Evaluación y comparación de agentes de descalcificación en humanos

dientes.

CONTEXTO:
En la histopatología de rutina, la descalcificación de huesos y dientes es a
menudo un paso esencial e importante durante el procesamiento de tejidos. Varios
agentes descalcificadores se han utilizado en el pasado. La tasa de
descalcificación y el efecto de los agentes descalcificadores en el tejido y sus
características de tinción son dos parámetros importantes que influyen en la
selección de las soluciones descalcificadoras. Aunque algunos agentes eliminan
los iones de calcio completa y rápidamente, afectan negativamente las
características de tinción y también pueden dañar los componentes orgánicos. Ha
habido muy pocos estudios que hayan evaluado sistemáticamente la eficacia de
estos agentes en la descalcificación de los tejidos duros dentales.

OBJETIVOS:
El presente estudio se realizó para evaluar la tasa de descalcificación de seis
agentes descalcificadores diferentes y también su efecto sobre las características
de tinción en los tejidos duros dentales.
Materiales y métodos:
Se utilizaron seis agentes descalcificadores, a saber, solución descalcificadora de
ácido etilendiaminotetraacético neutro (EDTA), 5% de ácido nítrico, fluido de
Perenyi, ácido formalina-nítrico, 5% de ácido tricloroacético y 10% de ácido
fórmico para descalcificar 24 dientes naturales (cuatro en cada solución) El punto
final de la descalcificación se evaluó mediante métodos químicos de banda
radiográfica. Los dientes descalcificados se procesaron, seccionaron y tiñeron
rutinariamente con hematoxilina y eosina.
RESULTADOS:
El EDTA neutro fue el más considerado con los tejidos blandos y duros y el ácido
nítrico al 5% fue el menos considerado con la estructura dental.

CONCLUSIONES:
El EDTA neutro, aunque es el agente descalcificador más lento entre los
seis agentes utilizados en el estudio, dio excelentes resultados para la integridad
de los tejidos blandos y la mejor calidad de las tinciones tanto de tejidos blandos
como de tejidos duros.
Palabras clave: 10% de ácido fórmico, 5% de ácido nítrico, 5% de ácido
tricloroacético, ácido formalina-nítrico, solución descalcificadora EDTA neutra,
fluido de Perenyi, integridad del tejido pulpar, descalcificación de los dientes.

INTRODUCCIÓN
Pierre de Coubertin propuso el lema olímpico "citius, altius, cuarentón", que
en latín significa más rápido, más alto y más fuerte. Con esta base, nosotros
también hemos adoptado lo mismo en nuestra búsqueda de un agente
descalcificador.(1)
La cabeza y el cuello son una estructura compleja de tejidos blandos y
duros. Los tejidos blandos presentan poca resistencia a las técnicas
histoquímicas. Las lesiones que afectan los tejidos duros necesitan una
metodología compleja y sensible a la técnica para la interpretación y el
diagnóstico. Rephrase tejido es un tejido inherentemente difícil para trabajar
histológicamente. La técnica para la demostración incluye molienda de tejido duro
y descalcificación. [2]
El tejido blando pulpar solo se puede evaluar en secciones descalcificadas,
que de otra manera en la sección del suelo no es posible ya que se pierde. El
objetivo de la descalcificación es eliminar las sales de calcio del tejido
mineralizado utilizando soluciones químicas como ácidos y agentes quelantes,
mientras se conservan las porciones orgánicas. [3]
Por lo tanto, un agente descalcificador ideal debería
 Ser rápido;
 Ser bueno y;
 Haz bien.
Aunque algunos agentes eliminan los iones de calcio completa y rápidamente,
afectan inversamente las características de tinción y también pueden dañar los
componentes orgánicos. [4]

Por lo tanto, presentamos aquí la evaluación comparativa de diferentes agentes

descalcificadores con respecto a la tasa de descalcificación, el efecto de los
agentes descalcificadores en el tejido dental y su influencia en las características
de tinción. Comienza la búsqueda de, como máximo, un agente descalcificador
ideal cercano.
Los fines y objetivos del estudio fueron:
1. Evaluar el agente descalcificador más rápido;
2. Evaluar los agentes descalcificadores en función de su efecto sobre el
contenido orgánico y la integridad del tejido blando;
3. Evaluar las características de tinción de los dientes descalcificados en los
diferentes agentes descalcificadores;
4. Comparar y contrastar entre los agentes descalcificadores.

MATERIALES Y MÉTODOS
Se obtuvieron 24 dientes naturales recién extraídos, no cariados, no
atrofiados, de pacientes de 40 a 45 años. [3–5] Los dientes, fijados en formol al
10%, incluían incisivos, caninos, premolares y molares, y se usaron para analizar
los seis agentes descalcificadores diferentes, a saber, ácido nítrico al 5%, líquido
de Perenyi, solución de ácido níquel y formalina, solución descalcificadora de
ácido etilendiaminotetraacético neutro (EDTA), ácido fórmico al 10% y ácido
tricloroacético al 5%. Cada agente descalcificador se usó para descalcificar un
incisivo, un canino, un premolar y un molar cada uno.
 Los agentes de descalcificación se sometieron a agitación repetida y se
reemplazaron por agentes recién preparados según lo indicado por el método
químico del punto final de la descalcificación para ácido nítrico al 5%, solución de
ácido nítrico, líquido de Perenyi y ácido tricloroacético al 5%. Tanto para EDTA
neutro como para ácido fórmico al 10%, las soluciones se reemplazaron con
soluciones nuevas cada cinco días.
El punto final de la descalcificación de las soluciones se evaluó utilizando el
método químico. [3,5]
1. El licor fuerte se agrega amoniaco gota a gota a 5 cm de agente
descalcificador hasta que se convierte en alcalino en tornasol.
2. Si la solución se volvió turbia, indicó presencia de calcio y la solución se
reemplazó con solución nueva
3. Si la solución no se vuelve turbia, se agregan 5 cm de oxalato de amonio
saturado a la solución.
4. Si la solución permanece clara durante 30 minutos, se concluyó que se
alcanzó el punto final de descalcificación y se completó el procedimiento.
El punto final del EDTA neutro se evaluó radiográficamente en donde la opacidad
sugirió una descalcificación incompleta [Figura 1]. El método físico de sondear los
dientes sometidos a EDTA neutro con una aguja también sugirió una
descalcificación incompleta.

Figura 1
Radiografía de un molar descalcificado usando EDTA
neutro al final de 91 días, antes del procesamiento.
La velocidad de descalcificación se calificó de 1 a 5
[1-más lenta y 5-más rápida].
Todos los dientes se lavaron con agua corriente durante 10 minutos (los dientes
descalcificados con EDTA neutro se lavaron durante 2 horas) y continuaron con el
procesamiento de rutina, la infiltración de cera de parafina y la incrustación;
Seccionamiento y tinción con hematoxilina y eosina. Las secciones teñidas se
observaron bajo el microscopio y se clasificaron de 1 a 4 [1 pobre, 2 regular, 3
bueno y 4 excelente] según los siguientes criterios:
1. Facilidad de seccionamiento;
2. Tinción de tejido duro;
3. Tinción de tejidos blandos: tinción tanto citoplasmática como nuclear;
4. Fijación de tejidos blandos;
5. Contracción de tejidos blandos y;
6. Organización pulpar.

RESULTADOS
 Parámetro 1: Velocidad de descalcificación: los dientes descalcificados
con ácido nítrico al 5%, el EDTA más rápido y neutro fue el más lento
[Gráfico 1].

Gráfica 1
Tiempo en días necesarios para la descalcificación
  Parámetro 2: Integridad de los tejidos blandos: con respecto a la integridad
de los tejidos blandos, características como fijación de los tejidos blandos,
contracción de los tejidos blandos y organización pulpar, los dientes
descalcificados con EDTA neutro exhibieron excelentes resultados, y los
descalcificados con ácido nítrico al 5% obtuvo la menor puntuación
[Gráfico 2, Figuras 2 y 3].

Gráfica 2
Integridad de los tejidos blandos de los diversos agentes descalcificadores.

Figura 2
Diente descalcificado usando solución descalcificadora EDTA neutra a alta
potencia.
Figura 3
Diente descalcificado con ácido
nítrico al 5% de baja potencia.

 Parámetro 3: Calidad de tinción: los dientes descalcificados con EDTA

neutro y ácido tricloroacético al 5% se tiñeron mejor, y el ácido nítrico al
5% y el fluido Perenyi se tiñeron peor [Gráfico 3, Figuras 4 y 5].

Gráfica 3
Características de tinción de los diferentes agentes descalcificadores.
 Figura 4
Vista de alta potencia de un
diente descalcificado en ácido
tricloroacético al 5%

Figura 5
Diente descalcificado
usando fluido Perenyi a
baja potencia

 En general, el
EDTA neutral obtuvo una puntuación superior a los otros agentes y el
fluido Perenyi obtuvo la menor puntuación [Tabla 1].

El proceso de descalcificación se realiza para estudiar la estructura de las

calcificaciones de los dientes y la pulpa, y también para evaluar la respuesta
biológica de la pulpa dental a los materiales restauradores. [6]
Durante muchos años, los científicos han intentado introducir nuevas sustancias
descalcificadoras o han tratado de modificar los agentes de descalcificación
conocidos, [5] para cumplir con los criterios de un buen agente descalcificador
que

 Asegura la eliminación completa de calcio.

 Causa un daño mínimo a las células y tejidos.
 Causa no deterioro de la tinción posterior y.
 Descalcifica a una velocidad razonable. [7]
La mayoría de los autores han comparado dos a cuatro agentes
descalcificadores, a veces variando los métodos utilizados y empleando muchas
permutaciones y combinaciones de los métodos y agentes, principalmente para
descalcificar el hueso. [2,8-10]
En el presente estudio, intentamos comparar la eficacia de seis agentes de
descalcificación, su tasa de descalcificación, su efecto sobre los componentes
orgánicos e inorgánicos de los dientes y las características de tinción. El factor de
velocidad de los agentes descalcificadores fue el más alto con ácido nítrico al 5%
y el más bajo con una solución descalcificadora EDTA neutral, que estaba de
acuerdo con la literatura. También se observó, basado en la apariencia
blanquecina del esmalte, la tasa inicial de descalcificación 4 días después del
inicio del procedimiento. Contrariamente al aumento general del tiempo que toma
el EDTA neutro, se observó que los dientes descalcificados en él habían perdido
su esmalte más rápido que el 5% de ácido nítrico. [3,6,8,10,11]
Al seccionar, se observó que había desmoronamiento del tejido
descalcificado en ácido nítrico al 5% y fluido de Perenyi que también contiene
ácido nítrico. Además, el tejido era indistinto cuando se observaba al
microscopio, como también señalaron Zappa et al. [11] con respecto al 7% de
ácido nítrico. Los dientes descalcificados con EDTA neutro respondieron mejor al
cuchillo de microtomo, por lo tanto, engañaron los métodos físicos y radiológicos
de probar el punto final de la descalcificación con respecto al EDTA neutro.
 En términos de eficacia de los agentes con respecto a la integridad de los
tejidos blandos y la tinción de los tejidos duros y blandos, en realidad se
obtuvieron excelentes resultados con el agente descalcificador más lento, es
decir, EDTA neutro. [10,11] Incluso el 5% de ácido ricoacetato también mostró
buenos resultados. Características de tinción.
La unión de los tejidos blandos y la contracción de los tejidos blandos,
según lo informado por Zappa et al. [11], sugieren que el ácido fórmico y el ácido
nítrico producen peores resultados en contraste con los resultados obtenidos en
nuestro estudio, en donde el ácido fórmico dio buenos resultados como mostró
contracción mínima de los tejidos blandos y pérdida mínima de tejido [Figura 6].
La organización de la pulpa con su matriz extracelular y las zonas histológicas
fueron claramente distintas y excelentes en los dientes descalcificados con EDTA
neutro y ácido tricloroacético al 5%.

Figura 6
Diente descalcificado con
ácido fórmico al 10% de
baja potencia.

Los resultados superiores generales obtenidos con EDTA neutro pueden

atribuirse al mecanismo de captura de iones metálicos como el calcio que se une
al agente quelante. Esto significa que se eliminarán los iones de calcio de la capa
externa de los cristales de apatita. Cuando se eliminan todos los iones de calcio
de la capa externa de los cristales de apatita, serán reemplazados por iones de
las capas más profundas. De esta manera, el tamaño del cristal disminuye
gradualmente, produciendo una excelente conservación de los componentes del
tejido. [4–6]

La calidad de las secciones descalcificadas y la tasa de descalcificación

dependen de factores como la concentración de fijación del agente
descalcificador utilizado, la temperatura, la presión, la agitación, la corriente
eléctrica, la radiación de microondas, la suspensión de tejidos y el tamaño y tipo
de tejido. [4–6,9].

En un estudio de Waerhaug, los huesos y los dientes se descalcificaron

rápidamente al vacío. El tiempo necesario para la descalcificación se redujo a
una décima parte. [12] Los cambios en la temperatura a la que ocurre la
descalcificación también varían el tiempo necesario para completar la
descalcificación. Vongsavan et al., En su estudio sobre dientes de gato y rata,
informaron un proceso más rápido de descalcificación en horno de microondas a
37 ± 2 ° C que a temperatura ambiente o en horno convencional. [13] Otro
estudio de Pitol et al. demostró que la descalcificación asistida por microondas
demostró ser más efectiva que los métodos tradicionales en aspectos como la
reducción del período de tiempo para la descalcificación, la buena morfología del
tejido óseo y un aumento de la liberación de calcio mediante microondas. [14].

Warshawsky y Moore estudiaron los efectos de los agentes descalcificadores, a

saber, ácido nítrico, ácido fórmico y EDTA, sobre el número y la estabilidad de las
bacterias grampositivas. Las reducciones en el recuento en EDTA fueron
menores. [15] El número de estudios que usaron EDTA fue mayor que el de otros
agentes descalcificadores, especialmente cuando la necesidad era para intereses
académicos e investigación. [16-19]
Para concluir, más difícil es la estructura, más difícil de descalcificar. Más lento el
proceso, mejores resultados.

Aquí proponemos, en casos de requerimiento urgente, el uso de ácidos puede

emplearse aunque con poca integridad tisular. Para la conservación y
presentación, cuando el tiempo no es un factor, se puede recomendar el uso de
EDTA neutral por su excelente integridad de los tejidos blandos y la calidad de la
tinción.

Un agente que parecía equilibrar ambos factores de tiempo e integridad tisular

fue la solución de ácido nítrico y formalina [Figura 7].

Figura 7
Vista de baja potencia
de un diente
descalcificado en
solución de ácido
fórmico y ácido nítrico

Independientemente de la solución utilizada, los métodos de

descalcificación comparten su característica de ser acelerados cuando se
emplean factores adicionales. El presente estudio se realizó con respecto a
diferentes agentes descalcificadores solamente y ninguno de los factores se
empleó, lo que estandarizó el procedimiento. Los estudios futuros en los que los
factores pueden variar y el agente descalcificador se puede mantener constante,
podrían llevarnos al agente descalcificador casi ideal.