Dinámica molecular y función proteica
Una apreciación fundamental de cómo funcionan las
macromoléculas biológicas requiere el conocimiento
de la estructura y la dinámica. Las simulaciones de
dinámica molecular proporcionan herramientas
poderosas para la exploración del paisaje de energía
conformacional accesible a estas moléculas, y el
rápido aumento en el poder computacional junto con
las mejoras en la metodología hacen de este un
momento emocionante para la aplicación de la
simulación a la biología estructural. En esta
perspectiva, examinamos dos áreas, el plegamiento de
proteínas y la catálisis enzimática, en las cuales las
simulaciones han contribuido a una comprensión
general del mecanismo. También describimos los
resultados para el motor molecular F1 ATPasa y la
familia Src de proteínas de señalización como ejemplos
de aplicaciones de simulaciones a sistemas biológicos
específicos.
La dinámica conformacional de las moléculas de
proteína está codificada en sus estructuras y es a
menudo un elemento crítico de su función. Por lo
tanto, una apreciación fundamental de cómo
funcionan las proteínas requiere una
comprensión de la conexión entre la estructura
tridimensional, obtenida con una rapidez
creciente por la cristalografía de rayos X y la
RMN, y la dinámica, que es mucho más difícil de
probar experimentalmente. Las simulaciones de
dinámica molecular proporcionan enlaces entre
estructura y dinámica al permitir la exploración
del paisaje de energía conformacional accesible a
las moléculas de proteínas. La primera simulación
de dinámica molecular de una proteína se
informó en 1977 y consistió en una trayectoria de
9.2 ps para una proteína pequeña en el vacío.
Once años más tarde, se informó una simulación
de 210 ps de la misma proteína en agua, y el
aumento fenomenal en el poder de cómputo
desde entonces ahora hace que sea rutinario
ejecutar simulaciones de proteínas mucho más
grandes que son 1,000-10,000 veces más largas
que la simulación original (10–100 ns), en el que
la proteína está rodeada de agua y sal (Fig. 1).
También se han logrado mejoras significativas en
las funciones potenciales, haciendo que las
simulaciones sean mucho más estables y
precisas.
Los principios de ingeniería que subyacen al
diseño de proteínas son verdaderamente
barrocos, con ajustes evolutivos que resultan en
máquinas moleculares que pueden ser efectivas
y eficientes, pero cuyas estructuras
tridimensionales son a menudo tan complicadas
que oscurecen el mecanismo de acción. Las
pistas sobre la dinámica esencial de la molécula a
menudo son proporcionadas por la separación de
la proteína en dominios conectados por bisagras
y la disponibilidad de estructuras
correspondientes a diferentes estados
funcionales, pero no es fácil a partir de la
inspección visual o cálculos simples para deducir
el funcionamiento de Estas máquinas
moleculares. Las simulaciones de dinámica
molecular pueden proporcionar el último detalle
sobre los movimientos atómicos individuales en
función del tiempo; por lo tanto, se pueden usar
para responder preguntas específicas sobre las
propiedades de un sistema modelo a menudo
más fácilmente que los experimentos en el
sistema real. Para muchos aspectos de la función
biomolécula, estos detalles son de interés (por
ejemplo, cuál de los muchos residuos que rodean
al ATP en una proteína motora son los más
importantes para acoplar la unión del ATP al
movimiento molecular).
Figura 1. Simulación de una proteína solvatada. Este
corte a través de un sistema de simulación muestra
una proteína quinasa Src (verde) rodeada por 15,000
moléculas de agua (los átomos de oxígeno son rojos y
los átomos de hidrógeno son blancos). El sistema de
simulación consta de 50,000 átomos, incluidos iones
de potasio y cloruro (esferas púrpura y naranja,
respectivamente). Se puede generar una trayectoria de
dinámica molecular de 1 ns para este sistema en 4
días utilizando un grupo de cuatro computadoras
económicas basadas en Linux. (Cortesía de Olga
Kuchment.)
La combinación de una mayor potencia de la
computadora y mejores funciones potenciales ha
resultado en la capacidad de generar
simulaciones que se acercan al punto en el que
pueden sobrevivir al examen crítico de los
experimentadores que determinan las
estructuras de las proteínas que se simulan. Para
proteínas pequeñas o dominios de proteínas que
no se espera que experimenten grandes
transiciones conformacionales (por ejemplo, un
dominio SH2 unido a un fosfopéptido), una
simulación que dure varios nanosegundos en un
entorno completamente solvatado y que utilice
potenciales de todos los átomos sin truncar las
interacciones electrostáticas. típicamente
resultan en desviaciones rms de la estructura
cristalina de 1 Å para los átomos del esqueleto de
la región central de la proteína. Tales
simulaciones generan cierto grado de confianza
en que los interesantes cambios estructurales
que resultan de la simulación de ensambles más
grandes [por ejemplo, Src quinasas intactas que
contienen dominios SH2] son significativos, como
describimos más adelante.
Las simulaciones son más efectivas cuando se
analizan en estrecha colaboración con
experimentos sobre la función de las proteínas,
que juegan un papel esencial en la validación y
mejora de las simulaciones. Un resultado del
aumento en el poder de la computadora
fácilmente disponible y la estandarización de los
protocolos de simulación es que ahora los
especialistas no especializados pueden reproducir
y verificar algunas, si no todas, las conclusiones
de los análisis de simulación publicados por otros.
Este tipo de validación cruzada ayudará en la
integración de simulaciones en el proceso normal
de interpretación de resultados estructurales
recientemente emergentes. Una receta para
hacer el análisis de los resultados de la
simulación más riguroso y se ha proporcionado
una lista de posibles errores.
En esta Perspectiva, ilustramos la aplicación de
simulaciones de dinámica molecular a la biología
describiendo varios ejemplos seleccionados,
enfatizando nuestro propio trabajo. Comenzamos
con una encuesta más amplia de dos áreas, el
plegamiento de proteínas y la catálisis
enzimática, en la que las simulaciones
combinadas con el experimento han llevado a
una comprensión general del mecanismo. El
crecimiento explosivo de los resultados
estructurales para una gama cada vez más
completa de procesos biológicos exige
simulaciones que aborden problemas específicos
de sistemas particulares. Como ejemplos,
describimos los resultados de la simulación para
el motor molecular F1 ATPasa y la familia Src de
proteínas de señalización.
Plegamiento de proteínas
Una comprensión de cómo la cadena
polipeptídica recién sintetizada puede plegarse a
su estructura nativa es fundamental para la
descripción de la vida a nivel molecular. Este
problema se vuelve aún más crítico porque el
plegamiento incorrecto está involucrado en una
variedad de enfermedades. Una sinergia entre la
simulación y el experimento ha llevado a una
solución conceptual para un aspecto del
problema de plegamiento relacionado con el
mecanismo por el cual la cadena de proteínas
encuentra la conformación nativa a pesar de la
inmensidad del espacio de búsqueda potencial.
Este avance se ha producido a pesar del hecho
de que el plegado es lento en la escala de tiempo
de simulación. (Incluso las proteínas más rápidas
tardan microsegundos en plegarse, y el proceso
no puede simularse directamente). La mayoría de
las simulaciones de plegamiento han utilizado
modelos simplificados para capturar los aspectos
esenciales del proceso.
Se obtuvieron ideas clave sobre cómo la
estructura nativa puede ser encontrada por la
cadena de polipéptidos en un tiempo razonable
mediante el uso de la dinámica de Monte Carlo
para el plegado de modelos de cuentas
simplificadas en una red cúbica, un proceso lo
suficientemente rápido como para que los cientos
de trayectorias necesiten obtener resultados
estadísticamente significativos podría calcularse
con las computadoras disponibles. Estos estudios
reticulados de Monte Carlo mostraron que el
plegamiento al estado nativo se produjo en una
escala de tiempo de muchos órdenes de
magnitud más cortos que los requeridos para
muestrear todas las configuraciones (el llamado
tiempo de Levinthal); por ejemplo, con el tiempo
medido en pasos de Monte Carlo, solo se
requirieron ≈ 5×107 pasos para plegar un
polímero de 27 cuentas que tenía 1016
configuraciones posibles. Aunque cada
trayectoria de plegado es muy diferente, el sesgo
al estado nativo en la superficie de energía libre
es suficiente para que la búsqueda estocástica
muestree solo una pequeña fracción de las
configuraciones totales para encontrar el estado
nativo. Este principio ahora se acepta
generalmente como la solución del problema de
búsqueda en el plegamiento de proteínas, y el
objetivo de los estudios actuales se refiere a los
detalles del plegamiento de proteínas
individuales y las formas en que se evita el
plegamiento incorrecto.
Uno de estos estudios de proteínas de haz de tres
hélices utilizó un modelo C para representar la
cadena de proteínas y un potencial de pozo
cuadrado para las interacciones entre pares de
residuos no unidos. Estas simplificaciones
hicieron posible el uso de algoritmos discretos de
dinámica molecular para estudiar el proceso de
plegamiento. La velocidad de este último es tal
que se podrían calcular varios cientos de
trayectorias de plegado para diferentes pesos
relativos de interacciones nativas y no nativas en
La función potencial del modelo. La figura 2
muestra las trayectorias típicas para un modelo
con el estado nativo fuertemente favorecido
(potencial similar a Go) y un modelo en el que las
interacciones no nativas hacen una contribución
significativa a lo largo de la vía de plegado. En el
primer modelo, las hélices se forman primero y
luego se difunden para encontrar el pliegue
nativo [un caso limitante del modelo de difusión-
colisión, mientras que, en el último modelo,
primero hay un colapso de un glóbulo
relativamente desordenado y las hélices se
forman simultáneamente con La estructura
terciaria nativa. Los resultados del modelo se
correlacionan con experimentos de plegamiento
recientes y simulaciones de todos los átomos
(desplegamiento) en solvente explícito.
Curiosamente, una extensión de la metodología
de dinámica discreta se ha utilizado
recientemente para simular la formación de
fibrillas a partir de péptidos de bobinas
aleatorias, ilustrando un posible mecanismo por
el cual podrían aparecer en solución grandes
agregados de hojas B relativamente bien
ordenados.
Todavía no es posible realizar simulaciones de
plegamiento estadísticamente significativas de
proteínas con modelos de todos los átomos. Sin
embargo, los péptidos compuestos de
aproximadamente 20 residuos con una estructura
nativa bien definida están siendo simulados por
la dinámica molecular con solventes implícitos y
explícitos. Aunque los péptidos son pequeños, la
complejidad de las simulaciones puede
interpretarse útilmente en términos de
descripciones gráficas de desconectividad y
redes del proceso de plegado. Dado el aumento
en la velocidad de las computadoras,
particularmente a través del desarrollo de
máquinas masivamente paralelas, es probable
que dentro de los próximos 10 años ab initio
plegable llegue a la etapa en la que pueda usarse
no solo para determinar los detalles del
mecanismo de plegado pero también para ayudar
a resolver el "otro" problema de plegamiento, el
de determinar la estructura del estado nativo
directamente de la secuencia mediante
simulaciones de dinámica molecular.
Figura 2. Simulaciones del plegamiento de una
proteína de haz de tres hélices. (ayb) Gráficos semilog
(superiores) de la dependencia del tiempo de las
fracciones de los contactos helicoidales e interhelicales
nativos y las fracciones inversas del volumen nativo
(calculado a partir del cubo inverso del radio de giro)
para dos trayectorias diferentes. (Inferior) Estructuras
de la molécula de proteína en momentos
seleccionados.
Catálisis enzimática
La catálisis enzimática puede producir
aceleraciones de velocidad de un factor de 1019.
Este proceso implica el "reconocimiento
molecular" al más alto nivel; La catálisis de las
reacciones de transferencia de protones, por
ejemplo, requiere el reconocimiento de un
cambio en una longitud de enlace COH de 0.5 Å
al pasar del estado reactivo al estado de
transición. En 1946, antes de que la información
estructural estuviera disponible, Linus Pauling
propuso que las enzimas pueden acelerar las
velocidades de reacción porque se unen mejor al
estado de transición que el sustrato y, por lo
tanto, reducen la energía libre de activación, G ‡.
La validez de este concepto clave en la catálisis
enzimática ha sido confirmada por muchos
estudios, aunque la contribución dinámica al
factor preexponencial, A (T), en la expresión de
Arrhenius k A (T) exp (G ‡ RT), donde k es el tasa
constante, tiene que ser considerado también.
Las simulaciones por computadora son esenciales
para comprender la disminución de la energía
libre de activación en términos de la estructura
de la enzima y su flexibilidad. La estructura
proporciona un "ambiente preorganizado" que
mejora la catálisis mediante una mayor
estabilización del estado de transición que del
estado reactivo, con contribuciones de las
interacciones con el sustrato unido y de la enzima
misma. Un cierto grado de flexibilidad enzimática
es esencial para la catálisis porque se requieren
movimientos atómicos de la enzima en todas las
reacciones. Además, los movimientos a mayor
escala también pueden participar directamente
en la catálisis y en proporcionar un sitio catalítico
protegido para la reacción al tiempo que permite
que el sustrato entre y el producto escape. Se ha
demostrado que los cambios en la estructura
enzimática y los modos vibratorios asociados con
el progreso a lo largo de la coordenada de
reacción promueven la catálisis de manera más
eficiente al disminuir G ‡. Este efecto es distinto
del papel de tales movimientos en la
determinación de A (T).
Una de las enzimas que se ha estudiado en
detalle experimentalmente y mediante
simulaciones es la triosefosfato isomerasa (TIM),
que cataliza la conversión de fosfato de
dihidroxiacetona (DHAP) en (R) -glicceraldehído
3-fosfato. Se ha calculado que la barrera
aparente para la reacción en la enzima es 11-13
kcalmol (1 cal 4.18 J) menor que la de la reacción
en solución acuosa. El paso determinante de la
velocidad es la transferencia de un protón de
DHAP a Glu-165 y las contribuciones obtenidas de
un modelo de perturbación (35) de residuos
individuales para reducir la energía de activación
de este paso se muestran en la Fig. 3A; Las
posiciones de los residuos importantes en el sitio
activo se muestran en la Fig. 3B. El residuo
cargado Lys-12 hace la contribución más
importante, pero también contribuyen la cadena
lateral neutral His-95, así como ciertos grupos NH
de la cadena principal. Este tipo de
descomposición, que puede validarse en parte
mediante experimentos, también proporciona
una base para determinar la variación evolutiva
en G ‡ para la gran cantidad de secuencias TIM
disponibles (M.K., datos no publicados). Debido a
que el agua puede provocar una reacción
secundaria, la protección del sitio activo se logra
mediante un movimiento de "tapa", que hace que
el sitio activo de TIM sea accesible para el
sustrato pero lo cierra para la catálisis.
Otra enzima que se ha estudiado ampliamente es
la dihidrofolato reductasa (DHFR), que cataliza la
transferencia de hidruros entre el nicotinamida
adenina dinucleótido fosfato y el 7,8-
dihidrofolato. Los experimentos y las
simulaciones (41, 42) señalan el hecho de que la
coordenada de reacción es compleja e involucra
movimientos de partes de la enzima distantes del
sitio activo. Aunque el movimiento enzimático
está involucrado, la catálisis se debe
principalmente a la disminución de las barreras
de activación. Los efectos dinámicos asociados
con el factor preexponencial, A (T), son
normalmente muy difíciles de aislar
experimentalmente. Una contribución se refiere
al coeficiente de transmisión de tipo Eyring, que
puede ser menor que la unidad debido al cruce
de la barrera. Las simulaciones han demostrado
que, aunque el factor de cruce es
cuantitativamente interesante en términos de
una comprensión completa de la reacción, la
magnitud de su efecto es generalmente pequeña
(no más de un factor de 2 o 3) en comparación
con otras contribuciones. Por el contrario, la
tunelización puede ser más importante en las
reacciones enzimáticas, particularmente en
aquellas que involucran la transferencia de
hidrógeno (átomo de hidrógeno, protón o ion
hidruro). Debido a que las inferencias sobre este
efecto de los estudios de isótopos son indirectas,
las simulaciones han sido importantes para una
determinación directa de la magnitud del túnel. A
temperatura ambiente, las mejoras de velocidad
calculadas debido al túnel varían de un factor de
1.5 para la transferencia de protones
intermoleculares en TIM a 780 para la
lipoxigenasa de soja. Estas aceleraciones de
velocidad son equivalentes a los efectos
termodinámicos de energía libre de 0.2–3.9
kcalmol, una contribución significativa pero
todavía pequeña en comparación con la
disminución de la energía libre de activación en
10 kcalmol o más. Los cálculos detallados de la
contribución del túnel en DHFR están
proporcionando información adicional sobre su
papel en la catálisis enzimática.
Figura 3. Mecanismo de TIM. (a) Contribución
electrostática de residuos individuales (en kcalmol en
la ordenada) a la disminución de la barrera de energía
de activación (TS1) de la reacción del sustrato DHAP
para formar el enolato intermedio. Este es el paso
determinante de la velocidad de la reacción química
general. Los residuos se trazan en la abscisa en
función de la distancia desde el carbono C del residuo
[o el oxígeno de una molécula de agua (W)] a C1 del
sustrato. Los valores negativos corresponden a la
disminución de la barrera. (b) Estructura del sitio activo
en estado de transición que muestra importantes
residuos y moléculas de agua.
Análisis de dinámica molecular de la ATPasa
F1
La enzima Fo-F1 ATP sintasa es quizás la más
notable de las máquinas moleculares que se han
estudiado a resolución atómica (Fig. 4A). Esta
enzima es fundamental para la vida porque
sintetiza ATP al aprovechar el potencial químico
de los gradientes de protones a través de las
membranas celulares. Un componente de Fo-F1
ATP sintasa (Fo) se encuentra principalmente
dentro de la membrana y es responsable de
convertir la energía química del gradiente de
protones en el movimiento rotatorio de un eje
impulsor que se encuentra dentro del segundo
componente, que se conoce como F1 ATPase
( 50) F1 ATPase convierte el movimiento de
rotación del eje de transmisión en la producción
de ATP a partir de ADP y Pi (fosfato inorgánico,
H2PO4). Las estructuras cristalinas históricas de
F1 ATPase, junto con los resultados de estudios
de moléculas individuales y experimentos
bioquímicos más convencionales, han
proporcionado la base para una serie de
simulaciones destinadas a comprender cómo
funciona F1 ATPasa.
Figura 4. F1 ATPasa y dinámica molecular dirigida.
(a) Estructura de la FoF1 ATP sintasa basada en
estructuras cristalinas de la F1 ATPasa (51, 52). El
componente Fo se indica como un cilindro gris dentro
de la membrana (amarillo), y el eje de la subunidad se
muestra en verde. Las tres subunidades se indican
mediante trazas de red troncal azules y se muestran
las superficies moleculares de las tres subunidades. La
subunidad gira en sentido horario durante la síntesis
de ATP, como se ve desde la membrana, y los efectos
de una rotación de 120 ° de la subunidad se
manifiestan como un cambio en la conformación de las
subunidades. (b) Representación esquemática de la
dinámica molecular dirigida. La estructura simulada
está restringida para estar a una distancia rms
especificada de la estructura objetivo, y esta distancia
disminuye gradualmente durante la simulación. Debido
a que la restricción se aplica en un sentido rms
general, las estructuras intermedias no se especifican
explícitamente y diferentes partes de la estructura
pueden relajarse hacia las estructuras finales a
diferentes velocidades.
De particular interés es la demostración de que la
F1 ATPasa, que por sí sola normalmente hidroliza
el ATP, también puede sintetizar ATP si el eje
central es girado por fuerzas externas. Las
estructuras de alta resolución para el
componente Fo no están disponibles en la
actualidad, pero este experimento demuestra
que es razonable esperar entender cómo F1
ATPase sintetiza ATP sin incluir el componente Fo
en las simulaciones.
El elemento estructural principal de F1 ATPasa es
un conjunto hexamérico de tres subunidades y
tres subunidades que rodean a la subunidad, que
tiene una base globular y un dominio de bobina
en espiral extendida (ver Fig. 4A). Las seis
subunidades se unen a los nucleótidos, pero solo
las tres subunidades son catalíticamente activas.
Las estructuras cristalinas de F1 ATPase han
demostrado ser enormemente informativas con
respecto al mecanismo del motor porque cada
instantánea cristalográfica proporciona vistas de
tres estados distintos de las subunidades
catalíticas. La subunidad asimétrica y
centralmente ubicada forma un eje, y su
orientación determina la conformación de las
subunidades. La estructura cristalina original de
la ATPasa F1 condujo a la identificación de tres
conformaciones de la subunidad: E (vacía), TP
(unida a ATP) y DP (unida a ADP). La
conformación abierta de la subunidad E es
diferente de la de las subunidades TP y DP,
ambas cerradas y muy similares entre sí.
El análisis profético de los datos cinéticos por
Paul Boyer condujo a su propuesta (antes de la
información estructural) de un notable
"mecanismo de cambio vinculante" que describía
la acción de F1 ATPase. En términos de este
mecanismo, la síntesis de ATP procede por la
conversión cíclica de la subunidad de un estado
"abierto" que une ATP solo débilmente a un
estado "suelto" que tiene una mayor afinidad por
ATP a un "apretado". Estado que tiene la mayor
afinidad por el ATP. La estructura cristalina, con
sus tres conformaciones distintas de las
subunidades y la disposición asimétrica del eje de
la subunidad, apoyó claramente el mecanismo de en F1 ATPasa mediante simulaciones de dinámica
cambio de unión propuesto por Boyer. molecular en presencia de fuerzas de polarización
que se aplicaron solo a la subunidad o a toda la
Las simulaciones de dinámica molecular han estructura en un procedimiento que conduce el
contribuido a nuestra comprensión de dos sistema de un estado a otro sin restringir
aspectos del mecanismo de F1 ATPase. Como explícitamente naturaleza del camino de
suele ser el caso en cristalografía, las estructuras transición. El espíritu en el que se realizan estas
guardan silencio sobre la naturaleza de las simulaciones implica "empujar" el ensamblaje
transiciones de un estado a otro y las fuerzas molecular (por ejemplo, forzando a la subunidad
involucradas. Las simulaciones han sido útiles a rotar) y analizar cómo responde el resto de la
para reconstruir al menos algo de lo que debe estructura (Fig. 4B). Debido a que la escala de
suceder a medida que el motor se mueve a tiempo de la transición rotacional forzada de la
través de su ciclo de trabajo, y primero subunidad es de órdenes de magnitud más
discutimos estos estudios. El segundo problema rápida que la tasa de rotación real, la suposición
se refiere a la identificación de conformaciones implícita en tales estudios es que todavía se
particulares de la subunidad con los estados puede obtener información significativa sobre el
abierto, suelto y apretado del mecanismo de mecanismo.
cambio vinculante. Es evidente que la
conformación vacía (E) es el estado de baja Ambos estudios demostraron que la rotación del
afinidad de la subunidad, pero los estados DP y eje desencadena la apertura de la subunidad TP
TP son muy similares entre sí, y no ha sido unida a nucleótidos y el cierre de la subunidad E
posible sobre la base de datos experimentales abierta. La importancia de una pista de residuos
solo identificar cuál de los dos son el sitio de iónicos en el eje y en las superficies hacia
unión de alta afinidad para ATP. Las simulaciones adentro del y -subunidades se ha resaltado. Estos
de diferencia de energía libre de la unión de residuos iónicos proporcionan un mecanismo
nucleótidos a las subunidades han resuelto estas para la rotación suave de la subunidad al permitir
ambigüedades, permitiendo que la gran cantidad la transferencia secuencial de las interacciones
de datos experimentales sobre el complejo se de emparejamiento de iones. La diferencia
integre en un esquema cinético detallado que funcional entre las subunidades y se demuestra
modela la catálisis de la hidrólisis de ATP por la mediante un bypass suave de las subunidades
ATPasa F1 en ausencia del componente Fo. mediante la subunidad giratoria. En contraste, los
elementos entrelazados de las subunidades - y
Transiciones conformacionales en F1 generan respuestas en las subunidades a medida
ATPase. que se mueven las subunidades.
La escala de tiempo para una rotación del eje
está en el rango de microsegundos a
milisegundos y, por lo tanto, no es accesible a las
escalas de tiempo de submicrosegundos
sondeadas por simulaciones de dinámica
molecular estándar. Debido a que se conocen los
estados inicial y final correspondientes a una
rotación de 120 ° de la subunidad, el desafío es
esencialmente el mapeo de una ruta de baja
energía que conecta una conformación estable
del sistema con otra, un problema general que
está recibiendo considerable atención en el
presente. El primer intento de caracterizar las
estructuras intermedias en la ATPasa F1 utilizó un
método de interpolación en un sistema de
coordenadas cilíndricas definido por el eje de
rotación de la subunidad. Estas estructuras
interpoladas se usaron recientemente después de
la relajación local por la dinámica molecular para
analizar la ruptura de las interacciones entre el
ATP y la proteína a medida que el sistema pasa
del estado TP al estado E. Se obtuvieron más
detalles sobre las transiciones conformacionales