IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA

DISOLUCIÓN DE CUSO4.5H2O, POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE UV-VIS,

MEDIANTE REGRESIÓN LINEAL SIMPLE (RLS), APLICANDO EL MÉTODO
DE ESTÁNDAR EXTERNO Y EL MÉTODO DE ADICIÓN ESTÁNDAR.

Luis Atencio1, Darly Bustamante1, Jaime García1 y Angelis Gómez1

1
, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del atlántico, Km 7 Vía Puerto,
Barranquilla, Atlántico.
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RESUMEN
En esta práctica se determinamos la concentración de una muestra problema de CuSO4.5H2O
preparada por el profesor la cual fue nuestra muestra problema (MP). Para la identificación
y cuantificación de esta muestra preparamos un set de disoluciones estándar de
CuSO4.5H2O, con la cual se determinamos el espectro de absorción del analito para
determinación la longitud de onda donde ocurre la máxima absorción (máx.), identificando
la máx., donde procedimos a medir la absorbancia de cada una de las disoluciones
estándares o patrones a esta longitud de onda con estos datos construimos una curva de
calibrado

KEYWORDS O PALABRAS CLAVES

Estándar externo, adición estándar, determinación, concentración.

INTRODUCCIÓN
La espectrometría de absorción en el UV-visible es una de las herramientas más útiles y
ampliamente utilizada en Química Analítica, tanto en el análisis cualitativo
comocuantitativo para la identificación y la determinación de la concentración de un analito
en disolución, respectivamente. La ley de Lambert-Beer establece que cuando pasa luz
monocromática por un medio homogéneo, la disminución de la intensidad del haz de luz
incidente es proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de
la luz transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del
medio absorbente La ley de Absorción o ley de Lambert-Beer relaciona la concentración de
un analito absorbente con el espesor de muestra y con su absorbancia. Es necesario considerar
una serie de limitaciones químicas e instrumentales a la hora de aplicar esta ley. Esta ley
expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática y concentración de un cromóforo
en solución. Mediante la Ley de Lambert-Beer es posible determinar el valor de
concentración de una solución con base a la relación entre la energía emitida por una fuente
y la absorbida por un cuerpo. Es posible medir así con la ayuda de un espectrofotómetro la
relación entre la energía emitida y la energía absorbida por la muestra mediante la medición
de los valores de transmitancia y absorbancia (1)

Calibración sencilla o con estándares externos: Este método de análisis se aplica en la

determinación de un analito, en el cual los componentes de la matriz de la muestra como
también los reactivos usados en la preparación de la misma no interfieren en el análisis, es
decir no se tiene un efecto de la matriz en la señal medida. También se puede emplear en
condiciones tales que la contribución de los interferentes, sobre las medidas se mantiene
constante, con lo cual se puede realizar la oportuna corrección del error determinado por el
interferente. Los estándares de calibrado seleccionados deben aproximarse tanto en la
concentración del analito como en su composición de los diferentes componentes químicos,
presentes en la matriz de la muestra. Este requerimiento es aplicado en todos los métodos de
calibración propuestos (2)

Calibración con adición de estándares: La preparación de estándares que reproduzcan la

composición de la muestra es muy complicada cuando se trata del análisis de muestras
complejas (suelos, minerales, sangre completa, orina, etc.) ya que, en este tipo de muestras,
usualmente, los componentes de la matriz afectan las medidas de la señal analítica ya sea por
exceso o por defecto. Por ello, es imposible compensar un blanco distinto de cero. Con el
objetivo de minimizar los efectos de la matriz, se utiliza el método de adición de estándar el
cual consiste en la adición de un volumen fijo de la muestra, a las soluciones estándares
diluyendo a un volumen final constante. (3)
Posteriormente, se procede a determinar la señal de los estándares, así como de una muestra
preparada de la misma forma, en ausencia de estándar añadido. En cada solución, las señales
son afectadas de manera similar por los interferentes de la matriz. En general, con este
método se obtienen intervalos lineales de concentración de trabajo muy estrechos (menos de
un orden de magnitud) originados por los complicados efectos químicos de los componentes
de la matriz. Este método no elimina las interferencias, solo las compensa ya que se obtienen
todas las señales analíticas bajo las mismas condiciones.
El procedimiento que se lleva a cabo para la aplicación de este método, consiste en la
selección de alícuotas de un volumen fijo de muestra (VM) a las cuales se les añaden
volúmenes variables de un estándar (VS) de concentración conocida (CS) diluyendo a un
volumen final fijo (VT) (4)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

ESTANDAR EXTERNO

1. Tomar nota de los componentes y el funcionamiento del espectrofotómetro, las cubetas

que se emplean para colocar muestras y el software para controlar el equipo.

2. Se Preparo 50 mL de disolución madre de CuSO4.5H2O 200 mM, a partir del soluto sólido
de CuSO4.5H2O.
3. A partir de la disolución madre de CuSO4.5H2O, preparamos 5 disoluciones estándar con
diferentes alícuotas de esta disolución

4. Se escogió a partir de los espectros obtenidos, la longitud de onda de máxima absorbancia,

a dicha longitud de onda se midió la absorbancia de las 5 disoluciones. Se anotó los
correspondientes valores de absorbancia frente a concentración para hacer una recta de
calibrado.

ADICION ESTANDAR

1. El profesor realiza una muestra problema, desconociendo el valor de la concentración

2. Se toma una de las disoluciones de estándar externo
3. A partir de la muestra problema de CuSO4.5H2O, preparamos 5 disoluciones
estándar con la misma alícuotas de esta disolución
4. Donde se les agrega el estándar en diferentes alícuotas de esta disolución
5. Se escogió a partir de los espectros obtenidos, la longitud de onda de máxima
absorbancia, a dicha longitud de onda se midió la absorbancia de las 5 disoluciones.
Se anotó los correspondientes valores de absorbancia frente a concentración para
hacer una recta de calibrado

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Tabla 1. Datos de absorbancia y de concentración de las muestras
N° muestras Tipo de muestra Concentración Absorbancia
Muestra 1 Estándar externo 16 mM 0.269
Muestra 2 Estándar externo 32 mM 0.460
Muestra 3 Estándar externo 48 mM 0.652
Muestra 4 Estándar externo 64 mM 0.844
Muestra 5 Estándar externo 80 mM 1.027
Muestra problema Estándar externo 29.04 mM 0.4263
Absorbancia vs concentración

Tabla 2. Adición estándar

Adicion estandar
0.45
0.4 y = 0.0139x + 0.1748
R² = 0.9832
0.35
0.3
Absorcion

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
Concentracion en base al estandar (mM)

ANALISIS
La onda de longitud máxima, y el máximo de absorción resultaron valiosos datos entregados
por el espectrofotómetro para el estudio de la relación entre la absorción (unidades de
absorción) y la concentración (Molar); lo cual resultó una correlación lineal

Con una onda de longitud máxima de 810 nm y un máximo de absorción de 1,027 se pudo
lograr el estudio de la muestra problema de CuSO4.5H2O.

Una vez obtenida la recta de adición patrón, realizada previo análisis y relaciones
matemáticas, se logró asumir el tipo de correlación que está entre la absorbancia y la
concentración, obtenido una ecuación de recta como la siguiente:

Absorbancia = 0,0119x + 0,0804

Donde 0,0119 es la pendiente y 0,0804 el intercepto, con una correlación ajustada de valor
0,9999.
Entregándonos la concentración de cobre de la muestra problema de un valor de 29,06 mM
Por lo tanto se aprende que la concentración desconocida de alguna muestra puede ser
calculada mediante la el método del adición patrón.

Cálculos de los gramos de CuSO4.5H2O, necesarios para preparar la disolución de 100

mM.

Wp= 0,2 mol/L x 0,05L x 249,69g/mol

Wp= 2,4969
Wimp= 100/99 x 2,4969
Wimp= 2,522

Calculos para determinar la concentración de las disoluciones estándar preparadas a

partir de la disolución madre de CuSO4.5H2O 100 mM.

V1C1=V2C2
a) 1 mL x 200 mM / 25 mL = 8 mM
b) 2 mL x 200 mM / 25 mL = 16 mM
c) 3 mL x 200 mM / 25 mL = 24 mM
d) 4 mL x 200 mM / 25 mL = 32 mM
e) 5 mL x 200 mM / 25 mL = 40 mM

Curva de calibrado (línea recta) a partir de los datos (Abs) vs (mM)

Muestra problema = 0,426

X= 0,4263 – 0,0804 / 0,0119
X= 29,06 mM

Coeficiente de absortividad molar

A= EbC
𝑨
𝑬=
𝑩∗𝑪
0.2463
𝑬= = 0,0084
1 ∗ 29,04
¿Importancia de la regresión lineal simple, cuando se usa?
La regresión lineal simple es la técnica más utilizada, es una forma que permite modelar una
relación entre dos conjuntos de variables. El resultado es una ecuación que se puede utilizar
para hacer proyecciones o estimaciones sobre los datos.
Este modelo se considera un predictor x y una variable dependiente o respuesta Y. Imagina
que la verdadera relación entre Y y x es una línea recta y que la observación Y en cada nivel
x es una variable aleatoria.
El modelo de regresión lineal simple se caracteriza por predecir la variable dependiente a
través de la siguiente ecuación:
E(Y/x) = 0 + β1 x
Donde la ordenada al origen β0 y la pendiente β1 son coeficientes desconocidos de la
regresión.
Algunos consejos que puedes tomar en cuenta al utilizar el modelo de regresión lineal simple
son:
Debes tener cuidado al seleccionar las variables con las que se construyen las ecuaciones de
regresión y determinar la forma del modelo.
Las relaciones de regresión sólo son válidas para los valores del regresor que están dentro
del rango de los datos originales.

¿Qué información entrega el r2, la pendiente y el intercepto en una regresión lineal

simple?
El R cuadrado es una herramienta estadística (un estadístico) que se utiliza en modelos
estadísticos como en una regresión para predecir futuros resultados. Por ejemplo, a los
inversores permite hacer predicciones sobre el crecimiento o variación de un dato
determinado según como se correlaciona con otras variables. El R cuadrado es el indicador
que nos permitirá conocer cómo de bien se pueden predecir esos resultados.

El R2 es el porcentaje de variación de la variable de respuesta que explica su relación con

una o más variables predictoras. Por lo general, mientras mayor sea el R2, mejor será el ajuste
del modelo a sus datos. El R2 siempre se encuentra entre 0 y 100%. El R-cuadrado también
se conoce como el coeficiente de determinación o determinación múltiple (en la regresión
lineal múltiple).

La pendiente indica el grado de inclinación de una línea y la intersección indica el lugar en

el que ésta se cruza con un eje. La pendiente y la intersección definen la relación lineal entre
dos variables, y se pueden utilizar para estimar una tasa de cambio promedio. Mientras mayor
sea la magnitud de la pendiente, más inclinada será la línea y mayor será la tasa de cambio.

CONCLUSION

De esta experiencia se concluye que desde el punto de vista práctico es igual de poderoso en
la determinación del analito el método de adición estándar del punto H que utiliza como señal
analítica la absorbancia que el que utiliza incrementos de absorbancia. Este método puede
utilizarse siempre que no sea necesario la determinación del interferente, ganando en
sencillez. También, y de una forma clara, queda totalmente establecido que el incremento de
absorbancia obtenido de acuerdo con las bases del método está única y exclusivamente
relacionado con la concentración de analito, principio básico en el que se apoya el método
propuesto
Gracias a esto:
- Se determinó el espectro de absorción del CuSO4.5H2O, y determinar longitud de
onda donde ocurre la máxima absorción (λ max).
- Se construyó la curva de calibrado graficando Absorbancia vs [disolución patrón],
mediante regresión lineal simple determinar la concentración de la MP, mediante la
metodología de adición estándar

AGRADECIMIENTOS
Se le agradece a la universidad por los equipos utilizados para realizar esta práctica, las
instalaciones que fueron muy bien mejoradas a nuestros compañeros que prepararon las
soluciones y al profesor por explicar el tema y enseñarnos el manejo de los equipos

BIBLIOGRAFIA

1.D. A. Skoog y J. L. Leary, "Análisis Instrumental", 4ta Edición, McGraw-Hill, España

1993.
2.D. Skoog, D. West, J. Holler y S. Crouch, “Fundamentos de Química Analítica”, 8ta
Edición, Thomson México, 2005.
3.B. Welz, “Atomic Absorption Spectrometry”, 2da Edición, VCH, Alemania, 1985.
4. D. C. Harris, “Análisis químico cuantitativo”, 6ta Edición, Reverte, España 2007.
Galen W. Ewing, “Instrumental methods of chemical analysis”, 2da Edición, McGrawHill,
New York, 1960.