constituye una tecnología
alternativa para la remediación de suelos contaminados. La biorremediación utiliza las reacciones
metabólicas de los microorganismos para degradar el contaminante en el ambiente. Las bacterias son
uno de los organismos vivos que generalmente se utilizan para tratar la contaminación por metales
pesados, debido a que tienen la capacidad de reducirlos hasta cierta concentración. Esta capacidad se
debe a varios procesos como la adsorción, absorción, acumulación y transformación dentro de su
célula, siendo la biosorción el proceso que utilizan las bacterias para reducir cierta cantidad de
contaminante, el mecanismo de dicho proceso consiste en adsorción, absorción, acumulación y
transformación del contaminante dentro de la célula bacteriana.
Bacillus subtilis es una de las bacterias gran positivas que tiene la capacidad de tratar la contaminación
por metales pesados, esta puede crecer en condiciones aeróbicas o anaeróbicas. En condiciones
aeróbicas, esta bacteria puede producir catalasa y enzima reductasa para tratar sustancias peligrosas
que ingresan a su célula. La enzima catalasa y reductasa trabajará simultáneamente para reducir la
toxicidad de sustancias peligrosas. Después de eso, se producirá la enzima polimerasa para unir el
material peligroso. La enzima polimerasa producirá material complejo menos dañino y este material
complejo se almacenará dentro de la célula.
Estudios previos de biorremediación encontraron que Bacilus subtilis es resistente a metales pesados
como Cr, Pb, Cd, Mn, Ni, Zn y Cu. Bacillus subtilis también puede remediar la contaminación por
cromo. En aguas residuales, Bacillus subtilis puede eliminar hasta 5.86% de cromo a partir de una
concentración incial de 50 mg/L en un periodo de prueba de 4 horas. Antecedentes también
demostraron que Bacillus sp. fue capaz de eliminar mas de 98% de Cr (Vi) en el suelo durante un
periodo de prueba de 10h a pH 7 con 500 mg/kg de cromo como concentración inicial.
MATERIALES Y METODOS.
Configuración experimental:
En esta investigación, el suelo contaminado utilizado fue un suelo artificial con púas, éste suelo se
hizo mezclando 425 gramos de arena de rio con solución de CrCl3 hasta que se alcanzó la densidad
aparente de la arena. La concentración de solución de CrCl3 añadida fue de 50, 75 y 100 mg/L para
obtener 19, 29, y 38 mg/kg de suelo contaminado por cromo. Esta concentración se eligió en función
de la prueba de detección realizada previamente a la investigación principal.
Preparación de bacteria:
La curva de crecimiento bacteriano fue verificada antes de iniciar la investigación principal utilizando
caldo nutriente en medio líquido. La curva de crecimiento bacteriano se realizó para verificar el
crecimiento exponencial de bacterias agitando 150 ml de medio liquido de caldo nutriente que
contiene bacterias a 150 rpm durante 24 horas. El tiempo de crecimiento exponencial se utilizará
como el tiempo para la prueba de detección de cromo. La prueba de detección de cromo se realizó
inoculando 15% de bacterias en volumen por unidad de volumen (V/V) en una solución de cromo de
50 mg/L. El resultado de la prueba de detección determinará si la bacteria tiene potencial o no de
agente remediador. La bacteria usada en esta investigación fue Bacillus subtilis con OD600 = 0.5A.
Antes de agregarlos en cada reactor, las bacterias se agitaron 150 rpm durante tres horas para lograr
OD600 = 0.5A. Después de obtener lo anterior, el caldo de nutrientes se centrifugó a 3000 rpm durante
15 minutos para separar las bacterias del medio. Las bacterias separadas se lavaron con solución
salina al 8.5% dos veces y se diluyeron hasta 50 ml. La adición de 15% de bacterias en volumen por
unidad de volumen (V/V) se realizó para cada reactor en la investigación principal. La mezcla de
reactores se realizó diariamente para mantener el suministro de oxigeno en el suelo. Esta investigación
se realizó durante 14 días.
Parámetros medidos:
Los parámetros medidos en esta investigación fueron:
Cromo total en el suelo húmedo destruido con ácido fuerte, probado usando AAS.
Numero de colonias bacterianas, las cuales fueron determinadas usando el método UFC. (Unidades
formadoras de colonias)
pH medido con un pHmetro.
Temperatura, medida con un termómetro.
Humedad del suelo, usando un medidor de humedad.
RESULTADOS Y DISCUSION:
Tasa de crecimiento y prueba de detección.
La curva de crecimiento bacteriano se realizó para verificar el tiempo exponencial para el crecimiento
de Bacillus subtilis. La curva de crecimiento para Bacillus Subtilis se puede ver en la Fig. 1. Según
la figura 1, el tiempo exponencial de Bacillus subtilis alcanzó el periodo de prueba de 6 horas. Por lo
tanto, las bacterias se agitarán durante tres horas (la mitad del tiempo exponencial) para alcanzar
OD600 = 0.5ª antes de inocularse en una solución de cromo. Luego, las bacterias se agitan en solución
de cromo durante tres horas para alcanzar el tiempo máximo de tasa de crecimiento. El resultado de
la prueba de concentración de cromo al principio y al final del periodo de prueba de detección de 3
horas mostró la eliminación del 5.68% de 50 mg/L de CrCl3 como concentración inicial. Según este
resultado, Bacillus subtillis tiene el potencial de eliminar cromo en un periodo de tiempo más largo.

Parámetros físicos:
Los parámetros físicos medidos en esta investigación fueron pH, temperatura, y humedad del suelo.
Estos parámetros fueron medidos una vez cada dos días durante 14 días. El pH es uno de los factores
que influyen en el crecimiento bacteriano. El proceso de eliminación de cromo puede funcionar de
manera optima al pH optimo para el crecimiento bacteriano. G. Cheng y X. Li (2009) afirmaron que
el pH optimo de Bacillus subtilis oscilaba entre 5 y 9.
El pH de la solución de cromo tiende a ser alcalino lo que aumenta el pH del suelo. La figura 2 mostro
que el reactor probado indica un pH de 6.1 – 6.9, el aumento del pH se produjo debido a la adición
de solución de cromo, la presencia de microorganismos y la acumulación de células muertas de las
bacterias. La figura 2 también mostró que el pH de todos los reactores durante los 14 días todavía se
incluía como el rango de pH optimo para el crecimiento bacteriano, por lo que todo el metabolismo
bacteriano funcionaba bien.
La temperatura es un factor que afecta el proceso de eliminación de cromo por las bacterias. La
temperatura optima de crecimiento. La temperatura optima del crecimiento de bacterias hace que la
eliminación de cromo se ejecute al máximo porque el metabolismo bacteriano va bien. Bacillus
subtillis es una bacteria mesofílica que tiene temperatura de crecimiento optima que oscila entre 20 y
40°C.
Los resultados de las mediciones de temperatura en todos los reactores mostraron un valor que no era
muy diferente para cada reactor (Fig. 3). La temperatura medida durante 14 días mostro entre 27 y 31
°C, es decir, aun se encontraba en el rango optimo para el crecimiento de la bacteria estudiada. Los
cambios de temperatura que ocurrieron en todos los reactores también fueron influenciados por la
temperatura ambiente porque todos los reactores se dejaron abiertos.
La humedad del suelo también es un factor que afecta el proceso de eliminación de cromo por las
bacterias. La humedad del suelo para todos los reactores se ajustó al 100% de humedad desde el
principio hasta el final del periodo de prueba. G. Cheng and X. Li (2009) afirmaron que la mejor
eliminación de cromo se produjo con un mínimo de 40% de humedad junto con el creciente numero
de bacterias. El suelo artificial contaminado en todos los reactores se ajusto al 100% de humedad
agregando solución de cromo hasta el valor de densidad aparente de la arena de rio utilizada. La
adición de cromo de acuerdo con la densidad aparente se realizó para asegurarse de que el cromo en
la fase liquida se mezclara uniformemente en el medio de arena.
Numero de colonias bacterianas.
Se utilizó el numero de colonias bacterianas para determinar el numero de bacterias vivas en el
reactor. Las mediciones de colonias bacterianas se realizaron tres veces en los días 0, 7 y 14. El
resultado del recuento de colonias bacterias se muestra en la fig 4. La determinación de las colonias
bacterianas en el reactor se realizó calculando todas las colonias que tienen forma de acuerdo con las
características de Bacillus subtilis (redondo irregular, blanco opaco y plano). Después de 14 días de
exposición al cromo, la cantidad de Bacillus subtilis en el reactor de adicion de bacterias al 15%
aumentó en el momento del periodo de prueba, esto ocurrió porque la bacteria ya se había adapatado
y podía vivir lo suficientemente bien. El aumento del numero de colonias de Bacillus subtilis ocurrió
en el reactor B50 que tiene la concentración de cromo más baja. El numero de colonias de bacterianas
resultantes en el día 14 se puede ver en la figura 5.
CROMO TOTAL:
La concentración de cromo total se midió dos veces, al comienzo y al final del periodo de prueba, el
resultado de la medición se muestra en la tabla 1. Basado en el resultado de la medición total de
cromo, el medio de arena utilizado en esta investigación también contiene cromo. En estudios
realizados previamente por Said, I. Et al (2009) se encontró que los sedimentos de los ríos estudiados
en Sulawesi contenían cromo de 10.4 A 62 mg/ kg, lo que hace posible que arena utilizada como
suelo con púas contenga cromo. Esto hace que la concentración de cromo en el reactor de cromo
agregado tenga un valor total de cromo que no es muy diferente del reactor en blanco.
La cantidad de concentración de metales medida en el suelo estuvo influenciada por varios factores
que influyeron en la biodisponibilidad de los metales en el suelo como el pH, la materia orgánica y
la actividad enzimática en el suelo. Según la tabla 1, el mayor porcentaje de eliminación de cromo
ocurrió en el reactor B75 (11%), esto se evidencia en la figura 6.
El porcentaje de eliminación tiende a disminuir conforme aumenta la concentración de cromo en el
reactor. Como se analizó anteriormente, el medio de arena utilizado también contenía cromo por lo
que la cantidad de cromo en el reactor agregado será mayor que su concentración diseñada. En el
reactor B50 se encontró una tendencia diferente, este reactor estaba codificado para una
concentración de cromo de 50 mg/L en el interior, y mostró un porcentaje de remoción más bajo
que otro reactor (5%), mientras que el reactor B100 debe tener el porcentaje de remoción más bajo
basado en la línea de tendencia.
Con referencia a la figura 4, se podría ver que el reactor B50 tiene el menor crecimiento entre todos
los reactores. Dado que el porcentaje de eliminación de cromo estaba altamente correlacionado con
el crecimiento bacteriano en el reactor, el bajo crecimiento bacteriano en el reactor B50 es la razón
por la cual el porcentaje de eliminación más bajo. El bajo crecimiento bacteriano en B50 se produjo
debido a un metabolismo diferente y una reacción enzimática que tuvo lugar en el reactor. El
metabolismo y la reacción enzimática diferentes ocurrieron porque no había control para el pH y la
temperatura en el reactor.
CONCLUSION.

La adicion de 15% v/v de Bacillus subtilis al suelo contaminado con cromo podría eliminar hasta un
11% de la concentración inical de 29 mg/kg de cromo (reactor b75). Bacillus subtilis podría
eliminar el 5% de 50 mg/L y el 9% de 100 mg/L de concentración inicial de cromo.